Lüüsipuhvreid saab tõhusalt ja kiiresti ette valmistada, kasutades ultraheli koe homogenisaatoreid. Kuna ultrasonikaatorid on unistuste vahend segamiseks, lahustamiseks ja hajutamiseks, võimaldavad nad lüüsipuhvrite usaldusväärset ja kasutajasõbralikku ettevalmistamist.

lüüsipuhvrite ultraheli ettevalmistamine

Ultraheli koe homogenisaatorid on tavaline vahend rakkude katkestamiseks, lüüsimiseks ja ekstraheerimiseks, seetõttu on need saadaval enamikus laborites. Sondi tüüpi ultrasonikaatorite sekundaarne rakendus on lüüsipuhvrite valmistamine.

Lüüsipuhver on lahus, mida kasutatakse avatud (lüüsi) rakkude murdmiseks ja nende sisu vabastamiseks järgnevaks analüüsiks. Lüüsipuhvri spetsiifiline koostis võib varieeruda sõltuvalt lüüsitavate rakkude tüübist ja järgnevast rakendusest. Kuid tüüpiline lüüsipuhver sisaldab selliseid komponente nagu pesuvahendid, soolad ja proteaasi inhibiitorid. Puhverdamissoolasid (nt Tris-HCl) ja ioonsooli (nt NaCl) kasutatakse tavaliselt lüsaadi pH ja osmolaarsuse reguleerimiseks.
Lüüsipuhvri saamiseks segatakse komponendid sobivates kontsentratsioonides ja pH väärtuses. Segu segatakse või loksutatakse tavaliselt, kuni komponendid on lahustunud ja lahus on homogeenne.
Ultraheli homogeniseerimine on meetod, mida saab kasutada hea lüüsipuhvri loomiseks, parandades komponentide segamist ja lahustumist. Selle meetodi puhul on ultraheli lained – tavaliselt vahemikus 20-30 kHz – kantakse segule, mis tekitab kavitatsioonimulle, mis varisevad kokku ja tekitavad intensiivset kohalikku energiat, põhjustades komponentide mehaanilist nihkumist ja segunemist.
Ultraheli homogeniseerimisprotsess võib aidata lõhkuda komponentide tükke või agregaate ja tagada, et lahus on ühtlaselt segunenud. Järelikult võib selline täiustatud lüüsipuhver põhjustada tõhusamaid rakkude häireid ja ekstraheeritud materjali suuremat saagist. Lisaks võib ultraheli homogeniseerimine vähendada lüüsipuhvri valmistamiseks kuluvat aega võrreldes traditsiooniliste segamis- või loksutamismeetoditega.
Üldiselt on ultraheli homogeniseerimine võimas vahend lüüsipuhvri ettevalmistamise kvaliteedi ja tõhususe parandamiseks.

Ultraheli lüüsipuhvri ettevalmistamise protokoll

See on üldine protokoll lüüsipuhvri tegemiseks sondi tüüpi ultrasonikaatori abil:
 
Materjalid:

• Valitud detergent(id) (nt Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Valitud sool(id) (nt NaCl, KCl)
• Proteaasi inhibiitorid (nt PMSF, aprotiniin, leupeptiin)
• ultraheligaator
• segaja
• Deioniseeritud vesi
• pH-meeter või pH-ribad

 
 
Samm-sammult juhised:

1. Määrake lüüsipuhvri koostis rakkude või kudede põhjal, mida te lüüsite, ja järgnevate rakenduste põhjal, milleks te lüsaati kasutate. Valmistatakse detergentide, soolade ja proteaasi inhibiitorite põhilahused soovitud kontsentratsioonides.
2. Keeduklaasi või kolbi lisatakse detergentide, soolade ja proteaasi inhibiitorite põhilahused.
3. Lisatakse deioniseeritud vett, et viia maht soovitud puhvri koguseni.
4. Segage komponendid segaja abil, et saada eelsegu lahus.
5. Puhvri pH mõõdetakse pH-meetri või pH-ribade abil ja reguleeritakse pH-d vastavalt vajadusele väikese koguse happe või alusega.
6. Kasutage sondi tüüpi ultrasonikaatorit, et homogeniseerida eelsegu lahus, nii et saadakse väga homogeenne lahus. Seetõttu sonikeerige lahust mõni sekund, kuni lahus on põhjalikult segunenud ja kõik tükid või agregaadid lagunevad. Ultrahelitöötluse kestust ja võimsust saab optimeerida vastavalt kasutatud spetsiifilisele lüüsipuhvrile ja ultrasonikaatorile.
7. Pärast ultraheliuuringut mõõtke puhvri pH uuesti ja reguleerige vastavalt vajadusele.
8. Filtreerige puhver läbi 0,2 mikroni filtri, et eemaldada kõik praht või agregaadid, mis võivad olla moodustunud ultrahelitöötluse ajal.
9. Lüüsipuhver on nüüd kasutamiseks valmis.

 
Märkus: lüüsipuhvri täpne koostis ja pH võivad varieeruda sõltuvalt lüüsitavatest rakkudest või koest ja järgnevatest rakendustest. Ülaltoodud protokoll on üldine suunis ja seda võib olla vaja optimeerida konkreetsete rakenduste jaoks.
 
Ultraheli homogenisaatoreid kasutatakse tavaliselt rakkude katkestamiseks ja rakusiseste molekulide ekstraheerimiseks. Seetõttu kasutavad paljud lüüsirakendused sondi tüüpi ultrahelitöötlust mitte ainult lüüsipuhvri ettevalmistamiseks, vaid ka mehaaniliseks rakkude katkestamiseks ja ekstraheerimiseks.
See muudab ultraheli koe homogenisaatorid mitmekülgseks vahendiks laboritele ja selgitab ultrasonikaatorite laialdast kasutamist mikrobioloogias, biotehnoloogias ja eluteaduses.

ultraheli lab homogenisaatoriteks

Hielscher Ultrasonics toodab ja tarnib ultraheli homogenisaatoreid ja sonde (sonotroodid) erinevatel võimsusastmetel ja proovimahtudel. See võimaldab meil pakkuda teile proovi ettevalmistamiseks kõige sobivamat ultraheli katkestajat. Keskendume kõrgeimale kvaliteedile, silmapaistvale kasutajamugavusele ja usaldusväärsetele ultrahelitöötluse tulemustele. Kõik digitaalsed ultrasonikaatorid sisaldavad nutikat tarkvara, ultrahelitöötlusprotokollide programmeerimist ja eelseadistamist, brauseri kaugjuhtimispulti, temperatuuri reguleerimist, proovi valgustust ning automaatset andmete salvestamist sisseehitatud SD-kaardile.

Disain, tootmine ja nõustamine – Kvaliteet Valmistatud Saksamaal

Hielscheri ultrasonikaatorid on tuntud oma kõrgeimate kvaliteedi- ja disainistandardite poolest. Vastupidavus ja lihtne kasutamine võimaldavad meie ultrasonikaatorite sujuvat integreerimist tööstusrajatistesse. Karmid tingimused ja nõudlikud keskkonnad on Hielscheri ultrasonikaatorite poolt kergesti käsitsetavad.

Hielscher Ultrasonics on ISO sertifitseeritud ettevõte ja paneb erilist rõhku suure jõudlusega ultrasonikaatoritele, millel on tipptasemel tehnoloogia ja kasutajasõbralikkus. Loomulikult on Hielscheri ultrasonikaatorid CE-nõuetele vastavad ja vastavad UL, CSA ja RoHs nõuetele.

The table below gives you an overview of our various lab ultrasonicators: