ELISA Tahlilleri için Ultrasonik Örnek Hazırlık

ELISA gibi tahliller in-vitro tanı, hastalıkla ilgili protein tespiti ve kalite kontrolü (örn. gıda alerjenlerinin izlenmesi) için yaygın olarak kullanılmaktadır. Ultrasonik örnek hazırlama hücre lyse ve hücre içi proteinler, DNA, RNA ve organelleri izole etmek için hızlı, güvenilir ve tekrarlanabilir bir tekniktir. Hielscher Ultrasonics tek örnekler, birden fazla şişe yanı sıra mikrotiter plakalar ve 96-iyi plakalar uygun hazırlanması için çeşitli ultrasonik çözümler sunuyor.

ELISA – EnzimE Bağlı İmmünosorbent Assay

ELISA enzime bağlı immünosorbent tahlil anlamına gelir ve ligand bağlayıcı tahliller kategorisinde yaygın olarak kullanılan biyokimyasal analiz tekniğidir. ELISA'da, sıvı numune özel bağlama özelliklerine sahip sabit bir katı faza eklenir. Normalde, sabit katı faz iyi bir plaka veya ELISA plaka kaplama olarak uygulanır. Daha sonra, çeşitli sıvı reaktifler sırayla eklenir, kuluçkaya yatırılır ve yıkanır, böylece sonunda bir optik değişim (örneğin, enzimatik reaksiyon un çarpımı yla renk gelişimi) kuyudaki son sıvıda gerçekleşir. Optik değişim, analit miktarını nicel olarak adlandırılan “okuma". Kantitatif okuma için, iletilen ışığın yoğunluğunu algılamak ve ölçmek için bir spektrofotometre, florometre veya luminometre kullanılır. Algılama nın hassasiyeti, analitik reaksiyonlar sırasında sinyalin yükseltilmesinden etkilenir. Enzim reaksiyonları iyi araştırılmış ve güvenilir amplifikasyon süreçleri olduğundan, enzimler sinyal oluşturmak için kullanılır. Enzimler doğru niceleme izin vermek için sabit oranlarda algılama reaktifleri ile bağlantılıdır, hangi da adı açıklar "enzim bağlı" immünosorbent testi.
ELISA tahlilleri mikrotiter plakalarda / 96-kuyu plakalarında yapıldığı gibi, plaka bazlı tahlil tekniği olarak bilinir ve antikorların, peptidlerin, proteinlerin ve hormonların saptandırıp ölçülmesinde klinik in-vitro tanı, araştırma, ilaç geliştirme vb. gibi kullanılır.
ELISA tekniği tıpta, biyoteknolojide, bitki patolojisinde tanı aracı olarak sıklıkla kullanılmakta ve aynı zamanda birçok endüstride önemli bir kalite kontrol ölçümüdür.

ELISA önce Ultrasonik Örnek Hazırlık

ELISA testi yapılmadan önce, numuneler hücre içi lisis ve hücre içi proteinlerin, DNA, RNA vb. ekstraksiyon gibi hazırlık adımlarını gerektirir. Ultrasonik hücre lisis ve protein izolasyon avantajı yüksek verimlilik, güvenilirlik ve tekrarlanabilirlik olduğunu. Tüm bu faktörler yüksek kaliteli tanı ve araştırma sonuçları elde etmek için önemlidir

Pre-ELISA Ultrasonik Hücre Lisis Protokolü

• Hücre Kültürleri için: Ultrasonik hücre lisis önce, bir mikrosantrifüj 270 x g 5 dakika için santrifüj hücreleri. 30 - 100 μL RIPA arabelleğindeki aspirasyon ve hücreleri yeniden askıya alarak süpernatantı çıkarın. Sonra, 30 dakika buz üzerinde hücre pelet kuluçka.
• Şimdi, hücre örneği ultrasonik lysis için hazır:
  Sonda tipi ultrasonicator kullanın (örn. UP200Ht S26d2 prob ile) veya ultrasonik çok örnek cihaz (örneğin 10 şişe veya mikrotiter plakalar için UIP400MPT eşzamanlı sonication için VialTweeter ) hazırlamak için gereken örneklerin miktarına bağlı olarak.
  Tek bir numunenin sonda tipi sonication için, 1.5 mL mikrosantrifüj tüpler hücreleri yerleştirin.
• Ultrasonicator dijital menüsünde ultrasonik süresi, toplam enerji girişi, döngü modu ve / veya sıcaklık sınırları önceden ayarlayın. Bu son derece güvenilir sonication ve tekrarlanabilirlik sağlar.
• Sonotrode inset ve ultrasonik cihazı açın. Ultrasonik sondanın mikro ucunu numunenin içinden yavaşça geçirerek örneği düzgün bir şekilde sonicate edin.
  Çoğu hücre için ultrasonik lysis 10 sn sonication 2 -4 döngüleri sonra tamamlanacaktır.
• Sonication sonra, örnekten sonotrode kaldırın. Numuneler 5 dakika boyunca buz üzerinde kuluçkaya yatırılmalıdır. Sonra, 10.000 x g 20 dk için santrifüj enkaz pelet. Süpernatantları yeni bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın. Analitleri etiketleyin ve -20°C'de saklayın.
• Ultrasonik sonotrode düzgün alkol veya sonicate alkol dolu bir beher ile silerek temizlenebilir, örneğin% 70 etanol. Titanyumdan yapılan tüm ultrasonik problar otoklavlanabilir.

Doku Homojenleri için:

• Aşırı hemolizi kandan iyice çıkarmak için dokuyu buz gibi PBS (0.01M, pH=7.4) ile durulayın.
• Dokutartın (böbrek, kalp, akciğer, dalak vb.) ve PBS'de homojenleştirilen küçük parçalara ayırın. Gerekli PBS hacmi dokunun ağırlığı ile ilgilidir. Başparmak bir kural olarak, doku 1g yaklaşık 9mL PBS gerektirir. PBS bazı proteaz inhibitörü eklemek için tavsiye edilir. (RIPA veya hipotonik lisis tampon proteaz ve fosfataz inhibitör kokteyl içeren alternatif olarak kullanılabilir.)
• Doku büyüklüğüne bağlı olarak, kısa bir girdap tedavisi (yaklaşık 1-2 dk. 15 sn. bakliyat) doku ön tedavisinde yararlı olabilir.
• Ultrasonicator'unuza s26d2 gibi bir mikro uç tonuyla. Bir buz banyosu nda doku ile örnek tüp yerleştirin.
• Sonicate the sample with your ultrasonicator, e.g. UP200St (80% amplitude) for 1 min. in pulse mode (15sec on, 15sec pause). Keep the sample in the ice bath.
• Homojenler daha sonra analiz için proteinzenginleştirmek için belirli havuzları (sitozolik, nükleer, mitokondriyal veya lisozomal) elde etmek için santrifüj edilir. 5000×g'de numuneyi 5 dakika santrifüj ederek, süpernatant alınır.

Sonication sırasında Güvenilir Sıcaklık Kontrolü

Sıcaklık, biyolojik numunelerin tedavisi için özellikle önemli olan, örneğin proteinlerin termal olarak bozulmasını önlemek için önemli bir proses etkileyen faktördür. Tüm mekanik numune hazırlama teknikleri gibi, sonication ısı oluşturur. Ancak, örneklerin sıcaklığı iyi Hielscher Ultrasonik cihazlar kullanırken kontrol edilebilir. Biz bir sonda tipi ultrasonicator veya VialTweeter önceden analitik onları hazırlarken örneklerinizi sıcaklığını izlemek ve kontrol etmek için çeşitli seçenekler salıyoruz.

1. Örnek sıcaklığın izlenmesi: Tüm Hielscher dijital ultrasonik işlemciler akıllı bir yazılım ve takılabilir sıcaklık sensörü ile donatılmıştır. Sıcaklık sensörünü ultrasonik cihaza takın (örn. UP200Ht, UP200St, VialTweeter, UIP400MTP) ve numune tüplerinden birine sıcaklık sensörünün ucunu takın. Dijital renkli dokunmatik ekran sayesinde, ultrasonik işlemci nin menüsünde örnek sonication için belirli bir sıcaklık aralığı ayarlayabilirsiniz. Ultrasonicator otomatik olarak max sıcaklık ulaşıldığında duracak ve örnek sıcaklık ∆ belirlenen sıcaklığın daha düşük değerine kadar duraklatmak. Sonra sonication otomatik olarak tekrar başlar. Bu akıllı özellik ısıkaynaklı bozulmayı önler.
2. Ultrasonik çoklu örnek birim VialTweeter ile ilgili olarak, örnek tüpler tutun titanyum blok, önceden soğutulmuş olabilir. Titanyum blok önceden soğutmak için buzdolabı veya dondurucu içine VialTweeter blok (transdüser olmadan sadece sonotrode!) koyun numunesıcaklık artışı ertelemeye yardımcı olur. Mümkünse, numunenin kendisi de önceden soğutulabilir.
3. Sonication sırasında soğutmak için bir buz banyosu veya kuru buz kullanın. Sonication sırasında örnek tüp (ler) bir buz banyosu içine yerleştirin. VialTweeter için, kuru buz dolu sığ bir tepsi kullanın ve ısı hızla dağıtmak böylece kuru buz üzerinde VialTweeter yerleştirin.

Müşteriler dünya çapında Hielscher prob-ultrasonicators yanı sıra çok örnekli sonication birimleri VialTweeter ve UIP400MTP biyolojik, biyokimyasal, tıbbi ve klinik laboratuvarlarda günlük numune hazırlama çalışmaları için kullanın. Hielscher işlemcilerin akıllı yazılım ve sıcaklık kontrolü, sıcaklık güvenilir bir şekilde kontrol edilir ve ısıya bağlı numune bozulması önlenir. Hielscher ultrasonik çözümler ile Ultrasonik örnek hazırlama son derece güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar sunar!