Hielscher Ultrason Teknolojisi

Sonication ile SARS-CoV-2 Coronavirus Inaktivasyonu protokolü

Hielscher VialTweeter coronavirus SARS-COV-2 inaktive etmek için kullanılan benzersiz bir ultrasonik çoklu örnek hazırlama birimidir. VialTweeter aynı anda 10 örnek şişeleri kadar hazırlamak için izin ve böylece kitle numune işleme için ideal bir birimdir.

VialTweeter ile SARS-CoV-2 Coronavirus inaktivasyonu

Fiksatif çıkardıktan sonra, monolayers 1mL MEM/5% FBS içine hücreleri kazıma önce fosfat tamponlu salin (PBS) ile üç kez yıkandı ve sonicated (3 × 10 saniye, 10 saniye kapalı% 100 güç ve genlik) Hielscher ultrasonik işlemci kullanarak VialTweeter ile UP200St Eki. Supernatants 10 dakika için 3000 × g santrifüj ile açıklık getirildi. 

Aşağıdaki (2020) Welch et al. tarafından SARS-CoV-2 coronavirus inaktivasyonu için tam protokolü burada okuyun:

Hücreler ve Virüs

Vero E6 hücreleri (Vero C1008; ATCC CRL-1586) modifiye Eagle'ın minimum esaslı orta (MEM)  (v/v) fetal baldır serumu (FCS) ile desteklenmis olarak kültürlenmiştir. Kullanılan virüs SARS-CoV-2 suşu hCOV-19/England/2/2020, PHE tarafından İngiltere'de ilk hasta kümesinden izole 29/01/2020. Bu virüs 1.
SARS-CoV-2 inaktivasyonu ve reaktif sitotoksisitesinin giderilmesinde kullanılan reaktifler ve kimyasallar için welch ve ark.'nın bilimsel raporuna bakın (2020).

The ultrasonic sample preparation unit VialTweeter is used for the inactivation of SARS-CoV-2 coronavirus

Deterjanlar tarafından virüs inaktivasyonu – Welch ve ark. 2020 tarafından SARS-CoV-2 Coronavirus Inaktivasyon protokolü

SARS-CoV-2 İnaktivasyonu

Ticari ürünler için, virüs preparatları (doku kültürü sıvısı, 1 × 10 arasında değişen titreler6 için 1 × 108 PFU/ml) konsantrasyonlarda reaktiflerle ve üreticilerin kullanım talimatlarında tavsiye edilen temas süreleri, mevcut olduğu durumlarda veya test laboratuvarları tarafından özel olarak talep edilen konsantrasyonlar ve süreler için triplicate olarak tedavi edildi. Üretici tarafından çeşitli konsantrasyonların verildiği durumlarda, numuneye en düşük ürün oranı test edilmiştir (örn. test ürününün önerilen en düşük konsantrasyonu). Numune taşıma tüpü reaktifleri, üretici tarafından numune sıvısının reaktife hacim oranı belirtilmedikçe, doku kültürü sıvısının bir hacmi nin on cilt reaktife oranı kullanılarak test edildi. Deterjanlar, fiksatifler ve çözücüler belirtilen süreler için belirtilen konsantrasyonlarda test edildi. Tüm inaktivasyon basamakları ortam oda sıcaklığında (18 - 25°C) gerçekleştirildi. Alternatif numune türlerinin test edilmesi için virüs belirtilen numune matrisine 1:9 oranında saptandı ve daha sonra yukarıdaki gibi test reaktifleri ile tedavi edildi. Tüm deneyler, test reaktifi yerine eşdeğer pbs hacmine sahip triplicate kontrol sahte işlenmiş numuneleri içeriyordu. Gerekli temas süresinin hemen ardından, 1mL işlenmiş numune uygun olarak seçilmiş filtrasyon matrisi kullanılarak işlenmiştir. İnaktivasyon testi için reaktif kaldırma Pierce 4mL Deterjan Kaldırma Spin Sütunlar (Thermo Fisher) kullanılarak daha büyük bir spin sütun formatında veya boş Pierce 10mL kapasiteli santrifüj sütunları (Thermo Fisher) SM2 Bio-Boncuklar, Sephacryl S-400HR veya Sephadex LH-20 ile 4mL paketlenmiş boncuk / reçine vermek için doldurarak yapılmıştır. Amicon filtreleri kullanılarak arınma için, 2 × 500μl örnekleri daha önce açıklanan yöntemle iki santrifüj filtre kullanılarak saflaştırılmış, daha sonra birlikte birleştirilmiş. Glutaraldehit giderimi ile formaldehit ve formaldehit için bir filtre 1× 500μl numune hacmi ile kullanıldı, 500μl PBS'de işlendikten sonra yeniden askıya alındı ve 400ul MEM/5% FBS'ye eklendi. Enfekte inaktivasyon için VialTweeter at the ultrasonic processor UP200STtek katmanlı, 12,5 cm2 Vero E6 hücrelerinin şişeleri (2,5 × 106 2.5mL MEM/5% FBS'deki hücreler/şişeler) MOI 0.001'de enfekte olmuş ve 7°C/5% CO'da kuluçkaya yatırıldı2 24 saat boyunca. Supernatant çıkarıldı ve hücreler formaldehit 5mL veya formaldehit ve glutaraldehit 15 veya 60 dakika oda sıcaklığında kullanılarak sabit. Fiksatif kaldırıldı ve monolayers 1mL MEM / 5% FBS içine hücreleri kazıma önce PBS ile üç kez yıkanmış ve sonicated (3 × 10 saniye, 10 saniye kapalı% 100 güç ve genlik) VialTweeter eki (Hielscher Ultrason Teknolojisi) ile up200St kullanarak. Supernatants 10 dakika için 3000 × g santrifüj ile açıklık getirildi.

Kapalı şişeleri yoğun sonication için VialTweeter

Kapalı Şişelerin Yoğun Sonication için VialTweeter

Bilgi talebi





Various reagents have been tested for the inactivation of the SARS-CoV-2 coronavirus using the ultrasonic sample prep unit VialTweeter.

Welch ve ark. 2020 tarafından protokole göre ultrasonik VialTweeter ile SARS-CoV-2 coronavirus inaktivasyonu için kullanılan reaktif detayları

Hielscher VialTweeter kullanımı da dahil olmak üzere tam protokol burada bulunabilir:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

The multi-sample ultrasonicator VialTweeter allows for simultaneous sample preparation of up to 10 vials under same process conditions. The VialTweeter is an established ultrasonic device used for the inactivation of corona virus SARS-CoV-2 (Click to enlarge!)

Ultrasonik virüs inaktivasyonu için VialTweeter

Bir bakışta VialTweeter Avantajları

  • Aynı anda 10 şişeye kadar sonication
  • Çapraz kontaminasyon yok
  • Örnek kaybı yok
  • Otomatik veri kaydı
  • Kullanımı Kolay ve Güvenli
VialTweeter için de kullanılır

  • Hücre Lysis
  • Viral parçacık bozulması
  • Nükleik asit ekstraksiyonu: DNA/RNA izolasyonu
  • DNA/RNA parçalanması
  • Lysate çözünürleştirme
  • Sofistike Ultrasonik Dismembrators ve Hücre Bozucular

    Çok örnekli ultrasonicator VialTweeter biyolojik, biyokimyasal ve klinik laboratuvarlarda örnek hazırlanması için birçok ultrasonik çözümler sadece biridir. Hielscher Ultrasonik uygulamanız için ideal ultrasonik dismembrator sunar, örneğin hücre lizis, hücre ekstraksiyonu, doku homojenizasyon, lizat emzme, eritme, örnek gaz giderme vb.
    Doğrudan veya dolaylı sonication tercih ederseniz ve ultrasonik örnek tedavi hedefi ne olduğunu, saat ve gün başına işlemek için kaç örnek olduğunu bize bildirin. Size günlük çalışma rutin için en uygun ultrasonik birim tavsiye edecektir!
    Hielscher Ultrasonik 'dijital ultrasonik işlemciler akıllı yazılım, otomatik veri kaydı, sıcaklık kontrolü, sonication süresi, döngü / darbe modu yanı sıra örnek aydınlatma ve tarayıcı uzaktan kumanda için kolay ön ayar seçenekleri ile donatılmıştır. Biz araştırma ve iş rutin mümkün olduğunca uygun ve başarılı olur, böylece mümkün olduğunca akıllı bizim ultrasonik cihazlar yapmak için çalışıyoruz.
    Buraya tıklayın, VialTweeter ile ultrasonik örnek hazırlama protokolleri de dahil olmak üzere daha fazla uygulama bulmak için!

    Bizimle iletişime geçin! / Bize sor!

    Daha fazla bilgi isteyin

    Ultrasonik işlemciler, uygulamalar ve fiyat hakkında ek bilgi istemek için lütfen aşağıdaki formu kullanın. Biz sizinle süreci tartışmak ve size gereksinimlerinizi karşılayan bir ultrasonik sistem sunmak için mutlu olacak!









    Lütfen dikkat Gizlilik Politikası.


    Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

    Hielscher Ultrasonik uygulamaları karıştırma, dağılım, emülsifikasyon ve laboratuvar, pilot ve endüstriyel ölçekte çıkarma için yüksek performanslı ultrasonik homojenler üretmektedir.

    Edebiyat / Referanslar



    Bilinmesi Gereken Gerçekler

    Vero Hücreleri Nedir?

    Vero E6, Ayrıca Vero C1008 olarak bilinen (ATCC No. CRL-1586) Vero 76'dan klon hücre hattıdır ve SARS-CoV ve SARS-CoV-2 koronavirüslerinin araştırmalarında kullanılır. Vero hücreleri hücre kültürlerinde kullanılan bir hücre soyundandır. 'Vero’ soy bir Afrika yeşil maymun (Chlorocebus sp.) çıkarılan böbrek epitel hücrelerinden izole edildi.
    Vero E6 hücreleri bazı temas inhibisyonu göstermek, bu yüzden yavaş çoğalan virüslerin yayılması için uygundur. Vero E6 hücre hatları yaygın vero hücreleri (Afrika yeşil maymun böbrek hücreleri) anjiyotensin dönüştürücü enzim 2 (ACE2) reseptörlerinin bol bir ifade sergilemek gibi coronaviruses SARS-CoV ve SARS-CoV-2 sitopatolojiaraştırmak için kullanılır. ACE2 reseptörleri SARS-CoV-2 coronavirus için önemli bir yerleştirme alanıdır.
    Örneğin, Ogando ve ark. (2020) SARS-CoV-2 – SARS-CoV ile karşılaştırıldığında – hücre içi viral RNA daha yüksek düzeyde üretilen, ancak çarpıcı yaklaşık 50 kat daha az bulaşıcı viral döl kültür ortamı kurtarıldı. Ayrıca, iki virüsün koronavirüs replikasyonunun üç yerleşik inhibitörüne (Remdesivir, Alisporivir ve klorokin) karşı duyarlılığının çok benzer olduğunu, ancak SARS-CoV-2 enfeksiyonunun pegile interferon alfa içeren hücrelerin ön tedavisine çok daha duyarlı olduğunu belirlemİştir. İki virüs arasındaki önemli bir fark, – Vero E6 hücrelerinde geçiş üzerine – SARS-CoV-2 görünüşe göre başak protein geninde adaptif mutasyonlar elde etmek için güçlü bir seçim baskısı altında. Bu mutasyonlar, S1 ve S2 alan adlarını birbirine bağlayan bölgede putatif bir 'furin benzeri dekolte bölgesini' değiştirir veya siler ve plak tahlillerinde çok belirgin bir henotik değişime neden olabilir.