Proovi ettevalmistamine ultraheli VialTweeteriga

Proovi ettevalmistamine enne analüüsi võib nõuda mitmesuguseid eelanalüütilisi protsesse, nagu koe homogeniseerimine, lüüs, valkude, DNA, RNA, organellide ja muude rakusiseste ainete ekstraheerimine, lahustamine ja degaseerimine. VialTweeter on ainulaadne ultraheli seade, mis valmistab samaaegselt mitu katseklaasi täpselt samadel tingimustel. Suletud katseklaaside kaudse ultrahelitöötluse tõttu välditakse ristsaastumist ja proovi kadu.

Ultraheli proovi ettevalmistamine

Ultraheliuuring on tavaline proovi töötlemise tehnika, et saada proov valmis analüüsideks, nagu polümeeride ahelreaktsioon (PCR), Western Blots, testid, molekulaarne järjestamine, kromatograafia jne. Ultraheli on tehnika, mida laborites kasutatakse laialdaselt proovide eelanalüütiliseks töötlemiseks. Ultrahelitöötluse peamine eelis on see, et ultraheli tööpõhimõte põhineb puhtalt mehaanilistel jõududel. Ultraheli lüüs ja rakkude katkestamine saavutatakse sonomehaaniliste nihkejõududega, mis annab ultraheliuuringule eelise, et valgu ekstraheerimiseks kasutatavaid lahusteid saab kasutada ka lüüsi ajal. Ultraheli rakkude katkestajad, näiteks VialTweeter, purustavad rakuseinad / membraanid ja soodustavad massiülekannet raku sisemuse ja lahusti vahel. Seega kantakse analüüt (nt DNA, RNA, valgud, organellid jne) tõhusalt rakumaatriksist lahustisse. See tähendab, et kustutamise ja ekstraheerimise etapid kattuvad ultraheli rakkude katkestamise protsessiga, mis muudab ultraheli lüüsi väga tõhusaks. Lisaks ei vaja ultraheli proovi ettevalmistamine detergente ja muid lüüsireaktiive, mis võivad muuta ja hävitada lüsaadi struktuuri ning on tuntud järgnevate puhastamisega seotud probleemide poolest. Teine lüüsimeetod, ensümaatiline katkestus nõuab pikka inkubatsiooniaega ja annab sageli mittereprodutseeritavaid tulemusi. Ultraheli proovide ettevalmistamine ületab proovide ettevalmistamisel tavalised probleemid, nagu koe homogeniseerimine, rakkude katkestamine, lüüs, valgu ekstraheerimine ja lüsaadi lahustumine. Kuna ultraheliravi intensiivsust saab täpselt kontrollida ja kohandada bioloogilise prooviga, välditakse lagunemist ja proovi kadu. Automaatselt jälgitav ja kontrollitud proovi temperatuur, impulsi režiim ja ultrahelitöötluse kestus tagavad optimaalsed tulemused.
 

VialTweeter on eriti mugav laboritööks, mis nõuab mitme proovi samaaegset ettevalmistamist samadel tingimustel. VialTweeter on ultraheli plokk sonotrode, mis mahutab kuni 10 viaali (nt Eppendorf, tsentriguge, NUNC torud, krüo-viaalid) ja sonikeerib neid intensiivselt täpselt kontrollitud tingimustes. Kuna ultraheli energia on ühendatud läbi viaalide seinte proovisöötmesse, jäävad viaalid ravi ajal suletuks. Sellega välditakse täielikult proovide kadu ja ristsaastumist.

Viaalid ja torud, mis sobivad VialTweeteriga

VialTweeter sobib 10 tavalise koonilise või ümarpõhjalise toru, näiteks Eppendorfi, tsentrifuugi, krüoviaali ja erinevate NUNC viaalitüüpide hoidmiseks, kuid auke saab soovi korral kohandada vastavalt teistele viaali- ja torusuurustele. Palun andke meile teada, milliseid katseklaase soovite kasutada, et saaksime teie VialTweeterit vastavalt muuta. Suuremate katseklaaside jaoks, nagu Falcon torud ja muud katsemahutid, keeduklaasid ja anumad, on VialPress mugav lahendus.

VialTweeter koos VialPressiga

Kuigi VialTweeter ise oma 10 toru aukudega on juba ainulaadne ja väga funktsionaalne ultraheli seade, muudab VialPressi lisandmoodul VialTweeteri veelgi mitmekülgsemaks ja paindlikumaks. VialPress on VialTweeteri tarvik, mis koosneb klambriga vardast, mis võimaldab kinnitada suuremaid katsetorusid, näiteks Falconi torusid või muid väikeseid kuni keskmise suurusega katsekeeduklaase VialTweeteri esiküljele. Vasakpoolsel pildil on VialTweeter, mis hoiab plokis 10 Eppendorfi viaali, samas kui VialPress kinnitab ultrahelitöötluseks ühe suurema katseklaasi esiküljele. VialPress on võimeline mahutama kuni 5 suuremat katseklaasi intensiivseks ultrahelitöötluseks.

VialTweeteri proovide ettevalmistamise protokollid

VialTweeterit kasutatakse laialdaselt bioloogiliste proovide sonikeerimiseks. Enne analüüsimist tuleb proovid ette valmistada biokeemilisteks või biofüüsikalisteks analüüsideks ja analüüsideks, nt lüüsi, kudede homogeniseerimise, valkude ekstraheerimise, DNA / RNA lõikamise, degaseerimise jms abil. VialTweeter täidab need ultraheli protsessid usaldusväärselt ja annab reprodutseeritavaid tulemusi. VialTweeteri tavaline kasutusala on imetajate (inimeste ja loomade) kudede, samuti bakterirakkude ja viirusosakeste lüüsi/rakkude katkemine. VialTweeteriga edukalt töödeldud bioloogiliste proovide hulka kuuluvad inimese kopsuepiteelirakud, vereloome tüvirakud, müeloidse leukeemia rakud, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus anthracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptococcus pyogenes, Caulobacter crescentus, Mycoplasma pneumoniae, mükobakterite / Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) ja paljud teised bakteriaalsed, botaanilised ja mikroobirakud.
Allpool leiate mõned valitud protokollid, mis sisaldavad VialTweeterit.

E.Coli lüüs VialTweeteriga in vivo glutatiooni määramiseks

Tüve MG1655 Escherichia coli baktereid kasvatati MOPS-i minimaalses söötmes kogumahus 200 ml, kuni saavutati A600 0,5. Kultuur jagati stressiraviks 50 ml kultuurideks. Pärast 15-minutilist inkubeerimist 0,79 mM allitsiini, 1 mM diamiidi või dimetüülsulfoksiidiga (kontroll) koguti rakud 4,000 g juures 4 °C juures 10 minutit. Rakke pesti kaks korda KPE puhvriga enne graanulite resuspensiooni 700 μl KPE puhvris. Deproteiinimiseks lisati enne rakkude katkestamist ultraheliga (3 x 1 min; VialTweeter ultrasonikaator). Supernatandid koguti pärast tsentrifuugimist (30 min, 13 000g, 4 °C). Sulfosalitsüülhappe kontsentratsiooni vähendati 1% -ni, lisades 3 mahuosa KPE puhvrit. Glutatiooni ja GSSG üldsisalduse mõõtmised viidi läbi eespool kirjeldatud viisil. Rakulise glutatiooni kontsentratsioonid arvutati E. coli rakkude mahu põhjal 6,7×10-15 liitrit ja rakutiheduse A600 0,5 (vastab 1×108 rakule ml-1 kultuurile). GSH kontsentratsioonid arvutati, lahutades 2[GSSG] kogu glutatioonist. (Müller jt 2016)

Alfa-sünukleiini fibrilli fragmenteerumine VialTweeteriga

VialTweeteri sonikaatorit kasutatakse laialdaselt alfa-sünukleiini fibrillide ja paelte usaldusväärseks ja tõhusaks killustamiseks. Klõpsake siin, et leida üksikasjalikke kirjeldusi, protokolle ja viiteid alfa-sünukleiini killustatuse kohta VialTweeteriga!

Rakkude lüüs VialTweeteriga enne grafiitahju aatomabsorptsioonspektromeetriat

Bacillus subtilis 168 (trpC2) puutus kokku 15 min antibiootikumistressiga, seejärel koguti rakud 3,320 x g juures, pesti viis korda 100 mM Tris / 1 mM EDTA, pH 7,5, resuspendeeriti 10 mM Tris, pH 7,5 ja häiriti ultraheliga Hielscher VialTweeteri instrumendis. (Wenzel et al. 2014)

VialTweeteri proovi ettevalmistamine enne massispektromeetriat

Inimese CD34ݏ� hematopoeetiliste tüvirakkude / eellasrakkude lüofiliseeritud rakugraanulid resuspendeeriti 10μ kapslites (200 μl lahtise HEK293 preparaadi jaoks peptiidide lahjenduste seeria jaoks) 8 M karbamiidis 100 mM ammooniumvesinikkarbonaadis ja lüüsiti ultrahelitöötluse abil Hielscher VialTweeteriga amplituudiga 60%, tsükliga 60% ja kestusega 20s kolm korda koos vahepealse jahutamisega jääl. (Amon et al. 2019)

Proovide ettevalmistamise protokollid VialPressi abil

Värske salat (Lactuca sativa) homogeniseeriti 0,5 M HEPES puhvris (pH 8, KOH reguleeritud) vahekorras 1 g taime (eluskaal) kuni 200, 100, 50 või 20 ml puhverlahusega. Taime massi ja puhverlahuse mahu suhet varieeriti, et homogenaadi kogumaht jääks vahemikku 3,5–12 ml. Taime massi ja puhverlahuse mahu suhet varieeriti, et hoida homogenaadi kogumaht vahemikus 3,5–12 ml, võimaldades sondiga homogeniseerimist. Seejärel läbisid homogenaadid kaudse ultraheliuuringu, kasutades UP200St koos VialTweeteriga, mis oli varustatud 200xt VialPressiga (Hielscher Ultrasonics GmbH, Saksamaa) 3 minuti jooksul (80% impulss ja 100% võimsus). Selle seadme kasutamine vältis saastumist. (Laughton et al. 2019)

Usaldusväärne temperatuuri reguleerimine ultrahelitöötluse ajal VialTweeteriga

Temperatuur on oluline protsessi mõjutav tegur, mis on eriti oluline bioloogiliste proovide töötlemisel. Nagu kõik mehaanilised proovide ettevalmistamise tehnikad, tekitab ultrahelitöötlus soojust. Kuid, proovide temperatuuri saab VialTweeteri kasutamisel hästi kontrollida. Tutvustame teile erinevaid võimalusi proovide temperatuuri jälgimiseks ja kontrollimiseks, valmistades neid analüüsimiseks ette VialTweeteri ja VialPressiga.

1. Proovi temperatuuri jälgimine: VialTweeterit juhtiv ultraheli protsessor UP200St on varustatud intelligentse tarkvara ja ühendatava temperatuurianduriga. Ühendage temperatuuriandur UP200St-ga ja sisestage temperatuurianduri ots ühte katseklaasi. Digitaalse värvilise puutetundliku ekraani abil saate UP200St menüüs seadistada oma proovi ultrahelitöötluse jaoks konkreetse temperatuurivahemiku. Ultrasonikaator peatub automaatselt, kui maksimaalne temperatuur on saavutatud, ja peatub, kuni proovi temperatuur on seatud temperatuuri ∆ madalama väärtuseni. Seejärel algab ultrahelitöötlus automaatselt uuesti. See nutikas funktsioon hoiab ära kuumusest põhjustatud lagunemise.
2. VialTweeteri plokki saab eeljahutada. Pange VialTweeteri plokk (ainult sonotrode ilma andurita!) külmkappi või sügavkülma, et titaanplokk eeljahutada, aitab proovi temperatuuri tõusu edasi lükata. Võimaluse korral saab proovi ka ise eeljahutada.
3. Kasutage ultrahelitöötluse ajal jahutamiseks kuiva jääd. Kasutage kuiva jääga täidetud madalat salve ja asetage VialTweeter kuivale jääle, et kuumus saaks kiiresti hajuda.

Kliendid kogu maailmas kasutavad VialTweeterit ja VialPressi oma igapäevaseks proovide ettevalmistamiseks bioloogilistes, biokeemilistes, meditsiinilistes ja kliinilistes laborites. UP200St protsessori intelligentne tarkvara ja temperatuuri reguleerimine, temperatuuri kontrollitakse usaldusväärselt ja välditakse kuumusest tingitud proovi lagunemist. Ultraheli proovide ettevalmistamine VialTweeteri ja VialPressiga annab väga usaldusväärseid ja reprodutseeritavaid tulemusi!

VialTweeteri tehnilised andmed

VialTweeter on titaanist valmistatud plokk sonotrode, mis mahutab plokis olevates aukudes kuni 10 viaali. Lisaks saab VialPressi abil VialTweeteri esikülje külge kinnitada kuni 5 suuremat katseklaasi. VialTweeter on konstrueeritud nii, et ultraheli energia jaotatakse ühtlaselt igasse sisestatud viaali, et tagada usaldusväärsed ja ühtlased ultrahelitöötluse tulemused. Väike pöördlüliti reguleerib VialTweeteri sonotrode'i ebaühtlaseks pinnaseks ja joondab katseklaasid vertikaalselt.

VialTweeteri eelised lühidalt

• Kuni 10 viaali intensiivne ultrahelitöötlus samaaegselt
• Kaudne ultrahelitöötlus suure ultraheli intensiivsusega läbi anuma seina proovi
• Kaudne ultrahelitöötlus väldib ristsaastumist ja proovi kadu
• Reprodutseeritavad tulemused tänu reguleeritavale ja kontrollitavale ultrahelitöötluse amplituudile
• VialPress võimaldab teil sonikeerida suuremaid torusid
• Reguleeritav amplituud 20 kuni 100%
• Reguleeritav impulsi režiim 0 kuni 100%
• Autoklaavitav

VialTweeteri toiteallikaks on UP200St, 200 vatti võimas ultraheli protsessor. UP200St on varustatud intelligentse tarkvaraga, mis võimaldab täpset kontrolli kõigi oluliste ultraheli protsessi parameetrite üle, nagu amplituud, ultrahelitöötluse aeg, pulsatsioon ja temperatuur. See muudab VialTweeteri usaldusväärseks vahendiks edukate reprodutseeritavate protsesside tulemuste saamiseks bioloogilistes ja biokeemilistes laborites.
Amplituudi saab reguleerida vahemikus 20 kuni 100% ja võimaldab seeläbi kohandada ultraheli intensiivsust teie prooviga. Näiteks nõuab DNA ja RNA lõikamine ja killustumine kergemat amplituudi, et vältida liiga väikeste DNA fragmentide teket, hiire aju kudede homogeniseerimine vajab suure intensiivsusega ultrahelitöötlust. Valige ideaalne amplituud, ultrahelitöötluse intensiivsus ja kestus UP200St protsessori nutika ja intuitiivse menüü kaudu. Menüüle ja seadetele pääseb hõlpsasti juurde ja neid saab juhtida värvilise puuteekraani kaudu. Seadistustes saate eelnevalt seadistada ultrahelitöötluse parameetreid, nagu amplituud, pulsatsioon / tsükli režiim, ultrahelitöötluse kestus, koguenergia sisend ja temperatuuri piirid. Teadusuuringutes ja tootmises on katsete ja katsetulemuste korratavus ülioluline. See tähendab, et protsessi tingimuste ja ultrahelitöötlusprotokollide täpne salvestamine on äärmiselt oluline. Automaatne andmete protokollimine kirjutab kõik ultrahelitöötluse andmed integreeritud SD-kaardi CSV-faili, et saaksite hõlpsasti kontrollida ja võrrelda erinevaid ultrahelitöötluse käike. Kõiki ultraheli protsessi andmeid saab hõlpsasti juurde pääseda ja jagada CSV-failina.
Hielscher Ultrasonics püüab pakkuda teile arenenud tehnoloogiat, et hõlbustada ja parandada oma uurimistööd!