Preparação da amostra com o VialTweeter ultrassônico

Preparação ultra-sônica da amostra

A ultrassonografia é uma técnica comum de tratamento amostral, a fim de preparar a amostra para análises como reação em cadeia de polímeros (PCR), Manchas Ocidentais, ensaios, sequenciamento molecular, cromatografia etc. A ultrassônica é uma técnica amplamente utilizada em laboratórios para tratar amostras pré-analiticamente. Uma grande vantagem da sônica é que o princípio de trabalho do ultrassom é baseado em forças puramente mecânicas. A lise ultrassônica e a interrupção celular são alcançadas por forças de cisalhamento sonomecânico, o que dá à ultrassonização a vantagem de que os solventes usados para extração de proteínas podem ser usados também durante a lise. Disruptores de células ultrassônicas como o VialTweeter quebram as paredes/membranas celulares e promovem a transferência de massa entre o interior celular e o solvente. Assim, o analito (por exemplo, DNA, RNA, proteínas, organelas etc.) são eficientemente transferidos da matriz celular para o solvente. Isso significa que as etapas de saciedação e extração se sobrepõem ao processo de ruptura celular ultrassônica, o que torna a lise ultrassônica muito eficaz. Além disso, a preparação da amostra ultrassônica não requer detergentes e outros reagentes de lise, que podem alterar e destruir a estrutura do lysate e é conhecida pelos problemas subsequentes com a purificação. Outro método de lise, a interrupção enzimática requer longos tempos de incubação e proporciona resultados muitas vezes não reprodutíveis. A preparação da amostra ultrassônica supera problemas comuns na preparação da amostra, como homogeneização de tecidos, ruptura celular, lise, extração de proteínas e solubilização de lise. Uma vez que a intensidade do tratamento ultrassônico pode ser exatamente controlada e ajustada à amostra biológica, a degradação e a perda amostral são evitadas. Temperatura da amostra monitorada e controlada automaticamente, modo de pulso e duração da sônica garantem ótimos resultados.

O VialTweeter é especialmente conveniente para o trabalho laboratorial que requer a preparação simultânea de múltiplas amostras sob as mesmas condições. O VialTweeter é um sonotrode de bloco ultrassônico que pode conter até 10 frascos (por exemplo, Eppendorf, centriguge, tubos NUNC, crio-frascos) e sonica-os intensamente sob condições precisamente controladas. Uma vez que a energia ultrassônica é acoplado através das paredes dos frascos no meio amostral, os frascos mantêm-se fechados durante o tratamento. Assim, a perda de amostras e a contaminação cruzada são completamente evitadas.

Frascos e tubos que se encaixam no FrascoLweeter

O VialTweeter é adequado para conter 10 tubos cônicos ou de fundo redondo comuns, como Eppendorf, centrífuga, crio-frascos e vários tipos de frascos NUNC, mas os orifícios podem ser personalizados para outros tamanhos de frasco e tubo a pedido. Por favor, deixe-nos saber que tipo de tubos de ensaio você quer usar para que possamos modificar seu VialTweeter de acordo. Para tubos de teste maiores, como tubos Falcon e outros recipientes de teste, béquers e vasos, o VialPress é uma solução conveniente.

O VialTweeter com VialPress

Embora o vialTweeter em si com seus 10 tubos furos já seja um dispositivo ultrassônico único e altamente funcional, o complemento do VialPress torna o VialTweeter ainda mais versátil e flexível para operação. O VialPress é um acessório para o VialTweeter que consiste em uma barra de fixação que permite fixar tubos de amostra maiores, como tubos Falcon ou outros béquers de teste de pequeno a médio porte para a frente do VialTweeter. A imagem à esquerda mostra o VialTweeter segurando 10 frascos Eppendorf no bloco, enquanto o VialPress fixa um tubo de ensaio maior à frente para sônicação. O VialPress é capaz de conter até 5 tubos de ensaio maiores para sônicação intensa.

Protocolos de preparação de amostras de frascos

O VialTweeter é amplamente utilizado para sonicar amostras biológicas. Antes da análise, as amostras devem ser preparadas para análises bioquímicas ou biofísicas e ensaios, por exemplo, por lise, homogeneização tecidual, extração de proteínas, tesoura de DNA/RNA, desgaseamento etc. O VialTweeter cumpre esses processos ultrassônicos de forma confiável e entrega resultados reprodutíveis. Uma aplicação comum do VialTweeter é a ruptura lise/células de tecidos mamíferos (humanos e animais), bem como células bacterianas e partículas virais. Amostras biológicas tratadas com sucesso por VialTweeter incluem células epiteliais pulmonares humanas, células-tronco hematopoiéticas, células de leucemia mielóide, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus anthracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Estreptococo pyogenes, Caulobacter crescentus, Pneumonia de mycoplasma, mycobacteria / Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) e muitas outras células bacterianas, botânicas e microbianas.
Abaixo, você pode encontrar alguns protocolos selecionados com o VialTweeter.

E.coli Lysis com VialTweeter para determinação de glutathione in-vivo

A bactéria Escherichia coli da cepa MG1655 foi cultivada em MOPS médio mínimo em um volume total de 200ml até que um A600 de 0,5 foi atingido. A cultura foi dividida em culturas de 50 ml para tratamento de estresse. Após 15 minutos de incubação com a totalidade de 0,79 mM, 1 mM de diamida ou sulfóxido de dimetil (controle), as células foram colhidas a 4.000g a 4°C por 10 minutos. As células foram lavadas duas vezes com tampão KPE antes da ressuspensão de pelotas em 700μl de tampão KPE. Para a desproteína, 300μl de ácido sulfosalicylic de 10% (w/v) foram adicionados antes da interrupção das células por ultrassônica (3 x 1 min; Frascotweeter ultrasonicador). Os supernacantes foram coletados após centrifugação (30 min, 13.000g, 4°C). As concentrações de ácido sulfosalicílico foram reduzidas para 1% com a adição de 3 volumes de tampão KPE. Foram realizadas medições de glutationa total e GSSG conforme descrito acima. As concentrações de glutationa celular foram calculadas com base em um volume de células E. coli de 6,7×10-15 litros e uma densidade celular de A600 0,5 (equivalente a 1×108 células ml-1 cultura). As concentrações de GSH foram calculadas por subtração de 2[GSSG] da glutationa total. (Müller et al. 2016)

Lysis celular com VialTweeter antes de espectrometria atômica de absorção atômica do forno de grafite

Bacillus subtilis 168 (trpC2) foram expostos a 15 minutos de estresse antibiótico, em seguida, as células foram colhidas a 3.320 x g, lavadas cinco vezes com 100 mM Tris/1 mM EDTA, pH 7.5, resuspended em 10 mM Tris, pH 7.5 e interrompida por ultrassônica em um instrumento Hielscher VialTweeter. (Wenzel et al. 2014)

Preparação da amostra de frascos antes da espectrometria de massa

As pelotas de células liofilizadas de células-tronco􏰀/progenitoras hematopoiéticas humanas foram resuspended em 10μ􏰇l (200μl para a preparação a granel HEK293 para a série de diluição de peptídeos) de 8 M de ureia em carbonato de hidrogênio de amônio de 100 mM e lysed auxiliado pela sônica com o Hielscher VialTweeter a uma amplitude de 60%, um ciclo de 60% e uma duração de 20 vezes por três vezes com resfriamento intermediário no gelo. (Amon et al. 2019)

Protocolos de preparação de amostras usando o FrascoPress

Alface fresca (Lactuca sativa) foi homogeneizada em tampão HEPES de 0,5 M (pH 8, KOH ajustado) numa proporção de 1 g de planta (peso fresco) a 200, 100, 50 ou 20 mL de solução tampão. A razão entre massa de plantas e volume de solução tampão foi variada para manter o volume total homogeneado entre 3,5 e 12 mL. A razão entre massa de plantas e volume de solução tampão foi variada para manter o volume total homogeneizado entre 3,5 e 12 mL, permitindo a homogeneização com a sonda. Homogenates então foi submetido a ultrassônica indireta usando um UP200St com VialTweeter equipado com VialPress 200xt (Hielscher Ultrasonics GmbH, Alemanha) por 3 min (80% de pulso e 100% de potência). O uso deste dispositivo evitou contaminação. (Laughton et al. 2019)

Controle de temperatura confiável durante a sonicação com o VialTweeter

A temperatura é um fator crucial que influencia o processo que é especialmente importante para o tratamento de amostras biológicas. Como todas as técnicas mecânicas de preparação de amostras, a sônica cria calor. No entanto, a temperatura das amostras pode ser bem controlada ao usar o VialTweeter. Apresentamos várias opções para monitorar e controlar a temperatura de suas amostras enquanto as preparamos com o VialTweeter e o VialPress para análise.

1. Monitorando a temperatura da amostra: O processador ultrassônico UP200St, que dirige o VialTweeter, é equipado com um software inteligente e um sensor de temperatura plugável. Conecte o sensor de temperatura no UP200St e insira a ponta do sensor de temperatura em um dos tubos de amostra. Através do touch-display colorido digital, você pode definir no menu do UP200St uma faixa de temperatura específica para sua sônica amostra. O ultrassonicador pára automaticamente quando a temperatura máxima for atingida e pausará até que a temperatura da amostra seja reduzida ao menor valor da temperatura definida ∆. Em seguida, a sônica começa automaticamente novamente. Este recurso inteligente evita a degradação induzida pelo calor.
2. O bloco VialTweeter pode ser pré-refrigerado. Coloque o bloco Deserção (apenas o sonotrodo sem transdutor!) na geladeira ou no congelador para pré-resfriar o bloco de titânio ajuda a adiar o aumento da temperatura na amostra. Se possível, a amostra em si pode ser pré-resfriada também.
3. Use gelo seco para esfriar durante a sônicação. Use uma bandeja rasa cheia de gelo seco e coloque o Frascotweeter no gelo seco para que o calor possa se dissipar rapidamente.

Os clientes em todo o mundo usam o VialTweeter e o VialPress para seu trabalho diário de preparação de amostras em laboratórios biológicos, bioquímicos, médicos e clínicos. O software inteligente e o controle de temperatura do processador UP200St, a temperatura é confiável e a degradação da amostra induzida pelo calor evitada. A preparação de amostras ultrassônicas com o VialTweeter e o VialPress oferece resultados altamente confiáveis e reprodutíveis!

Detalhes Técnicos do VialTweeter

O VialTweeter é um sonotrode de bloco feito de titânio que pode conter até 10 frascos nos orifícios dentro do bloco. Além disso, até 5 tubos de ensaio maiores podem ser fixados na frente do VialTweeter usando o VialPress. O VialTweeter é tão projetado que a energia de ultrassônica é distribuída uniformemente em cada frasco inserido para garantir resultados de sônica confiável e uniforme. Um pequeno pivô ajusta o sonotrode VialTweeter para o solo irregular e alinha os tubos de ensaio verticalmente.

Vantagens da VialTweeter em resumo

• sonicação intensa de até 10 frascos simultaneamente
• Sonication indireto na intensidade ultra-sônica elevada através da parede da embarcação na amostra
• sonicao indirecta evita contaminação cruzada e a perda de amostra
• Resultados reprodutíveis devido à amplitude ajustável e controlável do sonication
• O vialpress permite que você proceda tubos maiores
• Amplitude ajustável de 20 a 100%
• Modo de pulso ajustável de 0 a 100%
• autoclavável

O VialTweeter é alimentado pelo UP200St, um processador ultrassônico poderoso de 200 watts. O UP200St é equipado com um software inteligente que permite o controle preciso sobre todos os parâmetros importantes do processo ultrassônico, como amplitude, tempo de sônica, pulsação e temperatura. Isso faz do VialTweeter uma ferramenta confiável para resultados de processos reprodutíveis bem-sucedidos em laboratórios biológicos e bioquímicos.
A amplitude pode ser ajustada entre 20 e 100% e permite assim adaptar a intensidade ultrassônica à sua amostra. Por exemplo, a cisalhamento e fragmentação do DNA e do RNA requer uma amplitude mais branda para evitar a produção de fragmentos de DNA muito pequenos, a homogeneização tecidual do cérebro do camundongo precisa de sônica de alta intensidade. Escolha a amplitude ideal, intensidade e duração da sônica através do menu inteligente e intuitivo no processador UP200St. O menu e as configurações podem ser facilmente acessados e operados através de tela sensível ao toque colorida. Nas configurações você pode pré-definir parâmetros de sônica, como amplitude, pulsação/ modo ciclo, duração da sônicação, entrada total de energia e limites de temperatura. Na pesquisa e produção, a repetibilidade dos ensaios e resultados dos testes é crucial. Isso significa que o registro preciso das condições do processo e os protocolos de sônica são totalmente importantes. O protocolo automático de dados grava todos os dados de sônica em um arquivo CSV em um cartão SD integrado para que você possa facilmente verificar e comparar várias corridas de sônica. Todos os dados do processo ultrassônico podem ser facilmente acessados e compartilhados como arquivo CSV.
Hielscher Ultrasonics se esforça para fornecer tecnologia avançada para facilitar e melhorar seu trabalho de pesquisa!