Ultraäänisovellukset MonkeyPox-viruksessa

Ultrasonication on tärkeä käsittelymenetelmä apinarokkoviruksen (MPXV) eristämiseksi analyyttisistä näytteistä, viruksen DNA: n pirstoutumiseksi sekä apinarokkorokotteiden valmistuksessa. Näytteen valmisteluun ennen diagnostiikkaa ja analyysiä (PCR, ELISA jne.) ultrasonicationia käytetään solujen hajottamiseen apinarokkoviruksen vapauttamiseksi solun sisäpuolelta ja / tai DNA: n fragmentoimiseksi. Rokotetuotannossa sovellukset vaihtelevat viruspartikkelien / DNA-valmistelusta, kapseloinnista lääkekantajiin ja inokulaatin formuloimisesta.
Alta löydät yksityiskohtaista tietoa ultraääniapinarokkovirusnäytteiden valmistuksesta sekä ultraäänellä avustetun MPXV-rokotteen tuotannosta.

Mitä löydät tältä sivulta:

• Ultraäänilyysi apinarokkoviruksen uuttamiseen
• Apinarokkoviruksen DNA: n ultraäänipirstoutuminen
• Ultraäänisovellukset MPXV-rokotteen tuotannossa

Ultraäänilyysi ja DNA: n pirstoutuminen ennen polymeraasiketjureaktiota (PCR)

Apinarokkovirusinfektio havaitaan nukleiinihapon monistustestillä (NAAT) käyttämällä reaaliaikaista tai tavanomaista polymeraasiketjureaktiota (PCR) viruksen DNA: n ainutlaatuisten sekvenssien havaitsemiseksi. Näyte (esim. nenänielun vaihdosta tai ihobiopsioista) sisältää viruksen soluissa.
Analyysia varten virus on vapautettava soluista ja viruksen DNA on pirstottava PCR: ää varten.

Ultraäänilyysi:

Ultraäänisolujen häiriö / lyysi on luotettava ja tehokas menetelmä virusten eristämiseksi solunäytteistä ja siten edullinen tekniikka kemiallisille aineille, kuten lysotsyymi, proteinaasi K ja erilaiset pesuaineet, joita käytetään vaihtoehtoisesti solulyysin ja DNA: n vapautumisen saavuttamiseksi.
Tällaisten kemiallisten reagenssien käyttö vaatii kuitenkin aikaa vievää näytteen valmistelua useissa vaiheissa ennen PCR-analyysiä PCR-reaktion estämisen estämiseksi. Koska PCR-estäjät vaikuttavat monistumisen tehokkuuteen, poistamattomien inhibiittoreiden määrän pienet vaihtelut voivat johtaa suuriin vaihteluihin PCR-tuotteen monistamisessa (Diaco, 1995).
Lyysin ultrasonicationin etuna on, että solurakenteiden täydellinen hajoaminen ja DNA: n vapautuminen ilman lysoivien reagenssien tarvetta ja aikaa vievää näytteen valmistusta ovat toivottavia. (vrt. Fykse et al., 2003)

Ultraääni-DNA: n pirstoutuminen:

Ultraääni-DNA: n pirstoutuminen on yksinkertaista ja luotettavaa, koska se tuottaa pituudeltaan viritettäviä DNA-fragmentteja (emäsparit, bp). Ultraäänellä DNA voidaan tehokkaasti pirstoa kohdennettuun DNA-pituuteen. Ultraääniparametrien tarkka hallinta ja hienostuneet jäähdytysvaihtoehdot estävät DNA: n hajoamisen.
Lue lisää ultraääni-DNA: n pirstoutumisesta!

Ultraäänisovellukset apinarokkovirusrokotteessa

Apinarokkovirusta vastaan käytettävät rokotteet ovat tällä hetkellä eläviä viruksia. Äskettäin kehitetyt rokotteet saattavat käyttää muita alustoja, kuten DNA-pohjaista Tällä hetkellä se sisältää modifioitua Vaccinia Ankara viursia, heikennettyä, replikoitumatonta orthopoxvirusta. Se sisältää myös Trisiä (tris-aminometaania) ja natriumkloridia. Rokote voi sisältää myös pieniä määriä DNA: ta ja proteiinia kanan alkion fibroblastisoluista, joita käytetään rokoteviruksen, bentsonaasin ja antibioottiyhdisteiden, kuten gentamysiinin ja siprofloksasiinin, kasvattamiseen.

Ultraäänihomogenisointia käytetään elävien heikennettyjen virusrokotteiden, DNA-rokotteiden, moniarvoisten DNA-cocktailien, mRNA-rokotteiden, rekombinanttiproteiinirokotteiden, virusmaisten hiukkasrokotteiden jne.

Löydät tarkempia tietoja ultraäänisovelluksista rokotteiden valmistuksen parantamiseksi!

Protokolla apinarokkoviruksen ultraäänieristykseen

Stittelaarin (2005) tutkimusryhmä käytti ultraäänilyysiä vapauttaakseen apinarokkoviruksen kasvun isäntäsoluviljelmästä sekä tartunnan saaneiden kädellisten kurkunvaihtojen kautta saaduista soluista.

Apinarokkorokotteen valmistelu:

Apinarokkoviruksia kasvatettiin spesifisissä taudinaiheuttajista vapaissa kanan alkion fibroblastisoluissa. Kun virussolususpensiota on inkuboitu 1-2 päivää, se kerätään yhdellä jäädytyssulatuskierroksella ja väkevöidään sentrifugoimalla. Pelletti suspendoitiin uudelleen ja altistettiin useille ultraäänihomogenointikierroksille.

Apinarokkoviruksen eristäminen rokotetuista makakeista:

Näytteet jäädytettiin sulatettiin kolme kertaa ja sonikoitiin ultraääni CupHornissa. Kahta laimennosta (1:10 ja 1:100) kuljetuselatusaineessa, jota täydennettiin 1-prosenttisella sikiön naudan seerumilla, käytettiin Vero-solujen yksikerroksisten kasvien siirrostamiseen kuuden kuopan levyihin. 1 tunnin inkuboinnin jälkeen 37 °C:ssa inokulaatti poistettiin ja korvattiin elatusaineella, jota täydennettiin 1-prosenttisella naudan sikiöseerumilla. Yksikerroksisia kasveja viljeltiin 5 päivää 37 °C:ssa ja värjättiin kristallivioletilla liuoksella.
(vrt. Stittelaar et al., 2005)

Ultrasonicators virusanalyysiin ja rokotteiden tuotantoon

Hielscher Ultrasonics laaja tuotevalikoima tarjoaa ihanteellisen ultraäänilaitteen tutkimus- ja analyyttisiin laboratorioihin sekä teolliseen rokotteiden valmistukseen.
Hielscher Ultrasonics on erikoistunut korkean suorituskyvyn ultraäänilaitteiden ja sono-bioreaktorien suunnitteluun, valmistukseen ja jakeluun käytettäväksi tutkimus- ja analyyttisissä laboratorioissa sekä toteutukseen teollisessa rokotetuotannossa (esim. Rokotteet, Apis).
Sonikaatiota voidaan soveltaa avoimiin astioihin, suljettuihin jatkuvasti sekoitettuihin reaktoreihin ja jatkuviin läpivirtausreaktoreihin. Kaikki ultraäänijärjestelmien osat, jotka joutuvat kosketuksiin nestemäisen väliaineen kanssa, on valmistettu ruostumattomasta teräksestä, titaanista tai lasista. Autoklaavissa olevat osat ja saniteettikalusteet varmistavat tuotannon lääkelaatuiset olosuhteet.
Automaattinen tietojen tallennus: Älykäs ohjelmisto tallentaa sonikaatioprosessin parametrit automaattisesti integroidulle SD-muistikortille. Kaikkien prosessiparametrien tarkka hallinta varmistaa toistettavuus, Tuotannon standardointija helpottaa farmaseuttisten tuotteiden turvallisuusstandardien täyttämistä.
Hielscher Ultrasonics’ Ultraääniprosessorit ovat erittäin luotettavia ja niitä voidaan hallita tarkasti. Kaikki teolliset ultraäänilaitteet voidaan säätää tuottamaan koko alue alemmista erittäin korkeisiin amplitudit. Hielscherin ultraäänijärjestelmien kestävyys mahdollistaa 24/7 toiminnan raskaassa käytössä ja vaativissa ympäristöissä.

Alla oleva taulukko antaa sinulle viitteitä ultraäänilaitteidemme likimääräisestä käsittelykapasiteetista: