E. coli'nin Ultrasonik Lizisi
- E. coli bakterileri mikrobiyoloji ve biyoteknolojide en sık kullanılan bakterilerdir.
- Ultrasonik hücre bozucular, E. coli'nin parçalanması için güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar verir.
- Yoğun ancak hassas bir şekilde kontrol edilebilen kavitasyon ve kesme kuvvetleri, tam bozulma ve yüksek ekstraksiyon verimleri (örneğin proteinler, DNA) ile sonuçlanır.
E. coli'nin Ultrasonik Hücre Bozulması Neden Tercih Edilen Yöntemdir?
Ultrasonik homojenizatörler veya prob tipi ultrasonicators, yoğun ultrason hücre duvarlarını ve zarlarını verimli bir şekilde bozduğundan, E. coli lizisi için çeşitli avantajlar sunar. Prob tipi ultrasonicators, aşağıdaki nedenlerden dolayı E. coli lizisi için yaygın olarak kullanılmaktadır:
E.coli hücrelerinden protein ekstraksiyonu, ultrasonik prob UP200St
Prob tipi ultrasonikatör, E. coli lizisi için birçok avantaj sunar. Ultrasonik proses parametreleri üzerindeki güvenilir ve hassas kontrol, istenen sonuçları elde etmek için güç, süre ve numune işleme gibi çalışma parametrelerinin optimize edilmesini sağlar.
E. coli EDL933'ün genomik DNA'sının elektroforetik analizleri 0 - 15 dakika ultrasonikasyona tabi tutulmuştur. L, DNA Merdivenini gösterir.
(çalışma ve resim: ©Basselet ve ark. 2008)
Ultrasonik Kavitasyon Kullanarak Hücre Bozulması
Ultrasonik prob tipi homojenizatörler saniyede yaklaşık 20.000 devirle (20kHz'de) çalışır ve sıvılarda veya süspansiyonlarda kavitasyona neden olur. Akustik kavitasyon: Vakum benzeri basınçların mikroskobik alanları ve hücreleri parçalayan yüksek sıcaklıklar. Sıcaklıklar birkaç bin santigrat dereceye ulaşabilse de, kavitasyon hacimleri o kadar küçüktür ki işlemi önemli ölçüde ısıtmazlar. Ultrason tarafından üretilen akustik kavitasyon ve kesme kuvvetleri, E.coli gibi bakteri hücrelerinin hücre zarını deler veya kırar. Hielscher ultrasonicators, ultrasonik yoğunluk, genlik, enerji girişi ve sıcaklık gibi işlem parametreleri üzerinde hassas kontrol sağlar. Böylece, ultrasonik lizis işlemi hücre tipine, hücre kültürüne ve işlem hedefine en uygun şekilde ayarlanabilir.
- Lizisin hassas kontrolü (yoğunluk, genlik, sıcaklık)
- Güvenilir, tekrarlanabilir sonuçlar
- Belirli numunelere optimum adaptasyon
- Sıcaklık kontrolü
- çok küçük ila çok büyük numuneler için (μL ila litre)
- Tamamen mekanik arıtma
- Kullanıcı dostu, güvenli çalışma
- Laboratuvardan üretime doğrusal ölçek büyütme
VialTweeter ultrasonik lizis için
Ultrasonik Homojenizatör ve Diğer Lizis Teknikleri
Kimyasal ve enzimatik lizis sorunlu olabilirken – Kimyasal liz, protein yapılarını değiştirebileceğinden ve saflaştırma problemlerine neden olabileceğinden ve enzimatik lizis uzun inkübasyon süreleri gerektirdiğinden ve tekrarlanabilir olmadığından – Ultrasonik bozulma, sofistike, hızlı bir hücre bozulma yöntemidir.
Ultrasonik lizis sadece mekanik kuvvetlere dayanır. Hiçbir kimyasal eklenmez, sonikasyon hücre duvarını kesme kuvvetleri ile kırar. Kimyasal parçalanma, protein yapısını değiştirebilir ve saflaştırma problemlerine neden olabilir. Enzimatik bozulma, uzun inkübasyon süreleri gerektirir ve tekrarlanabilir değildir. E.coli bakteri hücrelerinin ultrasonik hücre bozulması hızlı, basit, güvenilir ve tekrarlanabilir. Bu nedenle Hielscher ultrasonicators örnek hazırlama, pre-anantitikler, in-vitro diagonstikler ve manifold tahlilleri için dünya çapında biyolojik ve biyokimyasal laboratuvarlarda kullanılır.
Ultrasonik Lizis için Genel Öneriler
Sonikasyon, çok küçük, orta ve büyük miktarlarda hücre süspansiyonlarını parçalamak için en popüler tekniktir – piko-litreden 100L/saate kadar (ultrasonik akış hücresi kullanarak). Hücreler sıvı kesme ve kavitasyon ile parçalanır. Sonikasyon sırasında DNA da kesilir, bu nedenle hücre süspansiyonuna DNaz eklemek gerekli değildir.
Ultrasonik E.coli lizisi sırasında sıcaklık kontrolü
Numuneyi önceden soğutarak ve numuneyi buz üzerinde sonikasyon sırasında tutarak, numunenin termal bozulması kolayca önlenebilir.
İdeal olarak, numuneler liziz sırasında buz gibi soğuk tutulmalıdır, ancak çoğu numune için sıcaklığın kültür veya doku kaynağının sıcaklığının üzerine çıkmaması yeterlidir. Bu nedenle, süspansiyonu buz üzerinde tutmak ve 5-10 saniyelik birkaç kısa ultrasonik darbe ve 10-30 saniyelik duraklamalarla sonikasyon yapmak önerilir. Duraklamalar sırasında, düşük bir sıcaklığı yeniden oluşturmak için ısı dağılabilir. Daha büyük hücre numuneleri için, soğutma ceketlerine sahip çeşitli akış hücresi reaktörleri mevcuttur.
Başarılı bir ultrasonik lizis için ayrıntılı ipuçlarını ve önerileri buradan okuyun!
E. coli lizatlarının ultrasonik hazırlanması için protokoller
Araştırmacılar, E.coli hücre bozulması için Hielscher ultrasonik homojenizatörleri kullanıyor. Aşağıda, çeşitli E. coli ile ilgili uygulamalar için Hielscher ultrasonik homojenizatörleri kullanarak E.coli lizisi için test edilmiş ve kanıtlanmış çeşitli protokoller bulabilirsiniz.
Hücre Büyümesi, Çapraz Bağlama ve E. coli Hücre Ekstraktlarının Ultrasonik Kullanılarak Hazırlanması
SeqA ve RNA polimeraz için ChIP-Chip E. coli MG1655 veya MG1655 ΔseqA, 37 ° C'de bir OD'ye büyütüldü600 ml ortam başına 27 μl formaldehit (% 37) eklenmeden önce 50 ml LB (+% 0.2 glikoz) içinde yaklaşık 0.15 (nihai konsantrasyon% 1). Çapraz bağlama, oda sıcaklığında 20 dakika boyunca yavaş çalkalamada (100 rpm) gerçekleştirildi, ardından 10 ml 2.5 M glisin (nihai konsantrasyon 0.5 M) ile söndürüldü. Isı şoku deneyleri için, E. coli MG1655, 30 ° C'de 65 ml LB ortamında bir OD'ye büyütüldü600 yaklaşık 0.3. Daha sonra 30 ml kültür, 43 ° C'de önceden ısıtılmış bir şişeye aktarıldı ve geri kalanı 30 ° C'de tutuldu. Çapraz bağlama ve söndürme, hücrelerin oda sıcaklığında daha yavaş çalkalamadan önce 5 dakika boyunca 30 veya 43 ° C'de tutulması dışında yukarıda tarif edildiği gibi yapıldı. Hücreler santrifüjleme ile toplandı ve iki kez soğuk TBS (pH7.5) ile yıkandı. 1 ml lizis tamponunda (10 mM Tris (pH 8.0),% 20 sükroz, 50 mM NaCl, 10 mM EDTA, 10 mg / ml lizozim) resüspansiyon ve 37 ° C'de 30 dakika inkübasyon ve ardından 4 ml IP tamponu ilavesi, hücreler% 100 güç ayarında Hielscher ultrasonik işlemci UP400St kullanılarak 12 kez 30 saniye ve 30 saniye molalarla buz üzerinde sonikasyona tabi tutuldu. 9000 g'da 10 dakika santrifüjlemeden sonra, süpernatantın 800 μl aliquote'u -20 ° C'de saklandı. (Waldminghaus 2010)
Ultrasonik Prob ile Enzimlerin Aşırı Üretimi ve Saflaştırılması
Dekasahisidin (His10) etiketli proteinlerin aşırı üretimi için, E. coli BL21 (DE3), pET19b yapıları ile dönüştürüldü. Bir gecede ön kültür, santrifüjleme ile hasat edildi ve bir ekspresyon kültürünü aşılamak için% 1 kullanıldı. pET19mgtB taşıyan hücreler, 22 ° C'de 600 nm'de (OD600) 0.7'lik bir optik yoğunluğa kadar büyütüldü. Kültür 17 ° C'ye aktarıldı ve 100 μM IPTG ile indüklendi. 16 saat sonra kültür, 4 ° C'de 7.500 × g'da santrifüjleme ile hasat edildi. Hücreler, pH 7.4'te 0.3 M NaCl ile 50 mM fosfat tamponlu salin (PBS) içinde yeniden süspanse edildi ve Hielscher ultrasonicator UP200St'de bir S2 mikro uçlu sonotrot ile 0.5'lik bir döngüde ve% 75'lik bir genlikte ultrasonikasyon ile bozuldu.
Dekahistidin etiketli GtfC'nin aşırı üretimi, bir OD'de 37 ° C'de indüklendi600 100 μM IPTG ile 0,6. Hücreler daha sonra 4 saat inkübe edildi, hasat edildi ve MgtB için yukarıda belirtildiği gibi parçalandı.
Ham hücre ekstraktları, hücre kalıntılarını çökeltmek için 15.000 × g ve 4 ° C'de santrifüjlendi. Arıtılmış ekstraktlar, bir ÄKTAprime Plus sistemi kullanılarak 1 ml HisTrap FF Ham sütunlara yüklendi. Enzimler, His etiketli proteinlerin gradyan elüsyonu için üreticinin protokolüne göre saflaştırıldı. Ayrıştırılmış protein çözeltileri, 4 ° C'de 0.3 M NaCl ile 1.000 hacim 50 mM PBS, pH 7.4'e karşı iki kez diyalize edildi. Saflaştırma% 12 SDS-PAGE ile analiz edildi. Protein konsantrasyonu, Roti-Quant kullanılarak Bradford yöntemi ile belirlendi. (Rabausch ve ark. 2013)
E. coli Bakterilerinden Proteinin Ultrasonik Ekstraksiyonu
İlgilenilen bir yem proteini (bu durumda, Arabidopsis thaliana'nın MTV1'i) bir GST etiketine kaynaştırılır ve BL21 Escherichia coli (E. coli) hücrelerinde eksprese edilir.
- Bir pelet GST-MTV1 ve GST (50 ml bakteri kültürüne karşılık gelir) alın ve her birini 2,5 mL buz gibi soğuk ekstraksiyon tamponunda yeniden süspanse edin.
- Bakteri hücrelerini parçalanana kadar parçalamak için bir ultrasonicator UP100H (yaklaşık 2-5 mL'lik küçük hacimler için MS3 mikrotip-sonotrot ile donatılmış) kullanın, bu da opaklığın azalması ve viskozitenin artması ile gösterilir. Bunun buz üzerinde yapılması gerekir ve aralıklarla sonikasyon yapılması önerilir (örneğin, 10 saniye sonikasyon ve ardından buz üzerinde 10 saniye duraklama vb.). Çok yüksek yoğunlukta sonikasyon yapmamaya özen gösterilmelidir. Köpürme veya beyaz bir çökelti oluşumu tespit edilirse, yoğunluğun düşürülmesi gerekir.
- Parçalanmış bakteri çözeltisini 1.5 mL mikrosantrifüj tüplerine aktarın ve 20 dakika boyunca 4 ° C, 16.000 x g'de santrifüjleyin.
UP400St gibi prob tipi ultrasonicators E.coli'nin verimli bir şekilde parçalanması için akustik kavitasyonun çalışma prensibini kullanın.
Sonikasyon Kullanarak Rekombinant Proteinin İfade Analizi ve Saflaştırılması
E. coli peleti, Hielscher ultrasonicator UP100H ile sonikleştirildi. Bu amaçla, hücre peleti soğutulmuş lizis tamponunda (50 mM Tris-HCl pH = 7.5, 100 mM NaCl, 5 mM DTT, 1 mM PMSF) yeniden süspanse edildi ve buz üzerinde 10 dakika soğutuldu. Daha sonra, hücre süspansiyonu, 10 s'lik 10 kısa patlama ve ardından soğutma için 30 sn aralıklarla sonikleştirildi. Son olarak, hücre kalıntıları 14000 rpm'de 15 dakika boyunca 4 ° C'de ultrasantrifüjleme ile uzaklaştırıldı. rPR ekspresyonunun doğrulanması için, süpernatant% 12 poliakrilamid jel üzerinde çalıştırıldı ve SDS-PAGE ve Western blotlama ile analiz edildi. rPR'nin saflaştırılması, üretici kılavuzuna göre Ni2 + -NTA reçinesi (Invitrogen, ABD) kullanılarak yapıldı. Bu aşamada doğal saflaştırma yöntemi kullanılmıştır. Saflaştırılmış proteinin saflığı, poliakrilamid jel üzerinde elektroforez ve ardından Coomassie mavisi boyama kullanılarak değerlendirildi. Saflaştırılmış protein konsantrasyonu Mikro BCA protein test kiti (PIERCE, ABD) ile ölçüldü. (Azarnezhad ve ark. 2016)
E. coli Lizisi için Ultrasonik Homojenizatörler
Hielscher Ultrasonics, E. coli bakterilerinin ve diğer hücre tiplerinin, dokuların ve hücre kültürlerinin güvenilir ve verimli bir şekilde parçalanması için yüksek performanslı ultrasonik homojenizatörler tasarlar, üretir ve tedarik eder.
Ultrasonik probların yanı sıra dolaylı sonikasyon sistemlerinin geniş portföyü, hücre bozulması ve ekstraksiyon uygulamanız için size ideal ultrasonik doku homojenizatörünü sunmamızı sağlar.
Tasarım, İmalat ve Danışmanlık – Almanya'da Üretilen Kalite
Hielscher ultrasonicators en yüksek kalite ve tasarım standartları için iyi bilinir. Akıllı yazılım, sezgisel menü, programlanabilir ayarlar ve otomatik veri protokolü, Hielscher ultrasonicators'ın sadece birkaç özelliğidir. Sağlamlık ve kolay kullanım, ultrasonicators'ımızın araştırma ve biyoteknoloji tesislerine sorunsuz bir şekilde entegre edilmesini sağlar. Zorlu koşullar ve zorlu ortamlar bile Hielscher ultrasonicators tarafından kolayca ele alınır.
Hielscher Ultrasonics, ISO sertifikalı bir şirkettir ve en son teknoloji ve kullanıcı dostu özelliklere sahip yüksek performanslı ultrasonicators'a özel önem vermektedir. Tabii ki, Hielscher ultrasonicators CE uyumludur ve UL, CSA ve RoHs gereksinimlerini karşılar.
Aşağıdaki tablo size ultrasonicators'ımızın yaklaşık işleme kapasitesinin bir göstergesini verir:
| Numune Hacmi | Akış Oranı | Önerilen Cihaz |
|---|---|---|
| Çok kuyulu / mikrotitre plakaları | n.a. | UIP400MTP |
| Şişeler veya beher için CupHorn | n.a. | Ultrasonik CupHorn |
| ultrasonik mikro akış reaktörü | n.a. | GDmini2 |
| 0,5 ila 1,5 mL ile 10 şişeye kadar | n.a. | VialTweeter |
| 0,5 - 1,5 mL | n.a. | VialTweeter |
| 1 - 500mL | 10 - 200mL/min | UP100H |
| 10 - 2000mL | 20 - 400mL/min | UP200Ht, UP400St |
| 0,1 - 20L | 0,2 - 4L/min | UIP2000hdT |
| 10 - 100L | 2 - 10L/min | UIP4000 |
| n.a. | 10 - 100L/min | UIP16000 |
| n.a. | daha büyük | grubu UIP16000 |
Bizimle İletişime Geçin! / Bize Sor!
Ultrasonik E. coli Lizisi için Ek Protokoller
Ultrasonik VialTweeter kullanarak E. coli'de allisin ile modifiye edilmiş proteinler
5,5'-Ditiobis (2-nitrobenzoik asit) (DTNB) Testi ile Sülfhidril İçeriğinin Belirlenmesi
MOPS minimal besiyerini (1:100) aşılamak için bir E. coli MG1655 gece kültürü kullanıldı. Kültür, 0.4'lük bir A600'e ulaşılana kadar aerobik olarak büyütüldü. Kültür, stres tedavisi için üç adet 15 ml'lik kültüre bölündü. Tedavi edilmemiş bir kültür, negatif bir kontrol görevi gördü. Kalan iki kültürün her birine 0.79 mM allisin (128 μg ml-1) veya 1 mM diamid eklendi. Kültürler 15 dakika inkübe edildi. Her kültürden 5 ml santrifüjleme ile hasat edildi (8.525 × g, 4 ° C, 10 dakika). Hücreler 1 ml PBS (137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4, pH 7.4, kullanımdan önce anaerobik olarak saklanır) ile iki kez yıkandı ve santrifüjlendi (13.000 × g, 4 ° C, 10 dakika). Hücreler, ultrasonikasyon ile 4 ° C'de bozulmadan önce lizis tamponunda (6 mM guanidinyum HCl, pH 7.4 ile PBS) yeniden süspanse edildi (VialTweeter ultrasonicator, Hielscher GmbH, Almanya) (3 × 1 dakika). Hücre kalıntıları santrifüjleme (13.000 × g, 4 °C, 15 dakika) ile peletlendi. Süpernatant, manyetik bir karıştırma çubuğu ile 3.5 ml'lik bir QS-makro küvete (10 mm) aktarıldı ve 1 ml lizis tamponu ile karıştırıldı. Numunelerin neslinin tükenmesi, oda sıcaklığında PSC-718 sıcaklık kontrollü hücre tutucu ile donatılmış bir Jasco V-650 spektrofotometresi ile 412 nm'de izlendi. 100μl 3 mM ditiobis (2-nitrobenzoik asit) çözeltisi ilave edildi. Nesli tükenme, doygunluğa ulaşana kadar izlendi. Tiyol konsantrasyonunun hesaplanması, sönme katsayısı kullanılarak yapıldı ε412 = 13.700 milyon-1 santim-1 tiyo-2-nitrobenzoik asit (TNB) için. Hücresel tiyol konsantrasyonları, 6.7 × 10'luk bir E. coli hücresi hacmine dayalı olarak hesaplandı-15 litre ve A600 = 0.5 hücre yoğunluğu (1 × 10'a eşdeğer)8 Hücreler ML-1 kültür). (Müller ve ark. 2016)
Ultrasonik Hücreli Kırıcı Kullanılarak İn Vivo Glutatyon Tayini
E.coli MG1655, 0.5'lik bir A600'e ulaşılana kadar toplam 200 ml'lik bir hacimde MOPS minimal ortamında büyütüldü. Kültür, stres tedavisi için 50 ml'lik kültürlere bölündü. 0.79 mM allisin, 1 mM diamid veya dimetil sülfoksit (kontrol) ile 15 dakikalık inkübasyondan sonra, hücreler 10 dakika boyunca 4 ° C'de 4.000 g'da hasat edildi. Hücreler, peletlerin 700μl KPE tamponunda yeniden süspansiyonundan önce KPE tamponu ile iki kez yıkandı. Deproteinasyon için, ultrasonikasyon ile hücrelerin parçalanmasından önce 300 l% 10 (a / h) sülfosalisilik asit eklendi (3 x 1 dakika; VialTweeter ultrasonikatör). Süpernatanlar santrifüjlemeden sonra toplandı (30 dk, 13.000g, 4 ° C). Sülfosalisilik asit konsantrasyonları, 3 hacim KPE tamponu ilavesiyle %1'e düşürüldü. Total glutatyon ve GSSG ölçümleri yukarıda tarif edildiği gibi yapıldı. Hücresel glutatyon konsantrasyonları, 6.7'lik bir E. coli hücresi hacmine dayalı olarak hesaplandı×10-15 litre ve A600 0.5 hücre yoğunluğu (1'e eşdeğer)×108 Hücreler ML-1 kültür). GSH konsantrasyonları, toplam glutatyondan 2 [GSSG] çıkarılmasıyla hesaplandı. (Müller ve ark. 2016)
Ultrasonik Homojenizatör kullanarak E. coli'de İnsan mAspAT'nin İfadesi
Tek koloni E. coli BL21 (DE3), 100μg / mL ampisilin içeren 30 mL Luria-Bertani (LB) ortamında ekspresyon vektörünü barındırır ve daha sonra optik yoğunluğa kadar 37ºC'de yetiştirilir (OD600) 0.6'ya ulaştı. Hücreler, 10 dakika boyunca 4.000 × g'da santrifüjleme ile hasat edildi ve 100μg / mL ampisilin içeren 3L taze LB ortamında yeniden süspanse edildi.
Daha sonra, protein ekspresyonu, 16ºC'de 20 saat boyunca 1 mM izopropil β-ᴅ-1-tiyogalaktopiranosid (IPTG) ile indüklendi. Hücreler 15 dakika boyunca 8.000 × g'da santrifüjleme ile hasat edildi ve tampon A (20 mM NaH2PO4, 0.5 M NaCl, pH 7.4) ile yıkandı. Yaklaşık 45 g (yaş ağırlık) hücreler 3 L kültürden elde edildi. Santrifüjlemeden sonra, hücre peletleri 40 mL (1 L kültür için) buz gibi soğuk ekstraksiyon tamponu A'da yeniden süspanse edildi ve Hielscher ultrasonik hücre kırıcı UP400St kullanılarak buz gibi soğuk sıcaklıkta ultrasonikasyon ile parçalandı. Hücre lizisi, çözünür (süpernatant) ve çökeltilmiş (pelet) fraksiyonları ayırmak için 15 dakika boyunca 12.000 rpm'de santrifüjlendi. (Jiang ve ark. 2015)
Bilmeye Değer Gerçekler
E.coli (E.coli)
Escherichia coli (E. coli), sıcakkanlı organizmaların (endotermler) alt bağırsağında yaygın olarak bulunan Escherichia cinsine ait gram negatif, fakültatif anaerobik, çubuk şeklinde, koliform bir bakteridir. Farklı özelliklere sahip çok sayıda E. coli suşu (veya alt tipi) vardır. Çoğu E. coli suşu insanlar için zararsızdır, örneğin laboratuvarlarda araştırma uygulamaları için yaygın olarak kullanılan B ve K-12 suşları. Bununla birlikte, bazı suşlar zararlıdır ve ciddi hastalıklara neden olabilir.
E. coli, bakterilerin manipüle edilmesi kolay olduğu için modern biyoloji mühendisliği ve endüstriyel mikrobiyolojide önemli bir rol oynar. Genellikle E. coli'nin kullanımını içeren yaygın laboratuvar uygulamaları, örneğin rekombinant deoksiribonükleik asit (DNA) oluşturmak veya bir model organizma olarak hareket etmek için.
E. coli, heterolog proteinlerin üretimi için çok yönlü bir konakçıdır ve E. coli'de rekombinant proteinlerin üretilmesi için manifold protein ekspresyon sistemleri mevcuttur. Yüksek düzeyde protein ekspresyonuna izin veren plazmitler kullanılarak, genler bakterilere sokulabilir ve bu da bu tür proteinlerin endüstriyel fermantasyon işlemlerinde yüksek miktarlarda üretilmesini sağlar.
E.coli, insülin üretmek için hücre fabrikaları olarak kullanılır. Diğer uygulamalar arasında, biyoyakıt üretmek ve biyoremediasyon için aşılar ve immobilize enzimler geliştirmek ve üretmek için modifiye edilmiş E. coli hücrelerinin kullanılması yer alır.
K-12 suşu, Alkalin Fosfataz (ALP) enzimini aşırı eksprese eden mutant bir E. coli formudur. Bu mutasyon, sürekli olarak enzimi kodlayan gendeki bir kusur nedeniyle ortaya çıkar. Bir gen, herhangi bir inhibisyon olmaksızın bir ürün üretirse, bu kurucu aktivite olarak bilinir. Bu spesifik mutant form, ALP enziminin izolasyonu ve saflaştırılması için kullanılır.
E. coli bakterileri de hücre fabrikaları olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. Tasarlanmış mikroplar (örneğin bakteriler) ve bitki hücreleri, hücre fabrikaları olarak adlandırılabilir. Genetiği değiştirilmiş bu hücreler, örneğin ilaç, gıda ve kimya endüstrisinde kullanılan moleküller, kimyasallar, polimerler, proteinler ve diğer maddeleri üretir. Bu tür biyomühendislik hücrelerinin içinde üretilen molekülleri serbest bırakmak için, ultrasonik lizis, hücre duvarlarını bozmak ve hedef maddeleri çevredeki sıvıya aktarmak için yaygın bir yöntemdir. Biyomühendislik hücrelerinin parçalanması hakkında daha fazla bilgi edinin!
Ultrasonik DNA Kesme
Ultrasonik kesme kuvvetleri, hücre içinden molekülleri, organelleri ve proteinleri serbest bırakmak ve DNA ipliklerini parçalara ayırmak için yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir. Akustik kavitasyon, hücrelerden DNA'yı çıkarmak ve yaklaşık 600 parçalık parçalar oluşturmak için hücre duvarlarını ve zarlarını kırar – 800 bp uzunluğundadır ve analiz için idealdir.
DNA parçalanması için ultrasonik homojenizatörler hakkında daha fazla bilgi edinmek için buraya tıklayın!
Literatür / Referanslar
- Azarnezhad A., Sharifi Z., Seyedabadi R., Hosseini A., Johari B., Sobhani Fard M. (2016): Cloning and Expression of Soluble Recombinant HIV-1 CRF35 Protease-HP Thioredoxin Fusion Protein. Avicenna J Med Biotechnol. 8(4), 2016. 175–181.
- Jiang X., Wang J., Chang H.; Zhou Y. (2016): Recombinant expression, purification and crystallographic studies of the mature form of human mitochondrial aspartate aminotransferase. BioScience Trends 2016.
- Müller A., Eller J., Albrecht F., Prochnow P., Kuhlmann K., Bandow J.E., Slusarenko A.J., Leichert L.I.O. (2016): Allicin Induces Thiol Stress in Bacteria through S-Allylmercapto Modification of Protein Cysteines. Journal of Biological Chemistry Vol. 291, No. 22, 2016. 11477–11490.
- Rabausch U., Juergensen J., Ilmberger N., Böhnke S., Fischer S., Schubach B., Schulte M., Streit W. R. (2013): Functional Screening of Metagenome and Genome Libraries for Detection of Novel Flavonoid-Modifying Enzymes. Applied and Environmental Microbiology 79(15), 2013. 4551–4563.
- Sauer M. (2014): MTV1 Pull-down Assay in Arabidopsis. bio-protocol Vol 4, Iss 12, Jun 20, 2014.
- Waldminghaus T., Skarstad K. (2010): ChIP on Chip: surprising results are often artifacts. BMC Genomics 11, 2010. 414.
Hielscher Ultrasonics, yüksek performanslı ultrasonik homojenizatörler üretmektedir. laboratuvar Hedef endüstriyel boyut.