Ultraheli töötlusega valmistatud puhverlahused

Lüüsipuhvreid saab ultraheli koehomogenisaatoritega valmistada tõhusalt ja kiiresti. Kuna ultraheli seadmed on segamiseks, lahustamiseks ja dispergeerimiseks ideaalne töövahend, võimaldavad need lüüsipuhvrite töökindlat ja kasutajasõbralikku valmistamist.

Lüüsipuhvrite valmistamine ultraheliga

Ultraheli koehomogenisaatorid on levinud vahend rakkude lõhkumiseks, lüüsiks ja ekstraheerimiseks, mistõttu on need olemas enamikus laboritest. Sondtüüpi ultraheli seadmete teisene kasutusala on lüüsipuhvrite valmistamine.

Lüüsipuhver on lahus, mida kasutatakse rakkude avamiseks (lüüsimiseks) ja nende sisu vabastamiseks edasiseks analüüsiks. Lüüsipuhvri täpne koostis võib varieeruda sõltuvalt lüüsitavate rakkude tüübist ja edasisest kasutusest. Tüüpiline lüüsipuhver sisaldab siiski selliseid komponente nagu detergendid, soolad ja proteaasi inhibiitorid. Puhverdavaid sooli (nt Tris-HCl) ja ioonseid sooli (nt NaCl) kasutatakse tavaliselt lüsaadi pH ja osmolaarsuse reguleerimiseks.
Lüüsipuhvri valmistamiseks segatakse komponendid kokku sobivates kontsentratsioonides ja sobival pH-l. Segu segatakse või loksutatakse tavaliselt seni, kuni komponendid on lahustunud ja lahus on homogeenne.
Ultraheliga homogeniseerimine on meetod, mida saab kasutada hea lüüsipuhvri valmistamise toetamiseks, parandades komponentide segunemist ja lahustumist. Selle meetodi puhul rakendatakse segule ultraheli lainet – tavaliselt vahemikus 20 kuni 30 kHz –, mis tekitab kavitatsioonimulle; need kollabeeruvad ja tekitavad intensiivset lokaalset energiat, mis põhjustab komponentide mehaanilist nihet ja segunemist.
Ultraheliga homogeniseerimine aitab lahutada komponentide tükke või agregaate ning tagada lahuse ühtlase segunemise. Seetõttu võib selliselt parandatud lüüsipuhver viia tõhusama rakkude lõhkumiseni ja suurema ekstraheeritud materjali saagiseni. Lisaks võib ultraheliga homogeniseerimine lühendada lüüsipuhvri valmistamiseks kuluvat aega võrreldes traditsiooniliste segamis- või loksutamismeetoditega.
Kokkuvõttes on ultraheliga homogeniseerimine võimas vahend lüüsipuhvri valmistamise kvaliteedi ja tõhususe parandamiseks.

Ultraheliga lüüsipuhvri valmistamise protokoll

See on üldine protokoll lüüsipuhvri valmistamiseks sondtüüpi ultraheli seadmega:

Materjalid:

• Valitud detergent(id) (nt Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Valitud sool(ad) (nt NaCl, KCl)
• Proteaasi inhibiitorid (nt PMSF, aprotiniin, leupeptiin)
• Ultraheli seade
• Segisti
• Deioniseeritud vesi
• pH-meeter või pH-testribad

 
 
Samm-sammulised juhised:

1. Määrake lüüsipuhvri koostis lähtuvalt rakkudest või koest, mida kavatsete lüüsida, ning edasistest kasutusotstarvetest, milleks lüsaati kasutate. Valmistage detergentide, soolade ja proteaasi inhibiitorite lähtelahused soovitud kontsentratsioonides.
2. Lisage detergentide, soolade ja proteaasi inhibiitorite lähtelahused keeduklaasi või kolbi.
3. Lisage deioniseeritud vett, et viia maht puhvri soovitud koguseni.
4. Segage komponente segistiga, et saada eelsegu lahus.
5. Mõõtke puhvri pH pH-meetri või pH-testribade abil ning vajadusel korrigeerige pH-d väikeste koguste happe või alusega.
6. Kasutage sondtüüpi ultraheli seadet eelsegu lahuse homogeniseerimiseks, et saada väga homogeenne lahus. Sonikeerige lahust seetõttu mõne sekundi jooksul, kuni lahus on põhjalikult segunenud ning kõik tükid või agregaadid on lagunenud. Sonikeerimise kestust ja võimsust saab optimeerida vastavalt konkreetsele lüüsipuhvrile ja kasutatavale ultraheli seadmele.
7. Pärast ultraheli töötlust mõõtke puhvri pH uuesti ja vajadusel korrigeerige.
8. Filtreerige puhver läbi 0,2 mikronilise filtri, et eemaldada praht või agregaadid, mis võisid sonikeerimise ajal tekkida.
9. Lüüsipuhver on nüüd kasutamiseks valmis.

Märkus: Lüüsipuhvri täpne koostis ja pH võivad varieeruda sõltuvalt lüüsitavatest rakkudest või koest ning edasistest kasutusotstarvetest. Ülaltoodud protokoll on üldine juhis ja seda võib olla vaja konkreetsete rakenduste jaoks optimeerida.

Ultraheli homogenisaatoreid kasutatakse tavaliselt rakkude lõhkumiseks ja rakusiseste molekulide ekstraheerimiseks. Seetõttu kasutavad paljud lüüsirakendused sondtüüpi sonikeerimist mitte ainult lüüsipuhvri valmistamiseks, vaid ka mehaaniliseks rakkude lõhkumiseks ja ekstraheerimiseks.
See muudab ultraheli koehomogenisaatorid laboritele mitmekülgseks vahendiks ning selgitab ultraheli seadmete laialdast kasutamist mikrobioloogias, biotehnoloogias ja bioteadustes.

Ultraheli laborihomogenisaatorid

Hielscher Ultrasonics toodab ja tarnib ultraheli homogenisaatoreid ja sonde (sonotroode) erineva võimsuse ja proovimahuga. See võimaldab meil pakkuda teile teie proovide ettevalmistamiseks kõige sobivamat ultraheli desintegraatorit. Keskendume kõrgeimale kvaliteedile, silmapaistvale kasutusmugavusele ja töökindlatele sonikeerimistulemustele. Kõik digitaalsed ultraheli seadmed on varustatud nutika tarkvara, sonikeerimisprotokollide programmeerimise ja eelseadistamise, brauseri kaudu kaugjuhtimise, temperatuuri juhtimise, proovi valgustuse ning sisseehitatud SD-kaardile automaatse andmete salvestamisega.

Disain, tootmine ja nõustamine – Saksamaal valmistatud kvaliteet

Hielscher ultraheli seadmed on tuntud oma kõrgeima kvaliteedi ja disainistandardite poolest. Vastupidavus ja lihtne kasutamine võimaldavad meie ultraheli seadmete sujuvat integreerimist tööstusrajatistesse. Hielscheri ultraheli seadmed saavad hõlpsasti hakkama rasketes tingimustes ja nõudlikes keskkondades.

Hielscher Ultrasonics on ISO sertifitseeritud ettevõte ja pöörab erilist tähelepanu suure jõudlusega ultraheli seadmetele, mis põhinevad tipptehnoloogial ja on kasutajasõbralikud. Loomulikult vastavad Hielscheri ultraheli seadmed CE nõuetele ning UL-i, CSA ja RoHs nõuetele.

Alljärgnev tabel annab ülevaate meie erinevatest ultraheli laboriseadmetest: