VialTweeter Sonicator kullanarak Alfa-Sinüklein Parçalanması
α-sinüklein fibrilleri ve şeritleri, çeşitli deneysel teknikler kullanılarak daha kolay analiz edilebilen daha küçük fibril parçacıkları ve hatta tek tek protein molekülleri oluşturmak için bilimsel araştırmalarda parçalanır. VialTweeter Sonicator, verimli ve güvenilir alfa-sinüklein parçalanması için en yaygın kullanılan ultrasonicators biridir.
Araştırmada α-Sinüklein
Alfa-sinüklein fibrilleri, Parkinson hastalığı gibi nörodejeneratif bozukluklar ve Lewy cisimcikli demans da dahil olmak üzere belirli demans formları ile güçlü bir şekilde ilişkili protein agregatlarıdır. Alfa-sinüklein fibrillerine odaklanan araştırmalar, hastalığın ilerlemesindeki rollerini anlamayı ve potansiyel terapötik müdahaleler geliştirmeyi amaçlamaktadır. Araştırmacılar, alfa-sinüklein fibrillerini daha küçük parçalara ayırarak, spesifik yapısal özelliklerini araştırabilirler. Örneğin, alfa-sinüklein fibrillerinin parçalanması, araştırmacıların proteinler, lipitler veya küçük moleküller gibi diğer moleküllerle etkileşimlerini araştırmalarını sağlar. Daha küçük parçalar üreterek, bu etkileşimli ortaklar için bağlanma bölgeleri ve afinite daha etkili bir şekilde araştırılabilir. Daha küçük α-Syn fribriller ve şeritler de değişmiş toksisite ve biyokimyasal etkiler gösterebilir. Bu nedenle, hızlı ve basit bir numune muamelesinde tekrarlanabilir sonuçlar üreten güvenilir ve verimli bir parçalama tekniği çok önemlidir.
Ultrasonik Alfa-Syn Parçalanması: VialTweeter sonikatörü, tam olarak aynı koşullar altında aynı anda 10 şişeye kadar sonikasyon yapan yerleşik ultrasonik numune hazırlama sistemidir. Programlanabilir ayarlar, aynı deneylerin basit ve hızlı bir şekilde yeniden çalıştırılmasına izin verir, bu da alfa-sinüklein fibril parçalanmasında son derece güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar verir.
VialTweeter sonikatör çoklu alfa-sinüklein örneklerinin eşzamanlı ultrasonik parçalanması için.
Sonikatör ile α-Sinüklein Numune Hazırlama
Alfa-sinüklein fibrillerini incelemek için bir yaklaşım, sonikasyon gibi teknikler kullanarak ekstraksiyonlarını ve parçalanmalarını içerir. Sonikasyon, protein agregatlarını bozmak ve parçalamak için yüksek yoğunluklu, düşük frekanslı ultrason dalgaları kullanan, daha küçük fibrillerin veya bireysel protein moleküllerinin salınmasına yol açan bir işlemdir. Sonikatör VialTweeter, bu amaçla α-sinüklein ile ilgili araştırma çalışmalarında yaygın olarak kullanılan bir cihazdır.
Çok sayıda araştırma çalışması, verimli ve güvenilir α-sinüklein fibril parçalanması için Hielscher VialTweeter'ı kullanan alfa-sinüklein fibrilleri sonikasyonunun kesin numune hazırlama protokollerini açıklamaktadır. Araştırmacılar, fibrilleri ultrasonik olarak parçalayarak ortaya çıkan ürünleri analiz edebilir ve yapılarını, toksisitelerini ve diğer moleküllerle etkileşimlerini inceleyebilirler. Bu araştırma, nörodejenerasyonun altında yatan mekanizmalar hakkında önemli bilgiler sağlar ve potansiyel olarak yeni terapötik hedefleri belirler. VialTweeter sonikatörünü kullanan iyi kurulmuş α-sinüklein sonikasyon protokolleri, güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar sağlar.
Üstteki resimler: parçalanmamış alfa-sinüklein fibrilleri
Alt görüntüler: VialTweeter sonicator ile ultrasonik olarak parçalanmış alfa-sinüklein fibrilleri
(çalışma ve görüntüler: ©Dieriks ve ark., 2022)
α-Sinüklein Fibrillerinin Ultrasonik Parçalanması – Protokol
Çok sayıda araştırmacı, tek tip α-sinüklein fibril fragmanları üretmek için tercih edilen parçalanma tekniği olarak VialTweeter sonikatörünü kullandığından, yerleşik protokoller kolayca mevcuttur. Aşağıda birkaç örnek parçalanma protokolü bulabilirsiniz.
ClearTau tohum hazırlama: ClearTau fibrilleri, dH2O'da 10 μM'ye seyreltildi ve VialTweeter ile sonikatör UP200St kullanılarak tüp içinde 1 s AÇIK, 1 s KAPALI döngü ile 50 s boyunca% 70 genlikte sonikleştirildi. Tohumlar elektron mikroskobu ile karakterize edildi.
ThS floresan ölçümü: ClearTau fibrilleri, dH2O'da 2.5 μM'ye seyreltildi ve VialTweeter ile UP200St kullanılarak tüp içinde 1 s AÇIK, 1 s KAPALI döngü ile 50 s boyunca% 70 genlikte sonikasyona tabi tutuldu. Kontrol olarak 2.5 μM tam uzunlukta Tau 4R2N monomeri kullanıldı. 100 μl reaksiyona, 100 μl ThS (10 μM) ilave edildi ve 1.25 μM'lik nihai protein konsantrasyonları elde edildi. Tek zamanlı nokta ThS floresansı, 445 nm'de uyarma ile FLUOstar Omega mikroplaka okuyucusuna yerleştirilmiş 96 iyi şeffaf alt plaka kullanılarak ölçüldü ve 485 nm'de emisyon kaydedildi.
(bkz. Limorenko ve diğerleri, 2023)
Sonikasyon kullanarak üniforma α-sinüklein uzunluğu: α-syn fibrillerin ve şeritlerin uzunluk heterojenliği, u genlik, 0.5 s darbelerde ayarlanmış bir VialTweeter'da 2 ml'lik Eppendorf tüplerinde buz üzerinde 20 dakika boyunca sonikasyon ile azaltıldı.
(bkz. Bousset ve diğerleri, 2013)
İnsan rekombinant monomerik WT veya S129A a-Syn ve ürettikleri fibriler polimorfların yanı sıra a-Syn 1-110'un kalite kontrolü gerçekleştirildi. Daha sonra, fibriller polimorflar, endositoz için uygun olan ortalama 42-52 nm büyüklüğünde fibriller parçacıklar oluşturmak için VialTweeter ultrasonicator'daki 2 mL Eppendorf tüplerinde 20 dakika boyunca sonikasyon ile parçalandı.
(bkz. Shrivastava ve diğerleri, 2020)
Beş fibriller α-Syn polimorfunun karakterizasyonu. (A) Negatif lekeli α-Syn fibriller polimorf fibrilleri, şeritleri, fibrilleri-91, fibrilleri-65 ve fibrilleri-110'un (üst şerit) ve VialTweeter (alt şerit) ile parçalanmadan önce ve sonra transmisyon elektron mikrografları gösterilir. (B) Parçalanmış fibriller polimorfların uzunluk dağılımı gösterilmiştir. Histogramların türetildiği fibriller düzeneklerin sayısı (n) belirtilmiştir.
(çalışma ve görüntüler: Shrivastava ve ark., 2020)
α-Syn fibrilleri, TEM analizi ile değerlendirildiği gibi ortalama boyutu 42-52 nm olan fibriler parçacıklar oluşturmak için bir VialTweeter'da 2 ml Eppendorf tüplerinde 20 dakika boyunca sonikasyon ile parçalandı.
(bkz. Negrini ve diğerleri, 2022)
Yeniden askıya alınan fibriller91 (PBS'de), hücre kültürlerine eklenmeden önce, Flakon Tweeter sonikatörü kullanılarak 2 mL Eppendorf tüplerinde 20 dakika boyunca sonikasyon yoluyla parçalandı, aliquoted, sıvı nitrojen içinde donduruldu ve -80 ̊C'de kullanıma kadar saklandı.
(bkz. Vajhøj ve diğerleri, 2021)
Çok kuyulu plakalarda alfa-sinüklein fibril parçalanması için sonikatör UIP400MTP.
α-Syn Parçalanması için VialTweeter ve Lab Sonicators
Hielscher Ultrasonics, dünya çapında son teknoloji ultrasonicators lider üreticisi olarak tanınmaktadır. Dünya çapında büyük araştırma laboratuvarlarında güvenilir ve kurulmuş olan ultrasonicators, kritik deneyleriniz için benzersiz kalite ve performans sunar.
Hielscher VialTweeter ve diğer herhangi bir Hielscher sonicator ile, tekrarlanabilir sonuçlar, kullanım kolaylığı ve sorunsuz çalışma için düşünceli bir şekilde tasarlandıkları için benzersiz bir kullanıcı konforu yaşayacaksınız. Otomatik veri kayıt özellikleriyle, ultrasonicator'larımız tekrarlanabilirlik ve hassasiyet için önemli verileri titizlikle kaydederken araştırmanıza odaklanabilirsiniz.
Güvenle tutarlı ve tekrarlanabilir sonuçlar elde edin!
Ultrasonicator'larımız Almanya'da tasarlanmış ve üretilmiştir. Her seferinde alfa-sinüklein fibril parçalanması gibi güvenilir ve doğru numune hazırlama sağlamak için Alman hassasiyeti ve en yüksek mühendislik kalitesi. Tutarsız sonuçlar konusunda endişelenmenize gerek yok - ultrason teknolojimiz, araştırmanızın bilimsel ilerlemenin ön saflarında yer almasını sağlar.
Ama hepsi bu kadar değil! Mükemmelliğe olan bağlılığımız ürünlerimizin ötesine uzanır. Olağanüstü müşteri hizmetlerimizle gurur duyuyoruz, sahip olabileceğiniz tüm soruları veya endişeleri ele almak için uzman desteği sağlıyoruz. Kendini işine adamış ekibimiz, araştırma yolculuğunuzun her adımında size yardımcı olmak için burada, ultrasonicator'larımızdan en iyi şekilde yararlanmanızı sağlamak.
Yenilik, güvenilirlik ve olağanüstü kullanıcı deneyimini seçin - alfa-sinüklein fibril parçalanması için VialTweeter gibi laboratuvar sonikatörlerimizi seçin. Halihazırda oluşturulmuş protokollerden yararlanın ve kritik çalışmaları için teknolojimize güvenen önde gelen araştırmacıların saflarına katılın. Araştırmanızı yükseltin ve son teknoloji ultrasonikatörlerimizle demans ve nörodejeneratif hastalık araştırmalarında yeni sınırları keşfedin.
- yüksek verim
- En son teknoloji
- güvenilirlik & sağlamlık
- Tekrarlanabilirlik
- Ayarlanabilir, hassas proses kontrolü
- herhangi bir hacim için
- Akıllı Yazılım
- Akıllı özellikler (örn. programlanabilir, veri protokolü, uzaktan kumanda)
- Kullanımı kolay ve güvenli
- Az bakım gerektirir
- CIP (yerinde temizlik)
Tasarım, İmalat ve Danışmanlık – Almanya'da Üretilen Kalite
Hielscher ultrasonicators en yüksek kalite ve tasarım standartları için iyi bilinir. Sağlamlık ve kolay kullanım, ultrasonicators'ımızın endüstriyel tesislere sorunsuz bir şekilde entegre edilmesini sağlar. Zorlu koşullar ve zorlu ortamlar Hielscher ultrasonicators tarafından kolayca ele alınır.
Hielscher Ultrasonics, ISO sertifikalı bir şirkettir ve en son teknoloji ve kullanıcı dostu özelliklere sahip yüksek performanslı ultrasonicators'a özel önem vermektedir. Tabii ki, Hielscher sonicators CE uyumludur ve UL, CSA ve RoHs gereksinimlerini karşılar.
Aşağıdaki tablo size laboratuvar boyutu ultrasonicators yaklaşık işleme kapasitesi hakkında bir gösterge vermektedir:
| Önerilen Cihaz | Numune Hacmi | Akış Oranı |
|---|---|---|
| UIP400MTP | Çok kuyulu / mikrotitre plakaları | n.a. |
| Ultrasonik CupHorn | Şişeler veya beher için CupHorn | n.a. |
| GDmini2 | ultrasonik mikro akış reaktörü | n.a. |
| VialTweeter | 0,5 - 1,5 mL | n.a. |
| UP100H | 1 - 500mL | 10 - 200mL/min |
| UP200Ht, UP400St | 10 - 2000mL | 20 - 400mL/min |
Bizimle İletişime Geçin! / Bize Sor!
VialTweeter (ŞişeTweeter) pre-analitik numune hazırlamanın bir aşaması olarak alfa-sinüklein fibrilini parçalamak için yaygın olarak kullanılır
Literatür / Referanslar
- Emil Dandanell Agerschou, Marie P. Schützmann, Nikolas Reppert, Michael M. Wördehoff, Hamed Shaykhalishahi, Alexander K. Buell, Wolfgang Hoyer (2021): β-Turn exchanges in the α-synuclein segment 44-TKEG-47 reveal high sequence fidelity requirements of amyloid fibril elongation. Biophysical Chemistry, Volume 269, 2021.
- Bousset, L., Pieri, L., Ruiz-Arlandis, G. et al. (2013): Structural and functional characterization of two alpha-synuclein strains. Nature Communications 4, 2575 (2013).
- Vajhøj, Charlott; Schmid, Benjamin; Alik, Ania; Melki, Ronald; Fog, Karina; Holst, Bjørn; Stummann, Tina (2021): Establishment of a human induced pluripotent stem cell neuronal model for identification of modulators of A53T α-synuclein levels and aggregation. PLOS ONE 16, 2021.
- Dieriks B.V.; Highet B.; Alik A.; Bellande T.; Stevenson T.J.; Low V.; Park T.I.; Correia J.; Schweder P.; Faull R.L.M.; Melki R.; Curtis M.A.; Dragunow M. (2022): Human pericytes degrade diverse α-synuclein aggregates. PLoS One, Nov 18;17(11), 2022.
- Amulya Nidhi Shrivastava, Luc Bousset, Marianne Renner, Virginie Redeker, Jimmy Savistchenko, Antoine Triller, Ronald Melki (2020): Differential Membrane Binding and Seeding of Distinct α-Synuclein Fibrillar Polymorphs. Biophysical Journal, Volume 118, Issue 6, 2020. 1301-1320.
- Negrini M, Tomasello G, Davidsson M, Fenyi A, Adant C, Hauser S, Espa E, Gubinelli F, Manfredsson FP, Melki R, Heuer A. (2022): Sequential or Simultaneous Injection of Preformed Fibrils and AAV Overexpression of Alpha-Synuclein Are Equipotent in Producing Relevant Pathology and Behavioral Deficits. Journal of Parkinsons Disease 12(4), 2022. 1133-1153.
- Limorenko G, Tatli M, Kolla R, Nazarov S, Weil MT, Schöndorf DC, Geist D, Reinhardt P, Ehrnhoefer DE, Stahlberg H, Gasparini L, Lashuel HA (2023): Fully co-factor-free ClearTau platform produces seeding-competent Tau fibrils for reconstructing pathological Tau aggregates. Nature Communications 4;14(1), July 2023.
Sıkça Sorulan Sorular
Alfa-sinüklein bir amiloid midir?
Evet, alfa-sinüklein amiloid benzeri fibriller oluşturabilir. Parkinson hastalığının ve diğer sinükleinopatilerin patolojik ayırt edici özelliği olan Lewy cisimciklerinin önemli bir bileşenidir. Agregasyonu, klasik amiloidlere benzer şekilde çekirdeklenmeye bağlı bir polimerizasyon sürecini takip eder.
Amiloid-Beta ve Alfa-Sinüklein Arasındaki Fark Nedir?
Amiloid-beta (Aβ) ve alfa-sinüklein (α-syn), nörodejeneratif hastalıklarda patolojik agregatlar oluşturan farklı proteinlerdir. Amiloid öncü proteininden (APP) türetilen Aβ, öncelikle Alzheimer hastalığı ile ilişkilidir ve hücre dışı plaklar oluşturur. Buna karşılık, α-syn, Parkinson hastalığı ve ilgili bozukluklarda hücre içi olarak toplanan presinaptik bir nöronal proteindir. Her ikisi de β yaprak açısından zengin amiloid yapıları sergilerken, dizileri, agregasyon yolları ve hastalığa özgü patolojileri bakımından farklılık gösterirler.
Amiloid Hangi Tür Proteindir?
Amiloid, çapraz β tabakalı bir yapıyı benimseyen ve çözünmeyen fibrillere agrega eden, yanlış katlanmış, fibriler bir proteindir. Bu proteinler tipik olarak, konformasyonel değişikliklere uğrayan ve kendi kendine toplanma ve birikmeye yol açan normal olarak çözünür öncülerden türetilir. Amiloidler, agregasyonlarının hücresel toksisiteye ve doku hasarına katkıda bulunduğu çeşitli nörodejeneratif ve sistemik hastalıklarla ilişkilidir. 96 oyuklu plaka sonikatörünün UIP400MTP araştırma amacıyla standartlaştırılmış amiloid fibrillerinin hızla oluşturulmasına nasıl yardımcı olduğunu öğrenin!
Amiloidler Hangi Hastalıklara Neden Olur?
Amiloidler, topluca amiloidoz olarak adlandırılan çok sayıda hastalıkta rol oynar. Bunlar şunları içerir:
- Nörodejeneratif hastalıklar: Alzheimer hastalığı (Aβ), Parkinson hastalığı (α-syn), Huntington hastalığı (mutant huntingtin) ve prion hastalıkları (PrPSc). (Yüksek verimli prion tespitinin sonikasyon destekli PMCA'sı hakkında daha fazla bilgi edinin!)
- Sistemik amiloidozlar: Hafif zincirli (AL) amiloidoz, transtiretin (ATTR) amiloidoz ve ikincil (AA) amiloidoz.
- Lokalize amiloidozlar: Tip 2 diyabette adacık amiloid polipeptidi (IAPP).
Amiloid ile ilişkili her hastalık, hücresel disfonksiyona ve toksisiteye yol açan protein yanlış katlanması, agregasyonu ve birikimi ile karakterizedir.
Hielscher Ultrasonics, yüksek performanslı ultrasonik homojenizatörler üretmektedir. laboratuvar Hedef endüstriyel boyut.