超音波による血小板リッチ血清の調製
- 多血小板血漿（PRP）とは、血小板を濃縮した血漿のことで、医療やエステティック治療に用いられる。
- 超音波による溶解とコンディショニングは、血小板を豊富に含む血漿を調製するのに非常に効果的な方法である。
- Hielscher Ultrasonics社は、血液処理（例：クリーンルームの内部および外部の準備）の要件に適合する様々な超音波システムを提供しています。
血小板リッチ血清
ソニケーションは、成長因子を放出させるために、自己血血清中の血小板を溶解させる確実で簡単な方法である。血小板由来画分 – 自己調整血清（ACS）としても知られる – は、組織修復や美容治療に使用される。最適な結果を得るために、PRPは注入前に濃縮される。
細胞増殖因子を含む濃縮血漿を調製するために、超音波処理は細胞膜を溶解し、血小板からほぼ完全な細胞増殖因子を放出させる非常に効果的かつ効率的な方法である。超音波溶解とコンディショニングにより、抗凝固血液も使用できる。
超音波処理によるPRPのコンディショニングは、濃縮成長因子を得るための便利で費用効果の高い方法である。
多血小板血漿（PRP）の超音波溶解
超音波による溶解効果
血清を超音波処理すると、血小板が均一に溶解し、内包されていた成長因子（成長因子AB（PDGF-AB）、成長因子AA（PDGF-AA）、成長因子BB（PDGF-BB）、血管内皮成長因子（VEGF）、トランスフォーミング成長因子β（TGF-β）、上皮成長因子（EGF）、インスリン様成長因子（IGF）、上皮細胞成長因子ECGFおよび線維芽細胞成長因子（FGF））。の現象を利用して、超音波処理により血小板とそのα顆粒を破壊する。 音響キャビテーション.血小板溶解に超音波キャビテーションを使用することで、凍結融解の繰り返しによる成長因子活性への悪影響を軽減することができる。
超音波PRP調製プロトコール
採血した新鮮な自己血約16mLをチューブに入れ、血液と抗凝固剤がよく混ざるように静かに8～10回転倒混和する。その後、1800g、20分間、室温で遠心する。遠心分離後、血小板と単核球は血漿層の下部に白っぽい層を作り、これを血小板豊富血漿（PRP）と呼ぶ。上層は血小板乏血漿（PPP）と呼ばれる。単核球は除去することも、サンプルに残すこともできます。多くの場合、コンタミネーションのリスクを伴う追加工程を避けるため、単核球はPRPサンプル中に残る。
注意：自己PRPの超音波処理は無菌状態で行わなければならない。
PRPとPPPを分離し、回収する。PPPには1.5mLの10%塩化カルシウム溶液を、PRPには0.5mLの5%エタノールを加える。両方の懸濁液を穏やかに撹拌し、室温で5分間放置する。最後に、1mLのPPPをPRP懸濁液に加え、フィブリン塊が形成されるまで放置する。
超音波治療： 形成された血小板ゲルは放出された成長因子のリザーバーとして働くので、利用可能な成長因子を放出するためにはフィブリンゲルを破壊しなければならない。超音波溶解と成長因子放出のパラメーターは以下の通りである：で超音波処理する。 UP200Ht または UP200St (200W、26kHz）のソノトロー ドS26d2 を用いて、チューブ内の試料を超音波処理します。血液サンプルの過加熱を避けるため、超音波処理をパルス周期で行うことができます（例：10秒オン、30秒オフ）。試料は冷却のため氷上に置き、温度が最適に2～3℃になるようにします。 – 5°C.超音波処理後、サンプルを16000 gで5分間、室温で遠心する。上清は回収され、-70℃で保存できる。
PRP画分中の血小板濃度は1.7％濃縮された。 – 全血中の血小板数の文献平均値と比較すると、超音波処理法では4.5倍。
PRPは、脂肪由来幹細胞療法(脂肪組織から超音波放出された自己幹細胞PRPと混合し、患者の組織に注入して修復する）。
超音波装置
Hielscher Ultrasonics社は、洗練された信頼性の高い超音波技術のエキスパートです。弊社の超音波装置は、溶解、抽出、サンプル前処理に世界中で使用されています。 – 直接と間接によって。 オートクレーブ のみならず 使い捨て アクセサリーを使用することで コンタミネーションフリー 自己血液サンプルの処理当社のシステムのほとんどは、以下の超音波溶解に使用できる。 幹細胞 とPRPを使用することで、当社の超音波装置は経済的にさらに効率的なものとなっている。
この表は、血小板豊富血漿の調製に適した超音波装置と推奨サンプル量をそれぞれ示しています。より大型の超音波装置やカスタマイズされたシステムもご利用いただけます。
| 装置 | パワー [W］ | 周波数[kHz］ | タイプ | 体積 [mL］ | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| バイアルツイーター | 200 | 26 | 自立型 | 0.5 | – | 1.5 |
| UP50H | 50 | 30 | ハンドヘルドまたはスタンドマウント | 0.01 | – | 250 |
| UP100H | 100 | 30 | ハンドヘルドまたはスタンドマウント | 0.01 | – | 500 |
| UP200Ht | 200 | 26 | ハンドヘルドまたはスタンドマウント | 0.1 | – | 1000 |
| UP200St | 200 | 26 | スタンドマウント | 0.1 | – | 1000 |
| UP400ST | 400 | 24 | スタンドマウント | 5.0 | – | 2000 |
| UP200St-ソノステップ | 200 | 26 | 自立型 | 30 | – | 500 |
| GDmini2 | 200 | 26 | コンタミフリーフローセル | |||
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GDmini2とUP200St-TDトランスデューサー（200ワット）
文献／参考文献
- Fortunato, T. M.; Beltrami, Ch.; Emanueli, C.; De Bank, P.A.; Pula, G. (2016)：Platelet lysate gel and endothelial progenitors stimulate microvascular network formation in vitro: tissue engineering implications.Sci. Rep. 6, 2016.
- Hamid, M.S.A.; Yusof, Ashril; Ali, Mohamed Razif Mohamed (2014)：急性筋損傷に対する血小板リッチ血漿（PRP）：A Systematic Review.PLOS ONE Volume 9, Issue 2, 2014.
知っておくべき事実
多血小板血漿
血小板豊富血漿には、成長因子AB（PDGF-AB）、血小板由来成長因子AA（PDGF-AA）、血小板由来成長因子BB（PDGF-BB）、血管内皮成長因子（VEGF）、トランスフォーミング成長因子β（TGF-β）、上皮成長因子（EGF）、インスリン様成長因子（IGF）、上皮細胞成長因子ECGFおよび線維芽細胞成長因子（FGF）が含まれており、これらは細胞の成長と再生に重要な刺激因子である。
自己調整血清（ACS）
自己調整血漿（ACP）は、自己血液から抽出される血小板を豊富に含む血漿であり、様々な整形外科疾患や外科的処置における再生をサポートするために使用される。コンディショニング血清は、血漿を他の血液成分（赤血球など）から分離し、濃縮することによって調製される。ACPは血小板を豊富に含む血漿（PRP）である。PRPとは、全血と比較して血小板の濃度が著しく高い血漿の総称である。全血から抽出される。ACPの主成分には、血小板細胞（血小板）と、治癒過程で重要な役割を果たすいくつかの成長因子が含まれる。他の血小板豊富血漿製剤とは異なり、ACPは、高濃度で存在すると治癒過程に有害となる好中球顆粒球などの白血球の濃度が低いという特徴がある。
多血小板血漿注射
多血小板血漿は、再生医療や美容整形における注射として使用されている。PRPの適用は、筋肉の治癒と筋肉の回復の著しい促進を約束する。さらに、炎症、関節炎、疼痛、創傷、治癒の遅い開放創、重篤な皮膚熱傷の治療にも使用されている。PRPには高レベルの成長因子が含まれており、損傷した組織が修復されるように治癒細胞を刺激し、保護する。
美容治療では、PRPは発毛や皮膚の再生を促進する効果があるとされている（ヴァンパイア治療としても知られている）。
血小板由来成長因子（PDGF）
血小板由来成長因子（PDGF）という用語は、PDGF-A、PDGF-B、PDGF-C、PDGF-Dの因子を指す。PDGFは4つのリガンド（PDGF-A、PDGF-B、PDGF-C、PDGF-D）と2つの受容体（PDGFR-αとPDGFR-β）からなるシグナル伝達ネットワークである。
成長因子、すなわちタンパク質は、細胞の成長と分裂を調節する。哺乳類の血清に含まれる主要な分裂促進因子であり、血栓形成の際に血小板から放出されることから、すでに存在する血管組織から血管を成長させる血管形成（血管新生）に重要な役割を果たしている。