Proovi ettevalmistamine ultraheli vialTweeter

Ultraheli proovi ettevalmistamine

Ultrasonication is a common technique of sample treatment in order to get the sample ready for analyses such as polymers chain reaction (PCR), Western Blots, assays, molecular sequencing, chromatography etc. Ultrasonication is a technique widely used in laboratories to treat samples pre-analytically. A major advantage of sonication is that the working principle of ultrasound is based on purely mechanical forces. Ultrasonic lysis and cell disruption is achieved by sonomechanical shear forces, which gives ultrasonication the advantage that the solvents used for protein extraction can be used also during lysis. Ultrasonic cell disruptors such as the VialTweeter break the cell walls / membranes and promote mass transfer between cell interior and solvent. Thereby, the analyte (e.g. DNA, RNA, proteins, organelles etc.) are efficiently transferred from the cell matrix into the solvent. This means the steps of quenching and extraction overlap with the ultrasonic cell disruption process, which makes ultrasonic lysis very effective. Furthermore, ultrasonic sample preparation does not require detergents and other lysis reagents, which might alter and destruct the structure of the lysate and is known for the subsequent troubles with purification. Another lysis method, the enzymatic disruption requires long incubation times and delivers often non-reproducible results. Ultrasonic sample preparation overcomes common problems in sample preparation such as tissue homogenization, cell disruption, lysis, protein extraction and lysate solubilization. Since the intensity of the ultrasonic treatment can be exactly controlled and adjusted to the biological sample, degradation and sample loss are avoided. Automatically monitored and controlled sample temperature, pulse mode and sonication duration ensure optimum outcomes.

VialTweeter on eriti mugav laboratoorsetöö, mis nõuab samaaegset ettevalmistamist mitu proovi samadel tingimustel. VialTweeter on ultraheli plokk sonotrode, mis mahutab kuni 10 viaali (nt Eppendorf, centriguge, NUNC torud, krüo-viaalid) ja sonicates neid intensiivselt täpselt kontrollitud tingimustes. Kuna ultraheli energia on ühendatud läbi viaalide seinte proovikeskkonda, säilitavad viaalid ravi ajal suletud. Seega välditakse täielikult proovi kadu mist ja ristsaastumist.

Viaalid ja torud, mis sobivad VialTweeter

VialTweeter sobib hoida 10 ühist kooniline või ümaralt torud nagu Eppendorf, tsentrifuugi, krüo-viaalija erinevate NUNC viaali tüübid, kuid augud saab kohandada teiste viaali ja toru suurused nõudmisel. Palun andke meile teada, millist katseklaasi soovite kasutada, et saaksime muuta oma VialTweeter vastavalt. Suuremate katseklaaside, nagu Falconi torud ja muud katsekonteinerid, keeduklaasid ja anumad, on VialPress mugav lahendus.

VialTweeter koos VialPress'iga

Kuigi VialTweeter ise oma 10 torud augud on juba unikaalne ja väga funktsionaalne ultraheli seade, VialPress lisandmoodul muudab VialTweeter veelgi mitmekülgne ja paindlik toimimiseks. VialPress on vialtweeter lisaseade, mis koosneb klamber-on baar, mis võimaldab fikseerida suurem proovi torud nagu Falcon torud või muud väikesed kuni keskmise suurusega test keeduklaasid VialTweeter ees. Pilt vasakul näitab VialTweeter ettevõttes 10 Eppendorf viaali plokk, samas VialPress fikseerib ühe suurema katseklaasi ees ultrahelitöötlus. VialPress on võimeline hoidma kuni 5 suuremat katseklaasi intensiivseks ultrahelitöötluseks.

VialTweeteri näidiste ettevalmistamise protokollid

VialTweeter it kasutatakse laialdaselt bioloogiliste proovide ultraheliga töötlemiseks. Enne analüüsimist tuleb proovid valmistada biokeemilisteks või biofüüsikalisteks analüüsideks ja analüüsideks, nt lüüsi, kudede homogeniseerimise, valgu ekstraheerimise, DNA/RNA lõikamise, degaseerimise jms abil. VialTweeter täidab need ultraheli protsessid usaldusväärselt ja annab reprodutseeritavaid tulemusi. VialTweeteri ühine kasutamine on imetajate (inimeste ja loomade) kudede, bakterirakkude ja viirusosakeste lüüsi-/rakuhäired. Edukalt VialTweeter-töödeldud bioloogilised proovid hõlmavad inimese kopsuepiteelirakke, vereloome tüvirakke, müeloidset leukeemiarakke, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus anthracis (Sihtkoha Brerelähedal lähedal), Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptococcus pyogenes (Sihtkoha Streptococcus pyogenes lähedal), Caulobacter poolkuu, Mükoplasma pneumoonia, mükobakterite / Mycobacterium tuberculosis kompleks (MTBC) ja paljud teised bakteriaalsed, botaanilised, ja mikroobide rakud.
Allpool leiate mõned valitud protokollid featuring VialTweeter.

E.Coli lüüs VialTweeteriga in vivo glutatiooni määramiseks

Tüve MG1655 Escherichia coli baktereid kasvatati Minimaalses söötmes 200 ml- s, kuni saavutati A600 0,5. Kultuur jagati 50 ml kultuuride stressi raviks. Pärast 15 min inkubeerimist 0,79 mM allititsiini, 1 mM diamiidi või dimetüülsulfoksiidiga (kontroll), rakud koguti 4000 g juures 4 °C juures 10 minutit. Rakud pesti kaks korda KPE puhvriga enne graanulite resuspendeerimist 700 μl KPE puhvris. Deproteinatsiooniks lisati 300 μl 10% (w/ v) sulfosalitsüülhapet enne rakkude katkemist ultraheliga (3 x 1 min; VialTweeter ultrasonicator). Supernatandid koguti pärast tsentrifuugimist (30 min, 13 000 g, 4 °C). Sulfosalitsüülhappe kontsentratsioon vähenes 3 mahuosa KPE puhvri lisamisega 1%-ni. Glutatiooni ja GSSG üldmõõtmisi tehti eespool kirjeldatud viisil. Rakuglutatiooni kontsentratsioonid arvutati 6,7×10- 15- liitriste E. coli rakkude ja A600 0, 5 rakutiheduse (vastab 1×108 raku ml- 1 kultuurile) mahu alusel. GSH kontsentratsioonid arvutati, lahutades 2[GSSG] kogu glutatioonist. (Müller et al. 2016)

Raku lüüs VialTweeter enne grafiit ahju aatomabsoriaatspektromeetria

Bacillus subtilis 168 (trpC2) puutusid kokku 15 minuti antibiootikumi stressiga, siis koguti rakud 3,320 x g juures, pestakse viis korda 100 mM Tris/1 mM EDTA, pH 7.5, resuspendeeriti 10 mM Trisis, pH 7.5 ja häiritud ultraheliga HielscherIvi seadmes. (Wenzel et al. 2014)

VialTweeter proovi ettevalmistamine enne massspektromeetria

Inimese CD34􏰀 vereloome varre/eellaste rakkude lüofiliseeritud rakugraanulid resuspendeeriti 10 μ􏰇l (200 μl peptiidi lahjendusseeria jaoks) 8 M karbamiidi 100 mM ammooniumvesinikkarbonaadis ja lüpseeritud ultraheliga töötlemiseteel HielscherVialTweeteriga 60% amplituudiga, 60% ja 20-aastane tsükkel kolm korda, kusjuures vahejahutus jääl. (Amon et al. 2019)

Proovi ettevalmistamise protokollid, kasutades ViaaliPressi

Värske salat (Lactuca sativa) homogeniseeriti 0,5 M HEPES puhvris (pH 8, KOH kohandatud) suhtega 1 g taime (värske kaal) kuni 200, 100, 50 või 20 ml puhverlahusega. Taimemassi ja puhverlahuse mahu suhe oli erinev, et homogeetaati kogumaht püsiks 3,5–12 ml. Taimemassi ja puhverlahuse mahu suhet oli vaheldusrikas, et hoida homogenitaati kogumaht 3,5–12 ml, võimaldades sondiga homogeniseerimist. Homogenaadid seejärel läbis kaudse ultraheli, kasutades UP200St koos VialTweeter varustatud 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Saksamaa) 3 min (80% pulss ja 100% võimsus). Selle seadme kasutamine vältis saastumist. (Naer u2019)

Usaldusväärne temperatuuri kontroll ultrahelitöötluse ajal VialTweeteriga

Temperatuur on oluline protsessi mõjutavat tegurit, mis on eriti oluline bioloogiliste proovide töötlemiseks. Nagu kõik mehaanilised proovi ettevalmistamise tehnikad, ultrahelitöötlus loob soojust. Siiski, temperatuur proovid saab hästi kontrollida, kui kasutate VialTweeter. Tutvustame teile erinevaid võimalusi jälgida ja kontrollida temperatuuri oma proovid valmistades neid VialTweeter ja VialPress analüüsimiseks.

1. Proovi temperatuuri jälgimine: Ultraheli protsessor UP200St, mis juhib VialTweeterit, on varustatud intelligentse tarkvara ja ühendatava temperatuurianduriga. Ühendage temperatuuriandur UP200St-ga ja sisestage temperatuurianduri ots ühte näidistorudest. Digitaalse värvilise puuteekraani abil saate up200St menüüs määrata oma proovi ultrahelitöötluse jaoks kindla temperatuurivahemiku. Ultraheliseade peatub automaatselt, kui maksimaalne temperatuur on saavutatud, ja peatub, kuni proovi temperatuur on määratud temperatuuri alumise väärtuseni ∆. Seejärel algab ultrahelitöötlus automaatselt uuesti. See nutikas funktsioon takistab kuumusest tingitud lagunemist.
2. VialTweeteri bloki võib eelnevalt jahutada. Pane VialTweeter plokk (ainult sonotrode ilma anduri!) külmkappi või sügavkülma eelnevalt jahtuda titaaniplokk aitab edasi lükata temperatuuri tõusu proovis. Võimaluse korral võib proovi ise ka eeljahutada.
3. Ultrahelitöötluse ajal jahtumiseks kasutage kuiva jääd. Kasutage kuiva jääga täidetud madalat alust ja asetage VialTweeter kuivajääle, et kuumus saaks kiiresti hajutada.

Kliendid kogu maailmas kasutada VialTweeter ja VialPress oma igapäevast proovi ettevalmistamise töö bioloogiliste, biokeemiliste, meditsiiniliste ja kliiniliste laborites. UP200St protsessori intelligentne tarkvara ja temperatuuri kontroll, temperatuur on usaldusväärselt kontrollitud ja kuumusest tingitud proovi lagunemist välditud. Ultraheli proovi ettevalmistamine VialTweeter ja VialPress pakub väga usaldusväärseid ja reprodutseeritavaid tulemusi!

VialTweeteri tehnilised andmed

VialTweeter on plokk sonotrode valmistatud titaanist, mis mahutab kuni 10 viaali augud ploki. Lisaks saab VialTweeteri esikülge kinnitada vialtweeteri esikülge vialpressi abil kuni 5 suuremat katseklaasi. VialTweeter on projekteeritud nii, et ultraheli energia jaotub ühtlaselt igasse sisestatud viaali, et tagada usaldusväärsed ja ühtsed ultrahelitöötlustulemused. Väike pööre reguleerib VialTweeter sonotrode et ebaühtlane maapinnast ja joondada katseklaasid vertikaalselt.

VialTweeter eelised lühidalt

• Intensiivne ultraheliga kuni 10 viaali üheaegselt
• Kaudne ultrahelitöötlus suure ultraheli intensiivsusega läbi laeva seina proovi
• Kaudne ultrahelitöötlus väldib ristsaastumist ja proovi kadu
• Reprodutseeritavad tulemused reguleeritavate ja kontrollitatavate ultrahelitöötluse amplituudi tõttu
• VialPress võimaldab teil sonikeerida suuremaid torusid
• Reguleeritav amplituud 20-100%
• Reguleeritav pulssrežiim 0-100%
• autoklaavitav

VialTweeter toidab UP200St, 200 vatti võimas ultraheli protsessor. UP200St on varustatud intelligentse tarkvaraga, mis võimaldab täpset kontrolli kõigi oluliste ultraheli protsessi parameetrite üle, nagu amplituud, ultrahelitöötlusaeg, pulsatsioon ja temperatuur. See muudab VialTweeter usaldusväärne vahend edukas reprodutseeritav protsess tulemusi bioloogiliste ja biokeemiliste laborites.
Amplituudi saab reguleerida 20 ja 100% vahel ning seeläbi kohandada ultraheli intensiivsust teie prooviga. Näiteks lõikamine ja killustumine DNA ja RNA nõuab leebemaamplituudi, et vältida tootmise liiga väike DNA fragmendid, kudede homogeniseerimine hiire aju vajab suure intensiivsusega ultrahelitöötlus. Valige up200st protsessori nutika ja intuitiivse menüü kaudu ideaalne amplituud, ultrahelitöötlus intensiivsus ja kestus. Menüüle ja seadetele pääseb hõlpsasti juurde ja neid saab kasutada värvilise puuteekraani ga. Seadetes saate eelseadistada ultrahelitöötluse parameetreid, nagu amplituud, pulsatsioon / tsükli režiim, ultrahelitöötluse kestus, kogu energia sisend ja temperatuuri piirangud. Teadusuuringutes ja tootmises on ülioluline katsete ja katsetulemuste korratavus. See tähendab, et protsessi tingimuste ja ultrahelitöötlusprotokollide täpne registreerimine on täiesti oluline. Automaatne andmete protokollimine kirjutab kõik ultrahelitöötlusandmed integreeritud SD-kaardilolevasse CSV-faili, nii et saate hõlpsalt kontrollida ja võrrelda erinevaid ultrahelitöötluse jookseb. Kõik ultraheli protsessi andmed on hõlpsasti juurdepääsetavad ja jagatud CSV-failina.
Hielscher Ultrasonics püüab pakkuda teile arenenud tehnoloogia, et hõlbustada ja parandada oma teadustööd!