VialTweeter Sonicator kullanarak Alfa-Sinüklein Parçalanması
α-sinüklein fibrilleri ve şeritleri, çeşitli deneysel teknikler kullanılarak daha kolay analiz edilebilen daha küçük fibril parçacıkları veya hatta bireysel protein molekülleri üretmek için bilimsel araştırmalarda parçalanır. VialTweeter Sonicator verimli ve güvenilir alfa-sinüklein parçalanması için en yaygın kullanılan ultrasonicators biridir.
Araştırmada α-Sinüklein
Alfa-sinüklein fibrilleri, Parkinson hastalığı gibi nörodejeneratif bozukluklarla ve Lewy cisimcikli demans da dahil olmak üzere bazı demans formlarıyla güçlü bir şekilde ilişkili protein agregalarıdır. Alfa-sinüklein fibrillerine odaklanan araştırmalar, hastalık progresyonundaki rollerini anlamayı ve potansiyel terapötik müdahaleler geliştirmeyi amaçlamaktadır. Alfa-sinüklein fibrillerini daha küçük parçalara ayırarak, araştırmacılar spesifik yapısal özelliklerini araştırabilirler. Örneğin, alfa-sinüklein fibrillerinin parçalanması, araştırmacıların proteinler, lipitler veya küçük moleküller gibi diğer moleküllerle etkileşimlerini araştırmalarını sağlar. Daha küçük parçalar üreterek, bu etkileşimli ortaklar için bağlanma bölgeleri ve afinite daha etkili bir şekilde araştırılabilir. Daha küçük α-Syn frizrilleri ve şeritleri de değişmiş toksisite ve biyokimyasal etkiler gösterebilir. Bu nedenle, hızlı ve basit bir numune işleminde tekrarlanabilir sonuçlar veren güvenilir ve verimli bir parçalanma tekniği çok önemlidir.
Ultrasonik Alfa-Syn Parçalanması: VialTweeter sonikatör, tam olarak aynı koşullar altında aynı anda 10 şişeye kadar sonikleştiren kurulu ultrasonik numune hazırlama sistemidir. Programlanabilir ayarlar, aynı deneylerin basit ve hızlı bir şekilde yeniden çalıştırılmasına izin verir, bu da alfa-sinüklein fibril parçalanmasında son derece güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar verir.
VialTweeter sonikatör çoklu alfa-sinüklein örneklerinin eşzamanlı ultrasonik parçalanması için.
α-Synuclein Bir Sonicator ile Numune Hazırlama
Alfa-sinüklein fibrillerini incelemeye yönelik bir yaklaşım, sonikasyon gibi teknikleri kullanarak ekstraksiyonlarını ve parçalanmalarını içerir. Sonikasyon, protein agregalarını bozmak ve parçalamak için yüksek yoğunluklu, düşük frekanslı ultrason dalgaları kullanan ve daha küçük fibrillerin veya bireysel protein moleküllerinin salınmasına yol açan bir işlemdir. Sonikatör VialTweeter, bu amaçla α-sinüklein ile ilgili araştırma çalışmalarında yaygın olarak kullanılan bir cihazdır.
Çok sayıda araştırma çalışması, verimli ve güvenilir α-sinüklein fibril parçalanması için Hielscher VialTweeter'ı kullanan alfa-sinüklein fibrillerin sonikasyonunun hassas numune hazırlama protokollerini açıklamaktadır. Fibrilleri ultrasonik olarak parçalayarak, araştırmacılar ortaya çıkan ürünleri analiz edebilir ve yapılarını, toksisitelerini ve diğer moleküllerle etkileşimlerini inceleyebilirler. Bu araştırma, nörodejenerasyonun altında yatan mekanizmalar hakkında önemli bilgiler sağlamakta ve potansiyel olarak yeni terapötik hedefleri tanımlamaktadır. VialTweeter sonikatörünü kullanan iyi kurulmuş α-sinüklein sonikasyon protokolleri güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar sağlar.
Üst resimler: parçalanmamış alfa-sinüklein fibrilleri
Düşük görüntüler: VialTweeter sonicator ile ultrasonik olarak parçalanmış alfa-sinüklein fibriller
(çalışma ve görüntüler: ©Dieriks ve ark., 2022)
α-Sinüklein Fibrillerin Ultrasonik Parçalanması – Protokol
Çok sayıda araştırmacı VialTweeter sonikatörünü üniform α-sinüklein fibril fragmanları üretmek için tercih edilen parçalanma tekniği olarak kullandığından, yerleşik protokoller kolayca mevcuttur. Aşağıda birkaç örnek parçalanma protokolü bulabilirsiniz.
ClearTau tohum hazırlama: ClearTau fibrilleri dH2O'da 10 μM'ye seyreltildi ve VialTweeter ile sonicator UP200St kullanılarak tüp içinde 1 s AÇIK 1 s KAPALI döngü ile 50 s için% 70 genlikte sonikleştirildi. Tohumlar elektron mikroskobu ile karakterize edildi.
ThS floresan ölçümü: ClearTau fibrilleri dH2O'da 2.5 μM'ye seyreltildi ve VialTweeter ile UP200St kullanılarak tüp içinde 1 s AÇIK 1 s KAPALI döngü ile 50 s için% 70 genlikte sonikleştirildi. Kontrol olarak 2.5 μM tam uzunlukta Tau 4R2N monomer kullanıldı. 100 μl reaksiyonuna, 100 μl ThS (10 μM) ilave edildi ve 1.25 μM'lik nihai protein konsantrasyonları elde edildi. Tek seferlik nokta ThS floresansı, FLUOstar Omega mikroplaka okuyucuda 445 nm'de uyarma ve 485 nm'de emisyon ile kurulan 96 kuyu berrak alt plaka kullanılarak ölçülmüştür.
(Bkz. Limorenko ve ark., 2023)
Sonikasyon kullanarak üniform α-sinüklein uzunluğu: α-syn fibrillerin ve şeritlerin uzunluk heterojenliği,% 75 genlik, 0.5 s darbelerde ayarlanmış bir VialTweeter'da 2 ml'lik Eppendorf tüplerinde buz üzerinde 20 dakika boyunca sonikasyon ile azaltılmıştır.
(bkz. Bousset ve ark., 2013)
İnsan rekombinant monomerik WT veya S129A a-Syn ve ürettikleri fibriller polimorfların yanı sıra a-Syn 1-110'un kalite kontrolü gerçekleştirildi. Daha sonra, fibriller polimorflar, endositoz için uygun olan ortalama 42-52 nm boyutunda fibriller parçacıklar üretmek için VialTweeter ultrasonicator'daki 2-mL Eppendorf tüplerinde 20 dakika boyunca sonikasyon ile parçalandı.
(Bkz. Shrivastava ve ark., 2020)
Beş fibriller α-Syn polimorfunun karakterizasyonu. (A) Negatif boyanmış α-Syn fibriller polimorflarının transmisyon elektron mikrografileri fibriller, şeritler, fibriller-91, fibriller-65 ve fibriller-110'un VialTweeter (alt şerit) ile parçalanmadan önce (üst şerit) ve parçalanmadan sonra gösterilir. (B) Parçalanmış fibriller polimorfların uzunluk dağılımı gösterilir. Histogramların türetildiği fibriller montajların sayısı (n) belirtilir.
(çalışma ve resimler: Shrivastava ve ark., 2020)
α-Syn fibrilleri, TEM analizi ile değerlendirildiği gibi ortalama 42-52 nm boyutunda fibriller parçacıklar üretmek için bir VialTweeter'daki 2 ml Eppendorf tüplerinde 20 dakika boyunca sonikasyon ile parçalandı.
(Bkz. Negrini ve ark., 2022)
Yeniden askıya alınan fibriller91 (PBS'de), Flakon Tweeter sonikatör kullanılarak 2 mL Eppendorf tüplerinde 20 dakika boyunca sonikasyon ile hücre kültürlerine eklenmeden önce parçalandı, aliquoted, flaş sıvı azotta dondurulmuş ve -80 ̊C'de kullanıma kadar saklanmıştır.
(Bkz. Vajhøj ve ark., 2021)
Çok kuyucuklu plakalarda alfa-sinüklein fibril parçalanması için Sonicator UIP400MTP.
α-Syn Parçalanması için VialTweeter ve Lab Sonikatörleri
Hielscher Ultrasonics, dünya çapında son teknoloji ultrasonicators lider üreticisi olarak tanınmaktadır. Güvenilir ve dünya çapında büyük araştırma laboratuvarlarında kurulmuş, ultrasonicators kritik deneyleriniz için eşsiz kalite ve performans sunuyoruz.
Hielscher VialTweeter ve diğer Hielscher sonicator ile, tekrarlanabilir sonuçlar, kullanım kolaylığı ve sorunsuz çalışma için düşünceli bir şekilde tasarlandıkları için benzersiz kullanıcı konforunu yaşayacaksınız. Otomatik veri kayıt özellikleri ile, ultrasonicators titizlikle tekrarlanabilirlik ve hassasiyet için önemli verileri kaydederken araştırmanıza odaklanabilirsiniz.
Güvenle tutarlı ve tekrarlanabilir sonuçlar elde edin!
Ultrasonicators tasarlanmış ve Almanya'da üretilmiştir. Her seferinde alfa-sinüklein fibril parçalanması gibi güvenilir ve doğru numune hazırlığı sağlamak için Alman hassasiyeti ve en yüksek mühendislik kalitesi. Artık tutarsız sonuçlar hakkında endişelenmenize gerek yok - ultrason teknolojimiz araştırmanızın bilimsel ilerlemenin ön saflarında kalmasını sağlar.
Ama hepsi bu kadar değil! Mükemmelliğe olan bağlılığımız ürünlerimizin ötesine geçmektedir. Sahip olabileceğiniz her türlü soru veya endişeyi ele almak için uzman desteği sağlayan olağanüstü müşteri hizmetlerimizle gurur duyuyoruz. Özel ekibimiz, araştırma yolculuğunuzun her adımında size yardımcı olmak için buradadır ve ultrasonicator'larımızdan en iyi şekilde yararlanmanızı sağlar.
Yeniliği, güvenilirliği ve olağanüstü kullanıcı deneyimini seçin - alfa-sinüklein fibril parçalanması için VialTweeter gibi laboratuvar sonikatörlerimizi seçin. Halihazırda oluşturulmuş protokollerden yararlanın ve kritik çalışmaları için teknolojimize güvenen önde gelen araştırmacıların saflarına katılın. Araştırmanızı yükseltin ve son teknoloji ultrasonicators ile demans ve nörodejeneratif hastalık araştırmalarında yeni sınırlar keşfedin.
- yüksek verim
- Son teknoloji
- güvenilirlik & sağlamlık
- Tekrarlanabilirlik
- Ayarlanabilir, hassas proses kontrolü
- herhangi bir hacim için
- akıllı yazılım
- Akıllı özellikler (örneğin, programlanabilir, veri protokolü, uzaktan kumanda)
- Kullanımı Kolay ve Güvenli
- Düşük bakım
- CIP (yerinde temizlik)
Tasarım, İmalat ve Danışmanlık – Almanya'da Üretilen Kalite
Hielscher ultrasonicators iyi onların en yüksek kalite ve tasarım standartları için bilinir. Sağlamlık ve kolay kullanım, ultrasonicator'larımızın endüstriyel tesislere sorunsuz entegrasyonunu sağlar. Zorlu koşullar ve zorlu ortamlar kolayca Hielscher ultrasonicators tarafından ele alınır.
Hielscher Ultrasonics ISO sertifikalı bir şirkettir ve state-of-the-art teknoloji ve kullanıcı dostu özelliğine sahip yüksek performanslı ultrasonicators üzerinde özel önem koymak. Tabii ki, Hielscher sonicators CE uyumludur ve UL, CSA ve RoHs gereksinimlerini karşılar.
Aşağıdaki tablo size laboratuvar boyutundaki ultrasonicator'larımızın yaklaşık işleme kapasitesinin bir göstergesini verir:
| Önerilen Cihaz | Numune Hacmi | Akış Oranı |
|---|---|---|
| UIP400MTP | çok kuyulu / mikrotitre plakaları | n.a. |
| ultrasonik cuphorn | CupHorn şişeler veya beher için | n.a. |
| GDmini2 | ultrasonik mikro akış reaktörü | n.a. |
| VialTweeter | 0,5 - 1,5 mL | n.a. |
| UP100H | 1 - 500mL | 10 - 200mL/min |
| UP200Ht, UP400St | 10 - 2000mL | 20 - 400mL/min |
Bizimle iletişime geçin! / Bize sor!
The VialTweeter Alfa-sinüklein fibrilini analitik öncesi numune hazırlama aşaması olarak parçalamak için yaygın olarak kullanılır
Edebiyat / Referanslar
- Emil Dandanell Agerschou, Marie P. Schützmann, Nikolas Reppert, Michael M. Wördehoff, Hamed Shaykhalishahi, Alexander K. Buell, Wolfgang Hoyer (2021): β-Turn exchanges in the α-synuclein segment 44-TKEG-47 reveal high sequence fidelity requirements of amyloid fibril elongation. Biophysical Chemistry, Volume 269, 2021.
- Bousset, L., Pieri, L., Ruiz-Arlandis, G. et al. (2013): Structural and functional characterization of two alpha-synuclein strains. Nature Communications 4, 2575 (2013).
- Vajhøj, Charlott; Schmid, Benjamin; Alik, Ania; Melki, Ronald; Fog, Karina; Holst, Bjørn; Stummann, Tina (2021): Establishment of a human induced pluripotent stem cell neuronal model for identification of modulators of A53T α-synuclein levels and aggregation. PLOS ONE 16, 2021.
- Dieriks B.V.; Highet B.; Alik A.; Bellande T.; Stevenson T.J.; Low V.; Park T.I.; Correia J.; Schweder P.; Faull R.L.M.; Melki R.; Curtis M.A.; Dragunow M. (2022): Human pericytes degrade diverse α-synuclein aggregates. PLoS One, Nov 18;17(11), 2022.
- Amulya Nidhi Shrivastava, Luc Bousset, Marianne Renner, Virginie Redeker, Jimmy Savistchenko, Antoine Triller, Ronald Melki (2020): Differential Membrane Binding and Seeding of Distinct α-Synuclein Fibrillar Polymorphs. Biophysical Journal, Volume 118, Issue 6, 2020. 1301-1320.
- Negrini M, Tomasello G, Davidsson M, Fenyi A, Adant C, Hauser S, Espa E, Gubinelli F, Manfredsson FP, Melki R, Heuer A. (2022): Sequential or Simultaneous Injection of Preformed Fibrils and AAV Overexpression of Alpha-Synuclein Are Equipotent in Producing Relevant Pathology and Behavioral Deficits. Journal of Parkinsons Disease 12(4), 2022. 1133-1153.
- Limorenko G, Tatli M, Kolla R, Nazarov S, Weil MT, Schöndorf DC, Geist D, Reinhardt P, Ehrnhoefer DE, Stahlberg H, Gasparini L, Lashuel HA (2023): Fully co-factor-free ClearTau platform produces seeding-competent Tau fibrils for reconstructing pathological Tau aggregates. Nature Communications 4;14(1), July 2023.
Hielscher Ultrasonics yüksek performanslı ultrasonik homojenizatörler üretir laboratuvar için endüstriyel boyut.