Cserélje ki a cellakaparást a UIP400MTP nagy áteresztőképességű szonikátorra

A tapadó sejtvonalak leválasztása és kivonása több lyukú lemezekről multi-omikai elemzéshez napi feladat a laboratóriumokban. A nagy áteresztőképességű sejtleválasztás a többlyukú lemezes szonikátor segítségével helyettesíti UIP400MTP kézi sejtkaparást, ami az RNS, az összes lipid és az összes poláris metabolit magasabb hozamához vezet. Egy új módszer integrálja a Hielscher UIP400MTP szonikátort a Beckman Coulter i7 folyadékkezelő munkaállomással, lehetővé téve a sejtek nagy áteresztőképességű, reprodukálható és hatékony feldolgozását RNS, metabolit és lipid extrakcióhoz. A bemutatott módszer felülmúlja a hagyományos kézi sejtkaparási módszereket azáltal, hogy kiváló reprodukálhatóságot és hozamot ér el különböző sejttípusokban és kísérleti körülmények között.

Egyszerűsítse a cellaleválasztást a Microplate Sonicator UIP400MTP segítségével

A tapadó sejttenyésztési rendszerek kritikus szerepet játszanak a toxikológiai és orvosbiológiai kutatásokban. Ebben az összefüggésben Cruchley-Fuge et al. (2024) a PrecisionTox projekt egyik jelentős kihívásával foglalkozott, amely az omikai technológiák kémiai veszélyértékelésre való felhasználására összpontosított. A projekt célja a különböző vegyi anyagokkal kezelt minták ezreinek nagy áteresztőképességű elemzése volt. Ennek az igénynek a kielégítése érdekében a kutatók kifejlesztettek egy automatizált munkafolyamatot, amely ötvözi a UIP400MTP szonikátort a folyadékkromatográfia-tömegspektrometria (LC-MS) elemzéséhez használt kétfázisú extrakciós protokollokkal. Tanulmányuk értékeli a UIP400MTP Multi-Well Plate Sonicator hatékonyságát a tapadó sejtek leválasztásában a kézi kaparáshoz és más hagyományos módszerekhez képest.

A multi-omika egyszerűsítése: automatizált tapadó sejtkivonás a UIP400MTP

Laura Cruchley-Fuge kutatócsoportja a Birminghami Egyetemen három emberi sejtvonalat használt: HepG2 (májrákos sejtek), HepaRG (differenciált hepatocita-szerű sejtek) és H295R (mellékvese rákos sejtek). Ezeket a sejteket 24 és 96 lyukú lemezeken tenyésztették, és olyan vizsgálati vegyi anyagoknak tették ki, mint az aflatoxin B1 és a forskolin.

Kísérleti tervezés:

• 1. fázis: A UIP400MTP szonikátor teljesítménybeállításainak optimalizálása és összehasonlítása a kézi cellakaparással és a szónikus vízfürdőkkel. HepG2 sejteket alkalmaztunk az RNS, a metabolit és a lipid visszanyerésének értékelésére.
• 2. fázis: A UIP400MTP integrálása kétfázisú extrakciós munkafolyamatba a Beckman Coulter i7 rendszer segítségével. A validálást HepaRG és H295R cellákkal végeztük.

Kinyerési munkafolyamat: A munkafolyamat magában foglalta a kémiai expozíciót több lyukú lemezekben, a sejtek leválasztását a UIP400MTP segítségével, valamint a kétfázisú extrakciót a Bligh segítségével & Dyer (B&D) módszer. Az LC-MS analízist a Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 segítségével végeztük lipofil és poláris vegyületekre. A B&A D módszer, a lipidek mennyiségi meghatározásának aranystandardja, kétlépcsős extrakciót foglal magában metanollal, kloroformmal és vízzel, amelyet a lipidek kloroform fázisban történő mennyiségi meghatározása követ.

UIP400MTP mikrolemez szonikátor megkönnyíti a tapadó sejtvonalak leválasztását a többlyukú lemezekről és a Petri-csészékről

Eredmények:

• 1. fázis: Az optimális ultrahangos körülményeket 60% -os teljesítményen azonosítottuk.
  A UIP400MTP a legmagasabb RNS-visszanyerést eredményezte, kivételes reprodukálhatósággal a kézi kaparáshoz és a hangfürdőkhöz képest.
  A poláris metabolitok regenerálódása konzisztens volt a különböző módszerekben, míg a lipid regenerálódás jelentősen jobb volt a UIP400MTP esetében.
• 2. fázis: A HepaRG és H295R sejteken végzett validálás magas reprodukálhatóságot mutatott a lipidomikai és metabolomikai adatokban, amint azt a szorosan klaszterezett PCA pontszámok jelzik.
  Az aflatoxin B1 és forskolin kezeléseket hatékonyan megkülönböztették a kontrolloktól, hangsúlyozva a módszer érzékenységét és megbízhatóságát.

“A Hielscher UIP400MTP szonikációs eszköz kiváló minőségű és reprodukálható alternatív megközelítést biztosít a kézi sejtkaparás "arany standardjához", ami az RNS, a teljes lipidek és a teljes poláris metabolitok magasabb hozamához vezet.” (Cruchley-Fuge és mtsai., 2024)

Cruchley-Fuge et al. kiemeli a UIP400MTP szonikátor előnyeit a tapadó sejtfeldolgozáshoz. A kézi kaparás helyettesítésével ez a módszer növeli a reprodukálhatóságot, az áteresztőképességet és a hozamot, így felbecsülhetetlen értékű eszköz az olyan nagyszabású vizsgálatokhoz, mint a PrecisionTox. A UIP400MTP automatizált munkafolyamatokba történő integrálása nemcsak a változékonyságot csökkenti, hanem egyszerűsíti a munkaigényes folyamatokat is, lehetővé téve a kiváló minőségű multi-omikai adatgyűjtést.

Cruchley-Fuge et al. (2024) munkája megkönnyíti és egyszerűsíti a tapadó sejtkultúrák feldolgozását a multi-omika elemzéséhez. A UIP400MTP szonikátor integrálása az automatizált munkafolyamatokkal biztosítja a következetes és hatékony mintaelőkészítést, így ideálisan alkalmas nagy áteresztőképességű toxikológiai kutatásokhoz.
 

Tervezés, gyártás és tanácsadás – Németországban gyártott minőség

A Hielscher ultrahangos készülékek jól ismertek a legmagasabb minőségi és tervezési szabványokról. A robusztusság és a könnyű kezelhetőség lehetővé teszi ultrahangos készülékeink zökkenőmentes integrálását ipari létesítményekbe. A durva körülmények és az igényes környezetek könnyen kezelhetők Hielscher ultrasonicators.

A Hielscher Ultrasonics egy ISO tanúsítvánnyal rendelkező vállalat, és különös hangsúlyt fektet a nagy teljesítményű szonikátorokra, amelyek a legmodernebb technológiával és felhasználóbarátsággal rendelkeznek. Természetesen a Hielscher ultrasonicators CE-kompatibilis és megfelel az UL, CSA és RoHs követelményeinek.