Ultrasonik VialTweeter ile Numune Hazırlama
Analizden önce numune hazırlama, doku homojenizasyonu, lizis, proteinlerin, DNA, RNA, organellerin ve diğer hücre içi maddelerin ekstraksiyonu, çözme ve gazdan arındırma gibi çeşitli pre-analitik işlemler gerektirebilir. VialTweeter, tam olarak aynı koşullar altında aynı anda birden fazla numune tüpü hazırlayan benzersiz bir ultrasonik cihazdır. Kapalı test tüplerinin dolaylı sonikasyonu nedeniyle, çapraz kontaminasyon ve numune kaybı önlenir.
Ultrasonik numune hazırlama
Ultrasonikasyon, numuneyi polimerler zincir reaksiyonu (PCR), Western Blots, tahliller, moleküler dizileme, kromatografi vb. gibi analizlere hazır hale getirmek için yaygın bir numune işleme tekniğidir. Ultrasonikasyon, numuneleri pre-analitik olarak tedavi etmek için laboratuvarlarda yaygın olarak kullanılan bir tekniktir. Sonikasyonun önemli bir avantajı, ultrasonun çalışma prensibinin tamamen mekanik kuvvetlere dayanmasıdır. Ultrasonik lizis ve hücre bozulması, ultrasonikasyona protein ekstraksiyonu için kullanılan çözücülerin lizis sırasında da kullanılabileceği avantajını veren sonomekanik kesme kuvvetleri ile elde edilir. VialTweeter gibi ultrasonik hücre bozucular, hücre duvarlarını / zarlarını kırar ve hücre içi ile çözücü arasındaki kütle transferini teşvik eder. Böylece, analit (örneğin DNA, RNA, proteinler, organeller vb.) hücre matrisinden çözücüye verimli bir şekilde aktarılır. Bu, su verme ve ekstraksiyon adımlarının ultrasonik hücre bozulma işlemi ile örtüştüğü anlamına gelir, bu da ultrasonik lizisi çok etkili kılar. Ayrıca, ultrasonik numune hazırlama, lizatın yapısını değiştirebilecek ve tahrip edebilecek deterjanlar ve diğer lizis reaktifleri gerektirmez ve saflaştırma ile ilgili sonraki sorunlar için bilinir. Başka bir lizis yöntemi olan enzimatik bozulma, uzun inkübasyon süreleri gerektirir ve genellikle tekrarlanamayan sonuçlar verir. Ultrasonik numune hazırlama, doku homojenizasyonu, hücre bozulması, lizis, protein ekstraksiyonu ve lizat çözündürme gibi numune hazırlamadaki yaygın sorunların üstesinden gelir. Ultrasonik tedavinin yoğunluğu tam olarak kontrol edilebildiği ve biyolojik numuneye göre ayarlanabildiği için bozulma ve numune kaybı önlenir. Otomatik olarak izlenen ve kontrol edilen örnek sıcaklığı, darbe modu ve sonikasyon süresi optimum sonuçlar sağlar.
VialTweeter, aynı koşullar altında birden fazla numunenin aynı anda hazırlanmasını gerektiren laboratuvar çalışmaları için özellikle uygundur. VialTweeter, 10 şişeye kadar (örneğin Eppendorf, santrifüj, NUNC tüpleri, kriyo-şişeler) tutabilen ve bunları hassas bir şekilde kontrol edilen koşullar altında yoğun bir şekilde sonikleştiren ultrasonik bir blok sonotrottur. Ultrasonik enerji, şişelerin duvarlarından numune ortamına bağlandığından, şişeler tedavi sırasında kapalı kalır. Böylece numune kaybı ve çapraz kontaminasyon tamamen önlenir.
VialTweeter'a uyan Şişeler ve Tüpler
VialTweeter, Eppendorf, santrifüj, kriyo-şişeler ve çeşitli NUNC flakon türleri gibi 10 ortak konik veya yuvarlak tabanlı tüpü tutmak için uygundur, ancak delikler istek üzerine diğer flakon ve tüp boyutlarına göre özelleştirilebilir. VialTweeter'ınızı buna göre değiştirebilmemiz için lütfen ne tür test tüpleri kullanmak istediğinizi bize bildirin. Falcon tüpleri ve diğer test kapları, beherler ve kaplar gibi daha büyük test tüpleri için VialPress uygun bir çözümdür.
Özel test tüpü boyutunuz için özelleştirilmiş VialTweeter modeli VT26dxx hakkında daha fazla bilgi edinin, örneğin Falcon tüpleri!
VialPress ile VialTweeter
10 tüp deliği ile VialTweeter'ın kendisi zaten benzersiz ve son derece işlevsel bir ultrasonik cihaz olsa da, VialPress eklentisi VialTweeter'ı kullanım için daha da çok yönlü ve esnek hale getirir. VialPress, Falcon tüpleri veya diğer küçük ila orta büyüklükteki test kapları gibi daha büyük numune tüplerini VialTweeter önüne sabitlemeye izin veren bir kelepçeli çubuktan oluşan VialTweeter için bir aksesuardır. Soldaki resim, VialTweeter'ın blokta 10 Eppendorf şişesi tuttuğunu gösterirken, VialPress sonikasyon için öne daha büyük bir test tüpü sabitler. VialPress, yoğun sonikasyon için 5 adede kadar büyük test tüpü tutabilir.
VialTweeter Numune Hazırlama Protokolleri
VialTweeter, biyolojik örnekleri sonikasyon yapmak için yaygın olarak kullanılır. Analizden önce numuneler, biyokimyasal veya biyofiziksel analizler ve tahliller için hazırlanmalıdır, örneğin parçalama, doku homojenizasyonu, protein ekstraksiyonu, DNA / RNA kesme, gaz giderme vb. VialTweeter, bu ultrasonik işlemleri güvenilir bir şekilde yerine getirir ve tekrarlanabilir sonuçlar verir. VialTweeter'ın yaygın bir uygulaması, memeli (insan ve hayvan) dokularının yanı sıra bakteri hücrelerinin ve viral partiküllerin parçalanması/hücre bozulmasıdır. Başarılı bir şekilde VialTweeter ile tedavi edilen biyolojik numuneler arasında insan akciğer epitel hücreleri, hematopoietik kök hücreler, miyeloid lösemi hücreleri, Escherichia coli (Escherichia coli), Bacillus subtilis (Bacillus subtilis), Bacillus anthracis (Bacillus anthracis), Francisella tularensis (Francisella tularensis), Yersinia pestis, Streptokok pyogenes, Caulobacter hilal, Mikoplazma pnömonisi, mikobakteriler / Mikobakteri tüberküloz kompleksi (MTBC) ve diğer birçok bakteriyel, botanik ve mikrobiyal hücre.
Aşağıda, VialTweeter'ı içeren birkaç seçilmiş protokol bulabilirsiniz.
- Doku Homojenizasyonu
- hücre bozulması & lizis
- Protein Ekstraksiyonu
- DNA / RNA kesme
- Hücre Pelet Çözündürme
- patojen tespiti
- gaz giderme
- In-vitro diagnostik
- Pre-analitik tedavi
- Proteomik
In-Vivo Glutatyon Tayini için VialTweeter ile E.Coli Lizisi
MG1655 suşunun Escherichia coli bakterileri, 0.5'lik bir A600'e ulaşılana kadar toplam 200 ml'lik bir hacimde MOPS minimal ortamında büyütüldü. Kültür, stres tedavisi için 50 ml'lik kültürlere bölündü. 0.79 mM allisin, 1 mM diamid veya dimetil sülfoksit (kontrol) ile 15 dakikalık inkübasyondan sonra, hücreler 10 dakika boyunca 4 ° C'de 4.000 g'da hasat edildi. Hücreler, peletlerin 700μl KPE tamponunda yeniden süspansiyonundan önce KPE tamponu ile iki kez yıkandı. Deproteinasyon için, ultrasonikasyon ile hücrelerin parçalanmasından önce 300μl% 10 (a / h) sülfosalisilik asit eklendi (3 x 1 dakika; VialTweeter ultrasonicator). Süpernatanlar santrifüjlemeden sonra toplandı (30 dk, 13.000g, 4 ° C). Sülfosalisilik asit konsantrasyonları, 3 hacim KPE tamponu ilavesiyle %1'e düşürüldü. Total glutatyon ve GSSG ölçümleri yukarıda tarif edildiği gibi yapıldı. Hücresel glutatyon konsantrasyonları, 6.7×10-15 litrelik bir E. coli hücresi hacmine ve A600 0.5'lik bir hücre yoğunluğuna (1×108 hücre ml-1 kültürüne eşdeğer) dayalı olarak hesaplandı. GSH konsantrasyonları, toplam glutatyondan 2 [GSSG] çıkarılmasıyla hesaplandı. (Müller ve ark. 2016)
VialTweeter ile Alfa-Sinüklein Fibril Parçalanması
VialTweeter sonikatörü, alfa-sinüklein fibrillerinin ve şeritlerinin güvenilir ve verimli bir şekilde parçalanması için yaygın olarak kullanılmaktadır. VialTweeter ile alfa-sinüklein parçalanması için ayrıntılı açıklamalar, protokoller ve referanslar bulmak için buraya tıklayın!
Grafit Fırını Atomik Absorpsiyon Spektrometrisi Öncesi VialTweeter ile Hücre Lizisi
Bacillus subtilis 168 (trpC2) 15 dakikalık antibiyotik stresine maruz bırakıldı, daha sonra hücreler 3.320 x g'da hasat edildi, 100 mM Tris / 1 mM EDTA, pH 7.5 ile beş kez yıkandı, 10 mM Tris, pH 7.5'te yeniden süspanse edildi ve bir Hielscher VialTweeter cihazında ultrasonikasyon ile bozuldu. (Wenzel ve ark. 2014)
Kütle Spektrometresi Öncesi VialTweeter Numune Hazırlama
İnsan CD34 μμietik kök / progenitör hücrelerinin liyofilize hücre peletleri, 100 mM amonyum hidrojen karbonat içinde 8 M üre 10μμl'de (peptit seyreltme serisi için toplu HEK293 hazırlığı için 200μl) yeniden süspanse edildi ve Hielscher VialTweeter ile sonikasyon ile desteklendi% 60, `'lık bir döngü ve buz üzerinde ara soğutma ile üç kez 20 saniyelik bir süre. (Amon ve ark. 2019)
VialPress kullanarak Numune Hazırlama Protokolleri
Taze marul (Lactuca sativa), 1 g bitki (taze ağırlık) ila 200, 100, 50 veya 20 mL tampon çözeltisi oranında 0.5 M HEPES tamponunda (pH 8, KOH ayarlanmış) homojenize edildi. Bitki kütlesinin tampon çözelti hacmine oranı, toplam homojenat hacmini 3.5 ile 12 mL arasında tutmak için değiştirildi. Bitki kütlesinin tampon çözelti hacmine oranı, toplam homojenat hacmini 3,5 ile 12 mL arasında tutacak şekilde değiştirildi ve prob ile homojenizasyona izin verildi. Homojenatlar daha sonra 3 dakika boyunca (% 80 nabız ve% 100 güç) 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Almanya) ile donatılmış VialTweeter ile bir UP200St kullanılarak dolaylı ultrasonikasyona tabi tutuldu. Bu cihazı kullanmak kontaminasyonu önledi. (Laughton ve ark. 2019)
VialTweeter ile Sonikasyon Sırasında Güvenilir Sıcaklık Kontrolü
Sıcaklık, biyolojik numunelerin işlenmesi için özellikle önemli olan, prosesi etkileyen çok önemli bir faktördür. Tüm mekanik numune hazırlama teknikleri gibi, sonikasyon da ısı oluşturur. Bununla birlikte, VialTweeter kullanılırken numunelerin sıcaklığı iyi kontrol edilebilir. Numunelerinizi analiz için VialTweeter ve VialPress ile hazırlarken sıcaklıklarını izlemek ve kontrol etmek için size çeşitli seçenekler sunuyoruz.
- Numune sıcaklığının izlenmesi: VialTweeter'ı çalıştıran ultrasonik işlemci UP200St, akıllı bir yazılım ve takılabilir bir sıcaklık sensörü ile donatılmıştır. Sıcaklık sensörünü UP200St'ye takın ve sıcaklık sensörünün ucunu numune tüplerinden birine yerleştirin. Dijital renkli dokunmatik ekran aracılığıyla, UP200St'nin menüsünde örnek sonikasyonunuz için belirli bir sıcaklık aralığı ayarlayabilirsiniz. Ultrasonicator, maksimum sıcaklığa ulaşıldığında otomatik olarak duracak ve örnek sıcaklığı, ayarlanan sıcaklığın ∆ daha düşük değerine düşene kadar duraklayacaktır. Sonra sonikasyon otomatik olarak tekrar başlar. Bu akıllı özellik, ısı kaynaklı bozulmayı önler.
- VialTweeter bloğu önceden soğutulabilir. Titanyum bloğu önceden soğutmak için VialTweeter bloğunu (yalnızca dönüştürücüsüz sonotrot!) buzdolabına veya dondurucuya koyun, numunedeki sıcaklık artışını ertelemeye yardımcı olur. Mümkünse, numunenin kendisi de önceden soğutulabilir.
- Sonikasyon sırasında soğutmak için kuru buz kullanın. Kuru buzla dolu sığ bir tepsi kullanın ve ısının hızla dağılabilmesi için VialTweeter'ı kuru buzun üzerine yerleştirin.
Dünya çapındaki müşteriler, biyolojik, biyokimyasal, tıbbi ve klinik laboratuvarlarda günlük numune hazırlama çalışmaları için VialTweeter ve VialPress'i kullanıyor. UP200St işlemcinin akıllı yazılımı ve sıcaklık kontrolü, sıcaklık güvenilir bir şekilde kontrol edilir ve ısı kaynaklı numune bozulması önlenir. VialTweeter ve VialPress ile ultrasonik numune hazırlama, son derece güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar verir!
VialTweeter'ın Teknik Detayları
VialTweeter, blok içindeki deliklerde 10 şişeye kadar tutabilen titanyumdan yapılmış bir blok sonotrottur. Ek olarak, VialPress kullanılarak VialTweeter önüne 5 adede kadar büyük test tüpü kenetlenebilir. VialTweeter, ultrasonikasyon enerjisinin, güvenilir ve düzgün sonikasyon sonuçları sağlamak için her bir yerleştirilen şişeye eşit olarak dağıtılması için tasarlanmıştır. Küçük bir pivot, VialTweeter sonotrotunu düz olmayan zemine ayarlar ve test tüplerini dikey olarak hizalar.
Bir bakışta VialTweeter'ın avantajları
- Aynı anda 10 şişeye kadar yoğun sonikasyon
- Damar duvarından numuneye yüksek ultrasonik yoğunlukta dolaylı sonikasyon
- Dolaylı sonikasyon, çapraz kontaminasyonu ve numune kaybını önler
- Ayarlanabilir ve kontrol edilebilir sonikasyon genliği nedeniyle tekrarlanabilir sonuçlar
- VialPress, daha büyük tüpleri sonikasyona tabi tutmanıza olanak tanır
- ile 0 arasında ayarlanabilir genlik
- %0 ile 0 arasında ayarlanabilir darbe modu
- Otoklavlanabilir
VialTweeter, aşağıdakiler tarafından desteklenmektedir: UP200St, 200 watt güçlü bir ultrasonik işlemci. UP200St, genlik, sonikasyon süresi, titreşim ve sıcaklık gibi tüm önemli ultrasonik işlem parametreleri üzerinde hassas kontrol sağlayan akıllı bir yazılımla donatılmıştır. Bu, VialTweeter'ı biyolojik ve biyokimyasal laboratuvarlarda başarılı tekrarlanabilir proses sonuçları için güvenilir bir araç haline getirir.
Genlik% 20 ile% 100 arasında ayarlanabilir ve böylece ultrasonik yoğunluğu numunenize uyarlamanıza izin verir. Örneğin, DNA ve RNA'nın kesilmesi ve parçalanması, çok küçük DNA parçalarının üretimini önlemek için daha hafif bir genlik gerektirir, fare beyninin doku homojenizasyonu yüksek yoğunluklu sonikasyona ihtiyaç duyar. UP200St işlemcideki akıllı ve sezgisel menü aracılığıyla ideal genliği, sonikasyon yoğunluğunu ve süresini seçin. Menü ve ayarlara renkli dokunmatik ekran üzerinden kolayca erişilebilir ve çalıştırılabilir. Ayarlarda genlik, titreşim / döngü modu, sonikasyon süresi, toplam enerji girişi ve sıcaklık limitleri gibi sonikasyon parametrelerini önceden ayarlayabilirsiniz. Araştırma ve üretimde, denemelerin ve test sonuçlarının tekrarlanabilirliği çok önemlidir. Bu, proses koşullarının ve sonikasyon protokollerinin kesin olarak kaydedilmesinin son derece önemli olduğu anlamına gelir. Otomatik veri protokolü, tüm sonikasyon verilerini entegre bir SD karttaki bir CSV dosyasına yazar, böylece çeşitli sonikasyon çalışmalarını kolayca kontrol edebilir ve karşılaştırabilirsiniz. Tüm ultrasonik işlem verilerine kolayca erişilebilir ve CSV dosyası olarak paylaşılabilir.
Hielscher Ultrasonics, araştırma çalışmanızı kolaylaştırmak ve geliştirmek için size ileri teknoloji sağlamaya çalışmaktadır!
Araştırma ve Bilimde Ultrasonik VialTweeter
VialTweeter, birden fazla Eppendorf şişesinin veya benzer test tüplerinin aynı anda ultrasonik numune hazırlanması için ideal olan 200 watt'lık güçlü bir ultrasonik işlemcidir. Bu nedenle VialTweeter, araştırma ve yaşam bilimleri için biyolojik ve biyokimyasal laboratuvarlarda sıklıkla kullanılmaktadır. Aşağıda ultrasonik işlemci VialTweeter'ı içeren bir dizi bilimsel makale bulabilirsiniz. Makaleler, ultrasonik numune homojenizasyonu, hücre bozulması ve parçalanması, DNA kesme ve parçalanması, proteinlerin ve biyoaktif bileşiklerin ekstraksiyonu ve ayrıca koronavirüs SARS-CoV-2'nin inaktivasyonu gibi çeşitli uygulamaları kapsamaktadır. Belirli bir uygulama ve ilgili bilimsel referanslar arıyorsanız, lütfen bizimle iletişime geçin.
- FactSheet VialTweeter VT26dxx – Customized VialTweeter Sonicator for Single Test Tubes or Vials
- FactSheet VialTweeter – Sonicator for Simultaneous Sample Preparation
- Gajek, Ryszard; Barley, Frank; She, Jianwen (2013): Determination of essential and toxic metals in blood by ICP-MS with calibration in synthetic matrix. Analytical Methods 5, 2013. 2193-2202.
https://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2013/ay/c3ay26036d - Nordenfelt P, Waldemarson S, Linder A, Mörgelin M, Karlsson C, Malmström J, Björck L. (2012): Antibody orientation at bacterial surfaces is related to invasive infection. Journal of Experimental Medicine 17;209(13), 2012. 2367-81.
- Wenzel, M., A. I. Chiriac, A. Otto, D. Zweytick, C. May, C. Schumacher, R. Gust, et al. (2014): Small Cationic Antimicrobial Peptides Delocalize Peripheral Membrane Proteins. Proceedings of the National Academy of Sciences 111, No. 14, 2014. E1409–E1418.
- Lindemann, C., Lupilova, N., Müller, A., Warscheid, B., Meyer, H. E., Kuhlmann, K., Eisenacher, M., Leichert, L. I. (2013): Redox proteomics uncovers peroxynitrite-sensitive proteins that help Escherichia coli to overcome nitrosative stress. The Journal of biological chemistry, 288(27), 2013. 19698–19714.
- Wenzel, M., Patra, M., Albrecht, D., Chen, D. Y., Nicolaou, K. C., Metzler-Nolte, N., Bandow, J. E. (2011): Proteomic signature of fatty acid biosynthesis inhibition available for in vivo mechanism-of-action studies. Antimicrobial agents and chemotherapy, 55(6), 2011. 2590–2596.
- Laughton, S., Laycock, A., von der Kammer, F. et al. (2019): Persistence of copper-based nanoparticle-containing foliar sprays in Lactuca sativa (lettuce) characterized by spICP-MS. Journal of Nanoparticle Research 21, 174 (2019).
- Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.
- Müller A., Eller J., Albrecht F., Prochnow P., Kuhlmann K., Bandow J. E., Slusarenko A. J., Leichert L.I.O. (2016): Allicin Induces Thiol Stress in Bacteria through S-Allylmercapto Modification of Protein Cysteines. Journal of Biological Chemistry, Vol. 291, No. 22, 2016. 11477-11490.
- Tim Krischuns; Franziska Günl; Lea Henschel; Marco Binder; Joschka Willemsen; Sebastian Schloer; Ursula Rescher; Vanessa Gerlt; Gert Zimmer; Carolin Nordhoff; Stephan Ludwig; Linda Brunotte (2018): Phosphorylation of TRIM28 Enhances the Expression of IFN-β and Proinflammatory Cytokines During HPAIV Infection of Human Lung Epithelial Cells. Frontiers in immunology Vol. 9, September 2018.
- Sabine Amon, Fabienne Meier-Abt, Ludovic C. Gillet, Slavica Dimitrieva, Alexandre P. A. Theocharides, Markus G. Manz, Ruedi Aebersold (2019): Sensitive Quantitative Proteomics of Human Hematopoietic Stem and Progenitor Cells by Data-independent Acquisition Mass Spectrometry. Molecular & Cellular Proteomics 18, 2019. 1454–1467.