मंकीपॉक्स वायरस में अल्ट्रासोनिक अनुप्रयोग
अल्ट्रासोनिकेशन विश्लेषणात्मक नमूनों से मंकीपॉक्स वायरस (MPXV) के अलगाव के लिए, वायरस डीएनए विखंडन के साथ-साथ मंकीपॉक्स वैक्सीन निर्माण में एक महत्वपूर्ण प्रसंस्करण विधि है। निदान और विश्लेषण (पीसीआर, एलिसा आदि) से पहले नमूना तैयार करने के लिए अल्ट्रासोनिकेशन का उपयोग कोशिकाओं को लाइज़ करने के लिए किया जाता है ताकि सेल इंटीरियर से मंकीपॉक्स वायरस को मुक्त किया जा सके और/या डीएनए को खंडित किया जा सके। वैक्सीन उत्पादन में, अनुप्रयोग वायरस कण/डीएनए की तैयारी, दवा वाहकों में एनकैप्सुलेशन और इनोकुला तैयार करने से लेकर होते हैं।
नीचे आप अल्ट्रासोनिक मंकीपॉक्स वायरस नमूना तैयार करने के साथ-साथ अल्ट्रासोनिक रूप से सहायता प्राप्त एमपीएक्सवी वैक्सीन उत्पादन के बारे में विस्तृत जानकारी प्राप्त कर सकते हैं।
आपको इस पृष्ठ पर क्या मिलेगा:
- मंकीपॉक्स वायरस निष्कर्षण के लिए अल्ट्रासोनिक Lysis
- मंकीपॉक्स वायरस डीएनए का अल्ट्रासोनिक विखंडन
- MPXV वैक्सीन उत्पादन में अल्ट्रासोनिक अनुप्रयोग
निरंतर-प्रवाह संचालन के लिए 2x 1kW अल्ट्रासोनिकेटर की यह प्रणाली एक वैक्सीन उत्पादन सुविधा में स्थापित की गई है।
पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) से पहले अल्ट्रासोनिक लाइसिस और डीएनए विखंडन
वायरल डीएनए के अद्वितीय अनुक्रमों का पता लगाने के लिए वास्तविक समय या पारंपरिक पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) का उपयोग करके न्यूक्लिक एसिड एम्प्लीफिकेशन टेस्टिंग (एनएएटी) द्वारा मंकीपॉक्स वायरस के संक्रमण का पता लगाया जाता है। नमूना (जैसे नासॉफिरिन्जियल स्वैप या त्वचा बायोप्सी से) में कोशिकाओं में वायरस होता है।
विश्लेषण के लिए, वायरस को कोशिकाओं से मुक्त किया जाना चाहिए और वायरल डीएनए को पीसीआर के लिए खंडित किया जाना चाहिए।
अल्ट्रासोनिक Lysis:
अल्ट्रासोनिक सेल व्यवधान / lysis सेल नमूनों से वायरस को अलग करने के लिए एक विश्वसनीय और कुशल तरीका है और इस तरह रासायनिक एजेंटों पर एक बेहतर तकनीक है, जैसे लाइसोजाइम, प्रोटीनेज के और विभिन्न डिटर्जेंट जो वैकल्पिक रूप से सेल लसीका और डीएनए की रिहाई को प्राप्त करने के लिए उपयोग किए जाते हैं।
हालांकि, ऐसे रासायनिक अभिकर्मकों के उपयोग के लिए पीसीआर प्रतिक्रिया के निषेध को रोकने के लिए पीसीआर विश्लेषण से पहले कई चरणों में समय लेने वाली नमूना तैयारी की आवश्यकता होती है। चूंकि पीसीआर अवरोधक प्रवर्धन की दक्षता को प्रभावित करते हैं, इसलिए अवरोधकों की मात्रा के छोटे बदलाव जिन्हें हटाया नहीं जाता है, पीसीआर उत्पाद प्रवर्धन (डायको, 1995) में बड़े बदलाव ला सकते हैं।
लसीका के लिए अल्ट्रासोनिकेशन का लाभ यह है कि सेलुलर संरचनाओं का पूर्ण विघटन और लाइसिंग अभिकर्मकों और समय लेने वाली नमूना तैयारी की आवश्यकता के बिना डीएनए की रिहाई वांछनीय है। (सीएफ फिकसे एट अल।
अल्ट्रासोनिक डीएनए विखंडन:
अल्ट्रासोनिक डीएनए विखंडन सरल और विश्वसनीय है क्योंकि लंबाई में ट्यून करने योग्य डीएनए टुकड़े पैदा करता है (बेसपेयर, बीपी)। अल्ट्रासाउंड का उपयोग करके, डीएनए को लक्षित डीएनए लंबाई तक प्रभावी ढंग से खंडित किया जा सकता है। अल्ट्रासोनिक मापदंडों और परिष्कृत शीतलन विकल्पों पर सटीक नियंत्रण डीएनए क्षरण को रोकता है।
अल्ट्रासोनिक डीएनए विखंडन के बारे में और अधिक पढ़ें!
मंकीपॉक्स वायरस वैक्सीन में अल्ट्रासोनिक अनुप्रयोग
मंकीपॉक्स वायरस के खिलाफ इस्तेमाल किए जाने वाले टीके वर्तमान में लाइव वायरस टीके हैं। नव विकसित टीके डीएनए-आधारित जैसे अन्य प्लेटफार्मों का उपयोग कर सकते हैं वर्तमान में एक संशोधित वैक्सीनिया अंकारा वियर्स, एक क्षीण, गैर-प्रतिकृति ऑर्थोपॉक्सवायरस शामिल है। इसमें ट्रिस (ट्रिस-एमिनोमेथेन) और सोडियम क्लोराइड भी शामिल हैं। वैक्सीन में चिकन एम्ब्रियो फाइब्रोब्लास्ट कोशिकाओं से डीएनए और प्रोटीन की थोड़ी मात्रा भी हो सकती है, जिसका उपयोग वैक्सीन वायरस, बेंज़ोनेस और एंटीबायोटिक यौगिकों जैसे जेंटामाइसिन और सिप्रोफ्लोक्सासिन को विकसित करने के लिए किया जाता है।
अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइजेशन का उपयोग लाइव-अटेन्यूएटेड वायरस टीके, डीएनए टीके, बहु-संयोजक डीएनए कॉकटेल, एमआरएनए टीके, पुनः संयोजक प्रोटीन टीके, वायरस जैसे कण टीके आदि के उत्पादन में किया जाता है।
- वायरस कणों और एजेंटों का फैलाव
- पायसीकरण
- वायरस की निष्क्रियता
- दवा वाहक सूत्रीकरण (एनएलसी, एसएलएन)
- संपुटीकरण
- एजेंटों का विघटन
- सहायक की तैयारी
- Degassing/डी-वातन
मंकीपॉक्स वायरस के अल्ट्रासोनिक अलगाव के लिए प्रोटोकॉल
Stittelaar (2005) की शोध टीम ने विकास मेजबान सेल संस्कृति के साथ-साथ संक्रमित प्राइमेट्स से गले की अदला-बदली के माध्यम से प्राप्त कोशिकाओं से मंकीपॉक्स वायरस को मुक्त करने के लिए अल्ट्रासोनिक lysis का उपयोग किया।
मंकीपॉक्स वैक्सीन की तैयारी:
मंकीपॉक्स वायरस विशिष्ट-रोगजनक मुक्त चिकन भ्रूण फाइब्रोब्लास्ट कोशिकाओं पर उगाए गए थे। 1 से 2 दिनों के लिए इनक्यूबेशन के बाद, वायरस-सेल निलंबन को फ्रीज-विगलन के एक दौर द्वारा काटा गया था और फिर सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा केंद्रित किया गया था। गोली को फिर से निलंबित कर दिया गया और अल्ट्रासोनिक समरूपता के कई दौर के अधीन किया गया।
टीकाकृत मकाक से मंकीपॉक्स वायरस अलगाव:
नमूने तीन बार फ्रीज-पिघले हुए थे और एक अल्ट्रासोनिक कपहॉर्न में सोनिकेटेड थे। परिवहन माध्यम में दो dilutions (1:10 और 1:100) 1% भ्रूण गोजातीय सीरम के साथ पूरक छह अच्छी तरह से प्लेटों में वेरो सेल monolayers टीका लगाने के लिए इस्तेमाल किया गया. 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेशन के 1 घंटे के बाद, इनोकुला को हटा दिया गया और 1% भ्रूण गोजातीय सीरम के साथ पूरक संस्कृति माध्यम के साथ बदल दिया गया। मोनोलेयर्स को 37 डिग्री सेल्सियस पर 5 दिनों के लिए सुसंस्कृत किया गया था और क्रिस्टल वायलेट समाधान के साथ दाग दिया गया था।
, 2005)
वायरस विश्लेषण और वैक्सीन उत्पादन के लिए अल्ट्रासोनिकेटर
Hielscher Ultrasonics व्यापक उत्पाद पोर्टफोलियो अनुसंधान और विश्लेषणात्मक प्रयोगशालाओं के साथ-साथ औद्योगिक वैक्सीन निर्माण के लिए आदर्श अल्ट्रासोनिकेटर प्रदान करता है।
Hielscher Ultrasonics डिजाइन, विनिर्माण और अनुसंधान और विश्लेषणात्मक प्रयोगशालाओं में उपयोग के लिए और साथ ही औद्योगिक टीका उत्पादन में कार्यान्वयन के लिए उच्च प्रदर्शन ultrasonicators और sono-bioreactors के वितरण में विशेषज्ञता प्राप्त है (उदा। टीके, एपीआई).
सोनिकेशन को खुले जहाजों, बंद लगातार-हलचल वाले रिएक्टरों और निरंतर प्रवाह-थ्रू रिएक्टरों पर लागू किया जा सकता है। अल्ट्रासोनिक सिस्टम के सभी भाग, जो तरल माध्यम के संपर्क में आते हैं, स्टेनलेस स्टील, टाइटेनियम या ग्लास से बने होते हैं। आटोक्लेवबल भागों और सैनिटरी फिटिंग के तहत उत्पादन सुनिश्चित करते हैं फार्मा-ग्रेड की स्थिति।
स्वचालित डेटा रिकॉर्डिंग: इंटेलिजेंट सॉफ्टवेयर एकीकृत एसडी मेमोरी कार्ड पर स्वचालित रूप से सोनीशन प्रक्रिया के मापदंडों को रिकॉर्ड करता है। सभी प्रक्रिया मापदंडों का सटीक नियंत्रण सुनिश्चित करता है प्रजनन क्षमता, उत्पादन का मानकीकरण, और दवा उत्पाद सुरक्षा मानकों की पूर्ति की सुविधा प्रदान करता है।
Hielscher Ultrasonics’ अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर अत्यधिक विश्वसनीय हैं और इसे ठीक से नियंत्रित किया जा सकता है। सभी औद्योगिक अल्ट्रासोनिकेटर कम से बहुत उच्च आयामों तक पूरी श्रृंखला देने के लिए समायोजित कर सकते हैं। Hielscher के अल्ट्रासोनिक सिस्टम की मजबूती भारी शुल्क के तहत और मांग वातावरण में 24/7 आपरेशन के लिए अनुमति देता है।
नीचे दी गई तालिका आपको हमारे अल्ट्रासोनिकेटर की अनुमानित प्रसंस्करण क्षमता का संकेत देती है:
| बैच वॉल्यूम | प्रवाह दर | अनुशंसित उपकरण |
|---|---|---|
| मल्टी-वेल / माइक्रोटिटर प्लेट्स | n/a | UIP400MTP |
| 1 से 500mL | 10 से 200mL/मिनट | यूपी100एच |
| 10 से 2000mL | 20 से 400mL/मिनट | यूपी200एचटी, UP400St |
| 0.1 से 20L | 0.2 से 4L/मिनट | यूआईपी2000एचडीटी |
| 10 से 100L | 2 से 10 लीटर/मिनट | यूआईपी4000एचडीटी |
| n/a | 10 से 100 लीटर/मिनट | UIP16000 |
| n/a | बड़ा | का क्लस्टर UIP16000 |
हमसे संपर्क करें! हमसे पूछो!
अल्ट्रासोनिक डीएनए बाल काटना
CC-BY-SA.03 के तहत Jkwchui से अनुकूलित
साहित्य/सन्दर्भ
- Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
- Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
- J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
- Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
- Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.
जानने के योग्य तथ्य
मंकीपॉक्स वायरस
मंकीपॉक्स (MPV, MPXV, या hMPXV) डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए वायरस की एक प्रजाति है, जो एक वायरल जूनोटिक बीमारी का कारण बनती है। इस बीमारी को मंकीपॉक्स संक्रमण के रूप में जाना जाता है और यह मनुष्यों और जानवरों में हो सकता है। यह पॉक्सविरिडे परिवार में जीनस ऑर्थोपॉक्सवायरस से संबंधित है। मंकीपॉक्स वायरस वेरियोला (VARV), काउपॉक्स (CPX), और वैक्सीनिया (VACV) वायरस के साथ मानव ऑर्थोपॉक्सवायरस में से एक है। ऑर्थोपॉक्सविर्यूज़ को बड़े ईंट के आकार के वायरस कणों की विशेषता होती है, जिसमें लगभग 200,000 बीपी का डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए जीनोम होता है।
एलिसा परख
एलिसा एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉरबेंट परख के लिए खड़ा है और एक लेबल इम्यूनोसे है जिसे इम्यूनोएसे का स्वर्ण मानक माना जाता है। एलिसा एक प्रतिरक्षाविज्ञानी परीक्षण है, जो इसकी उच्च नैदानिक संवेदनशीलता के लिए मूल्यवान है, इसका उपयोग एंटीबॉडी, एंटीजन, प्रोटीन, ग्लाइकोप्रोटीन और हार्मोन सहित अणुओं का पता लगाने और मात्रा निर्धारित करने के लिए किया जाता है। एलिसा का सिद्धांत एक एंटीजन-एंटीबॉडी इंटरैक्शन पर आधारित है। इस एंटीजन-एंटीबॉडी इंटरैक्शन द्वारा, विशिष्ट एंटीबॉडी अपने लक्ष्य एंटीजन से बंधते हैं। केवल जब बातचीत होती है, तो सब्सट्रेट एंजाइम से बंध सकता है और बाद में सब्सट्रेट रूपांतरण देखा जा सकता है, जिसका अर्थ है कि एक सकारात्मक परिणाम प्राप्त होता है।
Hielscher Ultrasonics से उच्च प्रदर्शन अल्ट्रासोनिक homogenizers बनाती है प्रयोगशाला तक औद्योगिक आकार।