Hielscheri ultraheli tehnoloogia

BL21 rakkude rakkude lüüsi ultraheliga

BL21 rakud on e. coli tüvi, mida kasutatakse laialdaselt uurimislaborites, biotehnoloogias ja tööstuslikus tootmises tänu nende võimele väljendada valke väga tõhusalt. Ultraheli rakkude häired, lüüsid ja valgu ekstraheerimine on ühine meetod, et isoleerida ja koguda sihtvalke BL21 rakkude rakusisemust. Ultraheli häirib raku täielikult ja vabastab kõik seotud valgud, muutes 100% valku saadaval.

BL21 Rakud valgu ekspressiooni

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsBL21 rakk on keemiliselt kompetentne E. coli bakteritüvi, mis sobib transformatsiooniks ja valgu ekspressiooniks kõrge tasemega valguekspressiooniks, kasutades T7 RNA polümeraasi-IPTG induktsioonsüsteemi. BL21 rakud võimaldavad kõrge efektiivsusega valgu ekspressiooni mis tahes geeni, mis on kontrolli all T7 promootor. E. coli tüvi BL21(DE3) on T7 RNA polümeraasi-põhine valgu tootmise tüvi koos T7 promootor põhinev ekspressiooni vektorid ja kasutatakse laialdaselt laborites ja tööstuses toota rekombinantseid valke. BL21(DE3) puhul transkriberitakse rekombinantset valku kodeeriva geeni ekspressiooni kromosoomiliselt kodeeritud T7 RNA polümeraasi (T7 RNAP) abil, mis transkribeerib kaheksa korda kiiremini kui tavaline E. coli RNAP. See muudab tüve BL21 (DE3) väga tõhusaks ja muudab selle üheks kõige eelistatumaks valguekspressiooni rakusüsteemiks.

Protokoll ultraheli lüüsija valgu ekstraheerimiseks BL21 rakkudest

BL21 rakkude rakkude lüüsi teostatakse enamasti ultraheliga koos naatriumlauroyl sarkisinaatiga (tuntud ka kui sarkosüül) lüüsipuhvrina. Ultraheli rakkude katkemise ja valgu ekstraheerimise eelised peituvad ultrahelirakkude usaldusväärsuses, reprodutseeritavuses ning ultrasonicators'i lihtsas, turvalises ja kiires toimimises. Allolev protokoll annab ultraheli BL21 raku lüüsi leidmissuuna samm-sammult:

Probe-tüüpi insonifier UP200St lüüsimiseks

Ultraheli rakkude katkend UP200St mikrootsaga S26d2 lüüsimiseks ja valgu ekstraheerimiseks

Infonõue




Pange tähele, et meie Privaatsuspoliitika.


  • Saatjavalkude eemaldamiseks suspendeeriti BL21 bakterigraanulid uuesti 50 ml jääkülmanaatrium-Tris-EDTA (STE) puhvris (koosnedes 10 mM Tris-HCL-ist, pH 8,0, 1 mM EDTAst, 150 mM NaCl-st, millele lisandus 100 mM PMSF).
  • Lisatakse 500 ul lüsosüümi (10 mg/ ml) ja rakke inkubeeritakse jääl 15 minutit.
  • Seejärel lisatakse 500 ul DTT-d ja 7 ml sarkosüüli (10% (w/v), mis koosneb STE puhvrist.
  • Oluline on hoida kõik puhastuspuhvrid jääkülmas ja hoida proovid jääl kogu aeg. Võimaluse korral tuleb kõik puhastusetapid läbi viia külmas ruumis.
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • Ultraheli lüüsi ja valgu ekstraheerimise puhul töödeldakse proovid VialTweeter MultiSample Ultrasonicator 4 x 30 sek 100% amplituudiga 2 min iga ultrahelitöötluse vahel. Teise võimalusena sondi-tüüpi ultraheli homogenisaator mikrootsaga, nt Uf200 ः t koos S26d2 -ga (3 x 30 sek, 2 min. paus ultraheli tsüklite vahel, 80% amplituud).
  • Edasiste puhastusetappide puhul tuleb proove hoida jääl või hoida kuni edasise töötlemiseni temperatuuril -80 °C.

Ultraheli lüüs prescise temperatuuri kontrolli all

Täpne ja usaldusväärne temperatuurikontroll on bioloogiliste proovide käitlemisel otsustava tähtsusega. Kõrgetemperatuur neis algatatakse proovides termiliselt indutseeritud valgu lagunemine.
Nagu kõik mehaanilised proovi ettevalmistamise tehnikad, ultrahelitöötlus loob soojust. Siiski, temperatuur proovid saab hästi kontrollida, kui kasutate VialTweeter. Tutvustame teile erinevaid võimalusi jälgida ja kontrollida temperatuuri oma proovid valmistades neid VialTweeter ja VialPress analüüsimiseks.

  1. Proovi temperatuuri jälgimine: Ultraheli protsessor UP200St, mis juhib VialTweeterit, on varustatud intelligentse tarkvara ja ühendatava temperatuurianduriga. Ühendage temperatuuriandur UP200St-ga ja sisestage temperatuurianduri ots ühte näidistorudest. Digitaalse värvilise puuteekraani abil saate up200St menüüs määrata oma proovi ultrahelitöötluse jaoks kindla temperatuurivahemiku. Ultraheliseade peatub automaatselt, kui maksimaalne temperatuur on saavutatud, ja peatub, kuni proovi temperatuur on määratud temperatuuri alumise väärtuseni ∆. Seejärel algab ultrahelitöötlus automaatselt uuesti. See nutikas funktsioon takistab kuumusest tingitud lagunemist.
  2. VialTweeteri bloki võib eelnevalt jahutada. Pane VialTweeter plokk (ainult sonotrode ilma anduri!) külmkappi või sügavkülma eelnevalt jahtuda titaaniplokk aitab edasi lükata temperatuuri tõusu proovis. Võimaluse korral võib proovi ise ka eeljahutada.
  3. Ultrahelitöötluse ajal jahtumiseks kasutage kuiva jääd. Kasutage kuiva jääga täidetud madalat alust ja asetage VialTweeter jääle, et kuumus saaks kiiresti hajutada.

Kliendid kogu maailmas kasutada VialTweeter ja VialPress oma igapäevast proovi ettevalmistamise töö bioloogiliste, biokeemiliste, meditsiiniliste ja kliiniliste laborites. UP200St protsessori intelligentne tarkvara ja temperatuuri kontroll, temperatuur on usaldusväärselt kontrollitud ja kuumusest tingitud proovi lagunemist välditud. Ultraheli proovi ettevalmistamine VialTweeter ja VialPress pakub väga usaldusväärseid ja reprodutseeritavaid tulemusi!

Leidke optimaalne ultraheli disruptor oma Lüüsi rakendus

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Hielscher Ultrasonics on kauaaegne kogenud suure jõudlusega ultraheli rakkude häirijate ja homogenisaatorite tootja laboritele, pink-top ja tööstusliku ulatusega süsteemidele. Teie bakteriaalne rakukultuuri suurus, teie uurimis- või tootmiseesmärk ja raku maht tunnis või päevas on olulised tegurid, et leida õige ultraheli rakuhävitus.
Hielscher Ultrasonics pakub erinevaid lahendusi multi-proovide (kuni 10 viaaliVialTweeter' iga) ja massiproovide (st microtiter plaadid / ELISA plaadid UIP400MTP), samuti klassikaline sondi-tüüpi lab ultrasonicator erinevate võimsustasemetega 50-400 vatti täielikult tööstusliku ultraheli protsessorid kuni 16,000watts ühiku kaubandusliku raku häireid ja valgu ekstraheerimise suur tootmine. Kõik Hielscheri ultrasonicators on ehitatud 24 / 7 / 365 operatsiooni täiskoormuse all. Töökindlus ja usaldusväärsus on meie ultraheli seadmete põhiomadused.
Kõik digitaalsed ultraheli homogenisaatorid on varustatud nutika tarkvara, värvilise puuteekraani ja automaatse teismeprotokolliga, mis muudavad ultraheli seadme mugavaks töövahendiks laboris ja tootmisrajatistes.
Andke meile teada, milliseid rakke, millist mahtu, millise sagedusega ja millise sihtmärgiga peate oma bioloogilisi proove töötlema. Soovitame teile oma protsessi nõuete jaoks kõige sobivamat ultraheli rakukatkest.

Alljärgnev tabel näitab meie ultraheli süsteemide ligikaudset töötlemisvõimet kompaktsetest käeshoitavatest homogenisaatoritest ja mitmevalimilistest ultrasonicators'ist kuni tööstuslike ultraheli protsessoriteni kaubanduslikel eesmärkidel:

partii Köide flow Rate Soovitatavad seadmed
96-well / mikrotiiter plaadid e.k. Led, mida sa ei pea booking.com-i külastajaid vastu
10 viaali à 0,5 kuni 1,5 ml e.k. VialTweeter UP200St
00,01 kuni 250ml 5 kuni 100ml/min UP50H
00,01 kuni 500ml 10 kuni 200 ml / min UP100H
10 kuni 2000 ml 20 kuni 400 ml / min Uf200 ः t, UP400St
0.1 kuni 20 l 0.2 kuni 4 l / min UIP2000hdT
10 kuni 100 l 2 kuni 10 l / min UIP4000hdT
e.k. 10 kuni 100 l / min UIP16000
e.k. suurem klastri UIP16000

Võta meiega ühendust! / Küsi meiega!

Küsige lisateavet

Palun kasutage allolevat vormi, et küsida lisateavet ultraheli protsessorite, rakenduste ja hinna kohta. Meil on hea meel arutada teie protsessi teiega ja pakkuda teile ultraheli süsteem, mis vastab teie vajadustele!









Palun pange tähele, et meie Privaatsuspoliitika.


Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

ultraheligaator Uf200 ः t koos 2mm mikrotip S26d2 jaoks ultrahelitöötlus väikeste proovide

Kirjandus/viited



Faktid Tasub teada

Escherichia Coli bakterid

Escherichia coli on bakteritüüp, mis on mitte-eos-vormimine, Gram-negatiivne ja iseloomustab selle kujul sirge varras. E.coli bakterid esinevad inimeste ja loomade keskkonnas, toidus ja sooltes. E. coli on tavaliselt motile kasutades peritrichous flagella, kuid on mittemotile tüübid ka. E.coli on niinimetatud fakultatiivselt anaeroobsed kemoorganotroiforganismid, mis tähendab, et nad on võimelised nii respiratoorseks kui ka fermenteerivaks metabolismiks. Enamik E.coli tüüpe on healoomulised ja täidavad kehas kasulikke funktsioone, nt kahjulike bakteriliikide kasvu pärssimine, vitamiinide süntees jne.
Escherichia coli bakterite raku nn B-tüüpi on erikategooria E.coli tüved, mida kasutatakse laialdaselt teadusuuringute uurida mehhanisme, nagu bakteriofoad tundlikkus või piirangu muutmise süsteemid. Lisaks hinnatakse E.coli baktereid usaldusväärse tööhobusena valgu ekspressiooniks biotehnoloogia ja eluteaduse laborites. Näiteks kasutatakse E.coli-d selliste ühendite nagu valkude ja oligosahhariidide sünteesimiseks tööstuslikus mastaabis. Tänu eripärale, nagu proteaasi puudulikkus, madala atsetaadi tootmine kõrgel glükoositasemel ja suurenenud läbilaskvus, E. coli B rakud on ta kõige sagedamini kasutatavad peremeesrakud tootmiseks geneetiliselt muundatud valke.

Rekombinantne valk

Rekombinantsed valgud (rProt) on muutumas oluliseks mitmesugustes harudes, sealhulgas keemiatööstuses, farmaatsia-, kosmeetika-, inim- ja loomameditsiinis, põllumajanduses, toidus ja jäätmekäitlustööstuses.
Rekombinantse valgu tootmiseks on vaja kasutada ekspressioonisüsteemi. Rakkude süsteemide väljendamiseks rekombinantse DNA tootmiseks võib kasutada nii prokarüootseid kui eukarüootseid rakke. Kuigi bakteriraku kasutatakse kõige laialdasemalt valgu ekspressiooni tõttu tegurid nagu odav, lihtne skaleeritavus ja lihtsad meediatingimused, imetaja, pärm, vetikad, putukate ja rakuvaba süsteemid on kehtestatud alternatiive. Valgu tüüp, funktsionaalne aktiivsus, samuti vajalik saagis väljendatud valgu mõjutada valiku rakusüsteemi kasutatakse valgu ekspressiooni.
Rekombinantse valgu väljendamiseks tuleb konkreetne rakk transfecteerida DNA vektoriga, mis sisaldab rekombinantse DNA malli. Seejärel kudutakse malliga transfected. Rakumehhanismi tulemusena transkribeerivad rakud ja tõlgivad huvipakkuva valgu, tekitades seeläbi sihtvalgu.
Kuna ekspresseeritud valgud on rakumaatriksis kinni seotud, tuleb valke vabastada (häiritud ja purustatud) l, rakul. Järgnevas puhastusetapis eraldatakse ja puhastatakse valk.
Esimene ravis kasutatud rekombinantne valk oli 1982. Tänapäeval toodetakse kogu maailmas ravieesmärgil üle 170 rekombinantse valgu. Tavaliselt kasutatavad meditsiinis kasutatavad rekombinantsed valgud on näiteks rekombinantsed hormoonid, interferoonid, interleukiinid, kasvufaktorid, kasvaja nekroosifaktorid, vere hüübimisfaktorid, trombolüütilised ravimid ja ensüümid suurte haiguste raviks, nagu diabeet, kääbuslus, müokardiinfarkt, kongestiivse südamepuudulikkuse, aju apopleksia, hulgiskleroos, neutropeenia, trombotsütopeenia, aneemia, hepatiit, reumatoidartriit, astma, Crohni tõbi ja vähiravi. (vt Phuc V. Pham, Aastal Omics Technologies and Bio-Engineering, 2018)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Suure jõudlusega ultraheli! Hielscheri tootevalik hõlmab kogu spektrit kompaktsest labori ultraheliseadmest pink-top üksuste kohal kuni täistööstuslike ultrahelisüsteemideni.