Probe Virbereedung mam Ultrasonic VialTweeter

Probepräparatioun virun der Analyse kann verschidde pre-analytesch Prozesser erfuerderen wéi Tissuehomogeniséierung, Lysis, Extraktioun vu Proteinen, DNA, RNA, Organellen an aner intrazellulär Substanzen, Opléisung an Entgasung. De VialTweeter ass en eenzegaartegt Ultraschall-Apparat, dee verschidde Probe-Tubes gläichzäiteg ënner genee déiselwecht Konditioune virbereet. Wéinst der indirekter Sonikatioun vu geschlossene Reagenzglieser, Kräizkontaminatioun a Probeverloscht ginn vermeit.

Ultrasonic Probe Virbereedung

Ultrasonication ass eng allgemeng Technik vun der Probebehandlung fir d'Probe prett ze kréien fir Analysen wéi Polymer Kettenreaktioun (PCR), Western Blots, Assays, Molekulare Sequenzéierung, Chromatographie etc. analytesch. E grousse Virdeel vun der Sonikatioun ass datt den Aarbechtsprinzip vum Ultraschall op reng mechanesche Kräfte baséiert. Ultrasonic Lysis an Zell Stéierungen gëtt duerch sonomechanical Scherrkräften erreecht, wat d'Ultraschall de Virdeel gëtt datt d'Léisungsmëttel, déi fir Proteinextraktioun benotzt ginn, och während der Lysis benotzt kënne ginn. Ultraschallzellstéierer wéi de VialTweeter briechen d'Zellmaueren / Membranen a förderen Massentransfer tëscht Zellinterieur a Léisungsmëttel. Doduerch gëtt den Analyt (zB DNA, RNA, Proteinen, Organellen etc.) effizient vun der Zellmatrix an de Léisungsmëttel transferéiert. Dëst bedeit datt d'Schrëtt vun der Quenching an der Extraktioun mam Ultraschallzell Stéierungsprozess iwwerlappt, wat d'Ultraschalllyse ganz effektiv mécht. Ausserdeem erfuerdert d'Ultraschallprobepräparatioun keng Detergenten an aner Lysisreagenz, déi d'Struktur vum Lysat änneren an zerstéieren an ass bekannt fir déi spéider Probleemer mat der Reinigung. Eng aner Lysismethod, déi enzymatesch Stéierung erfuerdert laang Inkubatiounszäiten a liwwert dacks net reproduzéierbar Resultater. Ultrasonic Probe Virbereedung iwwerwannt allgemeng Probleemer bei der Probepräparatioun wéi Tissuehomogeniséierung, Zellstéierung, Lysis, Proteinextraktioun a Lysatsolubiliséierung. Zënter datt d'Intensitéit vun der Ultraschallbehandlung genee kontrolléiert an un d'biologesch Probe ugepasst ka ginn, ginn d'Degradatioun an d'Probeverloscht vermeit. Automatesch iwwerwaacht a kontrolléiert Probetemperatur, Pulsmodus an Sonikatiounsdauer garantéieren optimal Resultater.
 

De VialTweeter ass besonnesch praktesch fir Laboraarbechten déi d'gläichzäiteg Virbereedung vu verschidde Proben ënner de selwechte Konditioune erfuerderen. De VialTweeter ass eng Ultraschallblock Sonotrode déi bis zu 10 Fläschen (zB Eppendorf, Zentriguge, NUNC Tubes, Cryo-Fläschen) hält an se intensiv ënner präzis kontrolléierte Bedéngungen sonicéiert. Zënter datt d'Ultraschallenergie duerch d'Maueren vun de Fläschen an d'Probemedium gekoppelt ass, halen d'Fläschen während der Behandlung zou. Doduerch gi Probeverloscht a Kräizkontaminatioun komplett vermeit.

Fläschen a Réier déi de VialTweeter passen

De VialTweeter ass gëeegent fir 10 gemeinsame konesch oder ronn-bottom Réier wéi Eppendorf, Zentrifuge, Cryo-Fläschen a verschidde NUNC Fläschenarten ze halen, awer d'Lächer kënnen op Ufro op aner Fläsch- a Röhregréissten personaliséiert ginn. Loosst eis w.e.g. wëssen wéi eng Zort Reagenzglieser Dir benotze wëllt fir datt mir Äre VialTweeter deementspriechend änneren. Fir gréisser Reagenzglieser wéi Falcon Röhre an aner Testbehälter, Becher a Schëffer ass de VialPress eng praktesch Léisung.

De VialTweeter mat VialPress

Wärend de VialTweeter selwer mat sengen 10 Röhre Lächer schonn en eenzegaartegen an héich funktionnelle Ultraschallapparat ass, mécht de VialPress Add-on de VialTweeter nach méi versatile a flexibel fir Operatioun. De VialPress ass en Accessoire fir de VialTweeter besteet aus enger Clamp-on Bar, déi et erlaabt gréisser Probe Tubes wéi Falcon Tubes oder aner kleng bis mëttelgrouss Testbecher op d'VialTweeter Front ze fixéieren. D'Bild op der lénker Säit weist de VialTweeter, deen 10 Eppendorf Fläschen am Block hält, wärend de VialPress e gréissere Reagenzglieser op d'Front fixéiert fir Sonikatioun. De VialPress ass fäeg bis zu 5 méi grouss Reagenzglieser fir intensiv Sonikatioun ze halen.

VialTweeter Sample Virbereedungsprotokoller

De VialTweeter gëtt wäit benotzt fir biologesch Proben ze sonicéieren. Virun Analyse musse Proben fir biochemesch oder biophysikalesch Analysen an Assays virbereet ginn, zB duerch Lysis, Tissuehomogeniséierung, Proteinextraktioun, DNA / RNA Scheren, Entgasung etc. De VialTweeter erfëllt dës Ultraschallprozesser zouverlässeg a liwwert reproduzéierbar Resultater. Eng gemeinsam Applikatioun vum VialTweeter ass d'Lyse / Zell Stéierungen vu Mamendéieren (Mënsch an Déier) Stoffer souwéi Bakterienzellen a virale Partikelen. Erfollegräich VialTweeter-behandelt biologesch Proben enthalen mënschlech Lungepithelzellen, hematopoietesch Stammzellen, myeloid Leukämie Zellen, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus anthracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptococcus pyogenes, Caulobacter crescentus, Mycoplasma pneumoniae, Mycobacteria / Mycobacterium Tuberculosis Complex (MTBC) a vill aner bakteriell, botanesch a mikrobiellen Zellen.
Hei ënnen fannt Dir e puer ausgewielte Protokoller mat dem VialTweeter.

E.Coli Lysis Mat VialTweeter fir In-Vivo Glutathion Bestëmmung

Escherichia coli Bakterien vum Stamm MG1655 goufen am MOPS minimale Medium an engem Gesamtvolumen vun 200ml ugebaut bis en A600 vun 0,5 erreecht gouf. D'Kultur gouf a 50-ml Kulturen fir Stressbehandlung opgedeelt. No 15 min Inkubatioun mat 0,79 mm Allicin, 1 mm Diamid oder Dimethylsulfoxid (Kontroll), goufen d'Zellen bei 4.000g bei 4 ° C fir 10 min gesammelt. Zellen goufen zweemol mat KPE Puffer gewäsch virum Resuspension vu Pellets an 700μl KPE Puffer. Fir Deproteinéierung goufen 300μl vun 10% (w / v) Sulfosalicylsäure bäigefüügt virum Ënnerbriechung vun Zellen duerch Ultraschall (3 x 1 min; VialTweeter Ultrasonicator). Supernatanten goufen no der Zentrifugéierung gesammelt (30 min, 13.000g, 4 °C). Sulfosalicylsäure Konzentratioune goufen op 1% reduzéiert duerch d'Zousatz vun 3 Volumen KPE Puffer. Miessunge vum Total Glutathion an GSSG goufen duerchgefouert wéi uewen beschriwwen. Zellular Glutathion Konzentratioune goufen berechent baséiert op engem Volume vun E. coli Zellen vun 6,7 × 10-15 Liter an enger Zell Dicht vun A600 0,5 (entspriechend 1 × 108 Zellen ml-1 Kultur). GSH Konzentratioune goufen duerch Subtraktioun vun 2 [GSSG] aus total glutathione berechent. (Müller et al. 2016)

Alpha-Synuclein Fibril Fragmentatioun mam VialTweeter

De VialTweeter Sonicator gëtt wäit benotzt fir déi zouverlässeg an effizient Fragmentatioun vun Alpha-Synuclein Fibrillen a Bänner. Klickt hei fir detailléiert Beschreiwungen, Protokoller a Referenze fir d'Alpha-Synuclein Fragmentatioun mam VialTweeter ze fannen!

Zell Lysis mat VialTweeter virun Graphite Uewen Atomer Absorptioun Spektrometrie

Bacillus subtilis 168 (trpC2) goufen zu 15 min vun Antibiotike Stress ausgesat, dann Zellen sech um 3.320 xg recoltéiert, fënnef Mol mat 100 mM Tris / 1 mM EDTA, pH 7.5 gewäsch, an 10 mM Tris resuspendéiert, pH 7.5 an ultrasonic Stéierungen an engem Hielscher VialTweeter Instrument. (Wenzel et al. 2014)

VialTweeter Sample Virbereedung virun Mass Spektrometrie

Déi lyophiliséiert Zellpellets vu mënschlechen CD34® hematopoietesch Stamm / Progenitor Zellen goufen an 10µµl (200µl fir bulk HEK293 Virbereedung fir d'Peptidverdünnungsserie) vun 8 M Harnstoff an 100 mM Ammonium-Wasserstoffkarbonat mat Hweeelscher a lysteronesche Waasserstoffkarbonat resuspendéiert. bei enger Amplitude vu 60%, engem Zyklus vun 60% an enger Dauer vun 20s fir dräimol mat Zwëschenofkillung op Äis. (Amon et al. 2019)

Probe Virbereedungsprotokoller mat der VialPress

Frësch Zalot (Lactuca sativa) war homogenized an 0,5 M HEPES Prellbock (pH 8, KOH ugepasst) an engem Verhältnis vun 1 g Planz (frësch Gewiicht) zu 200, 100, 50 oder 20 ml Prellbock Léisung. D'Verhältnis vu Planzmass zum Pufferléisungsvolumen gouf variéiert fir de Gesamthomogenatvolumen tëscht 3,5 an 12 ml ze halen. D'Verhältnis vu Planzmass zu Pufferléisungsvolumen gouf variéiert fir de Gesamthomogenatvolumen tëscht 3,5 an 12 ml ze halen, wat Homogeniséierung mat der Sonde erlaabt. Homogenaten hunn dann indirekt Ultrasonicatioun mat engem UP200St mat VialTweeter equipéiert mat 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Däitschland) fir 3 min (80% Puls an 100% Kraaft) gemaach. D'Benotzung vun dësem Apparat verhënnert Kontaminatioun. (Laughton et al. 2019)

Zuverlässeg Temperaturkontrolle während Sonication mam VialTweeter

Temperatur ass e wesentleche Prozess-beaflossende Faktor dee besonnesch wichteg ass fir d'Behandlung vu biologesche Proben. Wéi all mechanesch Probepräparatiounstechniken, erstellt Sonikatioun Hëtzt. Wéi och ëmmer, d'Temperatur vun de Proben kann gutt kontrolléiert ginn wann Dir de VialTweeter benotzt. Mir presentéieren Iech verschidde Méiglechkeeten fir d'Temperatur vun Äre Proben ze iwwerwaachen an ze kontrolléieren wärend Dir se mam VialTweeter a VialPress fir Analyse virbereet.

1. Iwwerwaachung vun der Probetemperatur: Den Ultraschallprozessor UP200St, deen den VialTweeter dréit, ass mat enger intelligenter Software an engem pluggbare Temperatursensor ausgestatt. Steet den Temperatursensor an den UP200St an setzt den Tipp vum Temperatursensor an ee vun de Proberöhren. Via digital faarweg Touch-Display kënnt Dir am Menü vun der UP200St e spezifescht Temperaturbereich fir Är Probe-Sonicatioun setzen. Den Ultraschall stoppt automatesch wann d'maximal Temperatur erreecht gëtt a pausen bis d'Probetemperatur erof op den ënneschten Wäert vun der festgeluegter Temperatur ∆ ass. Da fänkt d'Sonication automatesch erëm. Dës intelligent Feature verhënnert Hëtzt-induzéiert Degradatioun.
2. De VialTweeter Block kann virgekillt ginn. Setzt de VialTweeter Block (nëmmen d'Sonotrode ouni Transducer!) An de Frigo oder de Frigo fir den Titanblock ze precoolen hëlleft d'Temperaturerhéijung an der Probe ze posten. Wa méiglech, kann d'Probe selwer och virgekillt ginn.
3. Benotzt dréchen Äis fir während der Sonikatioun ze killen. Benotzt e flaache Schacht gefëllt mat trockenem Äis a setzt de VialTweeter op d'Dréchenäis sou datt d'Hëtzt séier opléise kann.

Clienten weltwäit benotzen de VialTweeter a VialPress fir hir alldeeglech Probepräparatiounsaarbecht a biologeschen, biochemeschen, medizineschen a klineschen Laboratoiren. Déi intelligent Software an d'Temperaturkontrolle vum UP200St Prozessor, d'Temperatur ass zouverlässeg kontrolléiert an d'Hëtzt-induzéiert Probe Degradatioun vermeit. Ultrasonic Probe Virbereedung mam VialTweeter a VialPress liwwert héich zouverlässeg a reproduzéierbar Resultater!

Technesch Detailer vum VialTweeter

De VialTweeter ass e Block Sonotrode aus Titan deen bis zu 10 Fläschen an de Lächer am Block kann halen. Zousätzlech kënne bis zu 5 gréisser Reagenzglieser op d'VialTweeter Front mat der VialPress ageklemmt ginn. De VialTweeter ass sou entworf datt d'Ultraschallenergie uniform an all agebaute Fläsch verdeelt gëtt fir zouverlässeg an eenheetlech Sonikatiounsresultater ze garantéieren. E klenge Pivot passt de VialTweeter Sonotrode op ongläiche Buedem an alignéiert d'Reagenzglieser vertikal.

Virdeeler vum VialTweeter op ee Bléck

• Intensiv Sonikatioun vu bis zu 10 Fläschen gläichzäiteg
• Indirekt Sonikatioun mat héijer Ultraschallintensitéit duerch Gefässwand an d'Probe
• Indirekt Sonikatioun vermeit Kräizkontaminatioun a Probeverloscht
• Reproduzéierbar Resultater wéinst justierbarer a kontrolléierbarer Sonikatiounsamplitude
• De VialPress erlaabt Iech méi grouss Réier ze sonicéieren
• Amplitude justierbar vun 20 bis 100%
• Upassbar Pulsmodus vun 0 bis 100%
• autoklaverbar

De VialTweeter gëtt ugedriwwen vum UP 200 St, en 200 Watt mächtegen Ultraschallprozessor. Den UP200St ass mat enger intelligenter Software ausgestatt, déi präzis Kontroll iwwer all wichteg Ultraschallprozessparameter wéi Amplitude, Sonikatiounszäit, Pulsatioun an Temperatur erlaabt. Dëst mécht de VialTweeter zu engem zouverléissege Tool fir erfollegräich reproduzéierbar Prozessresultater a biologeschen a biochemesche Laboratoiren.
Amplitude kann tëscht 20 an 100% ugepasst ginn an erlaabt doduerch d'Ultraschallintensitéit un Är Probe unzepassen. Zum Beispill erfuerdert d'Schéier an d'Fragmentatioun vun DNA a RNA eng mëller Amplitude fir d'Produktioun vun ze klengen DNA Fragmenter ze vermeiden, d'Gewësshomogeniséierung vum Mausgehir brauch héich Intensitéit Sonikatioun. Wielt déi ideal Amplitude, Sonikatiounsintensitéit an Dauer iwwer de Smart an intuitive Menü am UP200St Prozessor. De Menü an d'Astellunge kënnen einfach zougänglech a bedriwwe ginn iwwer faarweg Touch Display. An den Astellunge kënnt Dir d'Sonicatiounsparameter virstellen wéi Amplituden, Pulsatiouns- / Zyklusmodus, Sonikatiounsdauer, Gesamtenergie-Input, an Temperaturgrenzen. An der Fuerschung an der Produktioun ass d'Wiederholbarkeet vun Tester an Testresultater entscheedend. Dëst bedeit datt déi präzis Opnam vu Prozessbedéngungen a Sonikatiounsprotokoller ganz wichteg sinn. D'automatesch Dateprotokolléierung schreift all Sonikatiounsdaten an eng CSV-Datei op enger integréierter SD-Kaart, fir datt Dir verschidde Sonikatiounslafe ganz einfach iwwerpréift a vergläicht. All Ultraschallprozessdaten kënnen einfach zougänglech a gedeelt ginn als CSV-Datei.
Hielscher Ultrasonics beméit Iech mat fortgeschratt Technologie ze bidden fir Är Fuerschungsaarbecht ze erliichteren an ze verbesseren!