Probe Virbereedung virun der Analyse ka verschidde pre-analytesch Prozesser wéi Tissue Homogeniséierung, Lysis, Extraktioun vu Proteinen, DNA, RNA, Organellen an aner intrazellulär Substanzen, Opléisung an Entgasung erfuerderen. De VialTweeter ass en eenzegaartegt Ultraschall-Gerät dat verschidde Probe-Réier gläichzäiteg ënner genau déiselwechte Konditioune preparéiert. Wéinst der indirekter Opléisung vu geschlossene Reagenzglieser ginn d'Kräizkontaminatioun a Probeverloscht vermeit.

Ultraslon Probe Préparatioun

Ultrasonikatioun ass eng gemeinsam Technik vun der Probebehandlung fir d'Prouf prett ze kréien fir Analysen wéi Polymer Kettenreaktioun (PCR), Western Blots, Assays, molekulär Sequenzéierung, Chromatographie asw. Ultrasonikatioun ass eng Technik déi wäit an de Laboratoiren benotzt gëtt fir Prouwen virzegoen- analytesch. E wichtege Virdeel vun der Opléisung ass datt den Aarbechtsprinzip vum Ultraschall op reng mechanesch Kräfte baséiert. Ultraschall Lysis an Zell Stéierung gëtt duerch sonomechanesch Scherr Kräften erreecht, wat Ultraschall de Virdeel gëtt datt d'Léisungsmëttel, déi fir d'Proteinextraktioun benotzt ginn, och während der Lysis benotzt kënne ginn. Ultraschallzellstéierer wéi de VialTweeter briechen d'Zellwänn / Membranen a förderen d'Massentransfer tëscht Zellinterieur a Léisungsmëttel. Doduerch gëtt den Analyt (zB DNA, RNA, Proteinen, Organellen asw.) Effizient vun der Zellmatrix an de Léisungsmëttel transferéiert. Dëst bedeit d'Schrëtt vum Läschen an Extraktioun iwwerlappt mam Ultraschallzell Stéierungsprozess, wat Ultraschall Lysis ganz effektiv mécht. Ausserdeem, Ultraschall-Proufvirbereedung erfuerdert keng Wäschmëttelen an aner Lysisreagentien, déi d'Struktur vum Lysat veränneren an zerstéiere kënnen an ass bekannt fir déi spéider Probleemer mat der Reinigung. Eng aner Lysismethod, déi enzymatesch Stéierung erfuerdert laang Inkubatiounszäiten a liwwert dacks net reproduzéierbar Resultater. Ultraschall Proufvirbereedung iwwerhëlt allgemeng Probleemer bei der Proufvirbereedung wéi Tissu Homogeniséierung, Zellstéierungen, Lysis, Protein Extraktioun a Lysat Solubiliséierung Well d'Intensitéit vun der Ultraschallbehandlung genau kontrolléiert ka ginn an der biologescher Probe ugepasst ginn, ginn Degradatioun a Probeverloscht vermeit. Automatesch iwwerwaacht a kontrolléiert Prouftemperatur, Pulsmodus an Opléisungsdauer suergen optimal Resultater.

De VialTweeter ass besonnesch praktesch fir Laboraarbecht déi d'simultan Virbereedung vu méi Proben ënner déiselwechte Konditioune erfuerdert. De VialTweeter ass eng Ultraschall-Block Sonotrode déi bis zu 10 Fläschen (z. B. Eppendorf, Centriguge, NUNC Tuben, Kryo-Fläschen) hale kann an intensiv ënner präzis kontrolléierte Konditioune sonikéiert. Well d'Ultraschallenergie duerch d'Mauere vun de Fläschen an de Proufmedium gekoppelt ass, behalen d'Fläschen während der Behandlung zou. Doduerch gëtt Probeverloscht a Querschmidde komplett vermeit.

Vials an Tuben passend zum VialTweeter

De VialTweeter ass geegent fir 10 gemeinsam konisch oder ronnen-ënnen Tuben ze halen wéi Eppendorf, Zentrifuge, Kryo-Fläschen a verschidde NUNC-Fläschentypen, awer d'Lächer kënnen op Ufro un aner Fläsch- a Schlaanggréissten adaptéiert ginn. Loosst eis w.e.g. wëssen wéi eng Zort Tuben Dir wëllt benotze fir datt mir Ären VialTweeter deementspriechend änneren. Fir méi grouss Reagenzglieser wéi Falcon Tuben an aner Testbehälter, Becher a Gefässer ass d'VialPress eng praktesch Léisung.

De VialTweeter mat VialPress

Wärend de VialTweeter selwer mat sengen 10 Réierlächer schonn en eenzegaartegt an héich funktionnelt Ultraschallapparat ass, mécht de VialPress Add-on de VialTweeter nach méi villsäiteg a flexibel fir ze bedreiwen. D'VialPress ass en Accessoire fir de VialTweeter besteet aus enger Klemmbar, déi et erméiglecht méi grouss Musterréier wéi Falcon Tuben oder aner kleng bis mëttelgrouss Testbecher op d'VialTweeter Front ze fixéieren. D'Bild op der lénkser Säit weist de VialTweeter deen 10 Eppendorf Fläschen am Block hält, wärend d'VialPress ee méi grousse Reagenzglieser op der viischter Säit fir Sonikatioun fixéiert. D'VialPress ass fäeg bis zu 5 gréissere Reagenzglieser fir intensiv Opléisung ze halen.

VialTweeter Probe Virbereedungsprotokollen

De VialTweeter gëtt wäit benotzt fir biologesch Proben ze sonikéieren. Virun Analyse musse Proben op biochemesch oder biophysikalesch Analysen an Assays virbereet ginn, zB duerch Lysis, Tissue Homogeniséierung, Protein Extraktioun, DNA / RNA Scheieren, Entgasung asw. De VialTweeter erfëllt dës Ultraschallprozesser zouverléisseg a liwwert reproduzéierbar Resultater. Eng gemeinsam Uwendung vum VialTweeter ass d'Lysis / Zell Stéierung vu Mamendéieren (Mënsch an Déieren) Stoffer souwéi Bakterienzellen a Viruspartikelen. Erfollegräich VialTweeter-behandelt biologesch Proben enthalen mënschlech Longepithelzellen, haematopoietesch Stammzellen, myeloesch Leukämie Zellen, Escherichia coli, An Bacillus subtilis, An Bacillus anthracis, An Francisella tularensis, An Yersinia pestis, An Streptococcus pyogenes, An Caulobacter Crescentus, An Mycoplasma pneumoniae, Mykobakterien / Mycobacterium Tuberkulosekomplex (MTBC) a vill aner bakteriell, botanesch a mikrobiell Zellen.
Hei drënner fannt Dir e puer ausgewielte Protokoller mat dem VialTweeter.

E.Coli Lysis Mat VialTweeter fir In-Vivo Glutathion Determinatioun

Escherichia coli Bakterien vun der Stamm MG1655 goufen a MOPS minimal Medium an engem Gesamtvolumen vun 200ml ugebaut bis en A600 vun 0,5 erreecht gouf. D'Kultur gouf a 50-ml Kulture fir Stressbehandlung gedeelt. No 15 min vun der Inkubatioun mat 0,79 mm Allicin, 1 mm Diamid oder Dimethylsulfoxid (Kontroll), goufen d'Zellen bei 4.000g bei 4 ° C fir 10 min gesammelt. Zellen goufen zweemol mat KPE Puffer gewascht virun der Resuspension vu Pellets an 700µl KPE Puffer. Fir Depoteinatioun goufen 300 µl vun 10% (w / v) Sulfosalicylsäure bäigefüügt virum Ënnerbriechung vun den Zellen duerch Ultraschall (3 x 1 min; VialTweeter Ultraschall). Supernatants goufen no der Zentrifugatioun gesammelt (30 min, 13.000 g, 4 ° C). Sulfosalicylsäurekonzentratioune goufen op den Zousaz vun 3 Volumen KPE-Puffer op 1% ofgeholl. Miessunge vu totalem Glutathion a GSSG goufen wéi uewe beschriwwen duerchgefouert. Zellular Glutathion Konzentratioune goufen op engem Volume vun E. coli Zellen vu 6,7 × 10-15 Liter an enger Zelldicht vun A600 0,5 berechent (entsprécht 1 × 108 Zellen ml-1 Kultur). GSH Konzentratioune goufen duerch Subtraktioun vun 2 [GSSG] aus totalem Glutathion berechent. (Müller et al. 2016)

Zell Lysis mat VialTweeter virum Grafite Schmelzhäre Atomabsorptionsspektrometrie

Bacillus subtilis 168 (trpC2) goufen 15 Minutte vun Antibiotikastress ausgesat, duerno goufen d'Zellen op 3.320 xg gesammelt, fënnef Mol mat 100 mm Tris / 1 mm EDTA, pH 7,5 gewäsch, an 10 mm Tris, pH 7,5 resuspendéiert an duerch Ultraschall gestéiert an engem Hielscher VialTweeter Instrument. (Wenzel et al. 2014)

VialTweeter Probe Virbereedung virum Massespektrometrie

Déi lyophiliséiert Zellpellets vu mënschlechen CD34􏰀 hematopoietesche Stamm / Progenitor Zellen goufen an 10 µl (200 µl fir bulk HEK293 Virbereedung fir d'Peptid Verdënnungsreihe) vun 8 M Harnstoff an 100 mM Ammonium Waasserstoffkarbonat resuspendéiert a lyséiert duerch Sonikatioun mam Hielscher VialTweeter bei enger Amplitude vu 60%, engem Zyklus vu 60% an enger Dauer vun 20s fir dräimol mat Zwëschenofkillung op Äis. (Amon et al. 2019)

Probe Préparatiounsprotokoller mat der VialPress

Frësch Salat (Lactuca sativa) gouf an 0,5 M HEPES Puffer (pH 8, KOH ugepasst) an engem Verhältnes vun 1 g Planz (frësch Gewiicht) op 200, 100, 50 oder 20 ml Pufferléisung homogeniséiert. D'Verhältnis vu Planzemass zu Pufferléisungsvolumen gouf variéiert fir de Gesamt homogenat Volumen tëscht 3,5 an 12 ml ze halen. D'Verhältnis vu Planzemass zu Pufferléisungsvolumen gouf variéiert fir de Gesamt homogenat Volumen tëscht 3,5 an 12 ml ze halen, sou datt d'Homogeniséierung mat der Sond erlaabt. Homogenate hunn dunn indirekt Ultraschall mat engem UP200St mat VialTweeter mat 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Däitschland) fir 3 min ausgestatt (80% Puls an 100% Kraaft). Mat dësem Apparat gouf Kontaminatioun vermeit. (Laughton et al. 2019)

Verléisslech Temperaturkontrolle wärend der Sonikatioun mam VialTweeter

Temperatur ass e wichtege Prozess beaflosst Faktor dee besonnesch wichteg ass fir d'Behandlung vu biologesche Proben. Wéi all mechanesch Proufvirbereedungstechniken, Sonikatioun kreéiert Hëtzt. Wéi och ëmmer, d'Temperatur vun de Proben kann gutt kontrolléiert ginn wann Dir de VialTweeter benotzt. Mir presentéieren Iech verschidden Optiounen fir d'Temperatur vun Äre Proben z'iwwerwaachen a kontrolléieren, wa se se mam VialTweeter a VialPress fir d'Analyse virbereeden.

1. Iwwerwaachung vun der Probtemperatur: Den Ultraschallprozessor UP200St, deen de VialTweeter fiert, ass mat enger intelligenter Software an engem pluggbaren Temperatursensor ausgestatt. Stiech den Temperatursensor an den UP200St a setzt den Tipp vum Temperatursensor an ee vun de Proufréier. Iwwer digital faarweg Touch-Display kënnt Dir am Menu vum UP200St e spezifescht Temperaturbereich fir Är Probe-Sonikatioun setzen. Den Ultraschall stoppt automatesch wann d'maxstemperatur erreecht gëtt a pauséiert bis d'Prouftemperatur bis op den ënneschte Wäert vun der festgeluechter Temperatur is. Da fänkt d'Sonikatioun automatesch erëm un. Dës intelligent Feature verhënnert Hëtztinduzéierter Degradatioun.
2. De VialTweeter Block ka virgekillt ginn. Setzt de VialTweeter Block (nëmmen d'Sonotrode ouni Transducer!) An de Frigo oder Gefrierschrank fir den Titanblock vir ze killen hëlleft d'Temperaturerhéijung an der Probe ze verréckelen. Wa méiglech kann d'Prouf selwer och virgekillt ginn.
3. Benotzt dréchent Äis fir bei der Opléisung ofzekillen. Benotzt e flaache Schacht gefëllt mat dréchenem Äis a placéiert de VialTweeter op dat dréchent Äis, sou datt d'Hëtzt sech séier opléise kann.

Clienten weltwäit benotze de VialTweeter a VialPress fir hir alldeeglech Proufvirbereedungsaarbecht a biologeschen, biochemeschen, medizineschen a klineschen Laboratoiren. Déi intelligent Software an d'Temperaturregelung vum UP200St Prozessor, d'Temperatur gëtt zouverlässeg kontrolléiert an duerch Hëtzt induzéiert Probe Degradatioun vermeit. Ultraschall Proufvirbereedung mam VialTweeter a VialPress liwwert héich zouverléisseg a reproduzéierbar Resultater!

Technesch Detailer vum VialTweeter

De VialTweeter ass eng Block-Sonotrode aus Titan, déi bis zu 10 Fläschen an de Lächer am Block hale kënnen. Zousätzlech kënne bis zu 5 gréisser Reagenzglieser mat der VialPress un d'VialTweeter Front geklemmt ginn. De VialTweeter ass sou entwéckelt datt d'Ultrasonication Energie an all agefouert Fläsch verdeelt gëtt fir zouverléisseg an eenheetlech Opléisungsresultater ze garantéieren. E klenge Pivot passt d'VialTweeter Sonotrode un ongläichem Buedem un a richt d'Testrohre vertikal aus.

Virdeeler vum VialTweeter op ee Bléck

• Intensiv Ënnersetzung vun bis zu 10 Fläschelen gläichzäiteg
• Indirekt Opléisung bei héich Ultraschallintensitéit duerch Behältermauer an d'Probe
• Indirekt Soinatioun vermiddert Cross-Contamination a Probe Verlust
• Reproducible Resultater wéinst der verännerbarer an der kontrolléierbar Sonikite Amplitude
• De VialPress erlaabt Iech méi grouss Tubaks ze sonicéieren
• Verännerbar Amplitude vun 20 bis 100%
• Einstellbare Pulsmodus vu 0 bis 100%
• autoklavabel

De VialTweeter gëtt ugedriwwe vun der UP200St, en 200 Watt mächtege Ultraschallprozessor. Den UP200St ass mat enger intelligenter Software ausgestatt déi déi präzis Kontroll iwwer all wichteg Ultraschall-Prozessparameter wéi Amplitude, Opléisungszäit, Pulsatioun an Temperatur erlaabt. Dëst mécht de VialTweeter zu engem zouverléissegen Tool fir erfollegräich reproduzéierbar Prozessresultater a biologeschen a biochemesche Laboratoiren.
Amplitude kann tëscht 20 an 100% ugepasst ginn an erlaabt doduerch d'Ultraschallintensitéit op Är Probe unzepassen. Zum Beispill, d'Scheier an d'Fragmentéierung vun DNA a RNA erfuerdert eng méi mëll Amplitude fir d'Produktioun vun ze klengen DNA Fragmenter ze vermeiden, d'Tissue Homogeniséierung vum Maus Gehir brauch héich Intensitéit Sonikatioun. Wielt déi ideal Amplitude, Opléisungsintensitéit an Dauer iwwer dem intelligenten an intuitive Menu um UP200St Prozessor. De Menu an d'Astellunge kënne ganz einfach iwwer faarweg Touch Display zougänglech gemaach ginn. An den Astellunge kënnt Dir Virausbezuelungsparameter wéi Amplitude, Pulsatioun / Zyklusmodus, Opléisungsdauer, Gesamtenergie-Input an Temperaturlimitë virstellen. A Fuerschung a Produktioun ass d'Widderhuelbarkeet vu Prouwen an Testresultater entscheedend. Dëst bedeit datt déi präzis Opnam vu Prozessbedingungen a Sonikatiounsprotokoller ganz wichteg sinn. Den automateschen Dateprotokolléiere schreift all Opléisungsdaten an eng CSV Datei op eng integréiert SD-Kaart, fir datt Dir verschidde Sonikatiounsleef einfach préift a vergläicht. All Ultraschall-Prozessdate kënne ganz einfach zougeruff a gedeelt ginn als CSV-Datei.
Hielscher Ultrasonics beméit Iech fortgeschratt Technologie ze bidden fir Är Fuerschungsaarbecht ze erliichteren an ze verbesseren!