Hielscher Ultrason Teknolojisi

ELISA Tahlilleri için Ultrasonik Örnek Hazırlık

ELISA gibi tahliller in-vitro tanı, hastalıkla ilgili protein tespiti ve kalite kontrolü (örn. gıda alerjenlerinin izlenmesi) için yaygın olarak kullanılmaktadır. Ultrasonik örnek hazırlama hücre lyse ve hücre içi proteinler, DNA, RNA ve organelleri izole etmek için hızlı, güvenilir ve tekrarlanabilir bir tekniktir. Hielscher Ultrasonics tek örnekler, birden fazla şişe yanı sıra mikrotiter plakalar ve 96-iyi plakalar uygun hazırlanması için çeşitli ultrasonik çözümler sunuyor.

ELISA – EnzimE Bağlı İmmünosorbent Assay

ELISA enzime bağlı immünosorbent tahlil anlamına gelir ve ligand bağlayıcı tahliller kategorisinde yaygın olarak kullanılan biyokimyasal analiz tekniğidir. ELISA'da, sıvı numune özel bağlama özelliklerine sahip sabit bir katı faza eklenir. Normalde, sabit katı faz iyi bir plaka veya ELISA plaka kaplama olarak uygulanır. Daha sonra, çeşitli sıvı reaktifler sırayla eklenir, kuluçkaya yatırılır ve yıkanır, böylece sonunda bir optik değişim (örneğin, enzimatik reaksiyon un çarpımı yla renk gelişimi) kuyudaki son sıvıda gerçekleşir. Optik değişim, analit miktarını nicel olarak adlandırılan “okuma". Kantitatif okuma için, iletilen ışığın yoğunluğunu algılamak ve ölçmek için bir spektrofotometre, florometre veya luminometre kullanılır. Algılama nın hassasiyeti, analitik reaksiyonlar sırasında sinyalin yükseltilmesinden etkilenir. Enzim reaksiyonları iyi araştırılmış ve güvenilir amplifikasyon süreçleri olduğundan, enzimler sinyal oluşturmak için kullanılır. Enzimler doğru niceleme izin vermek için sabit oranlarda algılama reaktifleri ile bağlantılıdır, hangi da adı açıklar "enzim bağlı" immünosorbent testi.
ELISA tahlilleri mikrotiter plakalarda / 96-kuyu plakalarında yapıldığı gibi, plaka bazlı tahlil tekniği olarak bilinir ve antikorların, peptidlerin, proteinlerin ve hormonların saptandırıp ölçülmesinde klinik in-vitro tanı, araştırma, ilaç geliştirme vb. gibi kullanılır.
ELISA tekniği tıpta, biyoteknolojide, bitki patolojisinde tanı aracı olarak sıklıkla kullanılmakta ve aynı zamanda birçok endüstride önemli bir kalite kontrol ölçümüdür.

Komple VialTweeter kurulumu: ultrasonik işlemcisinde VialTweeter sonotrot UP200St

Ultrasonik örnek hazırlık ünitesi VialTweeter ELISA tahlillerinden önce hücre lisisi ve protein ekstraksiyonu için kullanılır

Bilgi talebi





ELISA önce Ultrasonik Örnek Hazırlık

ELISA testi yapılmadan önce, numuneler hücre içi lisis ve hücre içi proteinlerin, DNA, RNA vb. ekstraksiyon gibi hazırlık adımlarını gerektirir. Ultrasonik hücre lisis ve protein izolasyon avantajı yüksek verimlilik, güvenilirlik ve tekrarlanabilirlik olduğunu. Tüm bu faktörler yüksek kaliteli tanı ve araştırma sonuçları elde etmek için önemlidir

ELISA öncesi Ultrasonik Lysis Avantajları

  • Homojen numune tedavisi
  • Tam lysis
  • Tam protein ekstraksiyonu (örn. antikorlar, DNA)
  • Hücre tipine en iyi adaptasyon
  • Herhangi bir örnek boyutu için
  • tekrar üretilebilir
  • Sıcaklık kontrollü
  • SD kartta otomatik veri protokolü

Pre-ELISA Ultrasonik Hücre Lisis Protokolü

liziz için UP200St insonifier Prob tipi

  • Hücre Kültürleri için: Ultrasonik hücre lisis önce, bir mikrosantrifüj 270 x g 5 dakika için santrifüj hücreleri. 30 - 100 μL RIPA arabelleğindeki aspirasyon ve hücreleri yeniden askıya alarak süpernatantı çıkarın. Sonra, 30 dakika buz üzerinde hücre pelet kuluçka.
  • Şimdi, hücre örneği ultrasonik lysis için hazır:
    Sonda tipi ultrasonicator kullanın (örn. UP200Ht S26d2 prob ile) veya ultrasonik çok örnek cihaz (örneğin 10 şişe veya mikrotiter plakalar için UIP400MPT eşzamanlı sonication için VialTweeter ) hazırlamak için gereken örneklerin miktarına bağlı olarak.
    Tek bir numunenin sonda tipi sonication için, 1.5 mL mikrosantrifüj tüpler hücreleri yerleştirin.
  • Ultrasonicator dijital menüsünde ultrasonik süresi, toplam enerji girişi, döngü modu ve / veya sıcaklık sınırları önceden ayarlayın. Bu son derece güvenilir sonication ve tekrarlanabilirlik sağlar.
  • Sonotrode inset ve ultrasonik cihazı açın. Ultrasonik sondanın mikro ucunu numunenin içinden yavaşça geçirerek örneği düzgün bir şekilde sonicate edin.
    Çoğu hücre için ultrasonik lysis 10 sn sonication 2 -4 döngüleri sonra tamamlanacaktır.
  • Sonication sonra, örnekten sonotrode kaldırın. Numuneler 5 dakika boyunca buz üzerinde kuluçkaya yatırılmalıdır. Sonra, 10.000 x g 20 dk için santrifüj enkaz pelet. Süpernatantları yeni bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın. Analitleri etiketleyin ve -20°C'de saklayın.
  • Ultrasonik sonotrode düzgün alkol veya sonicate alkol dolu bir beher ile silerek temizlenebilir, örneğin% 70 etanol. Titanyumdan yapılan tüm ultrasonik problar otoklavlanabilir.

Doku Homojenleri için:

  • Aşırı hemolizi kandan iyice çıkarmak için dokuyu buz gibi PBS (0.01M, pH=7.4) ile durulayın.
  • Dokutartın (böbrek, kalp, akciğer, dalak vb.) ve PBS'de homojenleştirilen küçük parçalara ayırın. Gerekli PBS hacmi dokunun ağırlığı ile ilgilidir. Başparmak bir kural olarak, doku 1g yaklaşık 9mL PBS gerektirir. PBS bazı proteaz inhibitörü eklemek için tavsiye edilir. (RIPA veya hipotonik lisis tampon proteaz ve fosfataz inhibitör kokteyl içeren alternatif olarak kullanılabilir.)
  • Doku büyüklüğüne bağlı olarak, kısa bir girdap tedavisi (yaklaşık 1-2 dk. 15 sn. bakliyat) doku ön tedavisinde yararlı olabilir.
  • Ultrasonicator'unuza s26d2 gibi bir mikro uç tonuyla. Bir buz banyosu nda doku ile örnek tüp yerleştirin.
  • Sonicate the sample with your ultrasonicator, e.g. UP200St (80% amplitude) for 1 min. in pulse mode (15sec on, 15sec pause). Keep the sample in the ice bath.
  • Homojenler daha sonra analiz için proteinzenginleştirmek için belirli havuzları (sitozolik, nükleer, mitokondriyal veya lisozomal) elde etmek için santrifüj edilir. 5000×g'de numuneyi 5 dakika santrifüj ederek, süpernatant alınır.
Sonotrode MTP-24-8-96 mikrotiter plakaları kuyularının sonication için sekiz ultrasonik problar vardır.

Sonotrode MTP-24-8-96 mikrotiter plakaları kuyularının sonication için sekiz ultrasonik problar vardır.

Sonication sırasında Güvenilir Sıcaklık Kontrolü

Sıcaklık, biyolojik numunelerin tedavisi için özellikle önemli olan, örneğin proteinlerin termal olarak bozulmasını önlemek için önemli bir proses etkileyen faktördür. Tüm mekanik numune hazırlama teknikleri gibi, sonication ısı oluşturur. Ancak, örneklerin sıcaklığı iyi Hielscher Ultrasonik cihazlar kullanırken kontrol edilebilir. Biz bir sonda tipi ultrasonicator veya VialTweeter önceden analitik onları hazırlarken örneklerinizi sıcaklığını izlemek ve kontrol etmek için çeşitli seçenekler salıyoruz.

  1. Örnek sıcaklığın izlenmesi: Tüm Hielscher dijital ultrasonik işlemciler akıllı bir yazılım ve takılabilir sıcaklık sensörü ile donatılmıştır. Sıcaklık sensörünü ultrasonik cihaza takın (örn. UP200Ht, UP200St, VialTweeter, UIP400MTP) ve numune tüplerinden birine sıcaklık sensörünün ucunu takın. Dijital renkli dokunmatik ekran sayesinde, ultrasonik işlemci nin menüsünde örnek sonication için belirli bir sıcaklık aralığı ayarlayabilirsiniz. Ultrasonicator otomatik olarak max sıcaklık ulaşıldığında duracak ve örnek sıcaklık ∆ belirlenen sıcaklığın daha düşük değerine kadar duraklatmak. Sonra sonication otomatik olarak tekrar başlar. Bu akıllı özellik ısıkaynaklı bozulmayı önler.
  2. Ultrasonik çoklu örnek birim VialTweeter ile ilgili olarak, örnek tüpler tutun titanyum blok, önceden soğutulmuş olabilir. Titanyum blok önceden soğutmak için buzdolabı veya dondurucu içine VialTweeter blok (transdüser olmadan sadece sonotrode!) koyun numunesıcaklık artışı ertelemeye yardımcı olur. Mümkünse, numunenin kendisi de önceden soğutulabilir.
  3. Sonication sırasında soğutmak için bir buz banyosu veya kuru buz kullanın. Sonication sırasında örnek tüp (ler) bir buz banyosu içine yerleştirin. VialTweeter için, kuru buz dolu sığ bir tepsi kullanın ve ısı hızla dağıtmak böylece kuru buz üzerinde VialTweeter yerleştirin.

Müşteriler dünya çapında Hielscher prob-ultrasonicators yanı sıra çok örnekli sonication birimleri VialTweeter ve UIP400MTP biyolojik, biyokimyasal, tıbbi ve klinik laboratuvarlarda günlük numune hazırlama çalışmaları için kullanın. Hielscher işlemcilerin akıllı yazılım ve sıcaklık kontrolü, sıcaklık güvenilir bir şekilde kontrol edilir ve ısıya bağlı numune bozulması önlenir. Hielscher ultrasonik çözümler ile Ultrasonik örnek hazırlama son derece güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar sunar!

Bizimle iletişime geçin! / Bize sor!

Daha fazla bilgi isteyin

Ultrasonik işlemciler, uygulamalar ve fiyat hakkında ek bilgi istemek için lütfen aşağıdaki formu kullanın. Biz sizinle süreci tartışmak ve size gereksinimlerinizi karşılayan bir ultrasonik sistem sunmak için mutlu olacak!









Lütfen dikkat Gizlilik Politikası.


Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

Hielscher Ultrasonik uygulamaları karıştırma, dağılım, emülsifikasyon ve laboratuvar, pilot ve endüstriyel ölçekte çıkarma için yüksek performanslı ultrasonik homojenler üretmektedir.

Edebiyat / Referanslar



Bilinmesi Gereken Gerçekler

ELISA Türleri

ELISA'nın çeşitli türleri vardır ve bu türleri işleme prensipleri ile ayırt edilir. Doğrudan ELISA, dolaylı ELISA, sandviç ELISA, rekabetçi ELISA ve ters ELISA olarak bilinirler. Aşağıda, size çeşitli ELISA türleri ve bunların ana özellikleri ve farklılıkları hakkında genel bir bakış sayılacağız.
ELISA nitel veya nicel bir biçimde çalıştırılabilir. Nitel sonuçlar basit bir pozitif veya negatif sonuç sağlarken, kantitatif ELISA'da numunenin optik yoğunluğu (OD) standart bir eğriyle karşılaştırılır ve bu genellikle hedef molekülün bilinen konsantrasyon çözeltisinin seri seyreltilmesidir.

Doğrudan ELISA

Doğrudan ELISA, sadece enzim etiketli primer antikorların kullanıldığı ve sekonder antikorların gerekli olmadığı Elisa'nın en basit titreşme şeklidir. Enzim etiketli primer antikor doğrudan hedefe, yani antijene bağlanır. Tamponlu antijen çözeltisi, şarj etkileşimleri yoluyla plastik yüzeye yapışan bir mikrotif plakanın (genellikle 96 kuyulu plakalar, ELISA plakaları) her kuyuya eklenir. Birincil antikora bağlı enzim substratı ile reaksiyona girdiğinde, spektrofotometre, florometre veya luminometre ile ölçülebilen görünür bir sinyal üretir.

Dolaylı ELISA

Dolaylı ELISA testi için hem primer antikor hem de ikincil antikor gereklidir. Ancak, doğrudan ELISA aksine, birincil antikor değil, ama ikincil antikor bir enzim ile etiketlenir. Antijen kuyu plakasına kadar hareketsiz hale getirilir ve birincil antikorla bağlanır. Daha sonra, enzim etiketli ikincil antikor primer antikor bağlanır. Son olarak, sekonder antikora bağlı enzim, tespit edilebilen gözle görülür bir sinyal üretmek için substratıyla reaksiyona girer.

Sandviç ELISA

Doğrudan ve dolaylı ELISA testlerinde antijen hareketsiz hale getirilir ve kuyu plakasının yüzeyine kaplanır, sandviç ELISA'da antikor ELISA plakasının plastik yüzeyine hareketsiz hale getirilir. Sandviç ELISA'daki hareketsiz antikorlar yakalama antikorları olarak bilinir. Ayrıca yakalama antikorları için, sandviç ELISA da sözde algılama antikorları gereklidir. Algılama antikorları etiketlenmemiş primer saptama antikorları ve enzim etiketli ikincil saptama antikorlarını içerir.
Adım adım, ilgi antijeni plakaya hareketsiz yakalanan antikora bağlanır. Daha sonra, birincil algılama antikor antijen bağlanır. Daha sonra, ikincil algılama antikor birincil algılama antikor bağlanır. Son reaksiyon adımında, enzim yüzeyi ile reaksiyona girarak optik olarak tespit edilebilen görünür bir sinyal üretir.

Rekabetçi ELISA

İnhibisyon ELISA olarak da bilinen rekabetçi ELISA, bir inhibitör antijen kullanımını içerdiğinden en karmaşık ELISA türüdür. Doğrudan, dolaylı ve sandviç ELISA olmak üzere üç formatın her biri rekabetçi ELISA formatına uyarlanabilir. Rekabetçi ELISA'da, inhibitör antijen ve ilgi antijeni primer antikora bağlanmak için yarıştır.
Rekabetçi ELISA için, etiketlenmemiş antikor antijeni, yani numunesi varlığında kuluçkaya yatırılır. Bu bağlı antikor / antijen kompleksleri sonra bir antijen kaplı iyi eklenir.
Plaka yıkanır, böylece bağlanmamış antikorlar çıkarılır. Rekabetçi ELISA, örnekte ne kadar çok antijen olduğu, daha fazla antijen-antikor komplekslerinin oluşması nedeniyle adını almıştır. Bu demektir ki, kuyudaki antijene bağlayabilmek için daha az bağlanmamış antikorlar vardır ve antijenler mevcut bir antikor için rekabet etmelidir. Birincil antikorla eşleşen ikincil bir antikor eklenir. Bu ikinci antikor enzime bağlı. Substrat eklendiğinde, kalan enzimler kromojenik veya floresan sinyal üretirler.
Bu noktada, sinyalin nihai doygunluğu önlemek için reaksiyon durdurulur.
Bazı rekabetçi ELISA kitleri enzime bağlı antikor yerine enzime bağlı bir antijen içerir. Etiketli antijen, örnek antijen (etiketsiz) ile birincil antikor bağlama bölgeleri için yarışrılır. Örnekte ne kadar az antijen olursa, kuyuda o kadar çok etiketlenmiş antijen tutulur ve sinyal o kadar güçlü hale gelen bir antijen dir.

Ters ELISA

Ters ELISA iyi plakalar kullanmaz, ancak antijenleri test sıvısında asılı bırakır. Ters ELISA testi antijen yoluyla bağlı antikor miktarını ölçer. Özellikle Batı Nil virüsü zarf proteinini ve virüse özgü antikorları nasıl bulabildiğini tespit etmek ve araştırmak için geliştirilmiştir.

ELISA için Kullanılan Enzimatik Marker

Aşağıdaki liste, elisa tahlillerinde kullanılan en yaygın enzimatik belirteçleri verir ve bu da tahlil sonuçlarının tamamlandıktan sonra ölçülmesine olanak sağlar.

  • OPD (o-fenilenediamin dihidroklorür) hrp tespit kehribar döner (Horseradish Peroxidase), genellikle konjuge protein olarak kullanılır.
  • TMB (3,3′,5,5′-tetrametilbenzidin) HRP tespit ederken mavi döner ve sülfürik veya fosforik asit ilavesi sonra sarı döner.
  • ABTS (2,2′-Azinobis [3-etilbenzothiazoline-6-sülfonik asit]-diamonyum tuzu) HRP tespit ederken yeşile döner.
  • PNPP (p-Nitrofenil Fosfat, Disodyum Tuzu) alkali fosfataz tespit ederken sarıya döner.