ASTM E2799-22 protokoll az antimikrobiális értékeléshez

A Hielscher UIP400MTP egy erőteljes és hatékony többkútú lemezes szonikátor, amelynek célja az ASTM E2799-22 protokoll ultrahangos lépésének egyszerűsítése. Azáltal, hogy egyenletes ultrahangos energiát szállít az egész mikrotiter lemezen, a UIP400MTP biztosítja a biofilmek következetes és megbízható leválasztását a csapos fedelekről anélkül, hogy károsítaná a sejteket vagy veszélyeztetné a minta integritását. Nagy áteresztőképessége és felhasználóbarát működése jelentősen csökkenti a feldolgozási időt, miközben javítja a reprodukálhatóságot, így ideális megoldás a biofilm életképességi vizsgálatait és antimikrobiális hatékonysági vizsgálatait végző laboratóriumok számára.

ASTM E2799

Az ASTM E2799 egy szabványosított vizsgálati módszer, amelyet az antimikrobiális szerek biofilmek elleni hatékonyságának értékelésére terveztek, különös tekintettel a Pseudomonas aeruginosa-ra. A biofilmek összetett mikrobiális közösségek, amelyek megtapadnak a felületeken, és fokozott ellenállást mutatnak az antimikrobiális kezelésekkel szemben, ami jelentős kihívást jelent az egészségügyi, ipari és környezetvédelmi kontextusban. Ez a módszer a minimális biofilm felszámolási koncentráció (MBEC) vizsgálatot használja, hogy megbízható és reprodukálható keretet biztosítson a fertőtlenítőszerek valósághű biofilm körülmények közötti vizsgálatához.

Hogyan járul hozzá a szonikáció az ASTM E2799-hez?

A szonikálás kritikus szerepet játszik az ASTM E2799 protokollban azáltal, hogy megkönnyíti a biofilmek leválasztását a tesztfelületekről, biztosítva a mikrobiális életképesség pontos értékelését a kezelés után. A szabályozott ultrahangos energia felhasználásával a protokoll hatékony és következetes biofilm zavart ér el anélkül, hogy károsítaná a sejteket, lehetővé téve a pontos és reprodukálható eredményeket. Ez teszi az ASTM E2799-et a biofilm-kutatás előmozdításának és a hatékony antimikrobiális stratégiák fejlesztésének alapvető eszközévé.

Az MBEC vizsgálat futtatása az ASTM E2799-22 szerint

Az ASTM E2799-22 protokoll felvázolja az antimikrobiális szerek biofilmekkel szembeni hatékonyságának értékelésének lépéseit. A Hielscher UIP400MTP mikrotiter lemez szonikátor használatakor a protokoll adaptálható ahhoz, hogy beépítse ezt a fejlett szonikációs módszert a biofilm leválasztásához. Az alábbiakban ismertetjük a mikrolemezes szonikátor UIP400MTP használatára szabott lépéseket:

1. Biofilmek készítése
   Készítsünk steril, 96 lyukú mikrotiterlemezt levehető csapfedéllel.
   Oltsuk be a vájatokat standardizált baktériumszuszpenzióval megfelelő táptalajban.
   Helyezze a csap fedelét a lemezre, ügyelve arra, hogy a csapok teljesen belemerüljenek a baktériumszuszpenzióba.
   Inkubáljuk a lemezt ellenőrzött körülmények között (pl. hőmérséklet és idő), hogy lehetővé tegyük a biofilm képződését a csapokon.
2. Kezelés antimikrobiális szerekkel
   A biofilm képződése után helyettesítsük a táptalajt olyan friss táptalajjal, amely különböző koncentrációkban tartalmazza a vizsgált antimikrobiális szereket.
   Helyezzük vissza a csap fedelét, és inkubáljuk a vizsgálati tervben meghatározott feltételek mellett.
3. Felkészülés a biofilm leválasztásra
   A kezelés után öblítse le a csap fedelét steril öblítőoldatba merítve, hogy eltávolítsa a maradék antimikrobiális szereket és a lazán tapadt planktonsejteket.
4. Biofilm leválasztás a UIP400MTP szonikátor segítségével
   Készítsünk elő egy friss, 96 lyukú mikrotiterlemezt, amely visszanyerő táptalajt (pl. semlegesítő táptalajt) tartalmaz.
   Válasszuk le a biofilmeket úgy, hogy a csap fedelét a visszanyerő táptalaj lemezének vájataiba helyezzük.
   Helyezze be a lemezt a UIP400MTP szonikátorba, ügyelve arra, hogy a fedél és a lemez megfelelően illeszkedjen.
   Állítsa az ultrahangos készüléket 70% -80% amplitúdóra és szonikálja 3-4 percig ciklus üzemmódban, hogy biztosítsa a következetes biofilm leválást sejtlízis nélkül.
5. A biofilm életképességének értékelése
   Ultrahangos kezelés után feldolgozzuk a leválasztott biofilm sejteket tartalmazó visszanyerő táptalajt standard mikrobiológiai vagy analitikai technikákkal, például:
   • A telepképző egységek (CFU) száma: Végezzen sorozatos hígításokat és lemezt agaron az életképes sejtszámláláshoz.
   • Optikai sűrűség (OD) mérések: Használjon spektrofotometriás elemzést a sejtsűrűség értékeléséhez.
   • Fluoreszcencia alapú életképességi vizsgálatok:Az élő és halott sejtek számszerűsítése fluoreszcens színezékek segítségével.
6. adatelemzés
   Hasonlítsa össze a kezelt és kezeletlen biofilmek életképességi adatait az antimikrobiális szerek hatékonyságának meghatározásához.
   Számítsuk ki a minimális biofilm felszámolási koncentrációt (MBEC) az életképes biofilm sejtek eltávolításához szükséges koncentráció alapján.
7. minőségellenőrzés
   Biztosítsa a következetes szonikációs körülményeket a UIP400MTP rendszeres kalibrálásával és annak ellenőrzésével, hogy a biofilm leválási folyamat nem eredményez-e jelentős sejtlízist vagy pusztulást.
   Az eredmények validálásához megfelelő kontrollokat, például kezeletlen biofilmeket és csak közepesen használható vakpróbákat kell alkalmazni.

A csapokon képződött biofilm sejteket szonikálással (Hielscher ultrahang technológia, Teltow, Németország, UIP250MTP) 5 percig 96 lyukú lemezeken távolították el, amelyek friss táptalajt tartalmaznak a sejtek helyreállításához.
(Kép és tanulmány: ©de Oliveira et al., 2016)

A UIP400MTP integrálásával az ASTM E2799-22 munkafolyamatba a biofilm leválasztás folyamata optimalizálva van a konzisztencia, a hatékonyság és a nagy áteresztőképességű alkalmazások számára.