Ultraschall Lysis vun E. Coli
- E. coli Bakterien sinn déi meescht benotzt Bakterien an der Mikrobiologie a Biotechnologie.
- Ultraschallzellstéierer liwweren zouverlässeg a reproduzéierbar Resultater fir d'Lyse vun E. coli.
- Intens awer präzis kontrolléierbar Kavitatioun a Schéierkraaft resultéieren zu komplette Stéierungen an héich Extraktiounsausgaben (zB Proteinen, DNA).
Firwat ass Ultrasonic Zell Stéierung vun E. coli déi bevorzugt Method?
Ultrasonic Homogenisatoren oder Sonde-Typ Ultrasonicatoren bidden verschidde Virdeeler fir E. coli Lysis wéi intensiv Ultraschall effizient Zellmaueren a Membranen stéiert. Sonde-Typ Ultraschaller gi wäit benotzt fir E. coli Lysis aus de folgende Grënn:
Proteinextraktioun aus E.coli Zellen gëtt effizient mat der Ultraschallsonde UP200St
Probe-Typ Ultrasonicator bitt vill Virdeeler fir E. coli Lysis. Déi zouverlässeg a präzis Kontroll iwwer Ultraschallprozessparameter erlaabt d'Operatiounsparameter wéi Kraaft, Dauer a Probehandhabung ze optimiséieren fir déi gewënschte Resultater z'erreechen.
Elektrophoretesch Analyse vun genomesch DNA vun E. coli EDL933 ënnerworf 0 - 15 min Ultraschall. L weist d'DNA Leeder un.
(Etude a Bild: ©Basselet et al. 2008)
Zell Stéierungen mat Ultraschall Kavitatioun
Ultrasonic Sonde-Typ Homogenisatoren funktionnéieren mat ca. 20.000 Zyklen pro Sekonn (bei 20kHz) a verursaache Kavitatioun a Flëssegkeeten oder Suspensionen. Akustesch Kavitatioun mikroskopesch Gebidder vu Vakuumähnlechen Drock an héijen Temperaturen, déi Zellen auserneen räissen. Och wann d'Temperaturen e puer dausend Grad Celsius erreechen kënnen, sinn d'Kavitatiounsvolumen sou kleng datt se de Prozess net wesentlech erhëtzen. Ultraschall generéiert akustesch Kavitatioun a Schéierkräften perforéieren oder briechen d'Zellmembran vu bakteriellen Zellen wéi E.coli. Hielscher Ultraschaller erlaben déi präzis Kontroll iwwer Prozessparameter wéi Ultraschallintensitéit, Amplitude, Energieinput an Temperatur. Doduerch kann den Ultraschall-Lysprozess optimal un d'Zelltyp, d'Zellkultur an d'Prozessziel ugepasst ginn.
- präzis Kontroll vun der Lysis (Intensitéit, Amplitude, Temperatur)
- zouverlässeg, reproduzéierbar Resultater
- optimal Upassung un spezifesch Echantillon
- Temperatur Kontroll
- fir ganz kleng bis ganz grouss Proben (µL bis Liter)
- Reng mechanesch Behandlung
- User-frëndlech, sécher Operatioun
- linear Skala-up vu Labo bis Produktioun
VialTweeter fir Ultraschalllyse
Ultraschall Homogenisator vs Aner Lysis Techniken
Wärend chemesch an enzymatesch Lysis kann problematesch sinn – well chemesch Lysis kann Proteinstrukturen änneren an Reinigungsproblemer aféieren an enzymatesch Lysis erfuerdert laang Inkubatiounszäiten an ass net reproduzéierbar – Ultrasonic Stéierung ass eng raffinéiert, séier Zell Stéierungsmethod.
Ultrasonic Lysis baséiert nëmmen op mechanesche Kräfte. Kee Chemikalien ginn derbäigesat, d'Sonicatioun brécht d'Zellmauer duerch Schéierkräften. Chemesch Lysis kann d'Proteinstruktur änneren an d'Rengungsproblemer aféieren. Enzymatesch Stéierung erfuerdert laang Inkubatiounszäiten an ass net reproduzéierbar. Ultrasonic Zell Stéierungen vun E.coli Bakterien Zellen ass séier, einfach, zouverlässeg a reproduzéierbar. Dofir ginn Hielscher Ultraschaller an biologeschen a biochemesche Laboratoiren ronderëm d'Welt benotzt fir Probepräparatioun, Pre-Ananlytik, In-vitro-Diagonstik a villfälteg Assays.
Allgemeng Empfehlungen fir Ultraschall Lysis
Sonication ass déi populärste Technik fir ganz kleng, mëttel a grouss Quantitéite vun Zellsuspensioune ze lyséieren – vu Pico-Liter bis zu 100L/hr (mat Hëllef vun enger Ultraschallflosszelle). Zelle ginn duerch flësseg Schéier a Kavitatioun lyséiert. DNA gëtt och wärend der Sonikatioun geschnidden, sou datt et net néideg ass DNase an d'Zellsuspension ze addéieren.
Temperaturkontroll während Ultraschall E.coli lysis
Andeems Dir d'Probe virgekillt an d'Probe während der Sonikatioun op Äis hält, kann d'Probe thermesch Degradatioun vun der Probe liicht verhënnert ginn.
Idealerweis sollten d'Proben äiskal gehal ginn wärend der Lysis, awer fir déi meescht Proben ass et genuch wann d'Temperatur net iwwer d'Temperatur vun der Kultur oder der Tissuquell eropgeet. Dofir ass et recommandéiert d'Suspension op Äis ze halen a mat e puer kuerzen Ultraschallimpulsen vun 5-10 Sekonnen a Pausen vun 10-30 Sekonnen ze sonikéieren. An de Pausen kann sech d'Hëtzt opléisen, fir nees eng niddreg Temperatur opzebauen. Fir gréisser Zellproben si verschidde Flowzellreaktoren mat Killjacken verfügbar.
Liest hei detailléiert Tipps a Empfehlung fir eng erfollegräich Ultraschalllysis!
Protokoller fir d'Ultraschall Virbereedung vun E. Coli Lysates
Fuerscher benotzen Hielscher Ultraschall Homogenisatoren fir E.coli Zell Stéierungen. Hei ënnen fannt Dir verschidde gepréift a bewährte Protokoller fir E.coli Lysis mat Hielscher Ultraschallhomogenisatoren fir verschidde E. coli-bezunnen Uwendungen.
Zellwachstum, Crosslinking a Virbereedung vun E. coli Zellextrakter mat Ultraschall
Fir SeqA an RNA Polymerase ChIP-Chip E. coli MG1655 oder MG1655 ΔseqA war bei 37 ° C zu engem OD ugebaut600 vun ongeféier 0,15 an 50 ml LB (+ 0,2% Glukose) virun 27 μl vun formaldehyde (37%) pro ml mëttelfristeg dobäi (endlech Konzentratioun 1%). Crosslinking gouf bei luesen Rüschen (100 rpm) bei Raumtemperatur fir 20 min gefollegt, gefollegt vum Ausschloss mat 10 ml 2,5 M Glycin (endlech Konzentratioun 0,5 M). Fir Hëtzt-Schock Experimenter, E. coli MG1655 war an 65 ml LB mëttelfristeg bei 30 ° C zu engem OD ugebaut600 vun ongeféier 0,3. Duerno gouf 30 ml Kultur an eng virgewiermt Kolbe bei 43 ° C transferéiert an de Rescht bei 30 ° C gehal. Crosslinking a Quenching war wéi uewe beschriwwen ausser datt d'Zellen bei 30 oder 43 ° C fir 5 min gehale goufen ier se weider lues bei Raumtemperatur schüttelen. Zellen sech duerch centrifugation gesammelt an zweemol mat kal TBS (pH7.5) gewäsch. No resuspension an 1 ml lysis Prellbock (10 mM Tris (pH 8.0), 20% sucrose, 50 mM NaCl, 10 mM EDTA, 10 mg / ml lysozyme) an incubation bei 37 ° C fir 30 min gefollegt vun Zousätzlech vun 4 ml IP Puffer goufen d'Zellen op Äis mat 12 Mol 30 Sekonnen an 30 Sekonnen Pausen mat dem Hielscher Ultraschallprozessor UP400St bei 100% Power Setting sonikéiert. No 10 min centrifugation bei 9000 g, 800 μl aliquotes vun der supernatant sech bei -20 ° C gespäichert. (Waldminghaus 2010)
Iwwerproduktioun a Reinigung vun Enzymen mat enger Ultraschallsonde
Fir overproduction vun decahistidine (His10)-tagged Proteinen, E. coli BL21 (DE3) war mat pET19b baut transforméiert. Eng Iwwernuechtung Prekultur gouf duerch Zentrifugéierung gesammelt, an 1% gouf benotzt fir en Ausdrockkultur ze inoculéieren. Zellen, déi pET19mgtB droen, goufen bei 22 ° C ugebaut bis eng optesch Dicht bei 600 nm (OD600) vun 0,7. D'Kultur gouf op 17 ° C transferéiert an duerch 100 μM IPTG induzéiert. No 16 Stonnen gouf d'Kultur duerch Zentrifugéierung bei 7.500 × g bei 4 ° C gesammelt. Zellen goufen an 50 mM phosphat-gebufferter Salzlinn (PBS) mat 0,3 M NaCl bei pH 7,4 resuspendéiert an duerch Ultraschall mat enger S2 Mikro-Tipp Sonotrode am Hielscher Ultrasonicator UP200St bei engem Zyklus vun 0,5 an enger Amplitude vu 75% gestéiert.
D'Iwwerproduktioun vun decahistidine-tagged GtfC gouf bei 37 ° C bei engem OD induzéiert600 vun 0,6 mat 100 μM IPTG. Zellen sech dann fir 4 h incubated, recoltéiert, an lysed wéi uewen uginn fir MgtB.
Rau Zellextrakter goufen bei 15.000 × g a 4 ° C centrifugéiert fir d'Zellschutt ze sedimentéieren. Déi geklärten Extrakter goufen op 1-ml HisTrap FF Crude Sailen gelueden mat engem ÄKTAprime Plus System. D'Enzyme goufen no dem Hiersteller d'Protokoll fir Gradient elution vun His-tagged Proteinen gereinegt. Elutéiert Proteinléisungen goufen zweemol géint 1.000 Bänn vu 50 mM PBS, pH 7,4, mat 0,3 M NaCl bei 4 ° C dialyséiert. D'Preinung gouf vun 12% SDS-PAGE analyséiert. D'Konzentratioun vum Protein gouf duerch d'Bradford Method mat Roti-Quant bestëmmt. (Rabausch et al. 2013)
Ultraschall Extraktioun vu Protein aus E. coli Bakterien
E Köderprotein vun Interesse (an dësem Fall, MTV1 vun Arabidopsis thaliana) ass mat engem GST-Tag verschmolzelt an an BL21 Escherichia coli (E. coli) Zellen ausgedréckt.
- Huelt eng Pellet vu GST-MTV1 a GST (entspriechend 50 ml bakteriell Kultur) a resuspendéiert all an 2,5 ml äiskal Extraktiounsbuffer.
- Benotzt en Ultraschall UP100H (equipéiert mat MS3 Microtip-Sonotrode fir kleng Volumen vun ongeféier 2-5mL) fir d'Bakterienzellen ze stéieren, bis se lyséiert sinn, wat duerch reduzéierter Opazitéit a verstäerkter Viskositéit bezeechent gëtt. Dëst muss op Äis duerchgefouert ginn, an et ass recommandéiert an Intervalle ze sonicéieren (zB 10 Sekonnen Sonikatioun gefollegt vun 10 Sekonnen Paus op Äis a sou weider). Opgepasst muss net mat ze héich Intensitéit sonicate ginn. Wann Schaum oder d'Bildung vun engem wäisse Nidderschlag festgestallt gëtt, muss d'Intensitéit erofgesat ginn.
- Transfert déi lyséiert Bakterienléisung op 1,5 ml Mikrocentrifuge-Tubes a centrifugéiert bei 4 ° C, 16.000 xg fir 20 min.
Sonde-Typ Ultraschaller wéi den UP400St benotzt den Aarbechtsprinzip vun der akustescher Kavitatioun fir déi effizient Lysis vun E.coli.
Ausdrock Analyse a Reinigung vum Rekombinant Protein mat Hëllef vu Sonication
D'E. coli Pellet gouf mat dem Hielscher Ultraschall UP100H sonicéiert. Fir dësen Zweck gouf Zellpellet a gekillte Lysisbuffer (50 mM Tris-HCl pH = 7,5, 100 mM NaCl, 5 mM DTT, 1 mM PMSF) resuspendéiert a fir 10 min op Äis gekillt. Duerno gouf d'Zellsuspension mat 10 kuerze Bursts vun 10 s sonicated gefollegt vun engem Intervall vun 30 s fir ze killen. Endlech gouf d'Zellschutt duerch Ultracentrifugatioun bei 4 ° C fir 15 min bei 14000 RPM geläscht. Fir Bestätegung vun rPR Ausdrock, war de supernatant op 12% polyacrylamide gelies lafen an duerch SDS-PAGE a Western blotting analyséiert. Offäll vun rPR war mat Ni2 gemaach + -NTA resin (Invitrogen, USA) laut den Hiersteller Guide. An dëser Etapp gouf gebierteg Reinigungsmethod benotzt. D'Rengheet vun der gereinegt Protein war mat electrophoresis op der 12% polyacrylamide gelies a spéider Coomassie blo staining bewäert. Purifizéiert Protein Konzentratioun gouf duerch Mikro BCA Protein Assay Kit (PIERCE, USA) gemooss. (Azarnezhad et al. 2016)
Ultraschall Homogeniséierer fir E. coli Lysis
Hielscher Ultrasonics designt, fabrizéiert a liwwert High-Performance Ultrasonic Homogenisatoren fir déi zouverléisseg an effizient Lysis vun E. coli Bakterien an aner Zelltypen, Gewëss a Zellkulturen.
De breede Portfolio vun Ultraschallsonden wéi och indirekt Sonikatiounssystemer erlaabt eis Iech den ideale Ultraschallgewebe Homogenisator fir Är Zellstéierung an Extraktiounsapplikatioun ze bidden.
Design, Fabrikatioun a Berodung – Qualitéit Made in Germany
Hielscher Ultraschaller si bekannt fir hir héchst Qualitéit an Designnormen. Smart Software, intuitiv Menü, programméierbar Astellungen an automatesch Dateprotokolléierung sinn nëmmen e puer Features vun Hielscher Ultraschaller. Robustheet an einfach Operatioun erlaben déi glat Integratioun vun eisen Ultraschaller an d'Fuerschung an d'Biotech Ariichtungen. Och rau Konditiounen an erfuerderlech Ëmfeld ginn einfach vun Hielscher Ultraschaller gehandhabt.
Hielscher Ultrasonics ass eng ISO zertifizéiert Firma a setzt spezielle Wäert op High-Performance Ultrasonicatoren mat modernste Technologie a Benotzerfrëndlechkeet. Natierlech sinn Hielscher Ultraschaller CE konform an entspriechen d'Ufuerderunge vun UL, CSA a RoHs.
D'Tabell hei drënner gëtt Iech eng Indikatioun vun der geschätzter Veraarbechtungskapazitéit vun eisen Ultraschaller:
| Batch Volume | Duerchflossrate | Recommandéiert Apparater |
|---|---|---|
| Multi-Well / Mikrotiter Placke | na | UIP400MTP |
| CupHorn fir Fläschen oder Becher | na | Ultraschall CupHorn |
| Ultraschall Mikro-Flow Reaktor | na | GDmini 2 |
| bis zu 10 Fläschen mat 0,5 bis 1,5 ml | na | VialTweeter |
| 0,5 bis 1,5 ml | na | VialTweeter |
| 1 bis 500 ml | 10 bis 200 ml/min | UP100H |
| 10 bis 2000 ml | 20 bis 400 ml/min | UP200Ht, UP 400 St |
| 0.1 bis 20L | 02 bis 4 l/min | UIP2000hdT |
| 10 bis 100 l | 2 bis 10 l/min | UIP4000 |
| na | 10 bis 100 l/min | UIP16000 |
| na | méi grouss | Stärekoup vun UIP16000 |
Kontaktéiert eis! / Frot eis!
Zousätzlech Protokoller fir Ultraschall E. coli Lysis
Allicin-modifizéiert Proteinen an E. coli mat engem Ultrasonic VialTweeter
Bestëmmung vum Sulfhydrylgehalt duerch 5,5'-Dithiobis(2-Nitrobenzoinsäure) (DTNB) Assay
Eng E. coli MG1655 Iwwernuechtungskultur gouf benotzt fir MOPS minimal Medium (1:100) ze inoculéieren. D'Kultur gouf aerob gewuess bis en A600 vun 0,4 erreecht gouf. D'Kultur gouf an dräi 15-ml Kulturen fir Stressbehandlung opgedeelt. Eng onbehandelt Kultur huet als negativ Kontroll gedéngt. 0,79 mm Allicin (128 μg ml-1) oder 1 mm Diamid gouf zu enger vun de verbleiwen zwou Kulturen all dobäigesat. Kulturen goufen fir 15 min inkubéiert. 5 ml vun all Kultur goufen duerch Zentrifugéierung (8.525 × g, 4 ° C, 10 min) gesammelt. D'Zellen goufen zweemol mat 1 ml PBS (137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4, pH 7,4, anaerobe gespäichert virum Gebrauch) gewäsch an centrifugéiert (13.000 × g, 4 ° C, 10 min). Zellen goufen am Lysis-Puffer (PBS mat 6 mM guanidinium HCl, pH 7.4) resuspendéiert virun der Stéierung bei 4 ° C duerch Ultraschall (VialTweeter Ultraschall, Hielscher GmbH, Däitschland) (3 × 1 min). Zell Debris gouf duerch Zentrifugéierung (13.000 × g, 4 ° C, 15 min) pelletéiert. De Supernatant gouf op eng 3,5 ml QS-Makro-Kuvette (10 mm) mat enger magnetescher Rührbar transferéiert a mat 1 ml Lysisbuffer gemëscht. D'Ausstierwen vun de Proben gouf bei 412 nm mat engem Jasco V-650 Spektrofotometer iwwerwaacht mat dem PSC-718 Temperaturkontrolléierten Zellhalter bei Raumtemperatur. 100μl vun enger 3 mM Dithiobis (2-Nitrobenzoic Seier) Léisung goufen dobäi. Ausstierwen gouf iwwerwaacht bis et Sättigung erreecht huet. D'Berechnung vun der Thiol Konzentratioun gouf mam Ausstierwenskoeffizient ϵ gemaach412 = 13.700 M-1 cm-1 fir Thio-2-Nitrobenzoinsäure (TNB). Cellulär Thiol Konzentratioune goufen berechent baséiert op engem Volume vun E. coli Zellen vun 6,7 × 10-15 Liter an eng Zelldicht vun A600 = 0,5 (entsprécht 1 × 108 Zellen ml-1 Kultur). (Müller et al. 2016)
In Vivo Glutathion Bestëmmung mat Hëllef vun engem Ultrasonic Cell Crusher
E.coli MG1655 gouf am MOPS Minimalmedium an engem Gesamtvolumen vun 200ml ugebaut bis en A600 vun 0,5 erreecht gouf. D'Kultur gouf a 50-ml Kulturen fir Stressbehandlung opgedeelt. No 15 min Inkubatioun mat 0,79 mm Allicin, 1 mm Diamid oder Dimethylsulfoxid (Kontroll), goufen d'Zellen bei 4.000g bei 4 ° C fir 10 min gesammelt. Zellen goufen zweemol mat KPE Puffer gewäsch virum Resuspension vu Pellets an 700μl KPE Puffer. Fir Deproteinéierung goufen 300l vun 10% (w / v) Sulfosalicylsäure bäigefüügt virum Stéierungen vun Zellen duerch Ultraschall (3 x 1 min; VialTweeter Ultraschall). Supernatanten goufen no der Zentrifugéierung gesammelt (30 min, 13.000g, 4 °C). Sulfosalicylsäure Konzentratioune goufen op 1% reduzéiert duerch d'Zousatz vun 3 Volumen KPE Puffer. Miessunge vum Total Glutathion an GSSG goufen duerchgefouert wéi uewen beschriwwen. Zellular Glutathion Konzentratioune goufen berechent baséiert op engem Volume vun E. coli Zellen vu 6,7×10-15 Liter an eng Zelldicht vun A600 0,5 (entsprécht 1×108 Zellen ml-1 Kultur). GSH Konzentratioune goufen duerch Subtraktioun vun 2 [GSSG] aus total glutathione berechent. (Müller et al. 2016)
Ausdrock vu Mënsch mAspAT an E. coli mat engem Ultraschall Homogenisator
Déi eenzeg Kolonie vun E. coli BL21 (DE3) déi den Ausdrockvektor an 30 ml Luria-Bertani (LB) Medium mat 100μg /ml Ampicillin enthält, an dann bei 37ºC kultivéiert bis déi optesch Dicht (OD)600) erreecht 0,6. D'Zelle goufen duerch Zentrifugatioun bei 4.000 × g fir 10 min gesammelt, an an 3L frësche LB Medium mat 100μg /ml Ampicillin resuspendéiert.
Duerno gouf Protein Ausdrock mat 1 mM Isopropyl β-ᴅ-1-thiogalactopyranoside (IPTG) fir 20 Stonnen bei 16ºC entschlof. D'Zelle goufen duerch Zentrifugéierung bei 8.000 × g fir 15 min gesammelt a mat Puffer A (20 mM NaH2PO4, 0,5 M NaCl, pH 7,4) gewascht. Ongeféier 45g (naass Gewiicht) Zellen goufen aus 3 L Kultur kritt. No der Zentrifugéierung goufen d'Zellpellets an 40 ml (fir 1 L Kultur) äiskal Extraktiounsbuffer A resuspendéiert, a lyséiert duerch Ultraschall bei äiskaler Temperatur mat Hëllef vum Hielscher Ultraschallzell Crusher UP400St. D'Zelllysis gouf bei 12.000 rpm fir 15 min centrifugéiert fir soluble (supernatant) a precipitéiert (Pellet) Fraktiounen ze trennen. (Jiang et al. 2015)
Fakten Worth Wëssen
E.coli
Escherichia coli (E. coli) ass eng gram-negativ, fakultativ anaerobe, staaffërmeg, coliform Bakterie vun der Gattung Escherichia, déi allgemeng am ënneschten Darm vu waarmbluddegen Organismen (Endothermen) fonnt gëtt. Et ginn eng grouss Zuel vun E. coli Stämme (oder Ënnertypen) mat verschiddenen Charakteristiken. Déi meescht E. coli Stämme sinn harmlos fir Mënschen, zB B a K-12 Stämme déi allgemeng fir Fuerschungsapplikatiounen an Laboratoiren benotzt ginn. Wéi och ëmmer, e puer Stämme si schiedlech a kënne sérieux Krankheet verursaachen.
E. coli spillt eng wichteg Roll an der moderner biologescher Ingenieur an der industrieller Mikrobiologie well d'Bakterien einfach ze manipuléieren ass. Allgemeng Labo Uwendungen déi dacks d'Benotzung vun E. coli involvéieren, zB fir rekombinant Deoxyribonukleinsäure (DNA) ze kreéieren oder als Modellorganismus ze handelen.
E. coli ass e ganz versatile Host fir d'Produktioun vun heterologen Proteinen, a villfälteg Proteinausdrocksystemer si verfügbar fir rekombinant Proteinen an E. coli ze produzéieren. Mat Plasmiden, déi en héijen Niveau vum Proteinausdrock erlaben, kënnen Genen an d'Bakterien agefouert ginn, wat et erméiglecht esou Proteinen a grousse Quantitéiten an industrielle Fermentatiounsprozesser ze produzéieren.
E.coli ginn als Zellfabrike benotzt fir Insulin ze produzéieren. Weider Applikatiounen enthalen d'Benotzung vu modifizéierten E. coli Zellen fir Impfungen an immobiliséiert Enzymen z'entwéckelen an ze produzéieren, fir Biokraftstoffer ze produzéieren, wéi och fir Bioremediatioun.
De Stamm K-12 ass eng mutant Form vun E. coli déi den Enzym Alkaline Phosphatase (ALP) iwwerausdréckt. Dës Mutatioun geschitt wéinst engem Defekt am Gen, deen dauernd fir den Enzym codéiert. Wann e Gen e Produkt ouni Hemmung produzéiert, ass dëst als konstitutiv Aktivitéit bekannt. Dës spezifesch mutant Form gëtt fir Isolatioun a Reinigung vum ALP Enzym benotzt.
E. coli Bakterien ginn och vill als Zellfabriken benotzt. Konstruéiert Mikroben (zB Bakterien) a Planzenzelle kënnen als sougenannte Zellfabriken benotzt ginn. Dës genetesch modifizéiert Zellen produzéieren Molekülle, Chemikalien, Polymeren, Proteinen an aner Substanzen, déi zum Beispill an der Pharma-, Liewensmëttel- a chemescher Industrie benotzt ginn. Fir d'Moleküle, déi am Interieur vun esou bioengineeréierten Zellen produzéiert ginn, ze befreien, ass Ultraschalllysis eng gemeinsam Method fir d'Zellmaueren ze stéieren an d'Zilstoffer an d'Ëmgéigend Flëssegkeet ze transferéieren. Liest méi iwwer d'Lyse vu bioengineeréierten Zellen!
Ultraschall DNA Scheren
Ultrasonic Schéierkräfte sinn eng allgemeng benotzt Method fir Molekülen, Organellen a Proteinen aus dem Zellinterieur ze befreien an och DNA Strécke a Stécker ze briechen. Akustesch Kavitatioun brécht d'Zellmaueren a Membranen fir DNA aus Zellen ze extrahieren a Fragmenter vun ongeféier 600 ze generéieren – 800 bp an der Längt, wat ideal ass fir Analyse.
Klickt hei fir méi iwwer Ultraschallhomogenisatoren fir DNA Fragmentatioun ze léieren!
Literatur / Referenzen
- Azarnezhad A., Sharifi Z., Seyedabadi R., Hosseini A., Johari B., Sobhani Fard M. (2016): Cloning and Expression of Soluble Recombinant HIV-1 CRF35 Protease-HP Thioredoxin Fusion Protein. Avicenna J Med Biotechnol. 8(4), 2016. 175–181.
- Jiang X., Wang J., Chang H.; Zhou Y. (2016): Recombinant expression, purification and crystallographic studies of the mature form of human mitochondrial aspartate aminotransferase. BioScience Trends 2016.
- Müller A., Eller J., Albrecht F., Prochnow P., Kuhlmann K., Bandow J.E., Slusarenko A.J., Leichert L.I.O. (2016): Allicin Induces Thiol Stress in Bacteria through S-Allylmercapto Modification of Protein Cysteines. Journal of Biological Chemistry Vol. 291, No. 22, 2016. 11477–11490.
- Rabausch U., Juergensen J., Ilmberger N., Böhnke S., Fischer S., Schubach B., Schulte M., Streit W. R. (2013): Functional Screening of Metagenome and Genome Libraries for Detection of Novel Flavonoid-Modifying Enzymes. Applied and Environmental Microbiology 79(15), 2013. 4551–4563.
- Sauer M. (2014): MTV1 Pull-down Assay in Arabidopsis. bio-protocol Vol 4, Iss 12, Jun 20, 2014.
- Waldminghaus T., Skarstad K. (2010): ChIP on Chip: surprising results are often artifacts. BMC Genomics 11, 2010. 414.
Hielscher Ultrasonics fabrizéiert High-Performance Ultrasonic Homogenisatoren aus Labo zu industriell Gréisst.