Vérlemezkékben gazdag szérum ultrahangos előállítása
- A vérlemezkékben gazdag plazma (PRP) vérlemezkékkel dúsított vérplazma, amelyet orvosi és esztétikai kezelésekhez használnak.
- Az ultrahangos lízis és kondicionálás nagyon hatékony módszer a vérlemezkékben gazdag plazma előállítására.
- A Hielscher Ultrasonics különféle ultrahangos rendszereket kínál, amelyek megfelelnek a vérkezelés követelményeinek (pl. tisztatéren belüli és kívüli előkészítéshez).
Vérlemezkékben gazdag szérum
Az ultrahangos kezelés megbízható és egyszerű módszer az autológ vérszérumban lévő vérlemezkék lízisére a növekedési faktorok felszabadítása érdekében. A vérlemezkékből származó frakciókat – más néven autológ kondicionált szérumot (ACS) – szöveti helyreállításra vagy esztétikai kezelésekhez használják. Az optimális eredmények elérése érdekében a PRP-t az injekció beadása előtt dúsítják.
A sejtnövekedési faktorokkal dúsított plazma előállításához az ultrahangos kezelés nagyon hatékony és hatásos módszer a sejtmembránok lízisére és a sejtnövekedési faktorok csaknem teljes mennyiségének felszabadítására a vérlemezkékből. Ultrahangos lízissel és kondicionálással még alvadásgátlóval kezelt vér is felhasználható.
A PRP ultrahangos kezeléssel végzett kondicionálása kényelmes és költséghatékony módja a koncentrált növekedési faktorok kinyerésének.
Vérlemezkékben gazdag plazma (PRP) ultrahangos lízise
Az ultrahangos lízis hatásai
A vérszérum ultrahangos kezelése a vérlemezkék homogén lízisét eredményezi a bennük tárolt növekedési faktorok felszabadítása érdekében (AB növekedési faktor (PDGF-AB), AA növekedési faktor (PDGF-AA), BB növekedési faktor (PDGF-BB), vaszkuláris endoteliális növekedési faktor (VEGF), transzformáló növekedési faktor β (TGF-β), epidermális növekedési faktor (EGF), inzulinszerű növekedési faktor (IGF), hámsejtek növekedési faktora ECGF és fibroblaszt-növekedési faktor (FGF)). A vérlemezkéket és alfa-granulumaikat ultrahangos kezeléssel tárják fel, felhasználva az akusztikus kavitáció jelenségét. Az ultrahangos kavitáció alkalmazása a vérlemezkék lízisére csökkenti az ismételt fagyasztás–felolvasztás módszerének a növekedési faktorok aktivitására gyakorolt lehetséges negatív hatását.
A PRP ultrahangos előállításának protokollja
Kb. 16mL frissen levett autológ vérmintát egy csőben óvatosan 8–10 alkalommal átfordítanak, hogy a vér és az alvadásgátlók jól elkeveredjenek. Ezután a mintát 1800 g mellett 20 min ideig centrifugálják szobahőmérsékleten. A centrifugálás után a vérlemezkék és a mononukleáris sejtek fehéres réteget alkotnak a plazmaréteg alján, amelyet vérlemezkékben gazdag plazmának (PRP) neveznek. A felső réteget vérlemezkékben szegény plazmának (PPP) nevezik. A mononukleáris sejtek eltávolíthatók, vagy a mintában maradhatnak. A mononukleáris sejteket gyakran a PRP-mintában hagyják, hogy elkerüljék a további lépéseket, amelyek szennyeződés kockázatával járnak.
Megjegyzés: Az autológ PRP ultrahangos kezelését steril körülmények között kell végezni.
A PRP-t és a PPP-t elkülönítik és összegyűjtik. A PPP-hez 1,5mL 10%-os kalcium-klorid-oldatot, míg a PRP-hez 0,5mL 5%-os etanolt adnak. Mindkét szuszpenziót óvatosan megmozgatják, és 5 min ideig szobahőmérsékleten állni hagyják. Végül 1mL PPP-t adnak a PRP-szuszpenzióhoz, és addig hagyják állni, amíg fibrinalvadék képződik.
Ultrahangos kezelés: Mivel a képződött vérlemezke-gél a felszabadult növekedési faktorok tárolójaként működik, a fibringélt fel kell bontani a rendelkezésre álló növekedési faktorok felszabadítása érdekében. Az ultrahangos lízis és a növekedési faktorok felszabadításának paraméterei a következők: Használjon egy UP200Ht vagy UP200St (200W, 26kHz) készüléket S26d2 szonotródával a csőben lévő minta ultrahangos kezeléséhez. A vérminta túlmelegedésének elkerülése érdekében az ultrahangos kezelés impulzusciklusokban végezhető (pl. 10 sec. bekapcsolva, 30 sec. kikapcsolva). A mintát hűtés céljából jégre kell helyezni, hogy a hőmérséklet optimálisan 2 – 5°C között maradjon. Az ultrahangos kezelés után a mintát 16 000 g mellett 5 min. ideig centrifugálják szobahőmérsékleten. A felülúszót összegyűjtik, és -70°C-on lehet tárolni.
Az ultrahangos módszerrel a PRP-frakció vérlemezke-koncentrációja 1,7 – 4,5-szeresére dúsult a teljes vér szakirodalomban közölt átlagos vérlemezkeszámához képest.
A PRP-t zsírszövetből származó őssejtekkel végzett terápiával kombinálták (zsírszövetből ultrahangosan felszabadított autológ őssejtek, amelyeket PRP-vel kevertek össze, és helyreállítás céljából visszainjektáltak a beteg szövetébe).
Ultrahangos berendezések
A Hielscher Ultrasonics a kifinomult és megbízható ultrahangos technológia szakértője. Ultrahangos készülékeinket világszerte használják lízisre, extrakcióra és minta-előkészítésre – közvetlenül és közvetve. Az autoklávozható és az egyszer használatos tartozékok biztosítják az autológ vérminták szennyeződésmentes kezelését. Rendszereink többsége alkalmas az őssejtek és a PRP ultrahangos lízisére, ami ultrahangos készülékeinket gazdasági szempontból még hatékonyabbá teszi.
Az alábbi táblázat a vérlemezkékben gazdag plazma előállítására alkalmas ultrahangos készülékeinket és az egyes készülékekhez ajánlott mintatérfogatot sorolja fel. Nagyobb ultrahangos készülékek és egyedi igényekre szabott rendszerek is rendelkezésre állnak.
| Készülék | Teljesítmény [W] | Frekv. [kHz] | Típus | Térfogat [mL] | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| VialTweeter | 200 | 26 | önálló | 0,5 | – | 1,5 |
| UP50H | 50 | 30 | kézi vagy állványra szerelt | 0,01 | – | 250 |
| UP100H | 100 | 30 | kézi vagy állványra szerelt | 0,01 | – | 500 |
| UP200Ht | 200 | 26 | kézi vagy állványra szerelt | 0,1 | – | 1000 |
| UP200St | 200 | 26 | állványra szerelt | 0,1 | – | 1000 |
| UP400St | 400 | 24 | állványra szerelt | 5,0 | – | 2000 |
| UP200St-SonoStep | 200 | 26 | önálló | 30 | – | 500 |
| GDmini2 | 200 | 26 | szennyeződésmentes átfolyó cella | |||
Lépjen kapcsolatba velünk még ma! Örömmel segítünk megtalálni az optimális ultrahangos készüléket!
Lépjen kapcsolatba velünk! / Kérdezzen tőlünk!
GDmini2 az UP200St-TD ultrahangos átalakítóhoz csatlakoztatva (200 watt)
Szakirodalom és hivatkozások
- Fortunato, T. M.; Beltrami, Ch.; Emanueli, C.; De Bank, P.A:; Pula, G. (2016): A vérlemezke-lizátum gél és az endoteliális progenitorsejtek in vitro serkentik a mikrovaszkuláris hálózat kialakulását: szövetmérnöki vonatkozások. Sci. Rep. 6, 2016.
- Hamid, M.S.A.; Yusof, Ashril; Ali, Mohamed Razif Mohamed (2014): Vérlemezkékben gazdag plazma (PRP) akut izomsérülés esetén: szisztematikus áttekintés. PLOS ONE 9. kötet, 2. szám, 2014.
Tudnivalók
Vérlemezkékben gazdag plazma
A vérlemezkékben gazdag plazma AB növekedési faktort (PDGF-AB), vérlemezke-eredetű AA növekedési faktort (PDGF-AA), vérlemezke-eredetű BB növekedési faktort (PDGF-BB), vaszkuláris endoteliális növekedési faktort (VEGF), transzformáló növekedési faktort β (TGF-β), epidermális növekedési faktort (EGF), inzulinszerű növekedési faktort (IGF), a hámsejtek növekedési faktorát ECGF és fibroblaszt-növekedési faktort (FGF) tartalmaz, amelyek a sejtnövekedés és a sejtmegújulás fontos serkentői.
Autológ kondicionált szérum (ACS)
Az autológ kondicionált plazma (ACP) autológ vérből kinyert, vérlemezkékben gazdag plazma, amelyet különféle ortopédiai állapotok és sebészeti eljárások esetén a regeneráció támogatására használnak. A kondicionált szérumot úgy készítik, hogy a plazmát elválasztják a többi véralkotótól (például a vörösvértestektől), és koncentrálják. Az ACP vérlemezkékben gazdag plazma (PRP). A PRP olyan plazmatípus általános elnevezése, amely a teljes vérhez képest jelentősen magasabb trombocitakoncentrációt tartalmaz. Teljes vérből nyerik ki. Az ACP fő összetevői közé tartoznak a trombociták (vérlemezkék) és több olyan növekedési faktor, amely kulcsszerepet játszik a gyógyulási folyamatokban. Más, vérlemezkékben gazdag plazmakészítményekkel ellentétben az ACP-t a fehérvérsejtek, például a neutrofil granulociták alacsony koncentrációja jellemzi; ezek nagy koncentrációban jelen léve károsan befolyásolhatják a gyógyulási folyamatot.
Vérlemezkékben gazdag plazmával végzett injekciós kezelések
A vérlemezkékben gazdag plazmát injekció formájában alkalmazzák a regeneratív gyógyászatban és kozmetikai eljárások során. A PRP alkalmazása az izomgyógyulás és az izmok regenerációjának jelentős felgyorsítását ígéri. Ezenkívül sikeresen alkalmazzák gyulladás, ízületi gyulladás, fájdalom, sebek, lassan gyógyuló nyílt sebek és súlyos bőrégések kezelésére. A PRP nagy mennyiségben tartalmaz növekedési faktorokat, amelyek serkentik és védik a gyógyulást végző sejteket, hogy a károsodott szövet helyreálljon.
Kozmetikai kezelésekben a PRP hatékonynak bizonyult a hajnövekedés és a bőrmegújulás serkentésére (ez utóbbi vámpírkezelésként is ismert).
Vérlemezke-eredetű növekedési faktorok (PDGF)
A vérlemezke-eredetű növekedési faktor (PDGF) kifejezés a PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C és PDGF-D faktorokra utal. Ez négy ligandumból (PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C és PDGF-D) és két receptorból, a PDGFR-alpha és PDGFR-beta receptorból álló jelátviteli hálózat.
A növekedési faktorok, vagyis fehérjék szabályozzák a sejtek növekedését és osztódását. Az emlősök szérumában található fő mitogénként, amely az alvadék képződése során szabadul fel a vérlemezkékből, jelentős szerepet játszik az érképződésben (angiogenezisben), azaz az erek növekedésében a már meglévő érszövetből.