Protokoll fir d’Inaktivéierung vum Coronavirus SARS-CoV-2 mat Ultraschall

Den Hielscher VialTweeter ass en eenzegaartegen Ultraschallapparat fir d’Preparatioun vu méi Prouwen, dee fir d’Inaktivéierung vum Coronavirus SARS-COV-2 benotzt gëtt. Mam VialTweeter kënne bis zu 10 Prouweréiercher gläichzäiteg preparéiert ginn, wouduerch en den idealen Apparat fir d’Veraarbechtung vu grousse Quantitéite vu Prouwen ass.

Inaktivéierung vum Coronavirus SARS-CoV-2 mam VialTweeter

Nodeems d’Fixéiermëttel ewechgeholl gi war, goufen d’Monoschichten dräimol mat phosphatgepufferter Salzléisung (PBS) gewäsch, ier d’Zellen an 1mL MEM/5% FBS ofgeschraapt a mam Hielscher Ultraschallprozessor mat Ultraschall behandelt goufen (3 × 10 Sekonnen un, 10 Sekonnen aus bei 100% Leeschtung an Amplitud), mat der Ausféierung UP200St mat VialTweeter als Usaz. D’Iwwerstänn goufen duerch Zentrifugéiere bei 3000 × g fir 10 Minutte gekläert. Liest hei ënnen de komplette Protokoll vu Welch et al. (2020) fir d’Inaktivéierung vum Coronavirus SARS-CoV-2:

Zellen a Virus

Operativ Detailer iwwer d’Zellkultur an d’Passagéierung am SARS-CoV-2-Protokoll goufen aus Sécherheetsgrënn ewechgelooss.
De benotzte Virus war de SARS-CoV-2-Stamm hCOV-19/England/2/2020, dee vu PHE den 29/01/2020 aus dem éischte Patientecluster a Groussbritannien isoléiert gouf.
Fir d’Reagenzien a Chemikalien, déi fir d’SARS-CoV-2-Inaktivéierung benotzt goufen, souwéi fir d’Eliminatioun vun der Zytotoxizitéit vun de Reagenzien, kuckt wgl. de wëssenschaftleche Bericht vu Welch et al. (2020).

Virusinaktivéierung duerch Detergenzien – Protokoll fir d’Inaktivéierung vum Coronavirus SARS-CoV-2 vu Welch et al. 2020

SARS-CoV-2-Inaktivéierung


Fir kommerziell Produite goufe Viruspreparatiounen (Gewësskulturflëssegkeet, mat Titere vun 1 × 10⁶ bis 1 × 10⁸ PFU/ml) an dräifacher Ausféierung mat Reagenzie behandelt, an de Konzentratiounen a fir d’Kontaktzäiten, déi an de Gebrauchsinstruktioune vun den Hiersteller recommandéiert goufen, wa se disponibel waren, oder an de Konzentratiounen a fir d’Zäiten, déi vun den Testlaboratoirë speziell gefrot goufen. Wann den Hiersteller eng Rei vu Konzentratiounen uginn hat, gouf dat niddregst Verhältnes vu Produit zu Prouf getest (d. h. déi niddregst recommandéiert Konzentratioun vum Testproduit). Reagenzie fir Proufentransportréiercher goufe mat engem Verhältnes vun engem Volumendeel Gewësskulturflëssegkeet zu zéng Volumendeeler Reagens getest, ausser wann den Hiersteller e Volumeverhältnes vu Prouweflëssegkeet zu Reagens uginn hat. Detergenzien, Fixéiermëttel a Léisungsmëttel goufen an den uginnene Konzentratioune fir déi uginn Zäite getest. All Inaktivéierungsschrëtt goufe bei Raumtemperatur (18 – 25°C) duerchgefouert. Fir alternativ Prouftypen ze testen, gouf Virus an engem Verhältnes vun 1:9 an déi uginn Proufematrix bäigefüügt an duerno wéi uewe beschriwwe mat den Testreagenzie behandelt. All Experimenter hunn a jee dräifacher Ausféierung Kontrollprouwen ëmfaasst, déi enger Scheinbehandlung mat engem gläichwäertege Volume PBS amplaz vum Testreagens ënnerzu goufen. Direkt no der erfuerderlecher Kontaktzäit gouf 1mL vun der behandelter Prouf mat der passend ausgewielter Filtratiounsmatrix verschafft. D’Eliminatioun vun de Reagenzie fir d’Inaktivéierungstester gouf an engem méi grousse Spin-Saileformat mat Pierce 4mL Detergent Removal Spin Columns (Thermo Fisher) duerchgefouert, oder andeems eidel Pierce-Zentrifugesaile mat enger Kapazitéit vun 10mL (Thermo Fisher) mat SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-400HR oder Sephadex LH-20 gefëllt goufen, fir 4mL gepaakte Kärecher/Harz ze kréien. Fir d’Rengegung mat Amicon-Filtere goufen 2 × 500μl Prouwe mat zwee Zentrifugalfilteren no der virdru beschriwwener Method gerengegt an duerno zesummegefouert. Fir Formaldehyd a Formaldehyd mat Glutaraldehyd ze eliminéieren, gouf ee Filter mat 1× 500μl Prouwevolume benotzt; no der Veraarbechtung gouf d’Prouf a 500μl PBS resuspendéiert an zu 400ul MEM/5% FBS bäigefüügt. Fir d’Inaktivéierung vun infizéierte Monoschichte goufe Kulturfläsche mat 12,5 cm² mat Vero E6-Zellen (2,5 × 10⁶ Operativ Uweisunge fir d’Infektioun an d’Kultivatioun vu SARS-CoV-2 goufen aus Sécherheetsgrënn ewechgelooss.₂ D’Kultivatiounsdauer gouf aus Sécherheetsgrënn ewechgelooss. Den Iwwerstand gouf ewechgeholl, an d’Zelle goufe mat 5mL Formaldehyd oder Formaldehyd a Glutaraldehyd bei Raumtemperatur fir 15 oder 60 Minutte fixéiert. D’Fixéiermëttel gouf ewechgeholl, an d’Monoschichte goufen dräimol mat PBS gewäsch, ier d’Zellen an 1mL MEM/5% FBS ofgeschraapt a mat engem UP200St mat VialTweeter-Usaz (Hielscher Ultrasound Technology) mat Ultraschall behandelt goufen (3 × 10 Sekonnen un, 10 Sekonnen aus bei 100% Leeschtung an Amplitud). D’Iwwerstänn goufen duerch Zentrifugéiere bei 3000 × g fir 10 Minutte gekläert.


Detailer iwwer dat Reagens, dat fir d’Inaktivéierung vum Coronavirus SARS-CoV-2 mam Ultraschallapparat VialTweeter nom Protokoll vu Welch et al. 2020 benotzt gouf

De komplette Protokoll, inklusiv der Benotzung vum Hielscher VialTweeter, ass hei ze fannen:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Raffinéiert Ultraschalldesintegratoren an Apparater fir den Zellopbroch

Den Ultraschallapparat VialTweeter fir méi Prouwen ass nëmmen eng vu ville Ultraschallléisunge fir d’Proufepreparatioun a biologeschen, biocheemeschen a klinesche Laboratoiren. Hielscher Ultrasonics bitt den idealen Ultraschalldesintegrator fir Är Uwendung, z. B. Zelllys, Zellextraktioun, Gewësshomogeniséierung, Solubiliséierung vu Lysaten, Opléisen, Entgase vu Prouwen asw.
Deelt eis mat, wéi vill Prouwen Dir pro Stonn a pro Dag verschaffe musst, ob Dir direkt oder indirekt Ultraschallbehandlung virzitt a wat d’Zil vun der Ultraschallbehandlung vun de Prouwen ass. Mir recommandéieren Iech deen Ultraschallapparat, deen am beschte fir Är deeglech Aarbechtsroutine gëeegent ass!
Déi digital Ultraschallprozessore vun Hielscher Ultrasonics si mat intelligenter Software, automatescher Datenopzeechnung, einfache Virastellméiglechkeete fir d’Temperaturkontroll, d’Dauer vun der Ultraschallbehandlung an den Zyklus-/Pulsmodus souwéi mat Prouwebeliichtung a Fernsteierung iwwer de Browser ekipéiert. Mir beméien eis, eis Ultraschallapparater esou intelligent wéi méiglech ze maachen, fir datt Är Fuerschung an Är Aarbechtsroutine esou praktesch an erfollegräich wéi méiglech ginn.
Klickt hei, fir weider Uwendungen inklusiv Protokoller fir d’Proufepreparatioun mat Ultraschall mam VialTweeter ze fannen!