Fragmentação de alfa-sinucleína usando o VialTweeter Sonicator

Fibrilas e fitas de α-sinucleína são fragmentadas em pesquisas científicas para gerar fragmentos menores de fibrilas ou mesmo moléculas individuais de proteínas, que podem ser mais facilmente analisadas usando várias técnicas experimentais. O VialTweeter Sonicator é um dos ultrasonicators mais comumente usados para fragmentação eficiente e confiável de alfa-sinucleína.

α-Sinucleína em Pesquisa

VialTweeter para o simultâneo de múltiplas amostras para a fragmentação de fibrilas de alfa-sinucleína sob exatamente as mesmas condições.As fibrilas alfa-sinucleínas são agregados proteicos que estão fortemente associados a doenças neurodegenerativas, como a doença de Parkinson e certas formas de demência, incluindo demência com corpos de Lewy. A pesquisa focada em fibrilas de alfa-sinucleína visa compreender seu papel na progressão da doença e desenvolver potenciais intervenções terapêuticas. Ao quebrar as fibrilas de alfa-sinucleína em fragmentos menores, os pesquisadores podem investigar suas características estruturais específicas. Por exemplo, fragmentar fibrilas de alfa-sinucleína permite que os pesquisadores investiguem suas interações com outras moléculas, como proteínas, lipídios ou pequenas moléculas. Ao produzir fragmentos menores, os locais de ligação e a afinidade com esses parceiros em interação podem ser investigados de forma mais eficaz. Fribrils e fitas menores de α-Syn também podem apresentar toxicidade alterada e efeitos bioquímicos. Portanto, uma técnica de fragmentação confiável e eficiente, que produza resultados reprodutíveis em um tratamento rápido e simples da amostra, é crucial.
Fragmentação ultra-sônica alfa-syn: O sonicator VialTweeter é o sistema de preparação de amostras ultrassônico estabelecido que sonica até 10 frascos simultaneamente sob exatamente as mesmas condições. Configurações programáveis permitem a repetição simples e rápida dos mesmos experimentos, o que fornece resultados altamente confiáveis e reprodutíveis na fragmentação da fibrila alfa-sinucleína.

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O VialTweeter Sonicator é um dos ultrasonicators mais comumente usados para fragmentação eficiente e confiável de alfa-sinucleína.

VialTweeter sonicator para fragmentação ultra-sônica simultânea de múltiplas amostras de alfa-sinucleína.

 

O VialTweeter é um sistema ultrassônico exclusivo para a sonsoção simultânea de até 10 frascos exatamente as mesmas condições sem contaminação cruzada.

UP200St com VialTweeter para Sonication of Closed Vials

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Preparação de amostra de α-sinucleína com um sonicator

Uma abordagem para estudar fibrilas de alfa-sinucleína envolve sua extração e fragmentação usando técnicas como sonicação. A sonicação é um processo que usa ondas de ultrassom de alta intensidade e baixa frequência para interromper e quebrar agregados proteicos, levando à liberação de fibrilas menores ou moléculas proteicas individuais. O sonicator VialTweeter é um dispositivo comumente usado em estudos de pesquisa relacionados à α-sinucleína para esta finalidade.

Numerosos estudos de pesquisa descrevem protocolos precisos de preparação de amostras de sonicação de fibrilas alfa-sinucleínas, que usam o Hielscher VialTweeter para fragmentação eficiente e confiável de fibrilas de α-sinucleína. Ao fragmentar as fibrilas ultrassonicamente, os pesquisadores podem analisar os produtos resultantes e examinar sua estrutura, toxicidade e interações com outras moléculas. Esta pesquisa fornece informações importantes sobre os mecanismos subjacentes à neurodegeneração e potencialmente identifica novos alvos terapêuticos. Os protocolos de sonicação de α-sinucleína bem estabelecidos usando o sonicator VialTweeter permitem resultados confiáveis e reprodutíveis.

Imagens superiores: fibrilas alfa-sinucleína não fragmentadas
Imagens inferiores: Fibrilas alfa-sinucleína fragmentadas ultrassonicamente com o sonicator VialTweeter
(estudo e imagens: ©Dieriks et al., 2022)

Fragmentação ultra-sônica de fibrilas de α-sinucleína – Protocolos

Uma vez que numerosos pesquisadores usam o sonicator VialTweeter como técnica de fragmentação preferida para produzir fragmentos uniformes de fibrila de α-sinucleína, os protocolos estabelecidos estão prontamente disponíveis. Abaixo você pode encontrar alguns protocolos de fragmentação exemplares.
 

 
Preparação de sementes ClearTau: As fibrilas ClearTau foram diluídas a 10 μM em dH2O e sonicadas a 70 % de amplitude por 50 s com 1 s ON 1 s OFF ciclo in-tube usando o sonicator UP200St com VialTweeter. As sementes foram caracterizadas por microscopia eletrônica.
Medição de fluorescência ThS: As fibrilas ClearTau foram diluídas a 2,5 μM em dH2O e sonicadas a 70 % de amplitude por 50 s com 1 s ON 1 s OFF ciclo in-tube usando UP200St com VialTweeter. O monômero Tau 4R2N de comprimento total de 2,5 μM foi usado como controle. À reação de 100 μl foram adicionados 100 μl de ThS (10 μM), obtendo-se concentrações proteicas finais de 1,25 μM. A fluorescência ThS de ponto único foi medida usando 96 placas de fundo bem claro montadas no leitor de microplacas FLUOstar Omega com excitação a 445 nm e emissão a 485 nm foi registrada.
(Cf. Limorenko et al., 2023)
 
Comprimento uniforme de α-sinucleína usando sonicação: A heterogeneidade de comprimento das fibrilas e fitas de α-syn foi reduzida por sonicação por 20 min em gelo em tubos Eppendorf de 2 ml em um VialTweeter regulado em 75% de amplitude, pulsos de 0,5 s.
(Cf. Bousset et al., 2013)
 
Foi realizado o controle de qualidade dos monoméricos humanos recombinantes WT ou S129A a-Syn e dos polimorfos fibrilares por eles gerados, bem como o de a-Syn 1–110. Posteriormente, os polimorfos fibrilares foram fragmentados por sonicação por 20 min em tubos Eppendorf de 2 mL no ultrasonicator VialTweeter para gerar partículas fibrilares com tamanho médio de 42–52 nm adequadas para endocitose.
(Cf. Shrivastava et al., 2020)
 

A fragmentação ultarsônica é um método altamente confiável e eficiente para fragmentar fibrilas e fitas de alfa-sinucleína uniformemente. O VialTweeter é um dos sonicators mais comumente usados para fragmentação de α-syn.

Caracterização de cinco polimorfos fibrilares α-Syn. (A) Micrografias eletrônicas de transmissão de polimorfos fibrilares α-Syn corados negativamente, fitas, fibrilas-91, fibrilas-65 e fibrilas-110 antes (faixa superior) e após a fragmentação com o VialTweeter (faixa inferior) são mostradas. (B) A distribuição de comprimento dos polimorfos fibrilares fragmentados é mostrada. O número (n) de montagens fibrilares das quais os histogramas foram derivados é indicado.
(estudo e imagens: Shrivastava et al., 2020)

 
As fibrilas de α-Syn foram fragmentadas por sonicação por 20 min em tubos Eppendorf de 2 ml em um VialTweeter para gerar partículas fibrilares com tamanho médio de 42–52 nm, conforme avaliado pela análise de MET.
(Cf. Negrini et al., 2022)
 
As fibrilas ressuspensas91 (em PBS) foram fragmentadas antes da adição às culturas celulares por sonicação por 20 min em tubos Eppendorf de 2 mL usando o sonicador Vial Tweeter, aliquotado, congelado em nitrogênio líquido e armazenado até o uso a -80 ̊C.
(Cf. Vajhøj et al., 2021)
 

Sonicator UIP400MTP para fragmentação de fibrila alfa-sinucleína em placas de poço múltiplo.

Sonicator UIP400MTP para fragmentação de fibrila alfa-sinucleína em placas de poço múltiplo.

Sonicator UIP400MTP para fragmentação de fibrila alfa-sinucleína em placas de poço múltiplo.

VialTweeter e Lab Sonicators para fragmentação α-syn

VialTweeter com tubos Eppendorf de 2,0mL para fragmentação confiável da fibrila alfa-sinucleínaA Hielscher Ultrasonics é reconhecida mundialmente como fabricante líder de ultrassons de ponta. Confiáveis e estabelecidos nos principais laboratórios de pesquisa do mundo, nossos ultrasonicators oferecem qualidade e desempenho incomparáveis para seus experimentos críticos.
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Nossos ultrasonicators são projetados e fabricados na Alemanha. Precisão alemã e a mais alta qualidade de engenharia para garantir a preparação confiável e precisa da amostra, como a fragmentação da fibrila alfa-sinucleína sempre. Não se preocupe mais com resultados inconsistentes – nossa tecnologia de ultrassom garante que sua pesquisa permaneça na vanguarda do avanço científico.
Mas isso não é tudo! Nosso compromisso com a excelência vai além de nossos produtos. Temos orgulho de nosso excepcional serviço ao cliente, fornecendo suporte especializado para resolver quaisquer dúvidas ou preocupações que você possa ter. Nossa equipe dedicada está aqui para ajudá-lo em cada etapa de sua jornada de pesquisa, garantindo que você aproveite ao máximo nossos ultrassonicators.
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Este tutorial explica que tipo de sonicator é melhor para suas tarefas de preparação de amostras, como lise, interrupção celular, isolamento de proteínas, fragmentação de DNA e RNA em laboratórios, análise e pesquisa. Escolha o tipo de sonicator ideal para sua aplicação, volume de amostra, número de amostra e taxa de transferência. Hielscher Ultrasonics tem o homogeneizador ultra-sônico ideal para você!

Como encontrar o sonicator perfeito para ruptura celular e extração de proteínas em ciência e análise

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Design, Fabricação e Consultoria – Qualidade Made in Germany

Os ultrasonicators Hielscher são bem conhecidos por seus mais altos padrões de qualidade e design. A robustez e a fácil operação permitem a integração suave de nossos ultrasonicators em instalações industriais. Condições adversas e ambientes exigentes são facilmente manuseados por ultrassonicators Hielscher.

A Hielscher Ultrasonics é uma empresa certificada ISO e dá ênfase especial aos ultrasonicators de alto desempenho com tecnologia de ponta e facilidade de uso. Claro, os sonicators Hielscher são compatíveis com CE e atendem aos requisitos de UL, CSA e RoHs.
 
A tabela abaixo fornece uma indicação da capacidade aproximada de processamento de nossos ultrassonicators de tamanho de laboratório:
 

Dispositivos Recomendados Volume batch Quociente de vazão
UIP400MTP placas multi-bem /microtiter n / D.
cuphorn ultra-sônica CupHorn para frascos para injetáveis ou copo n / D.
GDmini2 Reator ultra-sônico de micro-fluxo n / D.
VialTweeter 00,5 a 1,5 mL n / D.
UP100H 1 a 500mL 10 a 200 mL / min
UP200Ht, UP400St 10 a 2000 mL 20 a 400 mL / min

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Por favor, use o formulário abaixo para solicitar informações adicionais sobre o VialTweeter e outros sonicators, fragmentação de alfa-sinucleína, protocolos e preços. Teremos prazer em discutir seu processo com você e oferecer-lhe um sonicator que atenda aos seus requisitos de preparação de amostra!









Por favor, note que o nosso Política de Privacidade.


 

O vídeo mostra o sistema de preparação de amostras ultrassônicas UIP400MTP, que permite a preparação confiável da amostra de qualquer placa multi-bem padrão usando ultrassom de alta intensidade. Aplicações típicas do UIP400MTP incluem lise celular, DNA, RNA e cromatina, bem como extração de proteínas.

Ultrassonicator UIP400MTP para sônica de placa multi-bem

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O Frasco de 100 frascos de ensaio multisamplepletivos pode conter até 10 frascos menores e até 5 tubos de teste maiores

O VialTweeter é comumente usado para fragmentar fibrila de alfa-sinucleína como etapa de preparação pré-analítica da amostra



Literatura / Referências


Ultrassônicos de alto desempenho! A linha de produtos Hielscher abrange todo o espectro desde o ultrassônico de laboratório compacto sobre unidades de bancada até sistemas ultrassônicos industriais completos.

Hielscher Ultrasonics fabrica homogeneizadores ultrassônicos de alto desempenho de Laboratório para tamanho industrial.


Ficaremos felizes em discutir seu processo.

Vamos entrar em contato.