Hielscher Ultrason Teknolojisi

Ultrasonication tarafından BL21 Hücrelerinin Hücre Lisisi

BL21 hücreleri, proteinleri yüksek verimli ifade etme yetenekleri nedeniyle araştırma laboratuvarlarında, biyoteknolojide ve endüstriyel üretimde yaygın olarak kullanılan Bir E. coli türüdür. Ultrasonik hücre bozulması, lysis ve protein ekstraksiyon ubl21 hücrelerinin hücresel iç hedeflenen proteinleri izole etmek ve toplamak için ortak bir yöntemdir. Ultrasonication hücreyi tamamen bozar ve tüm hapsedilmiş proteinleri serbest bırakır, proteinin % 100'ünü kullanılabilir hale getirir.

Protein Ekspresyonu için BL21 Hücreleri

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsBL21 hücresi, T7 RNA polimeraz-IPTG indüksiyon sistemi kullanılarak dönüşüme ve yüksek düzeyde protein ekspresyonuna uygun kimyasal olarak yetkin bir E. coli bakteriyel suşudur. BL21 hücreleri, bir T7 promotörükontrolünde olan herhangi bir genin yüksek verimli protein ekspresyonuna izin verir. E. coli strain BL21(DE3), T7 promotör bazlı ekspresyon vektörleri ile birleşen T7 RNA polimeraz bazlı protein üretimi dir. Rekombinant proteinler üretmek için laboratuvarlarda ve endüstride yaygın olarak uygulanmaktadır. BL21'de (DE3) rekombinant proteini kodlayan genin ekspresyonu, geleneksel E. coli RNAP'tan sekiz kat daha hızlı transkripsiyonu yapan kromozomal kodlanmış T7 RNA polimeraz (T7 RNAP) tarafından transkripsiyonu yapılır. Bu zorlanma BL21 (DE3) yüksek verimli hale getirir ve en çok tercih edilen protein ekspresyonu hücre sistemlerinden biri haline döner.

BL21 Hücrelerinden Ultrasonik Likis ve Protein Çıkarma Protokolü

BL21 hücrelerinin hücre lisisi çoğunlukla ultrasonication ile sodyum lauroyl sarkozinat (sarkosil olarak da bilinir) lysis tampon olarak yapılır. Ultrasonik hücre bozulması ve protein çıkarma avantajları güvenilirlik yalan, tekrarlanabilirlik yanı sıra ultrasonicators basit, güvenli ve hızlı çalışma. Aşağıdaki protokol ultrasonik BL21 hücre lisisiçin adım adım yön verir:

liziz için UP200St insonifier Prob tipi

Ultrasonik hücre bozucu UP200St lysis ve protein ekstraksiyonu için mikro uç S26d2 ile

Bilgi talebi





  • Şaperon proteinlerini çıkarmak için BL21 bakteriyel peletleri 50 ml buz gibi sodyum Tris-EDTA (STE) tamponu (10 mM Tris-HCL, pH 8.0, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl ile 100 mM PMSF ile desteklenmiş) yeniden askıya alınmıştır.
  • 500 ul likit (10 mg/ ml) eklenir ve hücreler 15 dakika boyunca buz üzerinde kuluçkaya yatırılır.
  • Daha sonra 500 ul DTT ve 7 ml sarkosil ( (w/v) STE tamponundan oluşur.
  • Tüm arıtma tamponlarını buz gibi tutmak ve numuneleri her zaman buzda tutmak esastır. Mümkünse tüm arınma adımları soğuk odada yapılmalıdır.
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • Ultrasonik lisis ve protein ekstraksiyonu için, numuneler sonicated vardır VialTweeter MultiSample Ultrasonicator her sonication arasında 2 dakika aralıklı% 100 genlik 4 x 30 sn için. Alternatif olarak, mikro uçlu bir sonda tipi ultrasonik homojener, UP200Ht with S26d2 (3 x 30 sec, 2 min. pause between ultrasonic cycles, 80% amplitude) can be used.
  • Daha fazla saflaştırma adımları için numuneler buzüzerinde tutulmalıdır veya daha fazla işleme alınana kadar -80°C'de saklanmalıdır.

Prescise Sıcaklık Kontrolü altında Ultrasonik Lysis

Biyolojik numuneleri işlerken hassas ve güvenilir sıcaklık kontrolü çok önemlidir. Yüksek sıcaklıklar numunelerde Termal kaynaklı protein yıkımı başlatır.
Tüm mekanik numune hazırlama teknikleri gibi, sonication ısı oluşturur. Ancak, örneklerin sıcaklığı iyi VialTweeter kullanırken kontrol edilebilir. Analiz için VialTweeter ve VialPress ile hazırlarken numunelerinizin sıcaklığını izlemek ve kontrol etmek için size çeşitli seçenekler salıyoruz.

  1. Örnek sıcaklığıizleme: VialTweeter sürücüler ultrasonik işlemci UP200St, akıllı bir yazılım ve takılabilir sıcaklık sensörü ile donatılmıştır. Sıcaklık sensörünü UP200St'ye takın ve numune tüplerinden birine sıcaklık sensörünün ucunu takın. Dijital renkli dokunmatik ekran aracılığıyla UP200St'nin menüsünde numune sonication'ınız için belirli bir sıcaklık aralığı ayarlayabilirsiniz. Ultrasonicator otomatik olarak max sıcaklık ulaşıldığında duracak ve örnek sıcaklık ∆ belirlenen sıcaklığın daha düşük değerine kadar duraklatmak. Sonra sonication otomatik olarak tekrar başlar. Bu akıllı özellik ısıkaynaklı bozulmayı önler.
  2. VialTweeter blok önceden soğutulmuş olabilir. Titanyum blok önceden soğutmak için buzdolabı veya dondurucu içine VialTweeter blok (transdüser olmadan sadece sonotrode!) koyun numunesıcaklık artışı ertelemeye yardımcı olur. Mümkünse, numunenin kendisi de önceden soğutulabilir.
  3. Sonication sırasında soğutmak için kuru buz kullanın. Kuru buz dolu sığ bir tepsi kullanın ve ısı hızla dağıtmak böylece buz üzerinde VialTweeter yerleştirin.

Müşteriler dünya çapında biyolojik, biyokimyasal, tıbbi ve klinik laboratuvarlarda günlük numune hazırlama çalışmaları için VialTweeter ve VialPress kullanın. UP200St işlemcinin akıllı yazılımı ve sıcaklık kontrolü, sıcaklık güvenilir bir şekilde kontrol edilir ve ısıya bağlı numune bozulması önlenir. VialTweeter ve VialPress ile Ultrasonik örnek hazırlama son derece güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar sunar!

Lysis Uygulamanız için Optimal Ultrasonik Bozucu'yu bulun

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Hielscher Ultrasonik laboratuvarlar, tezgah-top ve endüstriyel ölçekli sistemler için yüksek performanslı ultrasonik hücre bozucular ve homogenizers uzun zamandır deneyimli üreticisidir. Bakteri hücre kültürü boyutu, araştırma veya üretim hedefi ve saat veya gün başına işlemek için hücre hacmi uygulamanız için doğru ultrasonik hücre bozucu bulmak için gerekli faktörlerdir.
Hielscher Ultrasonics çoklu örnekler (VialTweeter ile 10 şişeye kadar) ve kitle örnekleri (yani, eşzamanlı sonication için çeşitli çözümler sunuyor mikrotiter plakalar / UIP400MTP ile ELISA plakaları), yanı sıra büyük üretim ticari hücre bozulması ve protein çıkarma için birim başına 16.000watt ile tam endüstriyel ultrasonik işlemciler için 50 ila 400 watt farklı güç düzeyleri ile klasik prob tipi laboratuvar ultrasonicator. Tüm Hielscher ultrasonicators tam yük altında 24/7/365 operasyon için inşa edilmiştir. Sağlamlık ve güvenilirlik ultrasonik cihazların temel özellikleridir.
Tüm dijital ultrasonik homogenizers akıllı yazılım ile donatılmıştır, renkli dokunmatik ekran ve otomatik veri protokolü, hangi laboratuvar ve üretim tesislerinde uygun bir çalışma aracı haline ultrasonik cihaz yapmak.
Biyolojik numunelerinizi işlemek için ne tür hücreler, hangi hacim, hangi frekansve hangi hedefle sahip olduğunuzu bize bildirin. Size süreç gereksinimleri için en uygun ultrasonik hücre bozucu önerecektir.

Aşağıdaki tablo, kompakt el homogenizers ve MultiSample Ultrasonicators ticari uygulamalar için endüstriyel ultrasonik işlemciler ultrasonik sistemlerin yaklaşık işleme kapasitesinin bir göstergesi verir:

Numune Hacmi Akış Oranı Önerilen Cihaz
96-iyi / mikrotiter plakalar n.a. UIP400MTP
10 şişe à 0.5 ila 1.5mL n.a. UP200St at VialTweeter
00,01 ile 250mL arasında 5 ila 100mL/dk UP50H
00,01 ile 500mL arasında 10 - 200mL/min UP100H
10 - 2000mL 20 - 400mL/min UP200Ht, UP400St
0,1 - 20L 0,2 - 4L/min UIP2000hdT
10 - 100L 2 - 10L/min Uıp4000hdt
n.a. 10 - 100L/min UIP16000
n.a. daha büyük grubu UIP16000

Bizimle iletişime geçin! / Bize sor!

Daha fazla bilgi isteyin

Ultrasonik işlemciler, uygulamalar ve fiyat hakkında ek bilgi istemek için lütfen aşağıdaki formu kullanın. Biz sizinle süreci tartışmak ve size gereksinimlerinizi karşılayan bir ultrasonik sistem sunmak için mutlu olacak!









Lütfen dikkat Gizlilik Politikası.


Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

ultrasonikatör UP200Ht küçük örneklerin sonication için 2mm mikrotip S26d2 ile

Edebiyat / Referanslar



Bilinmesi Gereken Gerçekler

Escherichia Coli Bakteriler

Escherichia coli bir bakteri türüdür, olmayan spor-oluşturan, Gram-negatif ve düz bir çubuk formu ile karakterizedir. E.coli bakterileri çevrede, gıdalarda ve insan ve hayvanların bağırsaklarında bulunur. E. coli genellikle peritrichous flagella kullanılarak hareketli, ama nonmotile türleri de vardır. E.coli sözde fakültatif anaerobik kemoorganotroph organizmalar, hangi solunum ve fermantif metabolizma hem de yeteneğine sahip olduğu anlamına gelir. Çoğu E.coli türü iyi huyluolup vücuttaki yararlı işlevleri yerine getirir, örneğin zararlı bakteri türlerinin büyümesini bastırmak, vitamin sentezleme vb.
B tipi escherichia coli bakteri hücresi, bakteriyofaj duyarlılığı veya kısıtlama-modifikasyon sistemleri gibi mekanizmaları araştırmak için araştırmalarda yaygın olarak kullanılan E.coli suşlarının özel bir kategorisidir. Ayrıca, E.coli bakterileri biyoteknoloji ve yaşam bilimi laboratuvarlarında protein ekspresyonu için güvenilir bir beygir olarak değerlendirilebilmiştir. Örneğin, E.coli endüstriyel ölçekte proteinler ve oligosakkaritler gibi bileşiklersentez için kullanılır. Proteaz eksikliği, yüksek glikoz seviyesinde düşük asetat üretimi ve gelişmiş geçirgenlik gibi özel özellikleri nedeniyle, E. coli B hücreleri genetik olarak tasarlanmış proteinlerin üretimi için en sık konak hücreleri kullanılır.

Rekombinant Protein

Rekombinant proteinler (rProt) kimyasal üretim, ilaç, kozmetik, insan ve hayvan tıbbı, tarım, gıda ve atık arıtma endüstrileri de dahil olmak üzere manifold dallarında önemli önem kazanmaktadır.
Rekombinant protein üretimi bir ifade sisteminin kullanılmasını gerektirir. Rekombinant DNA üretimi için hücre sistemleri ifade olarak hem prokaryotik hem de ökaryotik hücreler kullanılabilir. Bakteri hücresi düşük maliyet, kolay ölçeklenebilirlik ve basit medya koşulları gibi faktörler nedeniyle protein ekspresyonu için en yaygın olarak kullanılırken, memeli, maya, yosun, böcek ve hücresiz sistemler alternatifleri oluşturulmuştur. Protein tipi, fonksiyonel aktivite ve ifade edilen proteinin gerekli verimi protein ekspresyonu için kullanılan hücre sisteminin seçimini etkiler.
Rekombinant proteini ifade etmek için, belirli bir hücrerekombinant DNA şablonu içeren bir DNA vektörü ile transfected olmalıdır. Şablonla aktarılan hücreler daha sonra kültürlenir. Hücresel mekanizmanın bir sonucu olarak, hücreler ilgi proteinini yazıya çevirir ve çevirirler, bu da hedeflenen proteini üretir.
İfade edilen proteinler hücresel matrisiçinde sıkışıp kaldığı için, proteinlerin serbest bırakılması için hücre nin lysed (bozulmuş ve kırılmış) olması gerekir. Sonraki arınma adımında, protein ayrılır ve saflaştırılır.
Tedavide kullanılan ilk rekombinant protein 1982 yılında rekombinant insan insüliniidi. Günümüzde, dünya çapında tıbbi tedaviler için 170'ten fazla rekombinant protein türü üretilmektedir. Tıpta yaygın olarak kullanılan rekombinant proteinler örneğin rekombinant hormonlar, interferonlar, interlökinler, büyüme faktörleri, tümör nekrozu faktörleri, kan pıhtılaşma faktörleri, trombolitik ilaçlar ve diyabet, cücelik, miyokard infarktüsü, konjestif kalp yetmezliği, serebral apoplexy, multipl skleroz, nötropeni, trombositopeni, anemi, hepatit, romatoid artrit, astım, Crohn hastalığı, kanser ve kanser gibi önemli hastalıkların tedavisinde kullanılan enzimler. (cf. Phuc V. Pham, Omics Teknolojileri ve Biyo-Mühendislik, 2018)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Yüksek performanslı ultrasonik! Hielscher ürün yelpazesi tam endüstriyel ultrasonik sistemlere tezgah üst birimleri üzerinde kompakt laboratuvar ultrasonicator tam spektrum kapsar.