ASTM E2799-22 protokol til antimikrobiel evaluering

Hielscher UIP400MTP er en kraftfuld og effektiv multi-brønds plade sonicator designet til at strømline sonikeringstrinnet i ASTM E2799-22-protokollen. Ved at levere ensartet ultralydsenergi over hele mikrotiterpladen sikrer UIP400MTP ensartet og pålidelig løsrivelse af biofilm fra pindlåg uden at beskadige cellerne eller kompromittere prøvens integritet. Dens høje kapacitet og brugervenlige drift reducerer behandlingstiden betydeligt, samtidig med at den forbedrer reproducerbarheden, hvilket gør den til en ideel løsning til laboratorier, der udfører biofilmlevedygtighedsanalyser og antimikrobiel effektivitetstestning.

ASTM E2799

ASTM E2799 er en standardiseret testmetode designet til at evaluere effektiviteten af antimikrobielle midler mod biofilm, specifikt med fokus på Pseudomonas aeruginosa. Biofilm er komplekse mikrobielle samfund, der klæber til overflader og udviser øget resistens over for antimikrobielle behandlinger, hvilket gør dem til en betydelig udfordring i sundheds-, industri- og miljøsammenhænge. Denne metode anvender MBEC-analysen (Minimum Biofilm Eradication Concentration) til at give en pålidelig og reproducerbar ramme for test af desinfektionsmidler under realistiske biofilmforhold.

Hvordan bidrager sonikering til ASTM E2799?

Sonikering spiller en afgørende rolle i ASTM E2799-protokollen ved at lette løsrivelsen af biofilm fra testoverflader, hvilket sikrer en nøjagtig vurdering af mikrobiel levedygtighed efter behandling. Ved at bruge kontrolleret ultralydsenergi opnår protokollen effektiv og ensartet biofilmafbrydelse uden at beskadige cellerne, hvilket muliggør præcise og reproducerbare resultater. Dette gør ASTM E2799 til et vigtigt værktøj til at fremme biofilmforskning og udvikle effektive antimikrobielle strategier.

Sådan køres MBEC-analysen i overensstemmelse med ASTM E2799-22

ASTM E2799-22-protokollen skitserer trinene til evaluering af effektiviteten af antimikrobielle midler mod biofilm. Når du bruger Hielscher UIP400MTP mikrotiterplade soniker, kan protokollen tilpasses til at inkorporere denne avancerede sonikeringsmetode til biofilmløsrivelse. Nedenfor er en beskrivelse af de trin, der er skræddersyet til brug af mikroplade-sonikeren UIP400MTP:

1. Fremstilling af biofilm
   Forbered en steril 96-brønds mikrotiterplade med aftagelige pløklåg.
   Brøndene podes med en standardiseret bakteriesuspension i et passende vækstmedium.
   Placer pløklåget på pladen, og sørg for, at pløkkerne er helt nedsænket i bakteriesuspensionen.
   Inkuber pladen under kontrollerede forhold (f.eks. temperatur og tid) for at tillade biofilmdannelse på pindene.
2. Behandling med antimikrobielle midler
   Efter biofilmdannelse udskiftes mediet med frisk medium, der indeholder testantimikrobielle stoffer i forskellige koncentrationer.
   Sæt pløklåget på igen, og inkuber under de betingelser, der er angivet i testdesignet.
3. Forberedelse til biofilmløsrivelse
   Efter behandlingen skylles pindlåget ved at nedsænke det i en steril skylleopløsning for at fjerne resterende antimikrobielle midler og løst klæbende planktonceller.
4. Biofilmløsrivelse ved hjælp af UIP400MTP Sonicator
   Forbered en frisk 96-brønds mikrotiterplade indeholdende et genvindingsmedium (f.eks. neutraliserende bouillon).
   Tag biofilmene af ved at placere pindlåget i brøndene på genvindingsmediepladen.
   Indsæt pladen i UIP400MTP sonicator, og sørg for, at låget og pladen er korrekt justeret.
   Indstil sonikeren til 70% -80% amplitude og soniker i 3-4 minutter i cyklustilstand for at sikre ensartet biofilmløsning uden cellelyse.
5. Vurdering af biofilms levedygtighed
   Efter sonikering behandles genvindingsmediet indeholdende løsrevne biofilmceller ved hjælp af standard mikrobiologiske eller analytiske teknikker, såsom:
   • Kolonidannende enhed (CFU) tællinger: Udfør serielle fortyndinger og plade på agar til levedygtig celletælling.
   • Målinger af optisk tæthed (OD): Brug spektrofotometrisk analyse til at vurdere celletæthed.
   • Fluorescensbaserede levedygtighedsanalyser: Kvantificer levende og døde celler ved hjælp af fluorescerende farvestoffer.
6. Analyse af data
   Sammenlign levedygtighedsdata for behandlede og ubehandlede biofilm for at bestemme effektiviteten af de antimikrobielle stoffer.
   Den mindste biofilmudryddelseskoncentration (MBEC) beregnes på grundlag af den koncentration, der kræves for at eliminere levedygtige biofilmceller.
7. kvalitetskontrol
   Sørg for konsistente sonikeringsbetingelser ved regelmæssigt at kalibrere UIP400MTP og verificere, at biofilmløsrivningsprocessen ikke resulterer i betydelig cellelyse eller ødelæggelse.
   Medtag passende kontroller, såsom ubehandlede biofilm og blankprøver, der kun er medium, for at validere resultaterne.

Biofilmcellerne dannet på stifterne blev løsnet ved sonikering (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Tyskland, UIP250MTP) i 5 minutter i 96-brønds plader indeholdende frisk dyrkningsmedium til gendannelse af cellerne.
(Billede og studie: ©de Oliveira et al., 2016)

Ved at integrere UIP400MTP i ASTM E2799-22-arbejdsgangen optimeres processen med biofilmløsrivelse til konsistens, effektivitet og applikationer med høj kapacitet.