Ultraheliga valmistatud puhverlahused
Lüüsipuhvreid saab tõhusalt ja kiiresti ette valmistada, kasutades ultraheli koe homogenisaatoreid. Kuna ultrasonikaatorid on unistuste vahend segamiseks, lahustamiseks ja hajutamiseks, võimaldavad nad lüüsipuhvrite usaldusväärset ja kasutajasõbralikku ettevalmistamist.
lüüsipuhvrite ultraheli ettevalmistamine
Ultraheli koe homogenisaatorid on tavaline vahend rakkude katkestamiseks, lüüsimiseks ja ekstraheerimiseks, seetõttu on need saadaval enamikus laborites. Sondi tüüpi ultrasonikaatorite sekundaarne rakendus on lüüsipuhvrite valmistamine.
Lüüsipuhver on lahus, mida kasutatakse avatud (lüüsi) rakkude murdmiseks ja nende sisu vabastamiseks järgnevaks analüüsiks. Lüüsipuhvri spetsiifiline koostis võib varieeruda sõltuvalt lüüsitavate rakkude tüübist ja järgnevast rakendusest. Kuid tüüpiline lüüsipuhver sisaldab selliseid komponente nagu pesuvahendid, soolad ja proteaasi inhibiitorid. Puhverdamissoolasid (nt Tris-HCl) ja ioonseid sooli (nt NaCl) kasutatakse tavaliselt lüsaadi pH ja osmolaarsuse reguleerimiseks.
Lüüsipuhvri saamiseks segatakse komponendid sobivates kontsentratsioonides ja pH väärtuses. Segu segatakse või loksutatakse tavaliselt, kuni komponendid on lahustunud ja lahus on homogeenne.
Ultraheli homogeniseerimine on meetod, mida saab kasutada hea lüüsipuhvri loomiseks, parandades komponentide segamist ja lahustumist. Selle meetodi puhul on ultraheli lained – tavaliselt vahemikus 20-30 kHz – kantakse segule, mis tekitab kavitatsioonimulle, mis varisevad kokku ja tekitavad intensiivset kohalikku energiat, põhjustades komponentide mehaanilist nihkumist ja segunemist.
Ultraheli homogeniseerimisprotsess võib aidata lõhkuda komponentide tükke või agregaate ja tagada, et lahus on ühtlaselt segunenud. Järelikult võib selline täiustatud lüüsipuhver põhjustada tõhusamaid rakkude häireid ja ekstraheeritud materjali suuremat saagist. Lisaks võib ultraheli homogeniseerimine vähendada lüüsipuhvri valmistamiseks kuluvat aega võrreldes traditsiooniliste segamis- või loksutamismeetoditega.
Üldiselt on ultraheli homogeniseerimine võimas vahend lüüsipuhvri ettevalmistamise kvaliteedi ja tõhususe parandamiseks.

Ultraheli labori homogenisaator UP200Ht on populaarne uurimislaborites proovide ettevalmistamiseks, lüüsimiseks, ekstraheerimiseks, DNA killustamiseks ja lahustamiseks.
Ultraheli lüüsipuhvri ettevalmistamise protokoll
See on üldine protokoll lüüsipuhvri tegemiseks sondi tüüpi ultrasonikaatori abil:
Materjalid:
- Valitud detergent(id) (nt Triton X-100, SDS, CHAPS)
- Valitud sool(id) (nt NaCl, KCl)
- Proteaasi inhibiitorid (nt PMSF, aprotiniin, leupeptiin)
- Ultrasonikaator
- Segisti
- Deioniseeritud vesi
- pH-meeter või pH-ribad
Samm-sammult juhised:
- Määrake lüüsipuhvri koostis rakkude või kudede põhjal, mida te lüüsite, ja järgnevate rakenduste põhjal, milleks te lüsaati kasutate. Valmistatakse detergentide, soolade ja proteaasi inhibiitorite põhilahused soovitud kontsentratsioonides.
- Keeduklaasi või kolbi lisatakse detergentide, soolade ja proteaasi inhibiitorite põhilahused.
- Lisatakse deioniseeritud vett, et viia maht soovitud puhvri koguseni.
- Segage komponendid segaja abil, et saada eelsegu lahus.
- Puhvri pH mõõdetakse pH-meetri või pH-ribade abil ja reguleeritakse pH-d vastavalt vajadusele väikese koguse happe või alusega.
- Kasutage sondi tüüpi ultrasonikaatorit, et homogeniseerida eelsegu lahus, nii et saadakse väga homogeenne lahus. Seetõttu sonikeerige lahust mõni sekund, kuni lahus on põhjalikult segunenud ja kõik tükid või agregaadid lagunevad. Ultrahelitöötluse kestust ja võimsust saab optimeerida vastavalt kasutatud spetsiifilisele lüüsipuhvrile ja ultrasonikaatorile.
- Pärast ultraheliuuringut mõõtke puhvri pH uuesti ja reguleerige vastavalt vajadusele.
- Filtreerige puhver läbi 0,2 mikroni filtri, et eemaldada kõik praht või agregaadid, mis võivad olla moodustunud ultrahelitöötluse ajal.
- Lüüsipuhver on nüüd kasutamiseks valmis.
Märkus: lüüsipuhvri täpne koostis ja pH võivad varieeruda sõltuvalt lüüsitavatest rakkudest või koest ja järgnevatest rakendustest. Ülaltoodud protokoll on üldine suunis ja seda võib olla vaja optimeerida konkreetsete rakenduste jaoks.
Ultraheli homogenisaatoreid kasutatakse tavaliselt rakkude katkestamiseks ja rakusiseste molekulide ekstraheerimiseks. Seetõttu kasutavad paljud lüüsirakendused sondi tüüpi ultrahelitöötlust mitte ainult lüüsipuhvri ettevalmistamiseks, vaid ka mehaaniliseks rakkude katkestamiseks ja ekstraheerimiseks.
See muudab ultraheli koe homogenisaatorid mitmekülgseks vahendiks laboritele ja selgitab ultrasonikaatorite laialdast kasutamist mikrobioloogias, biotehnoloogias ja eluteaduses.
Ultraheli labori homogenisaatorid
Hielscher Ultrasonics toodab ja tarnib ultraheli homogenisaatoreid ja sonde (sonotroode) erinevatel võimsusastmetel ja proovimahtudel. See võimaldab meil pakkuda teile proovi ettevalmistamiseks kõige sobivamat ultraheli katkestajat. Keskendume kõrgeimale kvaliteedile, silmapaistvale kasutajamugavusele ja usaldusväärsetele ultrahelitöötluse tulemustele. Kõik digitaalsed ultrasonikaatorid sisaldavad nutikat tarkvara, ultrahelitöötlusprotokollide programmeerimist ja eelseadistamist, brauseri kaugjuhtimispulti, temperatuuri reguleerimist, proovi valgustust ning automaatset andmete salvestamist sisseehitatud SD-kaardile.
Disain, tootmine ja nõustamine – Kvaliteet Valmistatud Saksamaal
Hielscheri ultrasonikaatorid on tuntud oma kõrgeimate kvaliteedi- ja disainistandardite poolest. Vastupidavus ja lihtne kasutamine võimaldavad meie ultrasonikaatorite sujuvat integreerimist tööstusrajatistesse. Hielscheri ultrasonikaatorid saavad kergesti käsitseda karmid tingimused ja nõudlikud keskkonnad.
Hielscher Ultrasonics on ISO sertifitseeritud ettevõte ja paneb erilist rõhku suure jõudlusega ultrasonikaatoritele, millel on tipptasemel tehnoloogia ja kasutajasõbralikkus. Loomulikult on Hielscheri ultrasonikaatorid CE-nõuetele vastavad ja vastavad UL, CSA ja RoHs nõuetele.
Allolev tabel annab teile ülevaate meie erinevatest labori ultrasonikaatoritest:
VialTweeter UP200St juures | 200W | 26kHz | väikeste viaalide ultraheli, nt Eppendorf 1,5mL |
UP50H | 50W | 30kHz | pihuarvuti või statsionaarne labori homogenisaator |
UP100H | 100W | 30kHz | pihuarvuti või statsionaarne labori homogenisaator |
UP200Ht | 200W | 26kHz | pihuarvuti või statsionaarne labori homogenisaator |
UP200St | 200W | 26kHz | statsionaarne labori homogenisaator |
UP400St | 400W | 24kHz | statsionaarne labori homogenisaator |
SonoStep | 200W | 26kHz | Lab reaktori kombineerimine, ultraheli, pump, segaja ja anum |
GDmini2 | 200W | 26kHz | saastevaba voolukamber |
kupael | 200W | 26kHz | intensiivne ultrahelivann viaalide ja keeduklaaside jaoks |
UIP400MTP | 400W | 24kHz | Ultraheli süsteem mitme kaevuga plaatide / mikrotiiterplaatide jaoks |

Ultraheli CupHorn suletud torude ja viaalide intensiivseks ultrahelitöötluseks proovide steriilseks homogeniseerimiseks.
Võta meiega ühendust! / Küsi meilt!

Ultraheli labori homogenisaator UP400St kasutatakse tavaliselt lüüsipuhvri ettevalmistamiseks ja sellele järgnevaks rakukatkestuseks.
Kirjandus / Viited
- Fernandes, Luz; Santos, Hugo; Nunes-Miranda, J.; Lodeiro, Carlos; Capelo, Jose (2011): Ultrasonic Enhanced Applications in Proteomics Workflows: single probe versus multiprobe. Journal of Integrated OMICS 1, 2011.
- Priego-Capote, Feliciano; Castro, María (2004): Analytical uses of ultrasound – I. Sample preparation. TrAC Trends in Analytical Chemistry 23, 2004. 644-653.
- Welna, Maja; Szymczycha-Madeja, Anna; Pohl, Pawel (2011): Quality of the Trace Element Analysis: Sample Preparation Steps. In: Wide Spectra of Quality Control; InTechOpen 2011.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.

Hielscher Ultrasonics toodab suure jõudlusega ultraheli homogenisaatoreid alates Lab kuni tööstuslik suurus.