Hielscher Ultraschall Technologie

Zell Lysis vu BL21 Zellen duerch Ultrasonikatioun

BL21 Zellen sinn eng Belaaschtung vun E. coli déi wäit a Fuerschungslaboratoiren, Biotechnologie an industrieller Produktioun benotzt gëtt wéinst hirer Fäegkeet fir Proteinen héich effizient auszedrécken. Ultraschall Zell Stéierungen, Lysis a Protein Extraktioun ass déi gemeinsam Method fir déi gezielte Proteine vum zellularen Interieur vu BL21 Zellen ze isoléieren a sammelen. Ultrasonikatioun stéiert d'Zell komplett a verëffentlecht all agespaart Proteine, wouduerch 100% vum Protein verfügbar ass.

BL21 Zellen fir Protein Ausdrock

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsBL21 Zell ass eng chemesch kompetent E. coli Bakteriestamm déi passend fir Transformation an héijen Niveau Protein Ausdrock mat engem T7 RNA Polymerase-IPTG Induktiounssystem. BL21 Zellen erlaben héich Effizienz Protein Ausdrock vun all Gen dat ënner der Kontroll vun engem T7 Promoteur ass. Den E. coli Stamm BL21 (DE3) ass en T7 RNA Polymerase-baséiert Protein Produktiounsstamm kombinéiert mat T7 Promoteur-baséierten Ausdrockvektoren a gëtt wäit an de Laboratoiren an der Industrie applizéiert fir rekombinant Proteinen ze produzéieren. Am BL21 (DE3) gëtt den Ausdrock vum Gen kodéiert fir dat rekombinant Protein vun der chromosomal kodéierter T7 RNA Polymerase (T7 RNAP) transkribéiert, déi aacht Mol méi séier transkribéiert wéi konventionell E. coli RNAP. Dëst mécht d'Spannung BL21 (DE3) héich effizient a mécht en zu engem vun de meescht bevorzugte Protein Ausdrock Zellsystemer.

Protokoll fir Ultraschall Lysis a Protein Extraktioun aus BL21 Zellen

Zelllysis vun BL21 Zellen gëtt meeschtens mat Ultraschall a Kombinatioun mat Natriumlauroylsarcosinat (och bekannt als Sarkosyl) als Lysepuffer gemaach. D'Virdeeler vun Ultraschallzell Stéierung an Protein Extraktioun leien an der Zouverlässegkeet, Reproduzéierbarkeet wéi och einfach, sécher a séier Operatioun vun Ultraschaller. De Protokoll hei ënnen gëtt eng Schrëtt fir Schrëtt Richtung Ultraschall BL21 Zell Lysis:

Probe-Typ Versécherung UP200St fir Lyse

Ultraschall Zell Disruptor UP200St mat Mikro-Tipp S26d2 fir Lysis a Protein Extraktioun

Informatiounen ufroen




Notéiert eis Privatsphär Politik.


  • Fir d'Chaperonproteine z'entfernen, goufen BL21 bakteriell Pellets a 50 ml Äiskalem Sodium Tris-EDTA (STE) Puffer (bestehend aus 10 mm Tris-HCL, pH 8,0, 1 mm EDTA, 150 mm NaCl ergänzt mat 100 mm PMSF).
  • Déi, 500 ul Lysozym (10 mg / ml) ginn derbäi an d'Zellen ginn 15 Minutten op Äis incubéiert.
  • Duerno ginn 500 ul vun DTT a 7 ml Sarkosyl (10% (w / v) aus STE Puffer) bäigefüügt.
  • Et ass essentiell all Purifikatiounspuffer äiskal ze halen an d'Echantillonen all Zäit op Äis ze halen. All Reinigungsschrëtt sollen wa méiglech am kale Raum duerchgefouert ginn.
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • Fir Ultraschall Lysis a Protein Extraktioun ginn d'Echantillonen an der VialTweeter MultiSample Ultrasonicator fir 4 x 30 Sekonnen op 100% Amplitude mat engem 2 min Intervall tëscht all Opléisung. Alternativ ass e Sonde-Typ Ultraschall Homogeniséierer mat Mikro-Tipp zB UP200Ht mat S26d2 (3 x 30 sec, 2 min. Paus tëscht Ultraschallzyklen, 80% Amplitude) ka benotzt ginn.
  • Fir weider Purifikatiounsschrëtt musse Proben op Äis gehale ginn oder alternativ bei -80 ° C bis weider Veraarbechtung gelagert ginn.

Ultraschall Lysis ënner Prescise Temperatur Kontroll

Déi präzis an zouverléisseg Temperatursteuerung ass entscheedend beim Ëmgang mat biologesche Proben. Héich Temperaturen initiéieren thermesch induzéiert Protein Degradatioun a Proben.
Wéi all mechanesch Proufvirbereedungstechniken, Sonikatioun kreéiert Hëtzt. Wéi och ëmmer, d'Temperatur vun de Proben kann gutt kontrolléiert ginn wann Dir de VialTweeter benotzt. Mir presentéieren Iech verschidden Optiounen fir d'Temperatur vun Äre Proben z'iwwerwaachen a kontrolléieren wärend Dir se mam VialTweeter a VialPress fir d'Analyse preparéiert.

  1. Iwwerwaachung vun der Probtemperatur: Den Ultraschallprozessor UP200St, deen de VialTweeter fiert, ass mat enger intelligenter Software an engem pluggbaren Temperatursensor ausgestatt. Stiech den Temperatursensor an den UP200St a setzt den Tipp vum Temperatursensor an ee vun de Proufréier. Iwwer digital faarweg Touch-Display kënnt Dir am Menu vum UP200St e spezifescht Temperaturbereich fir Är Probe-Sonikatioun setzen. Den Ultraschall stoppt automatesch wann d'maxstemperatur erreecht gëtt a pauséiert bis d'Prouftemperatur bis op den ënneschte Wäert vun der festgeluechter Temperatur is. Da fänkt d'Sonikatioun automatesch erëm un. Dës intelligent Feature verhënnert Hëtztinduzéierter Degradatioun.
  2. De VialTweeter Block ka virgekillt ginn. Setzt de VialTweeter Block (nëmmen d'Sonotrode ouni Transducer!) An de Frigo oder Gefrierschrank fir den Titanblock vir ze killen hëlleft d'Temperaturerhéijung an der Probe ze verréckelen. Wa méiglech kann d'Prouf selwer och virgekillt ginn.
  3. Benotzt dréchent Äis fir bei der Opléisung ofzekillen. Benotzt e flaache Schacht gefëllt mat dréchenem Äis a placéiert de VialTweeter op d'Äis, sou datt d'Hëtzt sech séier opléise kann.

Clienten weltwäit benotze de VialTweeter a VialPress fir hir alldeeglech Proufvirbereedungsaarbecht a biologeschen, biochemeschen, medizineschen a klineschen Laboratoiren. Déi intelligent Software an d'Temperaturregelung vum UP200St Prozessor, d'Temperatur gëtt zouverlässeg kontrolléiert an duerch Hëtzt induzéiert Probe Degradatioun vermeit. Ultraschall Proufvirbereedung mam VialTweeter a VialPress liwwert héich zouverléisseg a reproduzéierbar Resultater!

Fannt den Optimal Ultraschall Disruptor fir Är Lysis Uwendung

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Hielscher Ultrasonics ass laang Zäit erfuerene Produzent vun héich performante Ultraschallzell-Disruptoren an Homogeniséierer fir Laboratoiren, Bank-Top an industriell Skala Systemer. Är bakteriell Zellkulturgréisst, Äert Fuerschungs- oder Produktiounsziel an de Volume vun der Zell fir pro Stonn oder Dag ze verschaffen si wesentlech Facteure fir de richtegen Ultraschallzellen-Disruptor fir Är Uwendung ze fannen.
Hielscher Ultrasonics bitt verschidde Léisunge fir d'simultan Opléisung vu Multi-Proben (bis zu 10 Fläschen mat dem VialTweeter) a Masseproben (dh Mikrotiterplacke / ELISA Placken mat der UIP400MTP), souwéi de klassesche Probe-Typ Lab Ultraschall mat verschiddene Kraaftniveau vu 50 bis 400 Watt bis voll industriell Ultraschallveraarbechter mat bis zu 16.000 Watt pro Eenheet fir kommerziell Zellstéierungen a Protein Extraktioun a grousser Produktioun. All Hielscher Ultraschaller si fir d'24/7/365 Operatioun ënner voller Belaaschtung gebaut. Robustheet an Zouverlässegkeet sinn Haaptfeatures vun eisen Ultraschall-Geräter.
All digital Ultraschall Homogeniséierer si mat intelligenter Software ausgestatt, faarweg Touch Display an automateschen Dateprotokolléieren, déi den Ultraschallapparat zu engem bequemen Aarbechtsinstrument am Labo a Produktiounsanlagen maachen.
Loosst eis wëssen, wéi eng Zellen, wat Volumen, mat wéi enger Frequenz a mat wéi engem Zil Dir Är biologesch Proben veraarbecht hutt. Mir empfeelen Iech am meeschte passend Ultraschallzell Disruptor fir Är Prozessufuerderungen.

Den Dësch hei ënnendrënner Iech eng Indikatioun iwwer déi ongeféier Veraarbechtungskapazitéit vun eise Ultraschallsystemer vu kompakten Handheld Homogeniséierer a MultiSample Ultrasonicatoren zu industriellen Ultraschallveraarbechter fir kommerziell Uwendungen:

Konte gefouert QShortcut Duerchflossrate recommandéiert Comments
96-Wuel / Mikrotiterplacke na UIP400MTP
10 Fläschen à 0,5 bis 1,5 ml na VialTweeter bei UP200St
0.01 bis 250mL 5 bis 100mL / min UP50H
0.01 bis 500mL 10 bis 200mL / min UP100H
10 bis 2000mL 20 bis 400mL / min UP200Ht, An UP400St
0.1 bis 20L 0.2 bis 4L / min UIP2000hdT
10 bis 100L 2 bis 10L / min UIP4000hdT
na 10 bis 100L / min UIP16000
na méi grouss Stärekoup vun UIP16000

Kontaktéiert eis! / Frot eis!

Frot méi Informatiounen

W.e.g. benotzt d'Form hei ënnen fir zousätzlech Informatiounen iwwer Ultrasonic Prozessoren, Uwendungen a Präis ze froen. Mir freeën eis Äre Prozess mat Iech ze diskutéieren an Iech en Ultrasonic System unzebidden, deen Är Ufuerderungen entsprécht!










Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

Ultraschall UP200Ht mat 2mm Mikrotip S26d2 fir d'Sonikatioun vu klenge Proben

Literatur / Referenzen



Fakten Wësse wat weess

Escherichia Coli Bakterien

Escherichia coli ass eng Bakterietyp, dat ass net sporend, Gram-negativ a charakteriséiert sech duerch seng Form vun enger riichter Staang. E.coli Bakterien sinn an der Ëmwelt, Liewensmëttel, an Daarm vu Mënsch an Déier. E. coli ass normalerweis beweeglech duerch peritrichous Flagella, awer et ginn och net-beweeglech Zorten. E.coli si sougenannt fakultativ anaerobe chemoorganotroph Organismen, dat heescht si fäeg sinn esouwuel den Otem- wéi och Fermentatiounsmetabolismus. Déi meescht E.coli Typen si gutt a erfëllen nëtzlech Funktiounen am Kierper, z.
Escherichia coli Bakterienzell vun der sougenannter B-Typ sinn eng speziell Kategorie vun E. coli Stämm, déi wäit an der Fuerschung benotzt ginn fir Mechanismen z'ënnersichen wéi Bakteriophagempfindlechkeet oder Restriktiounsmodifikatiounssystemer. Ausserdeem ginn E.coli Bakterien als zouverléisseg Aarbechtspäerd fir Protein Ausdrock an der Biotechnologie a Life Science Laboratoiren geschätzt. Zum Beispill gëtt E.coli benotzt fir Verbindungen wéi Proteinen an Oligosacchariden op industrieller Skala ze synthetiséieren. Wéinst spezifesche Funktiounen wéi Proteasmangel, gerénger Acetatproduktioun op engem héijen Niveau vu Glukos, a verstäerkter Permeabilitéit, sinn E. coli B Zellen am heefegsten Hostzellen fir d'Produktioun vu genetesch manipuléierte Proteinen.

Rekombinant Protein

Rekombinant Proteine (rProt) kréien eng bedeitend Bedeitung a villfältege Branchen, och an der chemescher Produktioun, pharmazeutescher, kosmetescher, mënschlecher an Déiermedizin, Landwirtschaft, Liewensmëttel wéi och Offallbehandlungsindustrie.
D'Produktioun vum rekombinanten Protein erfuerdert d'Benotzung vun engem Expressiounssystem. Als Ausdréck vun Zellsystemer fir d'Produktioun vu rekombinanten DNA kënne béid prokaryotesch an eukaryotesch Zellen benotzt ginn. Wärend bakteriell Zelle am meeschte verbreet gi fir Proteinausdrock wéinst Facteure wéi niddrege Käschten, einfach Skalierbarkeet an einfache Mediebedingungen, Mamendéieren, Hef, Algen, Insekt a Zellfräi Systemer sinn etabléiert Alternativen. D'Proteinstyp, d'funktionell Aktivitéit, sou wéi déi erfuerderlech Ausbezuelung vum ausgedréckte Protein beaflossen d'Auswiel vum Zellsystem deen fir Proteinausdrock benotzt gëtt.
Fir e rekombinant Protein auszedrécken, muss eng bestëmmten Zell mat engem DNA Vecteur transfizéiert ginn, deen d'Schabloun vun der rekombinanter DNA enthält. D'Zellen, déi mat der Schabloun transfizéiert sinn, ginn duerno kultivéiert. Als Konsequenz vum zellularen Mechanismus transkribéieren d'Zellen d'Protein vum Interesse an iwwersetzen doduerch dat geziilt Protein.
Wéi déi ausgedréckte Proteine an der cellulärer Matrix agefaang sinn, muss d'Zell lyséiert ginn (gestéiert a gebrach) fir d'Proteine fräigeloossen. An engem nächste Rengegungsschrëtt gëtt de Protein getrennt a gereinegt.
Dat éischt rekombinant Protein dat bei der Behandlung benotzt gouf war rekombinant mënschlecht Insulin 1982. Haut gi méi wéi 170 Aarte vu Rekombinant Protein weltwäit fir medizinesch Behandlungen hiergestallt. Allgemeng benotzt rekombinant Proteine benotzt an der Medizin sinn zum Beispill rekombinant Hormonen, Interferonen, Interleukinen, Wuestumfaktoren, Tumornekrose Faktoren, Blutgerinnungsfaktoren, thrombolytesch Medikamenter, an Enzyme fir d'Behandlung vu grousse Krankheeten wéi Diabetis, Zwergismus, Myokardinfarkt, Kongestiv Häerzversoen, zerebrale Apoplexie, Multiple Sklerose, Neutropenie, Thrombozytopenie, Anämie, Hepatitis, rheumatoider Arthritis, Asthma, Crohn Krankheet a Kriibs Therapien. (vgl. Phuc V. Pham, an Omics Technologies a Bio-Engineering, 2018)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Héich performant Ultraschall! Hielscher Produktpalette deckt de ganze Spektrum vum kompakten Lab Ultraschall iwwer Bank-Top Eenheeten zu vollindustriellen Ultraschall Systemer.