Erleichterte Metabolomik durch Hochdurchsatz-Sonikation

Die Metabolomik ist ein Forschungsgebiet, das Hochdurchsatztechniken zur Charakterisierung und Quantifizierung kleiner Moleküle in verschiedenen Bioflüssigkeiten wie Urin, Serum, Plasma, Kot und Speichel einsetzt, um einzigartige Stoffwechselsignaturen zu enthüllen. Der Hochdurchsatz-Sonicator UIP400MTP, der für Multiwell-Platten entwickelt wurde, ist ein leistungsfähiges Werkzeug für die Lyse von Zellen in diesen Proben und erleichtert die Freisetzung von Metaboliten für die nachfolgende Analyse. Dieser präzise und zuverlässige Ansatz ist für die Metabolomik unerlässlich, bei der ein genaues Studiendesign, eine sorgfältige Probenvorbereitung, ein optimiertes Plattform-Setup, eine umfassende Datenanalyse und eine aussagekräftige biologische Interpretation von größter Bedeutung sind. Bei der Metabolomik kommen sowohl gezielte Ansätze zum Einsatz, die sich auf bestimmte Molekülklassen wie Kohlenhydrate, Lipide und Aminosäuren konzentrieren, als auch nicht gezielte Techniken, die einen umfassenden Überblick über die Stoffwechselprofile in einer Probe liefern und die komplexe Komplexität der Stoffwechselsignale aufzeigen.

Hochdurchsatz-Probenvorbereitung mit dem 96-Well Plate Sonicator UIP400MTP

Die Verwendung des berührungslosen Sonicators UIP400MTP in Kombination mit 96-Well-Platten ist eine effiziente Methode zur Homogenisierung und Metaboliten-Extraktion im Hochdurchsatz. Bei diesem Aufbau wird der direkte Kontakt mit der Probe vermieden, wodurch das Risiko einer Kreuzkontamination bei der gleichzeitigen Verarbeitung mehrerer Proben verringert wird.

Schritt-für-Schritt-Protokoll für die Homogenisierung mit dem 96-Well Sonicator UIP400MTP

1. Vorbereitung der Metabolomik-Proben
   Musterplatzierung: Geben Sie jede Probe (z. B. Kot, Darmgewebe oder Luminalinhalt) in einzelne Vertiefungen einer 96-Well-Platte oder Mikroplatte.
   Lösungsmittel: Organische Lösungsmittel wie Methanol, Ethanol, Acetonitril, Chloroform und deren (wässrige) Mischungen sind für die Extraktion von Metaboliten unerlässlich, da sie die Freisetzung von intrazellulären Metaboliten aus der Zellmatrix unterstützen. Verwenden Sie 100-300 µl Lösungsmittel pro Vertiefung, wobei das Volumen ausreichen muss, um die Probe vollständig einzutauchen.
   Interne Standards: Optional können Sie jeder Vertiefung interne Standards zur Normalisierung während der nachgeschalteten Metabolomanalyse hinzufügen.
2. Kopplungsmedium Setup
   Wasserstand: Legen Sie die 96-Well-Platte wie im Handbuch beschrieben auf die mit Wasser (dem Kopplungsmedium) gefüllte Beschallungsplattform.
3. UIP400MTP Parameter Konfiguration
   Leistungseinstellungen: Stellen Sie die Ultraschallamplitude auf 50-80 % der maximalen Leistung ein, um eine effiziente Homogenisierung zu erreichen.
   Impuls-Modus: Stellen Sie den Beschallungszyklus so ein, dass sich die Pulse abwechseln (z. B. 30 Sekunden EIN, 30 Sekunden AUS), um eine Abkühlung zu ermöglichen und eine Überhitzung der Probe zu vermeiden.
   Gesamtdauer: 4-10 Minuten, je nach Komplexität und Zähigkeit der Probe.
   Temperaturregelung: Verwenden Sie eine Laborkühlung, um das Wasser während der Beschallung auf 4-8 °C zu halten, um hitzeempfindliche Metaboliten zu schützen.
4. Sonication Prozess
   Starten Sie das UIP400MTP für Beschallungszyklen.
   Überwachen Sie den Prozess über die UIP400MTP-Schnittstelle.
   Durch den Kavitationseffekt werden die Proben homogenisiert und die Zellen in den Vertiefungen lysiert, wodurch intrazelluläre Stoffwechselprodukte in das Lösungsmittel freigesetzt werden.
5. PostSonication
   Zentrifugation: Nach der Beschallung den Platteninhalt bei Bedarf in Sammelröhrchen überführen. 10 Minuten lang bei 4 000-6 000 × g zentrifugieren, um unlösliche Trümmer und zelluläres Material zu pelletieren.
   Sammlung des Überstandes: Übertragen Sie den Überstand aus jeder Vertiefung vorsichtig in neue Röhrchen oder Platten zur Analyse.
   Optionale Trocknung: Trocknen Sie den Überstand mit einem Vakuumkonzentrator (z. B. SpeedVac), wenn eine Konzentration erforderlich ist, und stellen Sie ihn dann in einem kleinen Volumen des entsprechenden Lösungsmittels wieder her.

Profitieren Sie von der hohen Durchsatzkapazität des UIP400MTP Multi-Well-Platten-Sonicators und erleichtern Sie Ihre metabolomische Forschung und Analyse!

Das Prinzip der berührungslosen Beschallung mit UIP400MTP

Das UIP400MTP überträgt Ultraschallwellen indirekt über ein Kopplungsmedium (z. B. Wasser) auf die Vertiefungen einer 96-Well-Platte. Diese Wellen erzeugen Kavitation, die Zellen aufbricht und Stoffwechselprodukte freisetzt, ohne dass es zu einem physischen Kontakt zwischen der Sonicator-Sonde und der Probe kommt.

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