ASTM E2799-22 Protocollo per la valutazione antimicrobica
Hielscher UIP400MTP è un sonicatore per piastre multipozzetto potente ed efficiente, progettato per semplificare la fase di sonicazione nel protocollo ASTM E2799-22. Fornendo un'energia ultrasonica uniforme su tutta la piastra per microtitolazione, l'UIP400MTP assicura un distacco costante e affidabile delle biofilm dai coperchi dei pozzetti senza danneggiare le cellule o compromettere l'integrità del campione. La sua capacità di alta produttività e la facilità d'uso riducono significativamente i tempi di elaborazione e migliorano la riproducibilità, rendendolo una soluzione ideale per i laboratori che eseguono saggi di vitalità dei biofilm e test di efficacia antimicrobica.
ASTM E2799
ASTM E2799 è un metodo di prova standardizzato progettato per valutare l'efficacia degli agenti antimicrobici contro i biofilm, con particolare attenzione allo Pseudomonas aeruginosa. I biofilm sono comunità microbiche complesse che aderiscono alle superfici e mostrano una maggiore resistenza ai trattamenti antimicrobici, rappresentando una sfida significativa in ambito sanitario, industriale e ambientale. Questo metodo utilizza il saggio della concentrazione minima di eradicazione del biofilm (MBEC) per fornire un quadro affidabile e riproducibile per testare i disinfettanti in condizioni realistiche di biofilm.
Sonicatore per piastre da 96 pozzetti UIP400MTP per lo screening ad alta produttività
In che modo la sonicazione contribuisce alla ASTM E2799?
La sonicazione svolge un ruolo fondamentale nel protocollo ASTM E2799 in quanto facilita il distacco dei biofilm dalle superfici di prova, garantendo una valutazione accurata della vitalità microbica dopo il trattamento. Utilizzando un'energia ultrasonica controllata, il protocollo consente di ottenere una disgregazione efficiente e coerente del biofilm senza danneggiare le cellule, permettendo di ottenere risultati precisi e riproducibili. Ciò rende l'ASTM E2799 uno strumento essenziale per far progredire la ricerca sul biofilm e sviluppare strategie antimicrobiche efficaci.
Come eseguire il test MBEC in conformità alla norma ASTM E2799-22
Il protocollo ASTM E2799-22 descrive le fasi per la valutazione dell'efficacia degli agenti antimicrobici contro i biofilm. Quando si utilizza il sonicatore per micropiastre Hielscher UIP400MTP, il protocollo può essere adattato per incorporare questo metodo di sonicazione avanzato per il distacco del biofilm. Di seguito è riportata una descrizione dei passaggi adattati all'uso del sonicatore per micropiastre UIP400MTP:
- Preparazione dei biofilm
Preparare una piastra sterile per microtitolazione a 96 pozzetti con coperchi staccabili.
Inoculare i pozzetti con una sospensione batterica standardizzata in un terreno di coltura adeguato.
Posizionare il coperchio del piolo sulla piastra, assicurandosi che i pioli siano completamente immersi nella sospensione batterica.
Incubare la piastra in condizioni controllate (ad esempio, temperatura e tempo) per consentire la formazione del biofilm sui chiodini. - Trattamento con agenti antimicrobici
Dopo la formazione del biofilm, sostituire il terreno con un terreno fresco contenente gli agenti antimicrobici in esame a diverse concentrazioni.
Rimettere il coperchio del piolo e incubare alle condizioni specificate nel progetto del test. - Preparazione per il distacco del biofilm
Dopo il trattamento, sciacquare il coperchio del piolo immergendolo in una soluzione di risciacquo sterile per rimuovere gli agenti antimicrobici residui e le cellule planctoniche poco aderenti. - Distacco del biofilm con il sonicatore UIP400MTP
Preparare una nuova piastra per microtitolazione a 96 pozzetti contenente un terreno di recupero (ad esempio, brodo di neutralizzazione).
Staccare i biofilm inserendo il coperchio del piolo nei pozzetti della piastra con terreno di recupero.
Inserire la piastra nel sonicatore UIP400MTP, assicurandosi che il coperchio e la piastra siano correttamente allineati.
Impostare il sonicatore al 70%-80% di ampiezza e sonicare per 3-4 minuti in modalità ciclo, per garantire un distacco costante del biofilm senza lisi cellulare. - Valutazione della vitalità del biofilm
Dopo la sonicazione, trattare il mezzo di recupero contenente le cellule di biofilm staccate utilizzando tecniche microbiologiche o analitiche standard, come ad esempio:- Conteggio delle unità formanti colonie (CFU): Eseguire diluizioni seriali e piastrare su agar per la conta delle cellule vitali.
- Misurazione della densità ottica (OD): utilizzare l'analisi spettrofotometrica per valutare la densità cellulare.
- Saggi di vitalità basati sulla fluorescenza: quantificare le cellule vive e morte utilizzando coloranti fluorescenti.
- Analisi dei dati
Confrontare i dati di vitalità dei biofilm trattati e non trattati per determinare l'efficacia degli agenti antimicrobici.
Calcolare la concentrazione minima di eradicazione del biofilm (MBEC) in base alla concentrazione necessaria per eliminare le cellule vitali del biofilm. - Controllo qualità
Assicurare condizioni di sonicazione coerenti calibrando regolarmente l'UIP400MTP e verificando che il processo di distacco del biofilm non comporti una lisi o una distruzione significativa delle cellule.
Includere controlli appropriati, come i biofilm non trattati e gli spazi vuoti per il solo terreno di coltura, per convalidare i risultati.
Le cellule del biofilm formatesi sui perni sono state rimosse mediante sonicazione (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Germania, UIP250MTP) per 5 minuti in piastre da 96 pozzetti contenenti terreno di coltura fresco per il recupero delle cellule.
(Immagine e studio: ©de Oliveira et al., 2016)
Integrando la UIP400MTP nel flusso di lavoro ASTM E2799-22, il processo di distacco del biofilm è ottimizzato per garantire coerenza, efficienza e applicazioni ad alta produttività.
Letteratura / Riferimenti
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- ASTM E2799-22 Standard Test Method for Testing Disinfectant Efficacy against Pseudomonas aeruginosa Biofilm using the MBEC Assay
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
Domande frequenti
Che cos'è l'ASTM E2799?
ASTM E2799 è un metodo di prova standard stabilito da ASTM International per testare l'efficacia dei disinfettanti contro il biofilm di Pseudomonas aeruginosa utilizzando il saggio MBEC. Il metodo è ampiamente utilizzato per valutare la formazione di biofilm, l'efficacia antimicrobica e le interazioni con la superficie dei materiali, consentendo confronti standardizzati nella ricerca sul biofilm.
Qual è la differenza tra ASTM E2799-22 e ASTM E2799-11, ASTM E2799-12 e ASTM E2799-17?
ASTM E2799 è un metodo di prova standardizzato che valuta l'efficacia dei disinfettanti contro i biofilm di Pseudomonas aeruginosa utilizzando il saggio MBEC (Minimum Biofilm Eradication Concentration). Questo metodo è stato sottoposto a diverse revisioni per migliorarne l'accuratezza e l'applicabilità.
- ASTM E2799-11: Si tratta della versione iniziale dello standard, che stabilisce le procedure fondamentali per la valutazione dell'efficacia dei disinfettanti contro i biofilm di P. aeruginosa utilizzando il saggio MBEC.
- ASTM E2799-12: Questa revisione ha incorporato aggiornamenti tecnici minori per migliorare la chiarezza e risolvere le ambiguità identificate nella versione del 2011.
- ASTM E2799-17: In questo aggiornamento sono state apportate modifiche più significative al protocollo, compresi aggiustamenti al processo di coltivazione del biofilm, all'applicazione del trattamento e alle procedure di neutralizzazione, con l'obiettivo di migliorare la riproducibilità e l'allineamento ai progressi della ricerca sul biofilm.
- ASTM E2799-22: la revisione più recente riflette le più recenti conoscenze scientifiche e i progressi tecnologici negli studi sui biofilm. Include metodologie perfezionate per la crescita, il trattamento e l'analisi dei biofilm, garantendo che il metodo di prova rimanga pertinente ed efficace per le attuali valutazioni dell'efficacia dei disinfettanti.
Ogni revisione dell'ASTM E2799 è stata fatta per migliorare l'affidabilità, la riproducibilità e la pertinenza del metodo, assicurando che rimanga al passo con i progressi scientifici e tecnologici nel campo della ricerca sul biofilm.
Qual è la differenza tra i test MBEC e MBIC?
La differenza fondamentale tra i saggi MBEC (Minimum Biofilm Eradication Concentration) e MBIC (Minimum Biofilm Inhibitory Concentration) sta nel loro obiettivo:
Saggi MBEC misurare la concentrazione minima di un agente antimicrobico necessaria per sradicare completamente i biofilm preformati, valutando la capacità di una sostanza di uccidere i microrganismi incorporati nel biofilm.
Saggi MBIC determinare la concentrazione più bassa di un agente antimicrobico che impedisce la formazione iniziale di biofilm, valutando la sua capacità di inibire lo sviluppo del biofilm.
Entrambi i saggi sono fondamentali per comprendere l'efficacia degli antimicrobici contro i biofilm, ma mirano a fasi diverse del ciclo di vita del biofilm.
Scoprite come viene utilizzato il sonicatore per micropiastre UIP400MTP per la rimozione del biofilm nei saggi MBIC!
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