Protokoll fir SARS-CoV-2 Coronavirus Inaktivéierung mat Sonication

Den Hielscher VialTweeter ass eng eenzegaarteg Ultraschall Multi-Sample Virbereedung Eenheet, déi benotzt gëtt fir de Coronavirus SARS-COV-2 ze inaktivéieren. De VialTweeter erlaabt Iech bis zu 10 Probefläschen gläichzäiteg ze preparéieren an ass domat déi ideal Eenheet fir Masseprobeveraarbechtung.

Inaktivéierung vum SARS-CoV-2 Coronavirus mam VialTweeter

No der Entfernung vum Fixativ goufen d'Monoschichten dräimol mat phosphatgebufferter Salzlinn (PBS) gewäsch, ier d'Zellen an 1mL MEM / 5% FBS geschrauft goufen a sonikéiert (3 × 10 Sekonnen op, 10 Sekonnen aus bei 100% Kraaft an Amplitude) mat Hëllef vun der Hielscher ultrasonic Prozessor UP200St mat VialTweeter Uschloss. Supernatanten goufen gekläert duerch Zentrifugéierung bei 3000 × g fir 10 Minutten. Liest de komplette Protokoll hei fir d'SARS-CoV-2 Coronavirus Inaktivéierung vum Welch et al. (2020) ënnert:

Zellen a Virus

Vero E6 Zellen (Vero C1008; ATCC CRL-1586) goufen am modifizéierten Eagle's Minimum Essential Medium (MEM) kultivéiert, ergänzt mat 10% (v /v) Fetal Kallefserum (FCS). Virus benotzt war SARS-CoV-2 Stamm hCOV-19/England/2/2020, isoléiert vum PHE aus dem éischte Patientecluster a Groussbritannien den 29/01/2020. Dëse Virus gouf um Passage 1 kritt a fir Inaktivéierungsstudien um Passage 2 oder 3 benotzt.
Fir Reagenzen a Chemikalien, déi fir SARS-CoV-2 Inaktivéierung benotzt ginn, souwéi d'Ewechhuele vun der Reagenzzytotoxizitéit, kuckt w.e.g. de wëssenschaftleche Bericht vum Welch et al. (2020).

Virusinaktivéierung duerch Wäschmëttelen – SARS-CoV-2 Coronavirus Inaktivéierungsprotokoll vum Welch et al. 2020

SARS-CoV-2 Inaktivéierung

Fir kommerziell Produkter, Viruspräparatiounen (Tissuekulturflëssegkeet, Titer rangéiert vun 1 × 10⁶ op 1x10⁸ PFU / ml) goufen an triplicate mat Reagenz behandelt bei Konzentratioune a fir Kontaktzäiten recommandéiert an den Hiersteller d'Benotzungsinstruktiounen, wa verfügbar, oder fir Konzentratioune an Zäite speziell vun Testlaboratoiren gefrot. Wou eng Rei vu Konzentratioune vum Hiersteller uginn ass, gouf de niddregsten Verhältnis vum Produkt zu Prouf getest (dh déi niddregst recommandéiert Konzentratioun vum Testprodukt). Exemplar Transport Röhre Reagens goufe mat engem Verhältnis vun engem Volume vun Tissuekulturflëssegkeet op zéng Volumen Reagens getest, ausser wann e Volumenverhältnis vu Probeflëssegkeet zum Reagens vum Hiersteller spezifizéiert gouf. Detergenten, Fixativen a Léisungsmëttel goufen bei den uginnene Konzentratioune fir déi uginn Zäiten getest. All Inaktivéierungsschrëtt goufen bei Raumtemperatur (18 - 25 ° C) gemaach. Fir Testen vun alternativen Probetypen, gouf de Virus an déi ugewise Probe Matrix an engem Verhältnis vun 1: 9 gespickt, duerno mat Testreagenz behandelt wéi hei uewen. All Experimenter abegraff triplicate Kontroll mock-behandelt Echantillon mat engem gläichwäerteg Volume vun PBS am Plaz vun Test reagent. Direkt no der erfuerderter Kontaktzäit gouf 1mL vun der behandelter Probe mat der entspriechender gewielter Filtratiounsmatrix veraarbecht. Reagensentfernung fir Inaktivéierungstest gouf an engem gréissere Spin Kolonnformat mat Pierce 4mL Detergent Removal Spin Columns (Thermo Fisher) duerchgefouert oder duerch eidel Pierce 10mL Kapazitéit Zentrifugesäulen (Thermo Fisher) mat SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-400HR oder Sephadex LH-20 fir 4mL gepackte Perlen / Harz ze ginn. Fir Reinigung mat Amicon Filteren, goufen 2 × 500μl Proben mat zwee Zentrifugalfiltere gereinegt mat der virdru beschriwwener Method, duerno zesummegefaasst. Fir Formaldehyd a Formaldehyd mat Glutaraldehyd-Entfernung, gouf ee Filter mat 1 × 500μl Probevolumen benotzt, no der Veraarbechtung an 500μl PBS suspendéiert an op 400ul MEM / 5% FBS bäigefüügt. Fir Inaktivéierung vun infizéierte monolayers, 12,5 cm² Flaschen vu Vero E6 Zellen (2,5 × 10⁶ Zellen / Fläsch an 2.5mL MEM / 5% FBS) goufen um MOI 0.001 infizéiert a bei 37 ° C / 5% CO incubated₂ fir 24 Stonnen. Supernatant gouf geläscht, an Zellen fixéiert mat 5mL Formaldehyd, oder Formaldehyd a Glutaraldehyd bei Raumtemperatur fir 15 oder 60 Minutten. De Fixativ gouf geläscht, an d'Monolayer goufen dräimol mat PBS gewascht, ier d'Zellen an 1mL MEM / 5% FBS geschrauft goufen a sonicéiert (3 × 10 Sekonnen op, 10 Sekonnen aus bei 100% Kraaft an Amplitude) mat engem UP200St mat VialTweeter Uschloss (Hielscher Ultraschall) Technologie). Supernatanten goufen gekläert duerch Zentrifugéierung bei 3000 × g fir 10 Minutten.

Detailer vum Reagens benotzt fir SARS-CoV-2 Coronavirus Inaktivéierung mam Ultraschall VialTweeter laut dem Protokoll vum Welch et al. 2020

De komplette Protokoll inklusiv d'Benotzung vum Hielscher VialTweeter kann hei fonnt ginn:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Raffinéiert Ultrasonic Dismembratoren a Zellstéierer

De Multi-Sample Ultrasonicator VialTweeter ass just ee vu ville Ultraschallléisungen fir Probepräparatioun an biologeschen, biochemeschen a klineschen Laboratoiren. Hielscher Ultrasonics bitt den ideale Ultraschall-Dismembrator fir Är Uwendung, zB Zelllysis, Zellextraktioun, Tissuehomogeniséierung, Lysatsolubiliséierung, Opléisung, Probe Entgasung etc.
Loosst eis wësse wéi vill Proben Dir pro Stonn an Dag veraarbecht hutt, wann Dir direkt oder indirekt Sonikatioun léiwer a wat d'Zil vun der Ultraschallprobebehandlung ass. Mir recommandéieren Iech déi gëeegent Ultraschall Eenheet fir Är alldeeglech Aarbecht Routine!
Hielscher Ultrasonics 'Digital Ultrasonic Prozessoren si mat Smart Software, automatesch Datenopnam ausgestatt, einfach Viraussetzungsoptioune fir Temperaturkontrolle, Sonikatiounsdauer, Zyklus / Pulsmodus wéi och Probebeleuchtung a Browser Fernbedienung. Mir beméien eis fir eis Ultraschallgeräter sou schlau wéi méiglech ze maachen, sou datt Är Fuerschung an Aarbechtsroutine sou bequem an erfollegräich wéi méiglech gëtt.
Klickt hei, fir méi Uwendungen ze fannen, dorënner Protokoller vun der Ultraschallprobepräparatioun mam VialTweeter!