MonkeyPox वायरस में अल्ट्रासोनिक अनुप्रयोग
अल्ट्रासोनिकेशन विश्लेषणात्मक नमूनों से मंकीपॉक्स वायरस (एमपीएक्सवी) के अलगाव के लिए एक महत्वपूर्ण प्रसंस्करण विधि है, वायरस डीएनए विखंडन के साथ-साथ मंकीपॉक्स वैक्सीन निर्माण में भी। निदान और विश्लेषण (पीसीआर, एलिसा आदि) से पहले नमूना तैयारी के लिए अल्ट्रासोनिकेशन का उपयोग कोशिकाओं को लाइस करने के लिए किया जाता है ताकि सेल इंटीरियर से मंकीपॉक्स वायरस को जारी किया जा सके और / या डीएनए को टुकड़ा किया जा सके। वैक्सीन उत्पादन में, अनुप्रयोग वायरस कण / डीएनए तैयारी, दवा वाहक में एनकैप्सुलेशन और इनोकुला तैयार करने से लेकर होते हैं।
नीचे आप अल्ट्रासोनिक मंकीपॉक्स वायरस नमूना तैयारी के साथ-साथ अल्ट्रासोनिक रूप से सहायता प्राप्त एमपीएक्सवी वैक्सीन उत्पादन के बारे में विस्तृत जानकारी पा सकते हैं।
इस पृष्ठ पर आपको क्या मिलेगा:
- मंकीपॉक्स वायरस निष्कर्षण के लिए अल्ट्रासोनिक लाइसिस
- मंकीपॉक्स वायरस डीएनए का अल्ट्रासोनिक विखंडन
- एमपीएक्सवी वैक्सीन उत्पादन में अल्ट्रासोनिक अनुप्रयोग
निरंतर प्रवाह संचालन के लिए 2x 1 किलोवाट ultrasonicators की यह प्रणाली एक टीका उत्पादन सुविधा में स्थापित किया गया है।
पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) से पहले अल्ट्रासोनिक लाइसिस और डीएनए विखंडन
वायरल डीएनए के अद्वितीय अनुक्रमों का पता लगाने के लिए, वास्तविक समय या पारंपरिक पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) का उपयोग करके न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन परीक्षण (एनएएटी) द्वारा एक मंकीपॉक्स वायरस संक्रमण का पता लगाया जाता है। नमूना (उदाहरण के लिए नासोफैरेन्जियल स्वैप या त्वचा बायोप्सी से) में कोशिकाओं में वायरस होता है।
विश्लेषण के लिए, वायरस को कोशिकाओं से जारी किया जाना चाहिए और वायरल डीएनए को पीसीआर के लिए खंडित किया जाना चाहिए।
अल्ट्रासोनिक लाइसिस:
अल्ट्रासोनिक सेल व्यवधान / लिसिस सेल नमूनों से वायरस को अलग करने के लिए एक विश्वसनीय और कुशल विधि है और इस प्रकार रासायनिक एजेंटों पर एक बेहतर तकनीक है, जैसे कि लाइसोजाइम, प्रोटीनेज के और विभिन्न डिटर्जेंट जो वैकल्पिक रूप से सेल लिसिस और डीएनए की रिहाई को प्राप्त करने के लिए उपयोग किए जाते हैं।
हालांकि इस तरह के रासायनिक अभिकर्मकों के उपयोग के लिए पीसीआर प्रतिक्रिया के निषेध को रोकने के लिए पीसीआर विश्लेषण से पहले कई चरणों में समय लेने वाली नमूना तैयारी की आवश्यकता होती है। चूंकि पीसीआर अवरोधक प्रवर्धन की दक्षता को प्रभावित करते हैं, इसलिए हटाए गए अवरोधकों की मात्रा के छोटे बदलाव पीसीआर उत्पाद प्रवर्धन (डायको, 1 99 5) में बड़ी भिन्नताएं पैदा कर सकते हैं।
लाइसिस के लिए अल्ट्रासोनिकेशन का लाभ यह है कि सेलुलर संरचनाओं का पूर्ण विघटन और लाइसिंग अभिकर्मकों और समय लेने वाली नमूना तैयारी की आवश्यकता के बिना डीएनए की रिहाई वांछनीय है। (सीएफ फिक्स एट अल।
अल्ट्रासोनिक डीएनए विखंडन:
अल्ट्रासोनिक डीएनए विखंडन सरल और विश्वसनीय है क्योंकि लंबाई (बेसपेयर, बीपी) में ट्यून करने योग्य डीएनए टुकड़े पैदा करता है। अल्ट्रासाउंड का उपयोग करके, डीएनए को लक्षित डीएनए लंबाई के लिए प्रभावी ढंग से खंडित किया जा सकता है। अल्ट्रासोनिक मापदंडों और परिष्कृत शीतलन विकल्पों पर सटीक नियंत्रण डीएनए गिरावट को रोकता है।
अल्ट्रासोनिक डीएनए विखंडन के बारे में और पढ़ें!
मंकीपॉक्स वायरस वैक्सीन में अल्ट्रासोनिक अनुप्रयोग
मंकीपॉक्स वायरस के खिलाफ उपयोग किए जाने वाले टीके वर्तमान में जीवित वायरस टीके हैं। नए विकसित टीके डीएनए-आधारित जैसे अन्य प्लेटफार्मों का उपयोग कर सकते हैं वर्तमान में एक संशोधित वैक्सीनिया अंकारा विर्स, एक क्षीण, गैर-प्रतिकृति ऑर्थोपॉक्सवायरस शामिल है। इसमें ट्रिस (ट्रिस-एमिनोमेथेन) और सोडियम क्लोराइड भी होता है। वैक्सीन में चिकन भ्रूण फाइब्रोब्लास्ट कोशिकाओं से डीएनए और प्रोटीन की थोड़ी मात्रा भी हो सकती है, जिसका उपयोग वैक्सीन वायरस, बेंजोनेस और एंटीबायोटिक यौगिकों जैसे जेंटामिसिन और सिप्रोफ्लोक्सासिन को विकसित करने के लिए किया जाता है।
अल्ट्रासोनिक होमोजिनाइजेशन का उपयोग लाइव-तनु वायरस टीकों, डीएनए टीकों, बहु-संयोजक डीएनए कॉकटेल, एमआरएनए टीकों, पुनः संयोजक प्रोटीन टीकों, वायरस जैसे कण टीकों आदि के उत्पादन में किया जाता है।
- वायरस कणों और एजेंटों का फैलाव
- पायसीकरण
- वायरस की निष्क्रियता
- दवा वाहक सूत्रीकरण (एनएलसी, एसएलएन)
- कैप्सूलीकरण
- एजेंटों का विघटन
- सहायक उपकरण ों की तैयारी
- Degassing/De-Aeration
मंकीपॉक्स वायरस के अल्ट्रासोनिक अलगाव के लिए प्रोटोकॉल
स्टेटेलार (2005) की शोध टीम ने विकास मेजबान सेल संस्कृति के साथ-साथ संक्रमित प्राइमेट्स से गले के स्वैप के माध्यम से प्राप्त कोशिकाओं से मंकीपॉक्स वायरस को जारी करने के लिए अल्ट्रासोनिक लिसिस का उपयोग किया।
मंकीपॉक्स वैक्सीन की तैयारी:
मंकीपॉक्स वायरस विशिष्ट-रोगज़नक़ मुक्त चिकन भ्रूण फाइब्रोब्लास्ट कोशिकाओं पर उगाए गए थे। 1 से 2 दिनों के लिए इनक्यूबेशन के बाद, वायरस-सेल निलंबन को फ्रीज-विगलन के एक दौर द्वारा काटा गया था और फिर सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा केंद्रित किया गया था। गोली को फिर से निलंबित कर दिया गया था और अल्ट्रासोनिक होमोजिनाइजेशन के कई राउंड के अधीन किया गया था।
टीका लगाए गए मकाक से मंकीपॉक्स वायरस अलगाव:
नमूनों को तीन बार फ्रीज-पिघलाया गया था और एक अल्ट्रासोनिक कपहॉर्न में सोनिकेटेड किया गया था। 1% भ्रूण गोजातीय सीरम के साथ पूरक परिवहन माध्यम में दो कमजोर पड़ने (1: 10 और 1: 100) का उपयोग छह-अच्छी तरह से प्लेटों में वेरो सेल मोनोलेयर्स को टीका लगाने के लिए किया गया था। 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेशन के 1 घंटे के बाद, इनोकुला को हटा दिया गया और 1% भ्रूण गोजातीय सीरम के साथ पूरक संस्कृति माध्यम के साथ बदल दिया गया। मोनोलेयर्स को 37 डिग्री सेल्सियस पर 5 दिनों के लिए सुसंस्कृत किया गया था और क्रिस्टल वायलेट समाधान के साथ दाग दिया गया था।
(सीएफ स्टिटेलार एट अल।
वायरस विश्लेषण और टीका उत्पादन के लिए Ultrasonicators
Hielscher Ultrasonics व्यापक उत्पाद पोर्टफोलियो अनुसंधान और विश्लेषणात्मक प्रयोगशालाओं के साथ-साथ औद्योगिक टीका निर्माण के लिए आदर्श ultrasonicator प्रदान करता है।
Hielscher Ultrasonics अनुसंधान और विश्लेषणात्मक प्रयोगशालाओं में उपयोग के साथ-साथ औद्योगिक टीका उत्पादन में कार्यान्वयन के लिए उच्च प्रदर्शन ultrasonicators और sono-bioreactors के डिजाइन, विनिर्माण और वितरण में विशेषज्ञता प्राप्त है (उदा. टीके, Apis)।
सोनिकेशन को खुले जहाजों पर लागू किया जा सकता है, लगातार उत्तेजित रिएक्टरों और निरंतर प्रवाह के माध्यम से रिएक्टरों को बंद किया जा सकता है। अल्ट्रासोनिक सिस्टम के सभी हिस्से, जो तरल माध्यम के संपर्क में आते हैं, स्टेनलेस स्टील, टाइटेनियम या ग्लास से बने होते हैं। Autoclavable भागों और सैनिटरी फिटिंग के तहत उत्पादन सुनिश्चित फार्मा-ग्रेड की स्थिति।
स्वचालित डेटा रिकॉर्डिंग: बुद्धिमान सॉफ्टवेयर एकीकृत एसडी मेमोरी कार्ड पर स्वचालित रूप से sonication प्रक्रिया के मापदंडों को रिकॉर्ड करता है। सभी प्रक्रिया मापदंडों का सटीक नियंत्रण सुनिश्चित reproducibility, उत्पादन मानकीकरण, और फार्मास्युटिकल उत्पाद सुरक्षा मानकों की पूर्ति की सुविधा प्रदान करता है।
Hielscher Ultrasonics’ अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर अत्यधिक विश्वसनीय हैं और उन्हें ठीक से नियंत्रित किया जा सकता है। सभी औद्योगिक ultrasonicators कम से बहुत उच्च आयाम के लिए पूरी रेंज देने के लिए समायोजित कर सकते हैं। Hielscher अल्ट्रासोनिक सिस्टम की मजबूती भारी शुल्क के तहत और मांग वातावरण में 24/7 ऑपरेशन के लिए अनुमति देता है।
नीचे दी गई तालिका आपको हमारे अल्ट्रासोनिकटर की अनुमानित प्रसंस्करण क्षमता का संकेत देती है:
| बैच वॉल्यूम | प्रवाह की दर | अनुशंसित उपकरणों |
|---|---|---|
| मल्टी-वेल / माइक्रोटिटर प्लेटें | n/a | यूआईपी400एमटीपी |
| 1 से 500 एमएल | 10 से 200 मील / मिनट | UP100H |
| 10 से 2000 मील | 20 से 400 एमएल / मिनट | UP200Ht, UP400St |
| 0.1 से 20 एल | 0.2 से 4 एल / मिनट | UIP2000hdT |
| 10 से 100 एल | 2 से 10 एल / मिनट | UIP4000hdT |
| n/a | 10 से 100 एल / मिनट | UIP16000 |
| n/a | बड़ा | के समूह UIP16000 |
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अल्ट्रासोनिक डीएनए बाल काटना
सीसी-बाय-एसए.03 के तहत जेकेडब्ल्यूचुई से अनुकूलित
साहित्य/संदर्भ
- Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
- Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
- J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
- Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
- Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.
जानने के योग्य तथ्य
मंकीपॉक्स वायरस
मंकीपॉक्स (एमपीवी, एमपीएक्सवी, या एचएमपीएक्सवी) डबल-फंसे डीएनए वायरस की एक प्रजाति है, जो एक वायरल जूनोटिक बीमारी का कारण बनती है। इस बीमारी को मंकीपॉक्स संक्रमण के रूप में जाना जाता है और यह मनुष्यों और जानवरों में हो सकता है। यह पोक्सविरिडे परिवार में जीनस ऑर्थोपॉक्सवायरस से संबंधित है। मंकीपॉक्स वायरस वैरियोला (वीएआरवी), काउपॉक्स (सीपीएक्स), और वैक्सीनिया (वीएसीवी) वायरस के साथ मानव ऑर्थोपॉक्सवायरस में से एक है। ऑर्थोपॉक्सवायरस को बड़े ईंट के आकार के वायरस कणों की विशेषता है, जिसमें लगभग 200,000 बीपी का डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए जीनोम होता है।
एलिसा परख
एलिसा एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉरबेंट परख के लिए खड़ा है और एक लेबल वाला इम्यूनोसे है जिसे इम्यूनोसेस का स्वर्ण मानक माना जाता है। एलिसा एक इम्यूनोलॉजिकल परीक्षण है, जो इसकी उच्च नैदानिक संवेदनशीलता के लिए मूल्यवान है, जिसका उपयोग एंटीबॉडी, एंटीजन, प्रोटीन, ग्लाइकोप्रोटीन और हार्मोन सहित अणुओं का पता लगाने और मात्रा निर्धारित करने के लिए किया जाता है। एलिसा का सिद्धांत एक एंटीजन-एंटीबॉडी इंटरैक्शन पर आधारित है। इस एंटीजन-एंटीबॉडी इंटरैक्शन द्वारा, विशिष्ट एंटीबॉडी अपने लक्ष्य एंटीजन से बंधते हैं। केवल जब बातचीत होती है, तो सब्सट्रेट एंजाइम को बांध सकता है और बाद में सब्सट्रेट रूपांतरण देखा जा सकता है, जिसका अर्थ है कि सकारात्मक परिणाम प्राप्त होता है।
हिल्स्चर अल्ट्रासोनिक्स उच्च प्रदर्शन अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइजर्स से बनाती है प्रयोगशाला सेवा मेरे औद्योगिक आकार।