उच्च-थ्रूपुट सोनिकेशन का उपयोग करके सोनिकेशन द्वारा एंटीबॉडी क्षालन
एफ़िनिटी क्रोमैटोग्राफी प्रोटीन शुद्धिकरण के लिए एक शक्तिशाली तकनीक है, जिसके लिए अल्ट्रासोनिक रूप से सहायता प्राप्त गैर-विशिष्ट क्षालन आत्मीयता क्रोमैटोग्राफी से एंटीबॉडी प्राप्त करने के लिए एक विश्वसनीय नमूना तैयारी तकनीक है। आत्मीयता मैट्रिक्स से बंधे लक्ष्य एंटीबॉडी के कुशल और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य क्षालन में सोनिकेशन द्वारा काफी सुधार किया जाता है। उच्च-थ्रूपुट प्लेट-सोनिकेटर UIP400MTP 96-अच्छी तरह से, माइक्रोटिटर और मल्टीवेल प्लेटों में उच्च नमूना संख्याओं को बेहतर ढंग से अनुकूल बनाता है और आत्मीयता क्रोमैटोग्राफी में एंटीबॉडी वसूली की सुविधा प्रदान करता है।
सोनिकेशन क्षालन की सुविधा कैसे देता है?
अल्ट्रासोनिक रूप से तीव्र गैर-विशिष्ट क्षालन का उपयोग करके, प्रयोगशाला कार्यकर्ता और वैज्ञानिक आत्मीयता क्रोमैटोग्राफी कॉलम से शुद्ध एंटीबॉडी को कुशलतापूर्वक पुनर्प्राप्त कर सकते हैं। ये शुद्ध एंटीबॉडी विभिन्न क्षेत्रों में डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों के माध्यम से चलाए जाते हैं, जैसे कि इम्यूनोलॉजी, जैव प्रौद्योगिकी और चिकित्सा निदान।
क्षालन एक नमूना तैयार करने वाला कदम है जिसका उपयोग आमतौर पर एफ़िनिटी क्रोमैटोग्राफी के लिए किया जाता है: एफ़िनिटी क्रोमैटोग्राफी एक लक्ष्य अणु (जैसे एंटीबॉडी) और क्रोमैटोग्राफी मैट्रिक्स पर स्थिर लिगैंड के बीच अत्यधिक विशिष्ट इंटरैक्शन का शोषण करती है। यह अणुओं की विशिष्ट बाध्यकारी आत्मीयता का उपयोग करके एक जटिल मिश्रण से लक्ष्य अणु के चयनात्मक शुद्धिकरण की अनुमति देता है, उदा।
एंटीबॉडी का विशिष्ट बंधन: एंटीबॉडी को अक्सर एफ़िनिटी क्रोमैटोग्राफी का उपयोग करके शुद्ध किया जाता है, जहां वे चुनिंदा रूप से क्रोमैटोग्राफी राल पर स्थिर लिगैंड से बंधते हैं। यह एक एंटीजन, एक प्रोटीन ए / जी, या कोई अन्य अणु हो सकता है जो विशेष रूप से ब्याज के एंटीबॉडी के साथ बातचीत करता है।
क्षालन: लक्ष्य एंटीबॉडी को मैट्रिक्स से बांधने के बाद, अगले चरण में राल से बाध्य एंटीबॉडी को हटाना (या धोना) शामिल है। इस क्षालन कदम में आमतौर पर एंटीबॉडी और लिगैंड के बीच विशिष्ट बंधन को बाधित करना शामिल है। इस कदम को सोनिकेशन द्वारा सुविधाजनक बनाया जा सकता है।
अल्ट्रासोनिक रूप से सहायता प्राप्त गैर-विशिष्ट क्षालन: विशिष्ट क्षालन विधियों के विपरीत जो केवल एंटीबॉडी-लिगैंड इंटरैक्शन को बाधित करते हैं, गैर-विशिष्ट क्षालन विधियां राल पर सभी इंटरैक्शन को बाधित करती हैं, जिनमें गैर-विशिष्ट भी शामिल हैं। दृढ़ता से बंधे हुए दूषित पदार्थों से निपटने के दौरान यह फायदेमंद हो सकता है जो शुद्धिकरण प्रक्रिया में हस्तक्षेप कर सकते हैं। यहाँ खेल में sonication आता है! अल्ट्रासोनिक तरंगों का उपयोग क्षालन बफर में गुहिकायन बुलबुले उत्पन्न करने के लिए किया जाता है। जब ये बुलबुले राल मैट्रिक्स के पास गिरते हैं, तो वे तीव्र स्थानीयकृत कतरनी बलों और माइक्रोस्ट्रीमिंग का उत्पादन करते हैं। यह यांत्रिक व्यवधान एंटीबॉडी और लिगैंड के बीच गैर-विशिष्ट इंटरैक्शन को तोड़ने में मदद करता है, जिससे मैट्रिक्स से बाध्य एंटीबॉडी के क्षालन की सुविधा मिलती है।
Sonication का उपयोग कर अल्ट्रासोनिक क्षालन के लाभ
अल्ट्रासोनिक क्षालन कई फायदे प्रदान करता है, विशेष रूप से प्रोटीन शुद्धि तकनीकों जैसे कि आत्मीयता क्रोमैटोग्राफी के संदर्भ में।
उदाहरण के लिए, सोनिकेशन प्रोटीन अखंडता, वसूली, शुद्धता, बहुमुखी प्रतिभा और दक्षता के मामले में वैकल्पिक तरीकों को उत्कृष्टता देता है। ये फायदे अल्ट्रासोनिक क्षालन को प्रोटीन शुद्धि प्रक्रियाओं के लिए एक पसंदीदा विकल्प बनाते हैं, विशेष रूप से उन अनुप्रयोगों में जहां प्रोटीन संरचना और गतिविधि को बनाए रखना आवश्यक है। इसके अतिरिक्त, अल्ट्रासोनिक क्षालन अपनी सादगी, दक्षता, बहुमुखी प्रतिभा और प्रोटीन और आत्मीयता मैट्रिसेस की एक विस्तृत श्रृंखला के साथ संगतता के लिए खड़ा है। प्रोटीन-मैट्रिक्स इंटरैक्शन को बाधित करने के लिए अल्ट्रासाउंड तरंगों को लागू करना, अल्ट्रासोनिक क्षालन प्रोटीन शुद्धि के लिए एक सौम्य और तेज़ विधि प्रदान करता है, उच्च वसूली दर सुनिश्चित करता है और डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों के लिए प्रोटीन अखंडता को संरक्षित करता है।
प्रोटीन संरचना पर जेंटलर: कम-पीएच क्षालन में लक्ष्य प्रोटीन (जैसे, एंटीबॉडी) और आत्मीयता मैट्रिक्स के बीच बंधन को बाधित करने के लिए अम्लीय बफ़र्स का उपयोग शामिल है। हालांकि, कम पीएच के संपर्क में आने से प्रोटीन विकृत हो सकते हैं, संभावित रूप से उनकी संरचना और जैविक गतिविधि से समझौता हो सकता है। इसके विपरीत, अल्ट्रासोनिक क्षालन मुख्य रूप से रासायनिक विकृतीकरण के बजाय यांत्रिक व्यवधान पर निर्भर करता है, जिससे यह प्रोटीन संरचना पर जेंटलर बन जाता है। पीएच परिवर्तनों के प्रति संवेदनशील नाजुक प्रोटीन या एंटीबॉडी को शुद्ध करते समय यह विशेष रूप से फायदेमंद होता है।
- एकत्रीकरण का कम जोखिम: कम-पीएच क्षालन प्रोटीन के खुलासा और हाइड्रोफोबिक क्षेत्रों के जोखिम के कारण प्रोटीन एकत्रीकरण के जोखिम को बढ़ा सकता है। एकत्रीकरण से प्रोटीन गतिविधि का नुकसान और डाउनस्ट्रीम प्रसंस्करण में कठिनाइयों का कारण बन सकता है। अल्ट्रासोनिक क्षालन, तुलनात्मक रूप से, प्रोटीन के मूल रचना को महत्वपूर्ण रूप से बदलने के बिना प्रोटीन और आत्मीयता मैट्रिक्स के बीच बातचीत को बाधित करने के लिए यांत्रिक बलों को नियोजित करके एकत्रीकरण के जोखिम को कम करता है।
- बेहतर वसूली और शुद्धता: अल्ट्रासोनिक क्षालन वैकल्पिक क्षालन विधियों की तुलना में उच्च वसूली दर और शुद्धता स्तर प्राप्त कर सकता है। अल्ट्रासोनिकेशन द्वारा प्रदान किया गया यांत्रिक व्यवधान गैर-विशिष्ट इंटरैक्शन को कम करते हुए एफ़िनिटी मैट्रिक्स से बाध्य प्रोटीन को प्रभावी ढंग से जारी करता है। इसके परिणामस्वरूप गैर-विशेष रूप से बाध्य अणुओं से कम संदूषण के साथ लक्ष्य प्रोटीन की बढ़ी हुई वसूली होती है, जो एल्यूटेड अंश की उच्च शुद्धता में योगदान करती है।
- उच्च-थ्रूपुट प्रसंस्करण: Hielscher Ultrasonics अल्ट्रासाउंड की सहायता से प्रोटीन शुद्धि, क्षालन और biopanning के लिए विभिन्न sonicators प्रदान करता है। माइक्रोटिटर प्लेट-सोनिकेटर UIP400MTP 96-अच्छी तरह से और अन्य मल्टीवेल प्लेटों में नमूनों के बड़े पैमाने पर प्रसंस्करण की अनुमति देता है। वायलट्वीटर एक ही परिस्थिति में एपडॉर्फ शीशियों जैसे 10 ट्यूबों तक की परेशानी मुक्त, एक साथ सोनिकेशन के लिए आदर्श है। कपहॉर्न कई ट्यूबों, छोटे बीकर और अन्य जहाजों के लिए एक बहुमुखी सोनिकेटर आदर्श है। और निश्चित रूप से, माइक्रोटिप्स के साथ क्लासिक जांच-प्रकार के सोनिकेटर नमूना तैयार करने के लिए एक अच्छी तरह से स्थापित प्रयोगशाला उपकरण हैं। Hielscher Ultrasonics उत्पाद रेंज में आपके प्रयोग सेटअप और आपके नमूना आकार के लिए आदर्श सोनिकेटर है।
- बहुमुखी प्रतिभा और संगतता: अल्ट्रासोनिक क्षालन प्रोटीन और आत्मीयता मैट्रिसेस की एक विस्तृत श्रृंखला के साथ संगत है, जो शुद्धि अनुप्रयोगों में बहुमुखी प्रतिभा प्रदान करता है। इसके विपरीत, कम-पीएच क्षालन कुछ प्रोटीनों के लिए उपयुक्त नहीं हो सकता है जो अम्लीय स्थितियों के प्रति संवेदनशील होते हैं या आत्मीयता मैट्रिसेस के लिए जो कम पीएच पर गिरावट या लीचिंग के लिए प्रवण होते हैं। अल्ट्रासोनिक क्षालन एक सौम्य और सार्वभौमिक रूप से लागू विकल्प प्रदान करता है जिसे प्रोटीन अखंडता या मैट्रिक्स स्थिरता से समझौता किए बिना विशिष्ट शुद्धि आवश्यकताओं के अनुरूप बनाया जा सकता है।
- समय और दक्षता: अल्ट्रासोनिक क्षालन को आमतौर पर अन्य क्षालन विधियों की तुलना में कम क्षालन समय की आवश्यकता होती है। अल्ट्रासोनिकेशन द्वारा सुगम बाध्य प्रोटीन की तेजी से और कुशल रिहाई प्रसंस्करण समय को कम करती है और समग्र शुद्धि दक्षता को बढ़ाती है, जिससे यह उच्च-थ्रूपुट अनुप्रयोगों के लिए एक आकर्षक विकल्प बन जाता है या जब समय-संवेदनशील परिणामों की आवश्यकता होती है।
अल्ट्रासोनिक रूप से सहायता प्राप्त बायोपैनिंग
एंटीबॉडी शुद्धिकरण में बायोपैनिंग एक महत्वपूर्ण तकनीक है, खासकर जब अनुसंधान या चिकित्सा निदान के लिए अत्यधिक विशिष्ट एंटीबॉडी प्राप्त की जानी चाहिए। बायोपैनिंग वह प्रक्रिया है जिसमें एंटीबॉडी को एंटीबॉडी के मिश्रण से अलग किया जाता है, तथाकथित एंटीबॉडी लाइब्रेरी।
अल्ट्रासोनिक बायोपैनिंग कैसे काम करता है?
यह एंटीबॉडी के एक पुस्तकालय के साथ शुरू होता है, विभिन्न एंटीबॉडी का मिश्रण। प्रत्येक एंटीबॉडी को अपने स्वयं के अनूठे आकार और विशिष्टता की विशेषता है। विश्लेषण और चिकित्सा विज्ञान के लिए, विशिष्ट एंटीबॉडी जो किसी विशेष लक्ष्य को पहचानते हैं, जैसे कि वायरस या कैंसर सेल, को अलग किया जाना चाहिए। बायोपैनिंग का उपयोग करके, इन विशिष्ट एंटीबॉडी को अलग किया जा सकता है। अल्ट्रासोनिकेशन बायोपैनिंग प्रक्रिया को सुविधाजनक बनाने में मदद करता है जिससे एंटीबॉडी शुद्धिकरण अधिक कुशल हो जाता है।
एंटीबॉडी की एक लाइब्रेरी से शुरू होकर, एंटीबॉडी आमतौर पर एक बैक्टीरियोफेज, खमीर सेल या अन्य डिस्प्ले सिस्टम की सतह पर प्रदर्शित होते हैं। यह पुस्तकालय एंटीबॉडी की एक विविध श्रेणी का प्रतिनिधित्व करता है।
पहले चरण में, यह पुस्तकालय आपके लक्षित अणु के संपर्क में है। लक्ष्य से बंधने वाले एंटीबॉडी चिपक जाएंगे, जबकि अन्य धुल जाएंगे। अनबाउंड एंटीबॉडी को हटाने के लिए, नमूनों को बफर समाधान के साथ कई बार धोया जाता है।
अब, हमारे पास केवल बाध्य एंटीबॉडी वाले नमूने हैं। हालांकि, इसका मतलब है कि एंटीबॉडी अभी भी उनके प्रदर्शन प्रणाली से जुड़े हुए हैं। उन्हें मुक्त करने के लिए, एंटीबॉडी-लिगैंड इंटरैक्शन को तोड़ना होगा। इस चरण को क्षालन के रूप में जाना जाता है। नमूनों को एक समाधान का उपयोग करके एल्यूट किया जा सकता है जो बाध्यकारी को बाधित करता है, उदाहरण के लिए एक विशिष्ट क्षालन बफर, एक अराजकता, पीएच मान को कम करना, गर्मी लागू करना आदि। ये क्षालन तकनीक एंटीबॉडी-लिगैंड बाइंडिंग को नष्ट कर देती है, लेकिन एंटीबॉडी को भी खराब कर सकती है। यही कारण है कि सोनिकेशन का उपयोग वैकल्पिक तकनीक के रूप में किया जाता है ताकि एंटीबॉडी को उनके लक्ष्य से धीरे से हटा दिया जा सके।
क्षालन चरण को अंतिम रूप देने के बाद, हम शुद्ध एंटीबॉडी प्राप्त करते हैं, जो अनुसंधान, निदान या चिकित्सा में उपयोग के लिए तैयार होते हैं।
बायोपैनिंग एंटीबॉडी शुद्धिकरण में एक शक्तिशाली तकनीक है और अल्ट्रासोनिक क्षालन प्रभावशीलता को सुविधाजनक और तेज करता है – जिसके परिणामस्वरूप अत्यधिक शुद्ध, अप्रकाशित एंटीबॉडी होते हैं। अल्ट्रासोनिक बायोपैनिंग वैज्ञानिकों को जटिल नमूनों से अत्यधिक विशिष्ट एंटीबॉडी को अलग करने में सक्षम बनाता है, जिससे अनुप्रयोगों की एक विस्तृत श्रृंखला के दरवाजे खुल जाते हैं।
एंटीबॉडी शुद्धिकरण के लिए Sonicators
Hielscher sonicators दुनिया भर में सबसे अच्छा अनुसंधान सुविधाओं में उपयोग की जाने वाली अच्छी तरह से स्थापित उपकरण हैं। उनके अत्याधुनिक डिजाइन और बेहतर प्रदर्शन के लिए मूल्यवान, Hielscher sonicators जैव प्रौद्योगिकी और आणविक जीव विज्ञान के क्षेत्र में अपरिहार्य प्रयोगशाला उपकरण के रूप में माना जाता है। Hielscher Ultrasonics एकल नमूने के साथ-साथ उच्च-थ्रूपुट नमूना तैयार करने के लिए sonicators प्रदान करता है, जो एंटीबॉडी के कुशल शुद्धिकरण और लक्ष्य-बाध्य अणुओं के क्षालन की सुविधा प्रदान करता है, और सटीक और गति के साथ विशिष्ट एंटीबॉडी को अलग करने के लिए कुशल बायोपैनिंग के लिए सक्षम बनाता है।
एंटीबॉडी शुद्धि के संदर्भ में, Hielscher sonicators लक्ष्य-बाध्य परिसरों की अखंडता को संरक्षित करते हुए अनबाउंड एंटीबॉडी को कुशलतापूर्वक हटाकर धोने और क्षालन चरणों को सुविधाजनक बनाने में उत्कृष्टता प्राप्त करते हैं। उनका सटीक नियंत्रण और मापनीयता अनुरूप प्रसंस्करण स्थितियों के लिए अनुमति देती है, नमूना संस्करणों और जटिलताओं की एक विस्तृत श्रृंखला में इष्टतम शुद्धि परिणाम सुनिश्चित करती है।
Hielscher sonicators अल्ट्रासोनिक प्रसंस्करण में तकनीकी नवाचार का प्रतिनिधित्व करते हैं, एंटीबॉडी शुद्धि, क्षालन और बायोपैनिंग के लिए अद्वितीय क्षमताओं की पेशकश करते हैं। उनकी सटीकता, विश्वसनीयता और आसानी से संचालन के साथ, विभिन्न अल्ट्रासोनिक सिस्टम बायोफर्मासिटिकल अनुसंधान, निदान और चिकित्सा के लिए इष्टतम दक्षता और बहुमुखी प्रतिभा प्रदान करते हैं।
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अल्ट्रासोनिक क्षालन बनाम पारंपरिक क्षालन तकनीकों की तुलना
- प्रवणता क्षालन: ढाल क्षालन में, लक्ष्य प्रोटीन और आत्मीयता मैट्रिक्स के बीच बाध्यकारी शक्ति धीरे-धीरे क्षालन बफर की संरचना को बदलकर कम हो जाती है। इसमें पीएच, नमक एकाग्रता, या प्रतिस्पर्धी लिगेंड की एकाग्रता जैसे कारकों को बदलना शामिल हो सकता है। ढाल क्षालन गैर-विशिष्ट बाध्यकारी को कम करते हुए लक्ष्य प्रोटीन को चुनिंदा रूप से जारी करने के लिए क्षालन स्थितियों के ठीक-ट्यूनिंग की अनुमति देता है।
अल्ट्रासोनिक क्षालन के लाभ: अल्ट्रासोनिक क्षालन ढाल क्षालन की तुलना में बाध्य प्रोटीन की अधिक तेजी से और समान रिहाई प्रदान करता है। जबकि ढाल क्षालन को सावधानीपूर्वक अनुकूलन और क्षालन स्थितियों की निगरानी की आवश्यकता होती है, अल्ट्रासोनिक क्षालन प्रोटीन वसूली के लिए एक सरल और अधिक कुशल तरीका प्रदान करता है। - प्रतिस्पर्द्धात्मक क्षालन: प्रतिस्पर्धी क्षालन में, एक प्रतिस्पर्धी लिगैंड की एक उच्च एकाग्रता लक्ष्य प्रोटीन और आत्मीयता मैट्रिक्स के बीच बंधन को बाधित करने के लिए क्षालन बफर में पेश की जाती है। प्रतिस्पर्धी लिगैंड मैट्रिक्स पर बाध्यकारी साइटों के लिए लक्ष्य प्रोटीन के साथ प्रतिस्पर्धा करता है, जिससे प्रोटीन को विस्थापित किया जाता है और इसे एल्यूएट में जारी किया जाता है।
अल्ट्रासोनिक क्षालन के लाभ: अल्ट्रासोनिक क्षालन प्रतिस्पर्धी क्षालन के लिए एक जेंटलर और अधिक बहुमुखी विकल्प प्रदान करता है। प्रतिस्पर्धी क्षालन को अराजक एजेंटों की उच्च सांद्रता के उपयोग की आवश्यकता हो सकती है (यानी एक सह-विलेय जो पानी के अणुओं के बीच हाइड्रोजन बॉन्डिंग नेटवर्क को बाधित करता है और हाइड्रोफोबिक प्रभाव को कमजोर करके प्रोटीन की मूल स्थिति की स्थिरता को कम करता है) या कठोर रसायन, जो प्रोटीन स्थिरता और गतिविधि को प्रभावित कर सकता है। इसके विपरीत, अल्ट्रासोनिक क्षालन अतिरिक्त रासायनिक एजेंटों की आवश्यकता के बिना यांत्रिक व्यवधान प्रदान करता है, प्रोटीन अखंडता को संरक्षित करता है और उच्च वसूली दर सुनिश्चित करता है। - तापमान-प्रेरित क्षालन: तापमान-प्रेरित क्षालन में लक्ष्य प्रोटीन और आत्मीयता मैट्रिक्स के बीच बंधन को बाधित करने के लिए क्षालन बफर के तापमान को बदलना शामिल है। यह विशिष्ट प्रोटीन-मैट्रिक्स इंटरैक्शन के आधार पर तापमान को बढ़ाकर या घटाकर प्राप्त किया जा सकता है।
अल्ट्रासोनिक क्षालन के लाभ: अल्ट्रासोनिक क्षालन तापमान-प्रेरित तरीकों की तुलना में प्रोटीन क्षालन के लिए अधिक तेज़ और नियंत्रित विधि प्रदान करता है। जबकि तापमान-प्रेरित क्षालन को तापमान ढाल और लंबे समय तक संतुलन समय के सटीक नियंत्रण की आवश्यकता हो सकती है, अल्ट्रासोनिक क्षालन तत्काल यांत्रिक व्यवधान प्रदान करता है, जिसके परिणामस्वरूप कम क्षालन समय और बेहतर दक्षता होती है। - एंजाइमेटिक एल्यूशन: एंजाइमैटिक क्षालन विशिष्ट एंजाइमों का उपयोग करता है जो लक्ष्य प्रोटीन और आत्मीयता मैट्रिक्स के बीच के बंधनों को साफ करते हैं, प्रोटीन को एल्यूएट में जारी करते हैं। यह विधि प्रोटीन के लिए विशेष रूप से उपयोगी है जो मैट्रिक्स से कसकर बंधे होते हैं या उन अनुप्रयोगों के लिए जिन्हें क्षालन की स्थिति पर सटीक नियंत्रण की आवश्यकता होती है।
अल्ट्रासोनिक क्षालन के लाभ: अल्ट्रासोनिक क्षालन एंजाइमी क्षालन एंजाइमी क्षालन के लिए एक गैर-एंजाइमेटिक और रासायनिक मुक्त विकल्प प्रदान करता है। जबकि एंजाइमी क्षालन को एंजाइम एकाग्रता, इनक्यूबेशन समय और पीएच स्थितियों के अनुकूलन की आवश्यकता हो सकती है, अल्ट्रासोनिक क्षालन अतिरिक्त अभिकर्मकों या विशेष उपकरणों की आवश्यकता के बिना प्रोटीन वसूली के लिए एक सीधा और सार्वभौमिक रूप से लागू तरीका प्रदान करता है।
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