Probe Virbereedung mam Ultraschall VialTweeter

Ultraslon Probe Préparatioun

Ultrasonication is a common technique of sample treatment in order to get the sample ready for analyses such as polymers chain reaction (PCR), Western Blots, assays, molecular sequencing, chromatography etc. Ultrasonication is a technique widely used in laboratories to treat samples pre-analytically. A major advantage of sonication is that the working principle of ultrasound is based on purely mechanical forces. Ultrasonic lysis and cell disruption is achieved by sonomechanical shear forces, which gives ultrasonication the advantage that the solvents used for protein extraction can be used also during lysis. Ultrasonic cell disruptors such as the VialTweeter break the cell walls / membranes and promote mass transfer between cell interior and solvent. Thereby, the analyte (e.g. DNA, RNA, proteins, organelles etc.) are efficiently transferred from the cell matrix into the solvent. This means the steps of quenching and extraction overlap with the ultrasonic cell disruption process, which makes ultrasonic lysis very effective. Furthermore, ultrasonic sample preparation does not require detergents and other lysis reagents, which might alter and destruct the structure of the lysate and is known for the subsequent troubles with purification. Another lysis method, the enzymatic disruption requires long incubation times and delivers often non-reproducible results. Ultrasonic sample preparation overcomes common problems in sample preparation such as tissue homogenization, cell disruption, lysis, protein extraction and lysate solubilization. Since the intensity of the ultrasonic treatment can be exactly controlled and adjusted to the biological sample, degradation and sample loss are avoided. Automatically monitored and controlled sample temperature, pulse mode and sonication duration ensure optimum outcomes.

De VialTweeter ass besonnesch praktesch fir Laboraarbecht déi d'simultan Virbereedung vu méi Proben ënner déiselwechte Konditioune erfuerdert. De VialTweeter ass eng Ultraschall-Block Sonotrode déi bis zu 10 Fläschen (z. B. Eppendorf, Centriguge, NUNC Tuben, Kryo-Fläschen) hale kann an intensiv ënner präzis kontrolléierte Konditioune sonikéiert. Well d'Ultraschallenergie duerch d'Mauere vun de Fläschen an de Proufmedium gekoppelt ass, behalen d'Fläschen während der Behandlung zou. Doduerch gëtt Probeverloscht a Querschmidde komplett vermeit.

Vials an Tuben passend zum VialTweeter

De VialTweeter ass geegent fir 10 gemeinsam konisch oder ronnen-ënnen Tuben ze halen wéi Eppendorf, Zentrifuge, Kryo-Fläschen a verschidde NUNC-Fläschentypen, awer d'Lächer kënnen op Ufro un aner Fläsch- a Schlaanggréissten adaptéiert ginn. Loosst eis w.e.g. wëssen wéi eng Zort Tuben Dir wëllt benotze fir datt mir Ären VialTweeter deementspriechend änneren. Fir méi grouss Reagenzglieser wéi Falcon Tuben an aner Testbehälter, Becher a Gefässer ass d'VialPress eng praktesch Léisung.

De VialTweeter mat VialPress

Wärend de VialTweeter selwer mat sengen 10 Réierlächer schonn en eenzegaartegt an héich funktionnelt Ultraschallapparat ass, mécht de VialPress Add-on de VialTweeter nach méi villsäiteg a flexibel fir ze bedreiwen. D'VialPress ass en Accessoire fir de VialTweeter besteet aus enger Klemmbar, déi et erméiglecht méi grouss Musterréier wéi Falcon Tuben oder aner kleng bis mëttelgrouss Testbecher op d'VialTweeter Front ze fixéieren. D'Bild op der lénkser Säit weist de VialTweeter deen 10 Eppendorf Fläschen am Block hält, wärend d'VialPress ee méi grousse Reagenzglieser op der viischter Säit fir Sonikatioun fixéiert. D'VialPress ass fäeg bis zu 5 gréissere Reagenzglieser fir intensiv Opléisung ze halen.

VialTweeter Probe Virbereedungsprotokollen

De VialTweeter gëtt wäit benotzt fir biologesch Proben ze sonikéieren. Virun Analyse musse Proben op biochemesch oder biophysikalesch Analysen an Assays virbereet ginn, zB duerch Lysis, Tissue Homogeniséierung, Protein Extraktioun, DNA / RNA Scheieren, Entgasung asw. De VialTweeter erfëllt dës Ultraschallprozesser zouverléisseg a liwwert reproduzéierbar Resultater. Eng gemeinsam Uwendung vum VialTweeter ass d'Lysis / Zell Stéierung vu Mamendéieren (Mënsch an Déieren) Stoffer souwéi Bakterienzellen a Viruspartikelen. Erfollegräich VialTweeter-behandelt biologesch Proben enthalen mënschlech Longepithelzellen, haematopoietesch Stammzellen, myeloesch Leukämie Zellen, Escherichia coli, An Bacillus subtilis, An Bacillus anthracis, An Francisella tularensis, An Yersinia pestis, An Streptococcus pyogenes, An Caulobacter Crescentus, An Mycoplasma pneumoniae, Mykobakterien / Mycobacterium Tuberkulosekomplex (MTBC) a vill aner bakteriell, botanesch a mikrobiell Zellen.
Hei drënner fannt Dir e puer ausgewielte Protokoller mat dem VialTweeter.

E.Coli Lysis Mat VialTweeter fir In-Vivo Glutathion Determinatioun

Escherichia coli Bakterien vun der Stamm MG1655 goufen a MOPS minimal Medium an engem Gesamtvolumen vun 200ml ugebaut bis en A600 vun 0,5 erreecht gouf. D'Kultur gouf a 50-ml Kulture fir Stressbehandlung gedeelt. No 15 min vun der Inkubatioun mat 0,79 mm Allicin, 1 mm Diamid oder Dimethylsulfoxid (Kontroll), goufen d'Zellen bei 4.000g bei 4 ° C fir 10 min gesammelt. Zellen goufen zweemol mat KPE Puffer gewascht virun der Resuspension vu Pellets an 700µl KPE Puffer. Fir Depoteinatioun goufen 300 µl vun 10% (w / v) Sulfosalicylsäure bäigefüügt virum Ënnerbriechung vun den Zellen duerch Ultraschall (3 x 1 min; VialTweeter Ultraschall). Supernatants goufen no der Zentrifugatioun gesammelt (30 min, 13.000 g, 4 ° C). Sulfosalicylsäurekonzentratioune goufen op den Zousaz vun 3 Volumen KPE-Puffer op 1% ofgeholl. Miessunge vu totalem Glutathion a GSSG goufen wéi uewe beschriwwen duerchgefouert. Zellular Glutathion Konzentratioune goufen op engem Volume vun E. coli Zellen vu 6,7 × 10-15 Liter an enger Zelldicht vun A600 0,5 berechent (entsprécht 1 × 108 Zellen ml-1 Kultur). GSH Konzentratioune goufen duerch Subtraktioun vun 2 [GSSG] aus totalem Glutathion berechent. (Müller et al. 2016)

Zell Lysis mat VialTweeter virum Grafite Schmelzhäre Atomabsorptionsspektrometrie

Bacillus subtilis 168 (trpC2) goufen 15 Minutte vun Antibiotikastress ausgesat, duerno goufen d'Zellen op 3.320 xg gesammelt, fënnef Mol mat 100 mm Tris / 1 mm EDTA, pH 7,5 gewäsch, an 10 mm Tris, pH 7,5 resuspendéiert an duerch Ultraschall gestéiert an engem Hielscher VialTweeter Instrument. (Wenzel et al. 2014)

VialTweeter Probe Virbereedung virum Massespektrometrie

Déi lyophiliséiert Zellpellets vu mënschlechen CD34􏰀 hematopoietesche Stamm / Progenitor Zellen goufen an 10 µl (200 µl fir bulk HEK293 Virbereedung fir d'Peptid Verdënnungsreihe) vun 8 M Harnstoff an 100 mM Ammonium Waasserstoffkarbonat resuspendéiert a lyséiert duerch Sonikatioun mam Hielscher VialTweeter bei enger Amplitude vu 60%, engem Zyklus vu 60% an enger Dauer vun 20s fir dräimol mat Zwëschenofkillung op Äis. (Amon et al. 2019)

Probe Préparatiounsprotokoller mat der VialPress

Frësch Salat (Lactuca sativa) gouf an 0,5 M HEPES Puffer (pH 8, KOH ugepasst) an engem Verhältnes vun 1 g Planz (frësch Gewiicht) op 200, 100, 50 oder 20 ml Pufferléisung homogeniséiert. D'Verhältnis vu Planzemass zu Pufferléisungsvolumen gouf variéiert fir de Gesamt homogenat Volumen tëscht 3,5 an 12 ml ze halen. D'Verhältnis vu Planzemass zu Pufferléisungsvolumen gouf variéiert fir de Gesamt homogenat Volumen tëscht 3,5 an 12 ml ze halen, sou datt d'Homogeniséierung mat der Sond erlaabt. Homogenate hunn dunn indirekt Ultraschall mat engem UP200St mat VialTweeter mat 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Däitschland) fir 3 min ausgestatt (80% Puls an 100% Kraaft). Mat dësem Apparat gouf Kontaminatioun vermeit. (Laughton et al. 2019)

Verléisslech Temperaturkontrolle wärend der Sonikatioun mam VialTweeter

Temperatur ass e wichtege Prozess beaflosst Faktor dee besonnesch wichteg ass fir d'Behandlung vu biologesche Proben. Wéi all mechanesch Proufvirbereedungstechniken, Sonikatioun kreéiert Hëtzt. Wéi och ëmmer, d'Temperatur vun de Proben kann gutt kontrolléiert ginn wann Dir de VialTweeter benotzt. Mir presentéieren Iech verschidden Optiounen fir d'Temperatur vun Äre Proben z'iwwerwaachen a kontrolléieren, wa se se mam VialTweeter a VialPress fir d'Analyse virbereeden.

1. Iwwerwaachung vun der Probtemperatur: Den Ultraschallprozessor UP200St, deen de VialTweeter fiert, ass mat enger intelligenter Software an engem pluggbaren Temperatursensor ausgestatt. Stiech den Temperatursensor an den UP200St a setzt den Tipp vum Temperatursensor an ee vun de Proufréier. Iwwer digital faarweg Touch-Display kënnt Dir am Menu vum UP200St e spezifescht Temperaturbereich fir Är Probe-Sonikatioun setzen. Den Ultraschall stoppt automatesch wann d'maxstemperatur erreecht gëtt a pauséiert bis d'Prouftemperatur bis op den ënneschte Wäert vun der festgeluechter Temperatur is. Da fänkt d'Sonikatioun automatesch erëm un. Dës intelligent Feature verhënnert Hëtztinduzéierter Degradatioun.
2. De VialTweeter Block ka virgekillt ginn. Setzt de VialTweeter Block (nëmmen d'Sonotrode ouni Transducer!) An de Frigo oder Gefrierschrank fir den Titanblock vir ze killen hëlleft d'Temperaturerhéijung an der Probe ze verréckelen. Wa méiglech kann d'Prouf selwer och virgekillt ginn.
3. Benotzt dréchent Äis fir bei der Opléisung ofzekillen. Benotzt e flaache Schacht gefëllt mat dréchenem Äis a placéiert de VialTweeter op dat dréchent Äis, sou datt d'Hëtzt sech séier opléise kann.

Clienten weltwäit benotze de VialTweeter a VialPress fir hir alldeeglech Proufvirbereedungsaarbecht a biologeschen, biochemeschen, medizineschen a klineschen Laboratoiren. Déi intelligent Software an d'Temperaturregelung vum UP200St Prozessor, d'Temperatur gëtt zouverlässeg kontrolléiert an duerch Hëtzt induzéiert Probe Degradatioun vermeit. Ultraschall Proufvirbereedung mam VialTweeter a VialPress liwwert héich zouverléisseg a reproduzéierbar Resultater!

Technesch Detailer vum VialTweeter

De VialTweeter ass eng Block-Sonotrode aus Titan, déi bis zu 10 Fläschen an de Lächer am Block hale kënnen. Zousätzlech kënne bis zu 5 gréisser Reagenzglieser mat der VialPress un d'VialTweeter Front geklemmt ginn. De VialTweeter ass sou entwéckelt datt d'Ultrasonication Energie an all agefouert Fläsch verdeelt gëtt fir zouverléisseg an eenheetlech Opléisungsresultater ze garantéieren. E klenge Pivot passt d'VialTweeter Sonotrode un ongläichem Buedem un a richt d'Testrohre vertikal aus.

Virdeeler vum VialTweeter op ee Bléck

• Intensiv Ënnersetzung vun bis zu 10 Fläschelen gläichzäiteg
• Indirekt Opléisung bei héich Ultraschallintensitéit duerch Behältermauer an d'Probe
• Indirekt Soinatioun vermiddert Cross-Contamination a Probe Verlust
• Reproducible Resultater wéinst der verännerbarer an der kontrolléierbar Sonikite Amplitude
• De VialPress erlaabt Iech méi grouss Tubaks ze sonicéieren
• Verännerbar Amplitude vun 20 bis 100%
• Einstellbare Pulsmodus vu 0 bis 100%
• autoklavabel

De VialTweeter gëtt ugedriwwe vun der UP200St, en 200 Watt mächtege Ultraschallprozessor. Den UP200St ass mat enger intelligenter Software ausgestatt déi déi präzis Kontroll iwwer all wichteg Ultraschall-Prozessparameter wéi Amplitude, Opléisungszäit, Pulsatioun an Temperatur erlaabt. Dëst mécht de VialTweeter zu engem zouverléissegen Tool fir erfollegräich reproduzéierbar Prozessresultater a biologeschen a biochemesche Laboratoiren.
Amplitude kann tëscht 20 an 100% ugepasst ginn an erlaabt doduerch d'Ultraschallintensitéit op Är Probe unzepassen. Zum Beispill erfuerdert d'Schéier a Fragmentéierung vun DNA a RNA eng méi mëll Amplitude fir d'Produktioun vun ze klengen DNA Fragmenter ze vermeiden, d'Gewebe Homogeniséierung vum Maus Gehir brauch eng héich Intensitéit Sonikatioun. Wielt déi ideal Amplitude, Opléisungsintensitéit an Dauer iwwer dem intelligenten an intuitive Menu um UP200St Prozessor. De Menu an d'Astellunge kënne ganz einfach iwwer faarweg Touch Display zougänglech gemaach ginn. An den Astellunge kënnt Dir Virausbezuelungsparameter wéi Amplitude, Pulsatioun / Zyklusmodus, Opléisungsdauer, Gesamtenergie-Input an Temperaturlimitë virstellen. A Fuerschung a Produktioun ass d'Widderhuelbarkeet vu Prouwen an Testresultater entscheedend. Dëst bedeit datt déi präzis Opnam vu Prozessbedingungen a Sonikatiounsprotokoller ganz wichteg sinn. Den automateschen Dateprotokolléiere schreift all Opléisungsdaten an eng CSV Datei op enger integréierter SD-Kaart, fir datt Dir ganz einfach verschidde Sonikatiounsleef préift a vergläicht. All Ultraschall-Prozessdate kënne ganz einfach zougeruff a gedeelt ginn als CSV-Datei.
Hielscher Ultrasonics beméit Iech fortgeschratt Technologie ze bidden fir Är Fuerschungsaarbecht ze erliichteren an ze verbesseren!