Hielscheri ultraheli tehnoloogia

SARS-CoV-2 Coronavirus Inaktiveerimise protokoll ultraheliga

Hielscher VialTweeter on unikaalne ultraheli mitmeprooviline ettevalmistusüksus, mida kasutatakse coronavirus SARS-COV-2 inaktiveerimiseks. VialTweeter võimaldab valmistada korraga kuni 10 prooviviaali ja on seega ideaalne massproovi töötlemise ühik.

SARS-CoV-2 Coronaviiruse inaktiveerimine VialTweeteriga

Pärast fiksaatori eemaldamist pesti monokihiid kolm korda fosfaatpuhverdatud soolalahusega (PBS) enne rakkude kraapimist 1mL MEM / 5% FBS-i ja ultraheliga (3 × 10 sekundit 100% võimsuse ja amplituudi juures), kasutades Hielscheri ultraheli protsessorit UP200St koos VialTweeter Manuse. Supernatandid selgitati tsentrifuugides 3000 × g juures 10 minutit. 

Loe täielikku protokolli siin SARS-CoV-2 coronavirus inactivation poolt Welch et al. (2020) allpool:

Rakud ja viirus

Vero E6 rakud (Vero C1008; ATCC CRL-1586) kultiveeritud modifitseeritud Eagle'i minimaalses olulises keskkonnas (MEM), millele lisandus 10% (v/v) loote vasika seerum (FCS). Kasutatud viirus oli SARS-CoV-2 tüvi hCOV-19/England/2/2020, isoleeritud PHE esimese patsiendi klastri Uk 29/01/2020. See viirus saadi 1.
SARS-CoV-2 inaktiveerimiseks kasutatavate reaktiivide ja kemikaalide kohta ning reaktiivi tsütotoksilisuse eemaldamise kohta vt Welch et al. (2020) teaduslikku aruannet.

The ultrasonic sample preparation unit VialTweeter is used for the inactivation of SARS-CoV-2 coronavirus

Viiruse inaktiveerimine detergentide poolt – SARS-CoV-2 Coronavirus Inaktiveerimise protokoll Welch et al. 2020

SARS-CoV-2 inaktiveerimine

Kaubanduslike toodete puhul on viirusepreparaadid (koekultuuri vedelik, tiitrid vahemikus 1 × 106 kuni 1 × 108 PFU/ml) raviti kolmes eksemplaris reaktiividega kontsentratsioonides ja kokkupuuteaegadel, mis on soovitatud tootja kasutusjuhendis, kui need on olemas, või kontsentratsioonide ja aegade puhul, mida katselaborid konkreetselt nõuavad. Kui tootja on andnud kontsentratsioonide vahemiku, kontrolliti toote ja proovi väikseimat suhet (st uuritava toote väikseimat soovitatavat kontsentratsiooni). Proovi transporditoru reaktiive kontrolliti, kasutades koekultuurivedeliku ühe mahujakümne mahu osa reaktiivi suhet, välja arvatud juhul, kui tootja on kindlaks määranud proovivedeliku ja reaktiivi mahusuhte. Detergente, fiksaate ja lahusteid kontrolliti kindlaksmääratud kontsentratsioonides ettenähtud aegadel. Kõik inaktiveerimisetapid viidi läbi toatemperatuuril (18...25 °C). Alternatiivsete proovitüüpide testimiseks tembiteritakse viirus näidatud proovimaatriksisse suhtega 1:9, seejärel töödeldi eespool kirjeldatud katsereaktiividega. Kõik katsed hõlmasid katsereaktiivi asemel kolmekiitaatset kontrollproovi, mille pbs-ekvivalentmaht oli samaväärne. Vahetult pärast nõutavat kontaktiaega töödeldi 1 ml töödeldud proovi sobivalt valitud filtreerimismaatriksiga. Reaktiivi eemaldamine inaktiveerimiseks viidi läbi suuremas tsentrifuugimiskolonnivormingus, kasutades Pierce 4mL detergentide eemaldamise spinnikolonne (termofisher), või täites tühjad Pierce 10ml võimsusetsentrifuugisambad (Termofisher) SM2 Bio-Helmede, Sephacryli S-400HR või Sephadex LH-20 abil, et anda 4ml pakitud helmed/resin. Amiconfiltrite abil puhastamiseks puhastati kaks × 500 μl proovi, kasutades eespool kirjeldatud meetodil kahte tsentrifugaalfiltrit, seejärel koondati kokku. Glutaaldehüüdi eemaldamisel kasutati formaldehüüdi ja formaldehüüdi puhul ühte filtrit 1× 500 μl proovi mahuga, mis resuspendeeriti pärast töötlemist 500 μl PBS-is ja lisati 400 ul MEM/5% FBS-ile. Inaktiveerimiseks nakatunud VialTweeter at the ultrasonic processor UP200STmonokihid, 12.5 cm2 vero E6 rakkude (2,5 × 106 2,5 ml MEM/5% FBS) nakatunud MOI 0,001 juures ja inkubeeriti 37 °C/5% CO2 24 tunni jooksul. Supernatant eemaldati ja rakud fikseeriti 5 ml formaldehüüdi või formaldehüüdi ja glutaaraldehüüdi abil toatemperatuuril 15 või 60 minutit. Fixative eemaldati ja monokihid pestud kolm korda PBS enne kraapides rakud 1mL MEM / 5% FBS ja sonicated (3 × 10 sekundit välja 100% võimsus ja amplituud) kasutades UP200St koos VialTweeter arestimine (Hiel Ultraheli Technology). Supernatandid selgitati tsentrifuugides 3000 × g juures 10 minutit.

VialTweeter suletud viaalide intensiivseks Ultrahelitöötluseks

VialTweeter suletud viaalide intensiivseks ultrahelitöötluseks

Infonõue




Pange tähele, et meie Privaatsuspoliitika.


Various reagents have been tested for the inactivation of the SARS-CoV-2 coronavirus using the ultrasonic sample prep unit VialTweeter.

Sars-CoV-2 koronaarviiruse inaktiveerimiseks kasutatava reaktiivi üksikasjad ultraheliVialTweeteriga vastavalt Welch et al. 2020 protokollile

Täielik protokoll, sealhulgas hielscherVialTweeteri kasutamine, leiate siit:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

The multi-sample ultrasonicator VialTweeter allows for simultaneous sample preparation of up to 10 vials under same process conditions. The VialTweeter is an established ultrasonic device used for the inactivation of corona virus SARS-CoV-2 (Click to enlarge!)

VialTweeter ultraheli viiruse inaktiveerimiseks

VialTweeter eelised lühidalt

  • Kuni 10 viaali sonikatsioon samaaegselt
  • Ristsaastumist ei ole
  • Proovi kadu ei ole
  • Automaatne andmete salvestamine
  • Lihtne ja ohutu tegutseda
VialTweeterit kasutatakse ka

  • Rakkude lüüsimine
  • Viiruse osakeste häired
  • Nukleiinhappe ekstraheerimine: DNA/RNA isoleerimine
  • DNA/RNA killustumine
  • Lüsaati lahustumine
  • Keerukad ultraheli dismembrators ja rakkude disruptors

    Mitme proovi ultrasonicator VialTweeter on vaid üks paljudest ultraheli lahendusi proovide ettevalmistamiseks bioloogilistes, biokeemilistes ja kliinilistes laborites. Hielscher Ultrasonics pakub teie rakenduse jaoks ideaalset ultraheli dismembratorit, nt rakkude lüüsi, rakkude ekstraheerimist, kudede homogeniseerimist, lüsate lahustumist, lahustamist, proovi degaseerimist jne.
    Andke meile teada, kui palju proove peate tund ja päeva kohta töötlema, kui eelistate otsest või kaudset ultrahelitöötlust ja milline on ultraheli proovi töötlemise eesmärk. Soovitame teile kõige sobivam ultraheli üksus oma igapäevast tööd rutiinist!
    Hielscher Ultrasonics'i digitaalsed ultraheli protsessorid on varustatud nutika tarkvaraga, automaatse andmesalvestusega, temperatuuri reguleerimise lihtsaeelsete valikutega, ultrahelitöötluse kestusega, tsükli / impulsi režiimiga, samuti proovi valgustusega ja brauseri kaugjuhtimispuldiga. Püüame muuta meie ultraheli seadmed võimalikult targaks, nii et teie uurimistöö ja töö rutiin muutub võimalikult mugavaks ja edukaks.
    Klõpsake siin, et leida rohkem rakendusi, sealhulgas ultraheli proovi ettevalmistamise protokollid VialTweeteriga!

    Võta meiega ühendust! / Küsi meiega!

    Küsige lisateavet

    Palun kasutage allolevat vormi, et küsida lisateavet ultraheli protsessorite, rakenduste ja hinna kohta. Meil on hea meel arutada teie protsessi teiega ja pakkuda teile ultraheli süsteem, mis vastab teie vajadustele!









    Palun pange tähele, et meie Privaatsuspoliitika.


    Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

    Hielscher Ultrasonics toodab suure jõudlusega ultraheli homogenisaatoreid rakenduste segamiseks, hajutamiseks, emulgeerimiseks ja ekstraheerimiseks laboris, piloot- ja tööstuslikus mastaabis.

    Kirjandus/viited



    Faktid Tasub teada

    Mis on Vero rakud?

    Vero E6, tuntud ka kui Vero C1008 (ATCC nr. CRL-1586) on vero 76 kloonirakuliin ja seda kasutatakse SARS-CoV ja SARS-CoV-2 krooniviiruste uurimiseks. Vero rakud on rakukultuurides kasutatavate rakkude sugupuu. "Vero"’ isoleeritud aafrika rohelisest ahvist (Chlorocebus sp.) ekstraheeritud neeru epiteelirakkudest.
    Vero E6 rakud näitavad mõningaid kontaktide inhibeerimist, seega sobivad need aeglaselt paljunevate viiruste paljundamiseks. Vero E6 rakuliine kasutatakse tavaliselt corona- cov ja SARS- CoV- 2 tsütopatoloogilise ks, sest Vero rakud (Aafrika rohelise ahvi neerurakud) ilmutavad külluslikult angiotensiini konverteeriva ensüümi 2 (ACE2) retseptoreid. ACE2 retseptorid on SARS-CoV-2 koronaaviiruse peamine dokkimiskoht.
    Näiteks Ogando et al. (2020) leidis, et SARS-CoV-2 – võrreldes SARS-CoV-ga – viiruse RNA kõrgem tase, kuid ligikaudu 50 korda vähem nakkuslikku viiruse järglast eritus kasvukeskkonnast. Lisaks sellele tegid nad kindlaks, et kahe viiruse tundlikkus kolme leroosi ga (Remdesiviir, alisporiviir ja klorokviin) on väga sarnane, kuid SARS- CoV- 2 infektsioon oli oluliselt tundlikum pegüleeritud interferoon alfarakkude eelravi suhtes. Oluline erinevus nende kahe viiruse vahel on asjaolu, et – vero E6 rakkudes passaalides – SARS-CoV-2 on ilmselt tugeva valikusurve all, et omandada adaptiivseid mutatsioone oma naelu valgugeenis. Need mutatsioonid muudavad või kustutavad piirkonnas, mis ühendab S1 ja S2 domeene, putatiivse "furinaaltaolise lõhustamise saiti" ning põhjustavad väga silmatorkavat fenotüübilist muutust naastutestides.