Sonication ile SARS-CoV-2 Coronavirus Inaktivasyonu protokolü

Hielscher VialTweeter coronavirus SARS-COV-2 inaktive etmek için kullanılan benzersiz bir ultrasonik çoklu örnek hazırlama birimidir. VialTweeter aynı anda 10 örnek şişeleri kadar hazırlamak için izin ve böylece kitle numune işleme için ideal bir birimdir.

VialTweeter ile SARS-CoV-2 Coronavirus inaktivasyonu

Fiksatif çıkardıktan sonra, monolayers 1mL MEM/5% FBS içine hücreleri kazıma önce fosfat tamponlu salin (PBS) ile üç kez yıkandı ve sonicated (3 × 10 saniye, 10 saniye kapalı% 100 güç ve genlik) Hielscher ultrasonik işlemci kullanarak VialTweeter ile UP200St Eki. Supernatants 10 dakika için 3000 × g santrifüj ile açıklık getirildi. 

Aşağıdaki (2020) Welch et al. tarafından SARS-CoV-2 coronavirus inaktivasyonu için tam protokolü burada okuyun:

Hücreler ve Virüs

Vero E6 hücreleri (Vero C1008; ATCC CRL-1586) modifiye Eagle'ın minimum esaslı orta (MEM)  (v/v) fetal baldır serumu (FCS) ile desteklenmis olarak kültürlenmiştir. Kullanılan virüs SARS-CoV-2 suşu hCOV-19/England/2/2020, PHE tarafından İngiltere'de ilk hasta kümesinden izole 29/01/2020. Bu virüs 1.
SARS-CoV-2 inaktivasyonu ve reaktif sitotoksisitesinin giderilmesinde kullanılan reaktifler ve kimyasallar için welch ve ark.'nın bilimsel raporuna bakın (2020).

Deterjanlar tarafından virüs inaktivasyonu – Welch ve ark. 2020 tarafından SARS-CoV-2 Coronavirus Inaktivasyon protokolü

SARS-CoV-2 İnaktivasyonu

Ticari ürünler için, virüs preparatları (doku kültürü sıvısı, 1 × 10 arasında değişen titreler⁶ için 1 × 10⁸ PFU/ml) konsantrasyonlarda reaktiflerle ve üreticilerin kullanım talimatlarında tavsiye edilen temas süreleri, mevcut olduğu durumlarda veya test laboratuvarları tarafından özel olarak talep edilen konsantrasyonlar ve süreler için triplicate olarak tedavi edildi. Üretici tarafından çeşitli konsantrasyonların verildiği durumlarda, numuneye en düşük ürün oranı test edilmiştir (örn. test ürününün önerilen en düşük konsantrasyonu). Numune taşıma tüpü reaktifleri, üretici tarafından numune sıvısının reaktife hacim oranı belirtilmedikçe, doku kültürü sıvısının bir hacmi nin on cilt reaktife oranı kullanılarak test edildi. Deterjanlar, fiksatifler ve çözücüler belirtilen süreler için belirtilen konsantrasyonlarda test edildi. Tüm inaktivasyon basamakları ortam oda sıcaklığında (18 - 25°C) gerçekleştirildi. Alternatif numune türlerinin test edilmesi için virüs belirtilen numune matrisine 1:9 oranında saptandı ve daha sonra yukarıdaki gibi test reaktifleri ile tedavi edildi. Tüm deneyler, test reaktifi yerine eşdeğer pbs hacmine sahip triplicate kontrol sahte işlenmiş numuneleri içeriyordu. Gerekli temas süresinin hemen ardından, 1mL işlenmiş numune uygun olarak seçilmiş filtrasyon matrisi kullanılarak işlenmiştir. İnaktivasyon testi için reaktif kaldırma Pierce 4mL Deterjan Kaldırma Spin Sütunlar (Thermo Fisher) kullanılarak daha büyük bir spin sütun formatında veya boş Pierce 10mL kapasiteli santrifüj sütunları (Thermo Fisher) SM2 Bio-Boncuklar, Sephacryl S-400HR veya Sephadex LH-20 ile 4mL paketlenmiş boncuk / reçine vermek için doldurarak yapılmıştır. Amicon filtreleri kullanılarak arınma için, 2 × 500μl örnekleri daha önce açıklanan yöntemle iki santrifüj filtre kullanılarak saflaştırılmış, daha sonra birlikte birleştirilmiş. Glutaraldehit giderimi ile formaldehit ve formaldehit için bir filtre 1× 500μl numune hacmi ile kullanıldı, 500μl PBS'de işlendikten sonra yeniden askıya alındı ve 400ul MEM/5% FBS'ye eklendi. Enfekte inaktivasyon için tek katmanlı, 12,5 cm² Vero E6 hücrelerinin şişeleri (2,5 × 10⁶ 2.5mL MEM/5% FBS'deki hücreler/şişeler) MOI 0.001'de enfekte olmuş ve 7°C/5% CO'da kuluçkaya yatırıldı₂ 24 saat boyunca. Supernatant çıkarıldı ve hücreler formaldehit 5mL veya formaldehit ve glutaraldehit 15 veya 60 dakika oda sıcaklığında kullanılarak sabit. Fiksatif kaldırıldı ve monolayers 1mL MEM / 5% FBS içine hücreleri kazıma önce PBS ile üç kez yıkanmış ve sonicated (3 × 10 saniye, 10 saniye kapalı% 100 güç ve genlik) VialTweeter eki (Hielscher Ultrason Teknolojisi) ile up200St kullanarak. Supernatants 10 dakika için 3000 × g santrifüj ile açıklık getirildi.

Welch ve ark. 2020 tarafından protokole göre ultrasonik VialTweeter ile SARS-CoV-2 coronavirus inaktivasyonu için kullanılan reaktif detayları

Hielscher VialTweeter kullanımı da dahil olmak üzere tam protokol burada bulunabilir:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Sofistike Ultrasonik Dismembrators ve Hücre Bozucular

Çok örnekli ultrasonicator VialTweeter biyolojik, biyokimyasal ve klinik laboratuvarlarda örnek hazırlanması için birçok ultrasonik çözümler sadece biridir. Hielscher Ultrasonik uygulamanız için ideal ultrasonik dismembrator sunar, örneğin hücre lizis, hücre ekstraksiyonu, doku homojenizasyon, lizat emzme, eritme, örnek gaz giderme vb.
Doğrudan veya dolaylı sonication tercih ederseniz ve ultrasonik örnek tedavi hedefi ne olduğunu, saat ve gün başına işlemek için kaç örnek olduğunu bize bildirin. Size günlük çalışma rutin için en uygun ultrasonik birim tavsiye edecektir!
Hielscher Ultrasonik 'dijital ultrasonik işlemciler akıllı yazılım, otomatik veri kaydı, sıcaklık kontrolü, sonication süresi, döngü / darbe modu yanı sıra örnek aydınlatma ve tarayıcı uzaktan kumanda için kolay ön ayar seçenekleri ile donatılmıştır. Biz araştırma ve iş rutin mümkün olduğunca uygun ve başarılı olur, böylece mümkün olduğunca akıllı bizim ultrasonik cihazlar yapmak için çalışıyoruz.
Buraya tıklayın, VialTweeter ile ultrasonik örnek hazırlama protokolleri de dahil olmak üzere daha fazla uygulama bulmak için!