Ultraäänisovellukset MonkeyPox-viruksessa

Ultrasonication on tärkeä käsittelymenetelmä apinarokkoviruksen (MPXV) eristämiseksi analyyttisistä näytteistä, viruksen DNA: n pirstoutumiseen sekä apinarokkorokotteiden valmistukseen. Näytteenvalmistukseen ennen diagnostiikkaa ja analyysiä (PCR, ELISA jne.) ultrasonicationia käytetään solujen lanseeraamiseen apinarokkoviruksen vapauttamiseksi solun sisäosasta ja / tai DNA: n fragmentoimiseksi. Rokotetuotannossa sovellukset vaihtelevat viruspartikkelien / DNA: n valmistuksesta, kapseloinnista lääkeaineiden kantajiin ja inokulan muotoilusta.
Alla on yksityiskohtaista tietoa ultraääniapinapokkovirusnäytteen valmistuksesta sekä ultraäänellä avustetusta MPXV-rokotteen tuotannosta.

 

Mitä löydät tältä sivulta:

Informaatio pyyntö




Huomaa, että Tietosuojakäytäntö.


Korkean suorituskyvyn ultraäänilaitteet ovat kriittinen käsittelytyökalu monien rokotteiden valmistuksessa.

Tämä 2x 1 kW: n ultraäänilaitteiden järjestelmä jatkuvan virtauksen toimintaa varten on asennettu rokotteiden tuotantolaitokseen.

Ultraäänilyysi ja DNA: n pirstoutuminen ennen polymeraasiketjureaktiota (PCR)

Apinarokkovirusinfektio havaitaan nukleiinihapon vahvistustestauksella (NAAT), käyttäen reaaliaikaista tai tavanomaista polymeraasiketjureaktiota (PCR) viruksen DNA: n ainutlaatuisten sekvenssien havaitsemiseksi. Näyte (esim. nenänielun vaihdosta tai ihobiopsioista) sisältää viruksen soluissa.
Analyysiä varten viruksen on vapaututtava soluista, ja viruksen DNA: n on oltava pirstoutunut PCR: ää varten.

Ultraääni Lyysi:

Ultrasonicator UP200Ht mikrotip S26d2: lla biologisten näytteiden ultraäänilyysiinUltraäänisolujen häiriö / lyysi on luotettava ja tehokas menetelmä virusten eristämiseksi solunäytteistä ja siten edullinen tekniikka kemiallisiin tekijöihin, kuten lysotsyymiin, proteinaasi K: hen ja erilaisiin pesuaineisiin, joita käytetään vaihtoehtoisesti solujen hajoamisen ja DNA: n vapautumisen saavuttamiseen.
Tällaisten kemiallisten reagenssien käyttö edellyttää kuitenkin aikaa vievää näytteen valmistamista useissa vaiheissa ennen PCR-analyysiä PCR-reaktion estämisen estämiseksi. Koska PCR-estäjät vaikuttavat monistuksen tehokkuuteen, pienet vaihtelut inhibiittoreiden määrässä, joita ei poisteta, voivat johtaa suuriin vaihteluihin PCR-tuotteen monistuksessa (Diaco, 1995).
Ultrasonicationin etuna hajoamiselle on, että solurakenteiden täydellinen häiriintyminen ja DNA: n vapautuminen ilman, että tarvitaan reagenssien ja aikaa vievän näytteen valmistelun tarvetta, ovat toivottavia. (vrt. Fykse ym., 2003)

Ultraääni-DNA: n pirstoutuminen:

Ultraääni-DNA:n pirstoutuminen on yksinkertaista ja luotettavaa, samoin kuin tuottaa DNA-fragmentteja, jotka ovat pituudeltaan viritettävissä (basepairs, bp). Ultraäänen avulla DNA voidaan hajottaa tehokkaasti kohdennettuun DNA-pituuteen. Ultraääniparametrien tarkka hallinta ja hienostuneet jäähdytysvaihtoehdot estävät DNA: n hajoamisen.
Lue lisää ultraääni-DNA:n pirstoutumisesta!

 

Video näyttää ultraääninäytteen valmistusjärjestelmän UIP400MTP, joka mahdollistaa minkä tahansa tavallisen monikaivolevyn luotettavan näytteen valmistuksen korkean intensiteetin ultraäänellä. UIP400MTP: n tyypillisiä sovelluksia ovat solulyysi, DNA, RNA ja kromatiini leikkaus sekä proteiinin uuttaminen.

Ultraääni UIP400MTP monitasoiseen levyn sonikaatioon

Informaatio pyyntö




Huomaa, että Tietosuojakäytäntö.


Ultraäänisovellukset Monkeypox-virusrokotteessa

Ultrasonicationia käytetään rokotteiden, kuten apinarokkorokotteiden, tuottamiseen. Apinarokkovirusta vastaan käytetyt rokotteet ovat tällä hetkellä eläviä virusrokotteita. Äskettäin kehitetyt rokotteet saattavat käyttää muita alustoja, kuten DNA-pohjaisia Tällä hetkellä sisältää modifioitua Vaccinia Ankara viursia, heikennettyä, ei-replikoituvaa ortopoxvirusta. Se sisältää myös Trisiä (tris-aminometaania) ja natriumkloridia. Rokote voi sisältää myös pieniä määriä DNA:ta ja proteiinia kananalkion fibroblastisoluista, joita käytetään rokoteviruksen, bentsonaasin ja antibioottiyhdisteiden, kuten gentamysiinin ja siprofloksasiinin, kasvattamiseen.

Ultraäänihomogenisointia käytetään elävän heikennetyn virusrokotteen, DNA-rokotteiden, monivalenttien DNA-cocktailien, mRNA-rokotteiden, rekombinanttiproteiinirokotteiden, viruksen kaltaisten hiukkasrokotteiden jne.

Ultraäänien sovellukset rokotetuotannossa vaihtelevat

  • viruspartikkeleiden ja -aineiden dispersio
  • emulgointi
  • virusten inaktivointi
  • lääkeaineen kantaja-aineformulaatio (NLC, SLN)
  • kapselointi
  • aineiden liuottaminen
  • adjuvanttien valmistelu
  • Kaasunpoisto / de-aerointi

 

Löydät syvällisempää tietoa ultraäänisovelluksista rokotteiden valmistuksen parantamiseksi!

Protokolla monkeypox-viruksen ultraäänieristykseen

Stittelaarin (2005) tutkimusryhmä käytti ultraäänilyysiä vapauttaakseen apinarokkoviruksen kasvun isäntäsoluviljelmästä sekä soluista, jotka on saatu kurkunvaihtojen kautta tartunnan saaneista kädellisistä.

Apinarokko-rokotteen valmistus:

Apinarokkoviruksia kasvatettiin spesifisissä patogeenittömissä kananalkion fibroblastisoluissa. Kun virussolususpensiota oli inkuboitu 1–2 päivän ajan, se kerättiin yhdellä jäädytys-sulatuskierroksella ja konsentroitiin sitten sentrifugoimalla. Pelletti keskeytettiin uudelleen ja altistettiin useille ultraäänihomogenisointikierroksille.

Apinarokkoviruksen eristäminen rokotetuista makakeista:

Näytteet jäädytettiin-sulatettiin kolme kertaa ja sonikoitiin ultraäänikuphornissa. Kaksi laimennosta (1:10 ja 1:100) kuljetusalustassa, jota täydennettiin 1%: lla sikiön naudan seerumilla, käytettiin verosolujen yksikerroksisten kerroksien rokottamiseen kuusikuoppalevyissä. Kun 1 tunti inkubointia oli inkuboitu 37 °C:ssa, inokulaatti poistettiin ja korvattiin viljelyväliaineella, jota täydennettiin 1%: lla sikiön naudan seerumilla. Yksikerroksisia viljeltiin 5 päivän ajan 37 °C:ssa ja värjättiin kristallivioletilla liuoksella.
(vrt. Stittelaar ym., 2005)

Tässä videossa näytämme sinulle 2 kilowatin ultraäänijärjestelmän inline-toimintaan puhdistettavassa kaapissa. Hielscher toimittaa ultraäänilaitteita lähes kaikille teollisuudenaloille, kuten kemianteollisuudelle, lääke-, kosmetiikka-, petrokemian prosesseihin sekä liuotinpohjaisiin uuttoprosesseihin. Tämä puhdistettava ruostumattomasta teräksestä valmistettu kaappi on suunniteltu käytettäväksi vaarallisilla alueilla. Tätä tarkoitusta varten asiakas voi puhdistaa suljetun kaapin typellä tai raikkaalla ilmalla estääkseen syttyvien kaasujen tai höyryjen pääsyn kaappiin.

2x 1000 watin ultraäänilaitteet puhdistettavassa kaapissa asennettavaksi vaarallisille alueille

Ultraäänilaitteet virusanalyysiin ja rokotetuotantoon

Hielscher Ultrasonicsin laaja tuotevalikoima tarjoaa ihanteellisen ultraäänilaitteen tutkimus- ja analyyttisiin laboratorioihin sekä teolliseen rokotevalmistukseen.
Hielscher Ultrasonics on erikoistunut korkean suorituskyvyn ultraäänilaitteiden ja sono-bioreaktoreiden suunnitteluun, valmistukseen ja jakeluun käytettäväksi tutkimus- ja analyyttisissä laboratorioissa sekä toteutukseen teollisessa rokotetuotannossa (esim. rokotteet, Api).
Hielscher Ultrasonicsin ultraääniprosessin parametrien tarkka hallinta' älykkäät ohjelmistotSonikaatiota voidaan soveltaa avoimiin astioihin, suljettuihin jatkuvasti sekoitettuihin reaktoreihin ja jatkuviin läpivirtausreaktoreihin. Kaikki ultraäänijärjestelmien osat, jotka joutuvat kosketuksiin nestemäisen väliaineen kanssa, on valmistettu ruostumattomasta teräksestä, titaanista tai lasista. Autoklavoitavat osat ja saniteettiliittimet varmistavat tuotannon lääketason olosuhteet.
Automaattinen tietojen tallennus: Älykäs ohjelmisto kirjaa parametrit Ultra äänellä prosessin automaattisesti integroidun SD-muisti kortille. Kaikkien prosessi parametrien tarkka hallinta varmistaa, että toistettavuus, tuotannon standardointi, ja helpottaa farmaseuttisten tuotteiden turvallisuutta koskevien vaatimusten täyttämistä.
Hielscher Ultrasonics’ ultraääniprosessorit ovat erittäin luotettavia ja niitä voidaan ohjata tarkasti. Kaikki teolliset ultraäänilaitteet voidaan säätää toimittamaan koko alue alemmista erittäin korkeisiin amplitudiin. Hielscherin ultraäänijärjestelmien kestävyys mahdollistaa 24/7 toiminnan raskaassa käytössä ja vaativissa ympäristöissä.

Seuraavassa taulukossa on merkintä ultrasonicatorien likimääräisestä käsittelykapasiteetista:

erätilavuus Virtausnopeus Suositeltavat laitteet
monikaivo- / mikrotitterilevyt N/a UIP400MTP-työkalu
1 - 500 ml 10 - 200 ml / min UP100H
10 - 2000 ml 20 - 400 ml / min Uf200 ः t, UP400St
0.1 - 20L 0.2 - 4 l / min UIP2000hdT
10 - 100 litraa 2 - 10 l / min UIP4000hdT
N/a 10 - 100 l / min UIP16000
N/a suuremmat klusterin UIP16000

Ota meihin yhteyttä! / Kysy meiltä!

Kysy lisä tietoja

Käytä alla olevaa lomaketta pyytääksesi lisätietoja ultraääniprosessoreista, sovelluksista ja hinnasta. Olemme iloisia voidessamme keskustella prosessista kanssasi ja tarjota sinulle ultraäänijärjestelmä, joka täyttää vaatimuksesi!









Huomaathan, että Tietosuojakäytäntö.


Ultraäänihomogenisaattorit ovat luotettavia DNA-leikkausta varten

Ultraääni-DNA leikkaus
Mukautettu Jkwchuista CC-BY-SA.03:n mukaisesti



Kirjallisuus / Referenssit

  • Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
  • Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidovudine in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
  • J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
  • Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
  • Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.

Tosiasiat, jotka kannattaa tietää

Apinapox-virus

Apinarokko (MPV, MPXV tai hMPXV) on kaksijuosteisen DNA-viruksen laji, joka aiheuttaa viruksen zoonoottisen taudin. Tämä tauti tunnetaan apinarokko-infektiona ja sitä voi esiintyä ihmisillä ja eläimillä. Se kuuluu Ortopoxvirus-sukuun Poxviridae-heimossa. Apinarokkovirus on yksi ihmisen ortopoxviruksesta yhdessä variola (VARV), lehmärokon (CPX) ja vaccinia (VACV) virusten kanssa. Ortopox-viruksille on tunnusomaista suuret tiilenmuotoiset virushiukkaset, jotka sisältävät noin 200 000 bp: n kaksijuosteisen DNA-genomin.

ELISA-määritys

ELISA on lyhenne sanoista Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay ja se on merkitty immunomääritys, jota pidetään immunomääritysten kultaisena standardina. ELISA on immunologinen testi, jota arvostetaan sen korkean diagnostisen herkkyyden vuoksi, jota käytetään havaitsemaan ja kvantifioimaan molekyylejä, mukaan lukien vasta-aineet, antigeenit, proteiinit, glykoproteiinit ja hormonit. ELISA:n periaate perustuu antigeenin ja vasta-aineiden vuorovaikutukseen. Tällä antigeeni-vasta-aine-vuorovaikutuksella spesifiset vasta-aineet sitoutuvat sen kohdeantigeeniin. Vasta kun vuorovaikutus tapahtuu, substraatti voi sitoutua entsyymiin ja sen jälkeen voidaan havaita substraatin muuntuminen, mikä tarkoittaa, että saadaan positiivinen tulos.


Korkean suorituskyvyn ultraäänet! Hielscherin tuotevalikoima kattaa koko spektrin kompaktista laboratorion ultraäänilaitteesta penkki-top-yksiköiden yli täysteollinen ultraäänijärjestelmä.

Hielscher Ultrasonics valmistaa korkealaatuisia ultraäänihomygenisoijia laboratorio että teollisen koon mukaan.