Ultrasonication on tärkeä käsittelymenetelmä apinarokkoviruksen (MPXV) eristämiseksi analyyttisistä näytteistä, viruksen DNA: n pirstoutumiseen sekä apinarokkorokotteiden valmistukseen. Näytteenvalmistukseen ennen diagnostiikkaa ja analyysiä (PCR, ELISA jne.) ultrasonicationia käytetään solujen lanseeraamiseen apinarokkoviruksen vapauttamiseksi solun sisäosasta ja / tai DNA: n fragmentoimiseksi. Rokotetuotannossa sovellukset vaihtelevat viruspartikkelien / DNA: n valmistuksesta, kapseloinnista lääkeaineiden kantajiin ja inokulan muotoilusta.
Alla on yksityiskohtaista tietoa ultraääniapinapokkovirusnäytteen valmistuksesta sekä ultraäänellä avustetusta MPXV-rokotteen tuotannosta.

Mitä löydät tältä sivulta:

• Ultraäänilyysi Monkeypox-viruksen uuttamiseen
• Monkeypox-viruksen DNA: n ultraääni pirstoutuminen
• Ultraäänisovellukset MPXV-rokotetuotannossa

Ultraäänilyysi ja DNA: n pirstoutuminen ennen polymeraasiketjureaktiota (PCR)

Apinarokkovirusinfektio havaitaan nukleiinihapon vahvistustestauksella (NAAT), käyttäen reaaliaikaista tai tavanomaista polymeraasiketjureaktiota (PCR) viruksen DNA: n ainutlaatuisten sekvenssien havaitsemiseksi. Näyte (esim. nenänielun vaihdosta tai ihobiopsioista) sisältää viruksen soluissa.
Analyysiä varten viruksen on vapaututtava soluista, ja viruksen DNA: n on oltava pirstoutunut PCR: ää varten.

Ultraääni Lyysi:

Ultraäänisolujen häiriö / lyysi on luotettava ja tehokas menetelmä virusten eristämiseksi solunäytteistä ja siten edullinen tekniikka kemiallisiin tekijöihin, kuten lysotsyymiin, proteinaasi K: hen ja erilaisiin pesuaineisiin, joita käytetään vaihtoehtoisesti solujen hajoamisen ja DNA: n vapautumisen saavuttamiseen.
Tällaisten kemiallisten reagenssien käyttö edellyttää kuitenkin aikaa vievää näytteen valmistamista useissa vaiheissa ennen PCR-analyysiä PCR-reaktion estämisen estämiseksi. Koska PCR-estäjät vaikuttavat monistuksen tehokkuuteen, pienet vaihtelut inhibiittoreiden määrässä, joita ei poisteta, voivat johtaa suuriin vaihteluihin PCR-tuotteen monistuksessa (Diaco, 1995).
Ultrasonicationin etuna hajoamiselle on, että solurakenteiden täydellinen häiriintyminen ja DNA: n vapautuminen ilman, että tarvitaan reagenssien ja aikaa vievän näytteen valmistelun tarvetta, ovat toivottavia. (vrt. Fykse ym., 2003)

Ultraääni-DNA: n pirstoutuminen:

Ultraääni-DNA:n pirstoutuminen on yksinkertaista ja luotettavaa, samoin kuin tuottaa DNA-fragmentteja, jotka ovat pituudeltaan viritettävissä (basepairs, bp). Ultraäänen avulla DNA voidaan hajottaa tehokkaasti kohdennettuun DNA-pituuteen. Ultraääniparametrien tarkka hallinta ja hienostuneet jäähdytysvaihtoehdot estävät DNA: n hajoamisen.
Lue lisää ultraääni-DNA:n pirstoutumisesta!

Ultraäänisovellukset Monkeypox-virusrokotteessa

Apinarokkovirusta vastaan käytetyt rokotteet ovat tällä hetkellä eläviä virusrokotteita. Äskettäin kehitetyt rokotteet saattavat käyttää muita alustoja, kuten DNA-pohjaisia Tällä hetkellä sisältää modifioitua Vaccinia Ankara viursia, heikennettyä, ei-replikoituvaa ortopoxvirusta. Se sisältää myös Trisiä (tris-aminometaania) ja natriumkloridia. Rokote voi sisältää myös pieniä määriä DNA:ta ja proteiinia kananalkion fibroblastisoluista, joita käytetään rokoteviruksen, bentsonaasin ja antibioottiyhdisteiden, kuten gentamysiinin ja siprofloksasiinin, kasvattamiseen.

Ultraäänihomogenisointia käytetään elävän heikennetyn virusrokotteen, DNA-rokotteiden, monivalenttien DNA-cocktailien, mRNA-rokotteiden, rekombinanttiproteiinirokotteiden, viruksen kaltaisten hiukkasrokotteiden jne.

Löydät syvällisempää tietoa ultraäänisovelluksista rokotteiden valmistuksen parantamiseksi!

Protokolla monkeypox-viruksen ultraäänieristykseen

Stittelaarin (2005) tutkimusryhmä käytti ultraäänilyysiä vapauttaakseen apinarokkoviruksen kasvun isäntäsoluviljelmästä sekä soluista, jotka on saatu kurkunvaihtojen kautta tartunnan saaneista kädellisistä.

Apinarokko-rokotteen valmistus:

Apinarokkoviruksia kasvatettiin spesifisissä patogeenittömissä kananalkion fibroblastisoluissa. Kun virussolususpensiota oli inkuboitu 1–2 päivän ajan, se kerättiin yhdellä jäädytys-sulatuskierroksella ja konsentroitiin sitten sentrifugoimalla. Pelletti keskeytettiin uudelleen ja altistettiin useille ultraäänihomogenisointikierroksille.

Apinarokkoviruksen eristäminen rokotetuista makakeista:

Näytteet jäädytettiin-sulatettiin kolme kertaa ja sonikoitiin ultraäänikuphornissa. Kaksi laimennosta (1:10 ja 1:100) kuljetusalustassa, jota täydennettiin 1%: lla sikiön naudan seerumilla, käytettiin verosolujen yksikerroksisten kerroksien rokottamiseen kuusikuoppalevyissä. Kun 1 tunti inkubointia oli inkuboitu 37 °C:ssa, inokulaatti poistettiin ja korvattiin viljelyväliaineella, jota täydennettiin 1%: lla sikiön naudan seerumilla. Yksikerroksisia viljeltiin 5 päivän ajan 37 °C:ssa ja värjättiin kristallivioletilla liuoksella.
(vrt. Stittelaar ym., 2005)

Ultraäänilaitteet virusanalyysiin ja rokotetuotantoon

Hielscher Ultrasonicsin laaja tuotevalikoima tarjoaa ihanteellisen ultraäänilaitteen tutkimus- ja analyyttisiin laboratorioihin sekä teolliseen rokotevalmistukseen.
Hielscher Ultrasonics on erikoistunut korkean suorituskyvyn ultraäänilaitteiden ja sono-bioreaktoreiden suunnitteluun, valmistukseen ja jakeluun käytettäväksi tutkimus- ja analyyttisissä laboratorioissa sekä toteutukseen teollisessa rokotetuotannossa (esim. rokotteet, Api).
Sonikaatiota voidaan soveltaa avoimiin astioihin, suljettuihin jatkuvasti sekoitettuihin reaktoreihin ja jatkuviin läpivirtausreaktoreihin. Kaikki ultraäänijärjestelmien osat, jotka joutuvat kosketuksiin nestemäisen väliaineen kanssa, on valmistettu ruostumattomasta teräksestä, titaanista tai lasista. Autoklavoitavat osat ja saniteettiliittimet varmistavat tuotannon lääketason olosuhteet.
Automaattinen tietojen tallennus: Älykäs ohjelmisto kirjaa parametrit Ultra äänellä prosessin automaattisesti integroidun SD-muisti kortille. Kaikkien prosessi parametrien tarkka hallinta varmistaa, että toistettavuus, tuotannon standardointi, ja helpottaa farmaseuttisten tuotteiden turvallisuutta koskevien vaatimusten täyttämistä.
Hielscher Ultrasonics’ ultraääniprosessorit ovat erittäin luotettavia ja niitä voidaan ohjata tarkasti. Kaikki teolliset ultraäänilaitteet voidaan säätää toimittamaan koko alue alemmista erittäin korkeisiin amplitudiin. Hielscherin ultraäänijärjestelmien kestävyys mahdollistaa 24/7 toiminnan raskaassa käytössä ja vaativissa ympäristöissä.

Seuraavassa taulukossa on merkintä ultrasonicatorien likimääräisestä käsittelykapasiteetista: