Proovide ettevalmistamine VialTweeter Sonicatoriga
Proovide ettevalmistamine enne analüüsi võib nõuda mitmesuguseid eelanalüütilisi protsesse, näiteks kudede homogeniseerimist, lüüsi, valkude, DNA, RNA, organellide ja muude rakusiseste ainete ekstraheerimist, lahustamist ja gaasistamist. VialTweeter on ainulaadne sonikaator, mis valmistab mitu proovitoru samaaegselt ette täpselt samades tingimustes. Tänu suletud katseklaaside kaudsele sonikatsioonile välditakse ristsaastumist ja proovide kadusid.
Ultraheli proovi ettevalmistamine
Ultraheliuuring on tavaline proovi töötlemise tehnika, et saada proov valmis analüüsideks, nagu polümeeride ahelreaktsioon (PCR), Western Blots, testid, molekulaarne järjestamine, kromatograafia jne. Ultraheli on tehnika, mida laborites kasutatakse laialdaselt proovide eelanalüütiliseks töötlemiseks. Ultrahelitöötluse peamine eelis on see, et ultraheli tööpõhimõte põhineb puhtalt mehaanilistel jõududel. Ultraheli lüüs ja rakkude katkestamine saavutatakse sonomehaaniliste nihkejõududega, mis annab ultraheliuuringule eelise, et valgu ekstraheerimiseks kasutatavaid lahusteid saab kasutada ka lüüsi ajal. Ultraheli rakkude katkestajad, näiteks VialTweeter, purustavad rakuseinad / membraanid ja soodustavad massiülekannet raku sisemuse ja lahusti vahel. Seega kantakse analüüt (nt DNA, RNA, valgud, organellid jne) tõhusalt rakumaatriksist lahustisse. See tähendab, et kustutamise ja ekstraheerimise etapid kattuvad ultraheli rakkude katkestamise protsessiga, mis muudab ultraheli lüüsi väga tõhusaks. Lisaks ei vaja ultraheli proovi ettevalmistamine detergente ja muid lüüsireaktiive, mis võivad muuta ja hävitada lüsaadi struktuuri ning on tuntud järgnevate puhastamisega seotud probleemide poolest. Teine lüüsimeetod, ensümaatiline katkestus nõuab pikka inkubatsiooniaega ja annab sageli mittereprodutseeritavaid tulemusi. Ultraheli proovide ettevalmistamine ületab proovide ettevalmistamisel tavalised probleemid, nagu koe homogeniseerimine, rakkude katkestamine, lüüs, valgu ekstraheerimine ja lüsaadi lahustumine. Kuna ultraheliravi intensiivsust saab täpselt kontrollida ja kohandada bioloogilise prooviga, välditakse lagunemist ja proovi kadu. Automaatselt jälgitav ja kontrollitud proovi temperatuur, impulsi režiim ja ultrahelitöötluse kestus tagavad optimaalsed tulemused.
VialTweeter on eriti mugav laboritööks, mis nõuab mitme proovi samaaegset ettevalmistamist samadel tingimustel. VialTweeter on ultraheli plokk sonotrode, mis mahutab kuni 10 viaali (nt Eppendorf, tsentrifuug, NUNC torud, krüo-viaalid) ja sonikeerib neid intensiivselt täpselt kontrollitud tingimustes. Kuna ultraheli energia on ühendatud läbi viaalide seinte proovisöötmesse, jäävad viaalid ravi ajal suletuks. Sellega välditakse täielikult proovide kadu ja ristsaastumist.

Ultraheli proovi ettevalmistusüksus VialTweeter: VialTweeter Sonotrode ultraheli protsessoriga UP200St
Viaalid ja torud, mis sobivad VialTweeteriga
VialTweeter sobib 10 tavalise koonilise või ümarpõhjalise toru, näiteks Eppendorfi, tsentrifuugi, krüoviaali ja erinevate NUNC viaalitüüpide hoidmiseks, kuid auke saab soovi korral kohandada vastavalt teistele viaali- ja torusuurustele. Palun andke meile teada, milliseid katseklaase soovite kasutada, et saaksime teie VialTweeterit vastavalt muuta. Suuremate katseklaaside jaoks, nagu Falcon torud ja muud katsemahutid, keeduklaasid ja anumad, on VialPress mugav lahendus.
Lisateavet VialTweeteri mudeli VT26dxx kohta, mis on kohandatud teie konkreetse katseklaasi suuruse jaoks, nt Falcon torud!
VialTweeter koos VialPressiga
Kuigi VialTweeter ise oma 10 toru aukudega on juba ainulaadne ja väga funktsionaalne ultraheli seade, muudab VialPressi lisandmoodul VialTweeteri veelgi mitmekülgsemaks ja paindlikumaks. VialPress on VialTweeteri tarvik, mis koosneb klambriga vardast, mis võimaldab kinnitada suuremaid katsetorusid, näiteks Falconi torusid või muid väikeseid kuni keskmise suurusega katsekeeduklaase VialTweeteri esiküljele. Vasakpoolsel pildil on VialTweeter, mis hoiab plokis 10 Eppendorfi viaali, samas kui VialPress kinnitab ultrahelitöötluseks ühe suurema katseklaasi esiküljele. VialPress on võimeline mahutama kuni 5 suuremat katseklaasi intensiivseks ultrahelitöötluseks.
VialTweeteri proovide ettevalmistamise protokollid
VialTweeterit kasutatakse laialdaselt bioloogiliste proovide sonikeerimiseks. Enne analüüsimist tuleb proovid ette valmistada biokeemilisteks või biofüüsikalisteks analüüsideks ja analüüsideks, nt lüüsi, kudede homogeniseerimise, valkude ekstraheerimise, DNA / RNA lõikamise, degaseerimise jms abil. VialTweeter täidab need ultraheli protsessid usaldusväärselt ja annab reprodutseeritavaid tulemusi. VialTweeteri tavaline kasutusala on imetajate (inimeste ja loomade) kudede, samuti bakterirakkude ja viirusosakeste lüüsi/rakkude katkemine. VialTweeteriga edukalt töödeldud bioloogiliste proovide hulka kuuluvad inimese kopsuepiteelirakud, vereloome tüvirakud, müeloidse leukeemia rakud, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus anthracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptococcus pyogenes, Caulobacter crescentus, Mycoplasma pneumoniae, mükobakterid, Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) ja paljud teised bakterid, taimede ja mikroobide rakud.
Allpool leiate mõned valitud protokollid, mis sisaldavad VialTweeterit.

VialTweeter sonikeerib 1.0, 1.5 ja 2.0 ml Eppendorfi torusid suure intensiivsusega ilma ristsaastumise või proovi kadumiseta.
- Kudede homogeniseerimine
- rakkude katkestamine & lüüs
- valgu ekstraheerimine
- DNA/RNA lõikamine
- rakugraanulite lahustumine
- patogeeni tuvastamine
- degaseerimine
- in vitro diagnostika
- eelanalüüs (Nt maavarade jälgede kaevandamine, mullaproovi ettevalmistamine)
- proteoomika
E.Coli lüüs VialTweeteriga in vivo glutatiooni määramiseks
Tüve MG1655 Escherichia coli baktereid kasvatati MOPS-i minimaalses söötmes kogumahus 200 ml, kuni saavutati A600 0,5. Kultuur jagati stressiraviks 50 ml kultuurideks. Pärast 15-minutilist inkubeerimist 0,79 mM allitsiini, 1 mM diamiidi või dimetüülsulfoksiidiga (kontroll) koguti rakud 4,000 g juures 4 °C juures 10 minutit. Rakke pesti kaks korda KPE puhvriga enne graanulite resuspensiooni 700 μl KPE puhvris. Deproteiinimiseks lisati enne rakkude katkestamist ultraheliga (3 x 1 min; VialTweeter ultrasonikaator). Supernatandid koguti pärast tsentrifuugimist (30 min, 13 000g, 4 °C). Sulfosalitsüülhappe kontsentratsiooni vähendati 1% -ni, lisades 3 mahuosa KPE puhvrit. Glutatiooni ja GSSG üldsisalduse mõõtmised viidi läbi eespool kirjeldatud viisil. Rakulise glutatiooni kontsentratsioonid arvutati E. coli rakkude mahu põhjal 6,7×10-15 liitrit ja rakutiheduse A600 0,5 (vastab 1×108 rakule ml-1 kultuurile). GSH kontsentratsioonid arvutati, lahutades 2[GSSG] kogu glutatioonist. (Müller jt 2016)
Alfa-sünukleiini fibrilli fragmenteerumine VialTweeteriga
VialTweeteri sonikaatorit kasutatakse laialdaselt alfa-sünukleiini fibrillide ja paelte usaldusväärseks ja tõhusaks killustamiseks. Klõpsake siin, et leida üksikasjalikke kirjeldusi, protokolle ja viiteid alfa-sünukleiini killustatuse kohta VialTweeteriga!
Rakkude lüüs VialTweeteriga enne grafiitahju aatomabsorptsioonspektromeetriat
Bacillus subtilis 168 (trpC2) puutus kokku 15 min antibiootikumistressiga, seejärel koguti rakud 3,320 x g juures, pesti viis korda 100 mM Tris / 1 mM EDTA, pH 7,5, resuspendeeriti 10 mM Tris, pH 7,5 ja häiriti ultraheliga Hielscher VialTweeteri instrumendis. (Wenzel et al. 2014)
VialTweeteri proovi ettevalmistamine enne massispektromeetriat
Inimese CD34ݏ� hematopoeetiliste tüvirakkude / eellasrakkude lüofiliseeritud rakugraanulid resuspendeeriti 10μ kapslites (200 μl lahtise HEK293 preparaadi jaoks peptiidide lahjenduste seeria jaoks) 8 M karbamiidis 100 mM ammooniumvesinikkarbonaadis ja lüüsiti ultrahelitöötluse abil Hielscher VialTweeteriga amplituudiga 60%, tsükliga 60% ja kestusega 20s kolm korda koos vahepealse jahutamisega jääl. (Amon et al. 2019)
Proovide ettevalmistamise protokollid VialPressi abil
Värske salat (Lactuca sativa) homogeniseeriti 0,5 M HEPES puhvris (pH 8, KOH reguleeritud) vahekorras 1 g taime (eluskaal) kuni 200, 100, 50 või 20 ml puhverlahusega. Taime massi ja puhverlahuse mahu suhet varieeriti, et homogenaadi kogumaht jääks vahemikku 3,5–12 ml. Taime massi ja puhverlahuse mahu suhet varieeriti, et hoida homogenaadi kogumaht vahemikus 3,5–12 ml, võimaldades sondiga homogeniseerimist. Seejärel läbisid homogenaadid kaudse ultraheliuuringu, kasutades UP200St koos VialTweeteriga, mis oli varustatud 200xt VialPressiga (Hielscher Ultrasonics GmbH, Saksamaa) 3 minuti jooksul (80% impulss ja 100% võimsus). Selle seadme kasutamine vältis saastumist. (Laughton et al. 2019)

VialTweeter koos 10 Eppendorfi viaaliga ultraheli protsessoril UP200St
Usaldusväärne temperatuuri reguleerimine ultrahelitöötluse ajal VialTweeteriga
Temperatuur on oluline protsessi mõjutav tegur, mis on eriti oluline bioloogiliste proovide töötlemisel. Nagu kõik mehaanilised proovide ettevalmistamise tehnikad, tekitab ultrahelitöötlus soojust. Kuid, proovide temperatuuri saab VialTweeteri kasutamisel hästi kontrollida. Tutvustame teile erinevaid võimalusi proovide temperatuuri jälgimiseks ja kontrollimiseks, valmistades neid analüüsimiseks ette VialTweeteri ja VialPressiga.
- Proovi temperatuuri jälgimine: VialTweeterit juhtiv ultraheli protsessor UP200St on varustatud intelligentse tarkvara ja ühendatava temperatuurianduriga. Ühendage temperatuuriandur UP200St-ga ja sisestage temperatuurianduri ots ühte katseklaasi. Digitaalse värvilise puutetundliku ekraani abil saate UP200St menüüs seadistada oma proovi ultrahelitöötluse jaoks konkreetse temperatuurivahemiku. Ultrasonikaator peatub automaatselt, kui maksimaalne temperatuur on saavutatud, ja peatub, kuni proovi temperatuur on seatud temperatuuri ∆ madalama väärtuseni. Seejärel algab ultrahelitöötlus automaatselt uuesti. See nutikas funktsioon hoiab ära kuumusest põhjustatud lagunemise.
- VialTweeteri plokki saab eeljahutada. Pange VialTweeteri plokk (ainult sonotrode ilma andurita!) külmkappi või sügavkülma, et titaanplokk eeljahutada, aitab proovi temperatuuri tõusu edasi lükata. Võimaluse korral saab proovi ka ise eeljahutada.
- Kasutage ultrahelitöötluse ajal jahutamiseks kuiva jääd. Kasutage kuiva jääga täidetud madalat salve ja asetage VialTweeter kuivale jääle, et kuumus saaks kiiresti hajuda.
Kliendid kogu maailmas kasutavad VialTweeterit ja VialPressi oma igapäevaseks proovide ettevalmistamiseks bioloogilistes, biokeemilistes, meditsiinilistes ja kliinilistes laborites. UP200St protsessori intelligentne tarkvara ja temperatuuri reguleerimine, temperatuuri kontrollitakse usaldusväärselt ja välditakse kuumusest tingitud proovi lagunemist. Ultraheli proovide ettevalmistamine VialTweeteri ja VialPressiga annab väga usaldusväärseid ja reprodutseeritavaid tulemusi!
VialTweeteri tehnilised andmed
VialTweeter on titaanist valmistatud plokk sonotrode, mis mahutab plokis olevates aukudes kuni 10 viaali. Lisaks saab VialPressi abil VialTweeteri esikülje külge kinnitada kuni 5 suuremat katseklaasi. VialTweeter on konstrueeritud nii, et ultraheli energia jaotatakse ühtlaselt igasse sisestatud viaali, et tagada usaldusväärsed ja ühtlased ultrahelitöötluse tulemused. Väike pöördlüliti reguleerib VialTweeteri sonotrode'i ebaühtlaseks pinnaseks ja joondab katseklaasid vertikaalselt.
VialTweeteri eelised lühidalt
- Kuni 10 viaali intensiivne ultrahelitöötlus samaaegselt
- Kaudne ultrahelitöötlus suure ultraheli intensiivsusega läbi anuma seina proovi
- Kaudne ultrahelitöötlus väldib ristsaastumist ja proovi kadu
- Reprodutseeritavad tulemused tänu reguleeritavale ja kontrollitavale ultrahelitöötluse amplituudile
- VialPress võimaldab teil sonikeerida suuremaid torusid
- Reguleeritav amplituud 20 kuni 100%
- Reguleeritav impulsi režiim 0 kuni 100%
- Autoklaavitav
VialTweeteri toiteallikaks on UP200St, 200 vatti võimas ultraheli protsessor. UP200St on varustatud intelligentse tarkvaraga, mis võimaldab täpset kontrolli kõigi oluliste ultraheli protsessi parameetrite üle, nagu amplituud, ultrahelitöötluse aeg, pulsatsioon ja temperatuur. See muudab VialTweeteri usaldusväärseks vahendiks edukate reprodutseeritavate protsesside tulemuste saamiseks bioloogilistes ja biokeemilistes laborites.
Amplituud on reguleeritav vahemikus 20-100% ja võimaldab seega kohandada ultraheli intensiivsust vastavalt teie proovile. Näiteks DNA ja RNA lõikamine ja fragmenteerimine nõuab leebemat amplituudi, et vältida liiga väikeste DNA-fragmentide teket, hiirte aju koe homogeniseerimine vajab suure intensiivsusega sonikatsiooni. Valige ideaalne amplituud, sonikatsiooni intensiivsus ja kestus UP200St protsessori nutika ja intuitiivse menüü kaudu. Menüüsse ja seadistustesse pääseb hõlpsasti ligi ja neid saab juhtida värvilise puuteekraani kaudu. Seadistustes saab eelseadistada sonikatsiooni parameetrid, nagu amplituud, pulsatsioon, tsüklirežiim, sonikatsiooni kestus, kogu energiakulu ja temperatuuripiirid. Uurimis- ja tootmistegevuses on katsete ja katsetulemuste korratavus ülioluline. See tähendab, et protsessitingimuste ja sonikatsiooniprotokollide täpne salvestamine on äärmiselt oluline. Automaatne andmeprotokoll kirjutab kõik sonikatsiooniandmed CSV-faili integreeritud SD-kaardile, nii et saate hõlpsasti kontrollida ja võrrelda erinevaid sonikatsiooniprotsesse. Kõiki ultraheli protsessiandmeid saab hõlpsasti kasutada ja jagada CSV-failina.
Hielscher Ultrasonics püüab pakkuda teile arenenud tehnoloogiat, et hõlbustada ja parandada oma uurimistööd!
Ultraheli viaaltweeter teadusuuringutes ja teaduses
VialTweeter on 200 vatti võimas ultraheli protsessor, mis sobib ideaalselt mitme Eppendorfi viaali või sarnaste katseklaaside ultraheli proovi ettevalmistamiseks. Seetõttu kasutatakse VialTweeterit sageli bioloogilistes ja biokeemilistes laborites teadusuuringute ja bioteaduste jaoks. Allpool leiate valiku teadusartikleid, mis sisaldavad ultraheli protsessorit VialTweeter. Artiklid hõlmavad erinevaid rakendusi, nagu ultraheli proovide homogeniseerimine, rakkude katkestamine ja lüüs, DNA lõikamine ja killustumine, valkude ja bioaktiivsete ühendite ekstraheerimine ning koronaviiruse SARS-CoV-2 inaktiveerimine. Kui otsite konkreetset rakendust ja sellega seotud teaduslikke viiteid, võtke meiega ühendust.
- FactSheet VialTweeter VT26dxx – Customized VialTweeter Sonicator for Single Test Tubes or Vials
- FactSheet VialTweeter – Sonicator for Simultaneous Sample Preparation
- Gajek, Ryszard; Barley, Frank; She, Jianwen (2013): Determination of essential and toxic metals in blood by ICP-MS with calibration in synthetic matrix. Analytical Methods 5, 2013. 2193-2202.
https://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2013/ay/c3ay26036d - Nordenfelt P, Waldemarson S, Linder A, Mörgelin M, Karlsson C, Malmström J, Björck L. (2012): Antibody orientation at bacterial surfaces is related to invasive infection. Journal of Experimental Medicine 17;209(13), 2012. 2367-81.
- Wenzel, M., A. I. Chiriac, A. Otto, D. Zweytick, C. May, C. Schumacher, R. Gust, et al. (2014): Small Cationic Antimicrobial Peptides Delocalize Peripheral Membrane Proteins. Proceedings of the National Academy of Sciences 111, No. 14, 2014. E1409–E1418.
- Lindemann, C., Lupilova, N., Müller, A., Warscheid, B., Meyer, H. E., Kuhlmann, K., Eisenacher, M., Leichert, L. I. (2013): Redox proteomics uncovers peroxynitrite-sensitive proteins that help Escherichia coli to overcome nitrosative stress. The Journal of biological chemistry, 288(27), 2013. 19698–19714.
- Wenzel, M., Patra, M., Albrecht, D., Chen, D. Y., Nicolaou, K. C., Metzler-Nolte, N., Bandow, J. E. (2011): Proteomic signature of fatty acid biosynthesis inhibition available for in vivo mechanism-of-action studies. Antimicrobial agents and chemotherapy, 55(6), 2011. 2590–2596.
- Laughton, S., Laycock, A., von der Kammer, F. et al. (2019): Persistence of copper-based nanoparticle-containing foliar sprays in Lactuca sativa (lettuce) characterized by spICP-MS. Journal of Nanoparticle Research 21, 174 (2019).
- Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.
- Müller A., Eller J., Albrecht F., Prochnow P., Kuhlmann K., Bandow J. E., Slusarenko A. J., Leichert L.I.O. (2016): Allicin Induces Thiol Stress in Bacteria through S-Allylmercapto Modification of Protein Cysteines. Journal of Biological Chemistry, Vol. 291, No. 22, 2016. 11477-11490.
- Tim Krischuns; Franziska Günl; Lea Henschel; Marco Binder; Joschka Willemsen; Sebastian Schloer; Ursula Rescher; Vanessa Gerlt; Gert Zimmer; Carolin Nordhoff; Stephan Ludwig; Linda Brunotte (2018): Phosphorylation of TRIM28 Enhances the Expression of IFN-β and Proinflammatory Cytokines During HPAIV Infection of Human Lung Epithelial Cells. Frontiers in immunology Vol. 9, September 2018.
- Sabine Amon, Fabienne Meier-Abt, Ludovic C. Gillet, Slavica Dimitrieva, Alexandre P. A. Theocharides, Markus G. Manz, Ruedi Aebersold (2019): Sensitive Quantitative Proteomics of Human Hematopoietic Stem and Progenitor Cells by Data-independent Acquisition Mass Spectrometry. Molecular & Cellular Proteomics 18, 2019. 1454–1467.

Ultraheli töötlemine: Hielscher aitab teil teostatavusest ja optimeerimisest kaubanduslikule tootmisele!