Udskift celleskrabning med den UIP400MTP Sonicator med høj gennemstrømning

Løsrivelse og ekstraktion af klæbende cellelinjer fra multi-brøndplader til multi-omics-analyse er en daglig opgave i laboratorier. Celleløsning med høj kapacitet ved hjælp af multi-brønds pladesonikeren UIP400MTP erstatter manuel celleskrabning, hvilket fører til højere udbytter af RNA, totale lipider og totale polære metabolitter. En ny metode integrerer Hielscher UIP400MTP sonicator med Beckman Coulter i7 væskehåndteringsarbejdsstation, hvilket muliggør høj gennemstrømning, reproducerbar og effektiv behandling af celler til RNA-, metabolit- og lipidekstraktion. Den præsenterede metode udmærker traditionelle manuelle celleskrabningsmetoder ved at opnå overlegen reproducerbarhed og udbytte på tværs af forskellige celletyper og eksperimentelle betingelser.

Strømlin celleløsrivelse med mikroplade Sonicator UIP400MTP

Adherente cellekultursystemer spiller en afgørende rolle i toksikologisk og biomedicinsk forskning. I denne sammenhæng adresserede Cruchley-Fuge et al. (2024) en væsentlig udfordring i PrecisionTox-projektet med fokus på udnyttelse af omics-teknologier til kemisk farevurdering. Projektet sigtede mod en analyse af tusindvis af prøver, der er behandlet med forskellige kemikalier. For at imødekomme denne efterspørgsel udviklede forskerne en automatiseret arbejdsgang, der kombinerer den UIP400MTP soniker med etablerede bifasiske ekstraktionsprotokoller til væskekromatografi-massespektrometri (LC-MS) analyse. Deres undersøgelse evaluerer effektiviteten af UIP400MTP Multi-Well Plate Sonicator i løsrivelse af vedhæftede celler sammenlignet med manuel skrabning og andre traditionelle metoder.

Strømlining af Multi-Omics: Automatiseret klæbende celleekstraktion med UIP400MTP

Forskerholdet Laura Cruchley-Fuge fra University of Birmingham brugte tre humane cellelinjer: HepG2 (leverkræftceller), HepaRG (differentierede hepatocytlignende celler) og H295R (binyrekræftceller). Disse celler blev dyrket i 24-brønds og 96-brønds plader og udsat for testkemikalier såsom aflatoksin B1 og forskolin.

Eksperimentelt design:

• Fase 1: Optimering af UIP400MTP sonicators effektindstillinger og sammenligning med manuel celleskrabning og soniske vandbade. HepG2-celler blev anvendt til at evaluere RNA-, metabolit- og lipidgenvinding.
• Fase 2: Integration af UIP400MTP i en bifasisk ekstraktionsarbejdsgang ved hjælp af Beckman Coulter i7-systemet. Valideringen blev udført ved hjælp af HepaRG- og H295R-celler.

Arbejdsgang for udtrækning: Arbejdsgangen omfattede kemisk eksponering i plader med flere brønde, celleløsning ved hjælp af UIP400MTP og bifasisk ekstraktion via Bligh & Dyer (B&D) metode. LC-MS-analyse blev udført ved hjælp af en Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 for lipofile og polære forbindelser. The B&D-metoden, en guldstandard for lipidkvantificering, involverer en to-trins ekstraktion med methanol, chloroform og vand, efterfulgt af lipidkvantificering i chloroformfasen.

UIP400MTP mikroplade soniker letter løsrivelsen af klæbende cellelinjer fra multi-brøndplader og petriskåle

Resultater:

• Fase 1: Optimale sonikeringsbetingelser blev identificeret ved 60% effekt.
  UIP400MTP gav den højeste RNA-genvinding med enestående reproducerbarhed sammenlignet med manuel skrabning og soniske bade.
  Polær metabolitgenvinding var konsistent på tværs af metoder, mens lipidgenvinding var markant bedre med UIP400MTP.
• Fase 2: Validering på HepaRG- og H295R-celler viste høj reproducerbarhed i lipidomics- og metabolomics-data, som indikeret af tæt klyngede PCA-scorer.
  Aflatoksin B1- og forskolinbehandlinger blev effektivt adskilt fra kontroller, hvilket understregede metodens følsomhed og pålidelighed.

“Hielscher UIP400MTP sonikeringsanordningen giver en højkvalitets og reproducerbar alternativ tilgang til "guldstandarden" for manuel celleskrabning, hvilket fører til højere udbytter af RNA, samlede lipider og totale polære metabolitter.” (Cruchley-Fuge et al., 2024)

Cruchley-Fuge et al. fremhæve fordelene ved den UIP400MTP soniker til vedhæftende cellebehandling. Ved at erstatte manuel skrabning forbedrer denne metode reproducerbarhed, gennemløb og udbytte, hvilket gør den til et uvurderligt værktøj til storskalaundersøgelser som PrecisionTox. UIP400MTP's integration i automatiserede arbejdsgange reducerer ikke kun variabiliteten, men strømliner også arbejdskrævende processer, hvilket muliggør multi-omics-dataindsamling af høj kvalitet.

Arbejdet af Cruchley-Fuge et al. (2024) letter og strømliner behandlingen af vedhæftede cellekulturer til multi-omics-analyse. Integrationen af UIP400MTP sonicator med automatiserede arbejdsgange sikrer ensartet og effektiv prøveforberedelse, hvilket gør den ideel til toksikologisk forskning med høj kapacitet.
 

Design, produktion og rådgivning – Kvalitet fremstillet i Tyskland

Hielscher ultralydapparater er kendt for deres højeste kvalitet og designstandarder. Robusthed og nem betjening muliggør en jævn integration af vores ultralydapparater i industrielle faciliteter. Hårde forhold og krævende miljøer håndteres let af Hielscher ultralydsapparater.

Hielscher Ultrasonics er en ISO-certificeret virksomhed og lægger særlig vægt på højtydende sonikere med avanceret teknologi og brugervenlighed. Selvfølgelig er Hielscher ultralydapparater CE-kompatible og opfylder kravene i UL, CSA og RoHs.