ऊतक और सेल संस्कृतियों से अल्ट्रासोनिक प्रोटीन निष्कर्षण
- प्रोटीन निष्कर्षण प्रोटिओमिक्स में एक आवश्यक नमूना तैयारी कदम है।
- प्रोटीन पौधों और जानवरों के ऊतकों, खमीर और सूक्ष्मजीवों से निकाला जा सकता।
- Sonication एक छोटी निष्कर्षण समय के भीतर उच्च प्रोटीन पैदावार दे एक विश्वसनीय, कुशल प्रोटीन निष्कर्षण विधि है।
ऊतकों और कोशिकाओं से प्रोटीन निष्कर्षण
ऊतकों और सुसंस्कृत कोशिकाओं से प्रोटीन निष्कर्षण एक आवश्यक नमूना तैयारी कदम है जो एलिसा, पेज, वेस्टर्न ब्लॉटिंग, मास स्पेक्ट्रोमेट्री या प्रोटीन शुद्धिकरण जैसी कई जैव रासायनिक और विश्लेषणात्मक तकनीकों के दौरान किया जाता है। अल्ट्रासोनिक सेल व्यवधान, लाइसिस और निष्कर्षण प्रोटीन की उच्च पैदावार सुनिश्चित करने के लिए एक सटीक नियंत्रणीय, गैर-थर्मल तकनीक है।
कोशिकाओं से प्रोटीन निष्कर्षण अल्ट्रासोनिक जांच UP200St
- तीव्र
- उच्च पैदावार
- अत्यधिक कुशल
- मापदंडों से अधिक सटीक नियंत्रण
- प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम
- रैखिक scalability
अल्ट्रासोनिक लाइसिस और प्रोटीन निष्कर्षण के लिए सामान्य निर्देश
- तापमान नियंत्रण: थर्मल विकृतीकरण के बिना एक उच्च प्रोटीन उपज सुनिश्चित करने के निष्कर्षण के दौरान तापमान नियंत्रित किया जाना चाहिए। Hielscher के राज्य के कला अल्ट्रासोनिक homogenizers – इसे अल्ट्रासोनिक डिसइंटिग्रेटर या अल्ट्रासोनिफायर भी कहा जाता है – ठीक चलाया है। वे एक plugable तापमान सेंसर के साथ आते हैं। अल्ट्रासोनिक homogenizer की सेटिंग विकल्प में, एक अधिकतम तापमान सेट किया जा सकता। जब यह तापमान अधिकतम तक पहुँच जाता है, ultrasonicator तक स्वचालित रूप से नमूना ठंडा है बंद हो जाता है।
- बफर: एक उपयुक्त बफर और बफर के सही मात्रा का choise के ऊतकों को ऊतकों से भिन्न होता है और सोचा-आउट होना चाहिए परीक्षण और त्रुटि परीक्षण द्वारा।
- अलगाव / शुद्धि: प्रोटीन lysates डीएनए या कार्बोहाइड्रेट के रूप में जैविक अणुओं, जो प्रोटीन वर्षा (deoxycholate-ट्राइक्लोरोएसिटिक एसिड) द्वारा हटाया जा सकता की एक अतिरिक्त शामिल कर सकते हैं या विनिमय बफ़र।
चित्तपालो और नोमहोर्म (2009) ने अपने अध्ययन में बताया कि सोनिकेशन का उपयोग करके प्रोटीन की उपज में वृद्धि हुई है और अल्ट्रासोनिक ऊतक होमोजेनाइजेशन और लाइसिस प्रक्रिया मौजूदा निष्कर्षण प्रक्रियाओं को काफी बढ़ा सकती है। – नए वाणिज्यिक निकासी के अवसरों के लिए सक्षम करने से।
जानवरों के ऊतकों से प्रोटीन निष्कर्षण
पूरे आकार के ऊतक (जैसे गुर्दे, दिल, फेफड़े, मांसपेशी इत्यादि) की तैयारी के लिए, ऊतक को साफ-सुथरे औजारों के साथ बहुत छोटे टुकड़ों में विभाजित किया जाना चाहिए, बर्फ पर अधिमानतः, और जितनी जल्दी हो सके प्रोटीज़ द्वारा गिरावट को रोकने के लिए (उदाहरण के लिए एलआईसी बफर जैसे आरआईपीए या हाइपोटोनिक लीस बफर जिसमें प्रोटीज़ और फॉस्फेटेज अवरोधक कॉकटेल शामिल है)। विच्छेदन के बाद, स्नैप फ्रीज के लिए नमूना तरल नाइट्रोजन में डुबोया जाता है। बाद में उपयोग के लिए नमूना -80 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जा सकता है या तत्काल होमोज़ाइजेशन के लिए बर्फ पर रखा जा सकता है। अल्ट्रासोनिक निष्कर्षण से पहले, बर्फ ठंडा लीस बफर (प्रोटीज़ इनहिबिटर डीटीटी, ल्यूपेप्टिन और एप्रोटिनिन के साथ) को तेजी से नमूना ट्यूब में जोड़ा जाता है (प्रति ~ 10 मिलीग्राम ऊतक ~ 600 μL बफर की सिफारिश की जाती है)। लगभग। प्रति नमूना ट्यूब के 20-60 मिलीग्राम ऊतक की सिफारिश की जाती है।
अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइजेशन, लाइसिस और निष्कर्षण एक अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइज़र जैसे यूपी 100 एच या यूपी 200एच के साथ किया जाता है, जो माइक्रो-टिप सोनोट्रोड से लैस होता है। सोनिकेशन अवधि 15 सेकंड के अल्ट्रासोनिक चक्र मोड पर 60-90 सेकंड है। नमूने को हर समय बर्फ में रखा जाना चाहिए।
अल्ट्रासोनिक एकरूपता / निष्कर्षण के बाद, lysate लगभग के लिए 27,000g पर centrifuged। बीस मिनट। बाद में supernatent एकत्र किया जाता है, ताकि प्रोटीन एकाग्रता ऐसे पियर्स प्रोटीन परख बीसीए के रूप में एक प्रोटीन परख द्वारा निर्धारित किया जा सकता है।
रक्त सीरम से प्रोटीन निष्कर्षण
सीरम और फॉस्फेट बफर के सजातीय मिश्रण के लिए, अल्ट्रासोनिक सेल लाइसिस से पहले नमूना पहले भंवर किया जाता है। अल्ट्रासोनिक लाइसिस के लिए, नमूने को अल्ट्रासोनिक लैब होमोजेनाइज़र जैसे कि यूपी 100 एच के साथ 20% आयाम पर 8 चक्रों के लिए, प्रत्येक 5 सेकंड के चक्रों के लिए और 15 सेकंड की दूरी के लिए सोनिक किया जाता है। सोनोकेशन चक्रों में सोनिकेशन द्वारा और नमूने को बर्फ पर रखकर किया जाता है ताकि नमूने के ओवरहीटिंग और थर्मल क्षरण से बचा जा सके। चूंकि सीरम में बड़ी मात्रा में उच्च आणविक भार प्रोटीन (जैसे एल्बुमिन, 1-एंटीट्रिप्सिन, ट्रांसफरिन, हैप्टोग्लोबुलिन, इम्युनोग्लोबुलिन जी और इम्युनोग्लोबुलिन ए) होते हैं, जो आईईएफ के दौरान कम आणविक भार प्रोटीन के पृथक्करण में हस्तक्षेप करते हैं, इसलिए कमी कॉलम का उपयोग करके सीरम से उन्हें कम करने की सिफारिश की जाती है।
संयंत्र के ऊतकों से प्रोटीन निष्कर्षण
ताजा, मुलायम संयंत्र ऊतक, उदा काई आदि, आसानी से बस sonication के लिए lysis बफर में कटा हुआ नमूना सामग्री रखकर बाधित किया जा सकता। इस तरह के बीज, देवदार सुई आदि के रूप में कठिन, ligenous संयंत्र के ऊतकों, सूखी जमीन की जानी चाहिए। कुछ हार्ड, वुडी संयंत्र सामग्री जमे हुए किया जाना चाहिए और तरल नाइट्रोजन में जमीन से पहले sonication द्वारा निकाली गई। संयंत्र सेल संस्कृति निलंबन के लिए, एक lysis बफर में 30 और 150 सेकंड के बीच एक अल्ट्रासोनिक उपचार ज्यादातर पर्याप्त है। इस तरह के कद्दू बीज के रूप में मुश्किल सामग्री एक अधिक तीव्र sonication के नीचे बताए गए तरीके की आवश्यकता है।
कद्दू बीज से एल्बुमिन की अल्ट्रासोनिक निष्कर्षण के लिए प्रोटोकॉल
बारीक-पिसे हुए कद्दू के बीज पाउडर से एल्बुमिन के अल्ट्रासोनिक प्रोटीन निष्कर्षण के लिए, 250 एमएल ग्लास बीकर में विलायक के रूप में 10 ग्राम डीफेटेड कद्दू के बीज पाउडर और 100 एमएल विआयनीकृत पानी मिलाया जाता है। प्रोटीन निष्कर्षण में दो चरण होते हैं: सबसे पहले, नमूने को किसके साथ मिलाया जाता है? सोनोट्रोड एस 24 डी 7 से लैस एक जांच-प्रकार अल्ट्रासोनिकेटर यूपी 400 एसटी (400 डब्ल्यू, 24 किलोहर्ट्ज)। अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइजेशन के दौरान ग्लास बीकर को ठंडे पानी के स्नान में रखा जाता है। प्लग करने योग्य तापमान सेंसर के साथ अल्ट्रासोनिकेटर यूपी 400 एसटी की स्थापना ने यह सुनिश्चित किया कि नमूना तापमान हमेशा 30 डिग्री सेल्सियस से नीचे रखा जाए। सोनिकेशन के दौरान सटीक तापमान नियंत्रण से, एल्बुमिन के विकृतीकरण से बचा जाता है। दूसरे, निष्कर्षण 200 आरपीएम गति और 30 डिग्री सेल्सियस पर मिक्सर के साथ किया गया था। बाद में बीकर को थर्मोस्टेटिक शेकर में स्थानांतरित कर दिया जाता है। ग्लोब्युलिन को आसुत जल के साथ डायलिसिस के माध्यम से हटा दिया जाता है। ग्लोब्युलिन हटाने के बाद, एल्बुमिन प्रोफाइल के निर्धारण के लिए प्रोटीन निकालने का नमूना लिया जा सकता है और बाद में एल्बुमिन जमावट के लिए 0.1 एम एचसीएल का उपयोग करके पीआई = 3.0 में समायोजित किया जाता है। ठोस चरण को 5000 ग्राम, 20 डिग्री सेल्सियस पर सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा अलग किया जाता है और विआयनीकृत पानी में फिर से घोल दिया जाता है। एल्बुमिन एकाग्रता में प्रोटीन अनुपात को बढ़ाने के लिए एल्ब्यूमिन जमावट दो बार की जाती है।
अल्ट्रासोनिक चावल की भूसी से प्रोटीन ध्यान की तैयारी के लिए क्षारीय प्रोटीन निष्कर्षण से पता चलता है कि एक काफी कम निष्कर्षण समय में उच्च प्रोटीन उपज में अल्ट्रासोनिक उपचार परिणाम – पारंपरिक निष्कर्षण तरीकों की तुलना में।
कार्यात्मक INOS एंजाइम के लिए नमूना तैयारी प्रोटोकॉल
पूरी तरह कार्यात्मक आईएनओएस एंजाइम (उदाहरण के लिए ड्रग स्क्रीनिंग के लिए) प्राप्त करने के लिए, निम्नलिखित प्रोटोकॉल की सिफारिश की जाती है: सेल निलंबन को बर्फ पर रखा जाना चाहिए और 5 सेकंड के चक्र मोड पर 10 μm आयाम पर यूपी 100 एच के साथ सोनिक किया जाता है। प्रक्रिया को लगभग 3 बार दोहराया जाना चाहिए। सोनिकेशन चक्रों के बीच आराम का समय तापमान वृद्धि को कम करता है और इसलिए विकृतीकरण के जोखिम को कम करेगा।
अल्ट्रासोनिक प्रोटीन solubilization
Sonication प्रोटीन solubilization प्रक्रिया, जो आमतौर पर कई घंटे की आवश्यकता है तेजी लाने के। आदेश नमूना ज़्यादा गरम और रोकने के लिए नहीं प्रोटीन गिरावट और यूरिया युक्त समाधान में संशोधनों में, अल्ट्रासोनिक फटने कुछ सेकंड से अधिक समय तक नहीं करना चाहिए।
अल्ट्रासोनिकेटर UP200Ht छोटे नमूनों के सोनिकेशन के लिए 2 मिमी माइक्रोटिप एस 26 डी 2 के साथ।
प्रोटीन निष्कर्षण के लिए अल्ट्रासोनिक उपकरण
Hielscher Ultrasonics की कोशिकाओं, ऊतकों, बैक्टीरिया, सूक्ष्मजीवों, खमीर, और बीजाणुओं विघटन के लिए अल्ट्रासोनिक homogenizers की एक विस्तृत रेंज प्रदान करते हैं।
Hielscher प्रयोगशाला अल्ट्रासोनिकेटर शक्तिशाली और संचालित करने में आसान हैं। 24/7 ऑपरेशन के लिए निर्मित, वे मजबूत और कुशल प्रयोगशाला और बेंच-टॉप उपकरणों के रूप में डिज़ाइन किए गए हैं। सभी उपकरणों के लिए, ऊर्जा उत्पादन और आयाम को ठीक से नियंत्रित किया जा सकता है। सहायक उपकरण की व्यापक श्रृंखला आगे सेटअप विकल्प खोलती है। वायल ट्वीटर, यूपी200एचटी, यूपी200एसटी और यूपी400एसटी जैसे डिजिटल अल्ट्रासोनिकेटर में एक एकीकृत तापमान नियंत्रण और स्वचालित डेटा रिकॉर्डिंग के लिए एक अंतर्निहित एसडी कार्ड है।
कई नमूनों के अप्रत्यक्ष, क्रॉस-संदूषण मुक्त और एक साथ सोनिकेशन के लिए, हम वायल ट्वीटर या अल्ट्रासोनिक कपहॉर्न की पेशकश करते हैं।
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| बैच वॉल्यूम | प्रवाह की दर | अनुशंसित उपकरणों |
|---|---|---|
| 10 शीशियों या ट्यूबों तक | एन.ए. | VialTweeter |
| मल्टीवेल / माइक्रोटिटर प्लेटें | एन.ए. | यूआईपी400एमटीपी |
| कई ट्यूब / | एन.ए. | कपहॉर्न |
| 1 से 500 एमएल | 10 से 200 मील / मिनट | UP100H |
| 10 से 1000 mL | 20 से 200 mL/ | UP200Ht, UP200St |
| 10 से 2000 मील | 20 से 400 एमएल / मिनट | UP400St |
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VialTweeter अप्रत्यक्ष sonication के लिए।
जानने के योग्य तथ्य
प्रोटिओमिक्स
प्रोटिओमिक्स अनुसंधान के क्षेत्र है कि प्रोटीन और proteome की जांच है। प्रोटीन जीवों के भीतर महत्वपूर्ण कार्यों की एक विशाल सरणी fullfil। proteome एक निश्चित समय पर एक जीनोम, सेल, ऊतक, या जीव द्वारा व्यक्त प्रोटीन के पूरे सेट है। proteome, समय और विशिष्ट आवश्यकताओं, या तनाव के साथ बदलता रहता है कि एक सेल या जीव से होकर गुजरती है। विशेष रूप से, यह सेल या जीव के किसी दिए गए प्रकार में व्यक्त प्रोटीन का सेट है परिभाषित परिस्थितियों में, एक निश्चित समय पर,। अवधि प्रोटीन और जीनोम का एक मिश्रण है। प्रोटिओमिक्स proteome के अध्ययन है।
प्रोटीन
प्रोटीन बड़े जैविक अणुओं कर रहे हैं, तथाकथित बड़े अणुओं – जो एमिनो एसिड अवशेषों की एक या अधिक लंबी श्रृंखलाओं से बना है। प्रोटीन दोनों वनस्पति और पशु मूल के सभी जीवों में मौजूद हैं और वे अधिकांश जैविक कार्यों के लिए महत्वपूर्ण हैं। चूंकि प्रोटीन में बहुत सारी जैविक जानकारी होती है, इसलिए उन्हें विश्लेषणात्मक उद्देश्य के लिए निकाला जाता है, उदाहरण के लिए प्रोटीमिक शोध के लिए। प्रोटीन द्वारा किए गए सबसे महत्वपूर्ण कार्यों में चयापचय प्रतिक्रियाओं, डीएनए प्रतिकृति, उत्तेजना के प्रति प्रतिक्रिया, और अणुओं के परिवहन को एक स्थान से दूसरे स्थान पर ले जाना शामिल है। प्रोटीन मुख्य रूप से एमिनो एसिड के अनुक्रम में एक दूसरे से अलग होते हैं, जो उनके जीन के न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम द्वारा निर्धारित होता है, और आमतौर पर प्रोटीन में एक विशिष्ट त्रि-आयामी संरचना में तब्दील होता है जो इसकी गतिविधि को निर्धारित करता है। प्रोटीन हैं – पेप्टाइड्स के अलावा – भोजन के प्रमुख घटक में से एक। इसलिए, प्रोटिओमिक्स प्रक्रियाओं, खाद्य सुरक्षा और पोषण मूल्यांकन अनुकूलन करने के लिए खाद्य विज्ञान के क्षेत्र में एक शक्तिशाली उपकरण है।
Cloud Point Extraction
Cloud Point Extraction यह अलग और पूर्व-दंकेट विश्लेषणों के लिए एक पूर्व-विश्लेषणात्मक प्रक्रिया है। अल्ट्रासोनिकेशन के साथ संयोजन में, क्लाउड पॉइंट निष्कर्षण को तेज किया जा सकता है जिससे प्रक्रिया अधिक कुशल, तेज और पर्यावरण-अनुकूल हो जाती है। अल्ट्रासोनिकेशन के साथ, क्लाउड पॉइंट निष्कर्षण विश्लेषण तैयारी का एक काफी अधिक कुशल तरीका है। अल्ट्रासोनिक रूप से सहायता प्राप्त क्लाउड पॉइंट निष्कर्षण के बारे में अधिक पढ़ें!जेल वैद्युतकणसंचलन
जेल वैद्युतकणसंचलन जुदाई और डीएनए, आरएनए और प्रोटीन के साथ ही उनके टुकड़े, उनके आकार और आरोप के आधार पर के रूप में अणुओं के विश्लेषण के लिए प्रमुख तरीका है। (IEF agarose, अनिवार्य रूप से आकार स्वतंत्र) और जैव रसायन में, आणविक जीव विज्ञान और प्रोटिओमिक्स डीएनए और आरएनए टुकड़े की एक मिश्रित आबादी लंबाई से अलग करने के लिए यह आरोप और / या आकार से प्रोटीन को अलग करने के नैदानिक रसायन विज्ञान में प्रयोग किया जाता है, डीएनए के आकार का अनुमान और आरएनए टुकड़े या प्रभारी द्वारा प्रोटीन को अलग करने के।
कोशिका संवर्धन
कोशिका संवर्धन नियंत्रित बढ़ रही प्रक्रिया है जिसके द्वारा कोशिकाओं नियंत्रित परिस्थितियों में खेती की जाती है है। कोशिका संवर्धन की स्थिति प्रत्येक कोशिका प्रकार के लिए बदलती हैं। सामान्य तौर पर, एक सेल संस्कृति के वातावरण एक उपयुक्त पोत (जैसे पेट्री डिश) सब्सट्रेट या मध्यम है कि आवश्यक पोषक तत्वों (अमीनो एसिड, कार्बोहाइड्रेट, विटामिन, खनिज), वृद्धि कारक, हार्मोन की आपूर्ति, और गैसों (सीओ के साथ होते हैं2,2), और भौतिक-रासायनिक वातावरण (पीएच बफर, आसमाटिक दबाव, तापमान) नियंत्रित करता है। अधिकांश कोशिकाओं, एक सतह या कृत्रिम सब्सट्रेट की जरूरत है, जबकि अन्य कोशिका संवर्धन संस्कृति मध्यम (निलंबन संस्कृति, कोशिका निलंबन) में चल मुक्त खेती की जा सकती।
पशु सेल लाइनों की बड़े पैमाने पर संस्कृतियों वायरल टीकों और अन्य biotechnologically प्राप्त उत्पादों की औद्योगिक उत्पादन में किया जाता है। मानव स्टेम सेल कोशिकाओं की संख्या का विस्तार करने और प्रत्यारोपण के प्रयोजनों के लिए विभिन्न दैहिक प्रकार की कोशिकाओं में कोशिकाओं को अलग करने के सुसंस्कृत हैं।
ऊतक के नमूने
अवधि ऊतक, एक सेलुलर मध्यवर्ती का वर्णन करता है, जहां सेल सामग्री कोशिकाओं और एक पूर्ण अंग के बीच एक संगठनात्मक स्तर पर है। ऊतक में, इसी तरह की कोशिकाओं, एक ही मूल है कि एक साथ एक विशेष समारोह बाहर ले जाने से, इकट्ठे होते हैं। कई ऊतकों के कार्यात्मक समूह करके, अंगों की जटिल संरचनाओं का निर्माण होता है।
ऊतक जीव विज्ञान, ऊतक विज्ञान / ऊतकविकृतिविज्ञानी, Parasitology, जैव रसायन, इम्युनोहिस्टोकैमिस्ट्री में अनुसंधान के साथ-साथ खेती और डीएनए निकालने के लिए के लिए नमूना है। और संयंत्र के ऊतकों: यह जानवर (स्तनपायी ऊतक उपखंड) के बीच प्रतिष्ठित किया जा सकता। जानवरों के ऊतकों संयोजी, मांसपेशियों, तंत्रिका, और उपकला ऊतक के चार बुनियादी प्रकार में वर्गीकृत किया है। एपिडर्मिस, ग्राउंड ऊतक, और संवहनी ऊतक: संयंत्र के ऊतकों निम्नलिखित तीन ऊतक प्रणालियों में विभाजित है।
ऊतक के नमूने जानवर या संयंत्र भागों, उदा से तैयार किया जा सकता हड्डियों, मांसपेशियों, पत्ते, आदि
शरीर द्रव
रक्त, सीरम, प्लाज्मा, मस्तिष्कमेरु द्रव, लार और श्लेष तरल पदार्थ शरीर के तरल पदार्थ है, जो diagnostically प्रासंगिक जानकारी का एक बड़ा स्रोत प्रदान करते हैं। इसलिए, विश्लेषण के लिए शरीर के तरल पदार्थ के नमूने का एक परिष्कृत तैयारी महत्वपूर्ण है। पहली कठिनाई शरीर के तरल पदार्थ में मौजूद घटकों के व्यापक गतिशील रेंज के साथ जुड़ा हुआ है।
प्रोटीन एकाग्रता का निर्धारण
ब्रैडफोर्ड परख, लौरी परख और bicinchoninic एसिड (बीसीए) परख आम assays प्रोटीन की एकाग्रता का निर्धारण कर रहे हैं। गोजातीय सीरम albumin (BSA) सर्वाधिक उपयोग होने वाले प्रोटीन मानक से एक है।
लिसेस बफ़र
Lysis बफर सेल सामग्री या ऊतक (टिशू कल्चर, पौधे, बैक्टीरिया, कवक, आदि) के अनुसार चुना जाना चाहिए, और है कि क्या कोशिकाओं एक संरचना और संरचना के प्रकार में हैं। lysis की एक विस्तृत श्रृंखला प्रोटीन, झिल्ली की निकासी के लिए बफ़र्स, और अंगों में एक या अधिक डिटर्जेंट से तैयार कर रहे हैं। डिटर्जेंट आम तौर पर परीक्षण और त्रुटि परीक्षण या के माध्यम से चयन किया जाता है – अगर उपलब्ध हो – एक मौजूदा प्रोटीन निष्कर्षण प्रोटोकॉल के अनुसार। डिटर्जेंट ऊतक स्रोत और प्रोटीन के साथ संगत होना चाहिए। सामान्य तौर पर, mildest डिटर्जेंट, जो किसी विशेष ऊतक / प्रोटीन के लिए काम करता है, आदेश निकालने की अधिक से अधिक कार्यक्षमता बनाए रखने के लिए चुना जाता है। इसके अलावा, झिल्ली और अंगों के निष्कर्षण के मामले में, एक हल्के डिटर्जेंट झिल्ली बरकरार रहता है। lysis बफर में आमतौर पर इस्तेमाल किया डिटर्जेंट ज्यादातर गैर ईओण या zwitterionic, उदा हैं CHAPS, deoxycholate, ट्राइटन ™ एक्स 100, NP40, और बीच 20।
उदाहरण के लिए, इस तरह के मस्तिष्क, लीवर, आंत, गुर्दे के रूप में ऊतकों, तिल्ली आदि बस RIPA साथ बफ़र किया जा सकता है – तथापि प्रोटीज इनहिबिटर्स और डीटीटी (जैसे जेल वैद्युतकणसंचलन के लिए) शामिल किया जाना चाहिए।
20 मिमी Tris (7.8 पीएच), 137 मिमी NaCl, 2.7 मिमी KCl, 1 मिमी 2 MgCl, 1% ट्राइटन X-100, 10% (w / v) ग्लिसरॉल, 1 मिमी EDTA: कंकाल की मांसपेशी ऊतक (बर्फ जैसी ठंडी) के लिए lysis बफर , 1 मिमी प्रोटीज और फॉस्फेट अवरोध करनेवाला कॉकटेल के साथ पूरक dithiothreitol
आम बफ़र्स की टेबल और उनके पीएच रेंज। सामान्य तौर पर, इन बफ़र्स सामान्य रूप से 20-50 मिमी की सांद्रता में उपयोग किया जाता है।
| बफर | पीएच रेंज |
|---|---|
| साइट्रिक एसिड – Naoh | 2.2 – 6.5 |
| सोडियम साइट्रेट – साइट्रिक एसिड | 3.0 – 6.2 |
| नाजिया – सिरका अम्ल | 3.6 – 5.6 |
| Cacodylic एसिड सोडियम नमक – एचसीएल | 5.0 – 7.4 |
| मेरी – Naoh | 5.6 – 6.8 |
| सोडियम dihydrogen फॉस्फेट – डाइसोडियम हाइड्रोजन फॉस्फेट | 5.8 – 8.0 |
| imidazole – एचसीएल | 6.2 – 7.8 |
| एमओपीएस – Koh | 6.6 – 7.8 |
| triethanolamine हाइड्रोक्लोराइड – Naoh | 6.8 – 8.8 |
| Tris – एचसीएल | 7.0 – 9.0 |
| HEPES – Naoh | 7.2 – 8.2 |
| tricine – Naoh | 7.6 – 8.6 |
| सोडियम tetraborate – बोरिक अम्ल | 7.6 – 9.2 |
| बाइसिन – Naoh | 7.7 – 8.9 |
| ग्लाइसिन – Naoh | 8.6 – 10.6 |
अधिकांश बफ़र्स तापमान के साथ एक पीएच निर्भरता दिखा। यह Tris बफर के लिए विशेष रूप से सच है। pKa 0 डिग्री सेल्सियस पर 25 डिग्री सेल्सियस 8.85 करने पर 8.06 से बदल जाता है।
(पीएच और pKa एक बफर के: पीएच एक जलीय घोल में हाइड्रोजन आयनों की सांद्रता उपायों pKa (= एसिड पृथक्करण स्थिरांक) एक संबंधित है, लेकिन अधिक विशिष्ट मात्रा में यह कैसे एक अणु एक विशिष्ट पर कार्य करेगा भविष्यवाणी करने के लिए मदद करता है कि, है। पीएच मान।)
TRIzol
TRIzol एक रासायनिक guanidinium thiocyanate-फिनोल-क्लोरोफॉर्म निष्कर्षण के दौरान शाही सेना / डीएनए / प्रोटीन निकालने के लिए इस्तेमाल समाधान है। एक ही नमूना से उच्च डीएनए, आरएनए, और प्रोटीन की पैदावार में ultrasonically सहायता प्रदान की TRIzol निष्कर्षण परिणामों के उपयोग और इस तरह अन्य निष्कर्षण तरीकों excels।
साहित्य / संदर्भ
- Chittapalo T, Noomhorm A (2009): Ultrasonic assisted alkali extraction of protein from defatted rice bran and properties of the protein concentrates. Int J Food Sci Technol 44: 1843–1849.
- Simões, André E.S:; Pereira, Diane M.; Amaral, Joana D.; Nunes, Ana F.; Gomes, Sofia E.; Rodrigues, Pedro M.; Lo, Adrian C.; D’Hooge, Rudi; Steer, Clifford J.; Thibodeau, Stephen N.; Borralho, Pedro M.; Rodrigues, Cecília M.P. (2013): Efficient recovery of proteins from multiple source samples after trizol or trizol LS RNA extraction and long-term storage. BMC Genomics 2013, 14:181.