Hielscher Ultraschall Technologie

Ultraschall Protein Extrait aus Tissue a Zellkulturen

  • Protein Extraktioun ass e wesentlecht Virbereedungspréifung fir Proteomik.
  • Proteine kënnen aus Planz an Déierewëssenschaft, Hefen a Mikroorganismen extrahiert ginn.
  • Sonication ass eng verlässlech, efficace Protein Extraktioun Methode déi e groussen Protein Ausbezuele an enger Kuerzextraktioun gëtt.

 

Protein Extraktioun aus Stoffer an Zellen

Protein Extraktioun aus Gewëss a kultivéiert Zellen ass e wesentlecht Virbereedungsprozess, deen während vill biochemesch an analytescher Techniken wéi ELISA, PAGE, Western blotting, Massespektrometry oder Proteinreinung. Ultraschall Zelle Stierfhëllef, Lyphus an Extraktioun ass eng präzis kontrolléiert Technik fir eng grouss Ausbeutung vu Proteinen ze garantéieren.

Protein Extraktioun vum Déierewëss

Fir d'Virbereedung vu ganzer Gréisst Tissue (z. B. Nier, Häerz, Lung, Muskel etc.), soll den Tissu a ganz klenge Stécker mat propperem Tools dissektéiert ginn, op Äis am léifsten, a sou séier wéi méiglech fir Degradatioun duerch Proteasien ze verhënneren (z. B. lysisbuffer wéi RIPA oder hypotonesche Lysisbuffer mat Protease a Phosphatase-Inhibitor Cocktail). Nom dissektéieren ass d'Probe mat flëssege Stickstoff fir Schnappfrost gedompelt. D'Prouf kann op -80 ° C fir spéider Benotzung gelagert ginn oder op Äis fir direkt Homogeniséierung opgespaart ginn. Direkt virun der Ultrasonic Extraktioun gëtt d'Äis kale Lysis-Puffer (mat Protease-Inhibitoren DTT, Leupeptin an Aprotinin) séier an de Probe-Röhre hinzugefügt (pro ~ 10 mg Tissu ongeféier ~ 600 μL Puffer gëtt empfohlen). Ongeféier. 20-60 mg Tissu ass pro Probe-Röhre empfohlen.
Ultraschall Homogeniséierung, Lyphis an Extraktioun gëtt mat engem Ultraschall Homogeniséierer wéi dem UP200Ht oder UP200St, mat engem Mikrodip Sonotrode ausgestatt. D'Suerderungsdauer ass 60-90 sec. an engem Ultraschallzyklusmodus vun 15 s. sonication an 10 sec. ruhend Zäit. D'Probe soll all d'Zäit am Eis ageholl ginn.
No Ultraschallhomogenisatioun / Extrait ass de Lysat bei ongeféier 27.000 g zentrifugéiert. 20 min. Duerno gëtt de Supernatent gesammelt, sou datt d'Proteinkonzentratioun vu engem Protein Assay bezeechent gëtt wéi Pierce Protein Assay BCA.

Protein Sonication ass eng wichteg Method fir d'Préparatioun vun de Proben

Ultraschall Protein Extraktioun aus Zellen mat UP200St

Informatiounen ufroen




Notéiert eis Privatsphär Politik.


Protein Extraktioun vu Bluttserum

Fir eng homogen Geméis vum Serum an dem Phosphat-Puffer ass d'Probe éischter first drop vir't Ultraschallzell-Lyse. Fir d'Ultraschalllysis gëtt d'Probe mat engem Ultraschall-Homogeniséierer wie de UP100H fir 8 Zyklen bei 20% Amplitude, fir Zyklen vun all 5 Sekonnen op a 15 Sekonne vun. D'Sonocatioun ass duerch d'sonicationg an Zyklen ausgeführt a gëtt d'Probe op Ie platzéiert, sou datt een Iwwerhitz a Wärmestrahlung vun der Probe vermeide gëtt. Well de Serum eng grouss Quantitéit vu Proteinen mat héich Molekulargewicht enthalen (zB Albumin, α1-Antitrypsin, Transferrin, Haptoglobulin, Immunoglobulin G an Immunoglobulin A), déi d'Trennung vu Proteinen ënner nidem Molekulargewicht während der IEF beaflosst, vum Serum aus enger Spekulatiounstrooss.

Protein Extraktioun aus Planzenzell

Frësche, mëllen Planzewelt, zB Moos etc., kënne ganz einfach gestéiert ginn andeems d'gutt gehackte Probe-Material an d'Lysis-Puffer fir d'Sonikéierung plazéiert gëtt. Hefteg, ligenös Planzewebe, wéi Somen, Spuere Nadelen asw. Sollten dréche geroden. E puer schwéier, hëlzent Planzmaterialien musse gefruer ginn a flëssegem Stéckstoff ginn ier se duerch d'Sonikatioun erausgeholl ginn. Fir Planzzellkultursuspensiounen ass eng Ultraschallbehandlung tëscht 30 an 150 Sekonnen an engem Lysisbuffer meeschtens genuch. Méi schwéier Material wéi Kürbiskerne brauchen eng méi intensiv Sonikatioun wéi hei ënnendrënner beschriwwe ginn.

Protokoll zur Ultraschallerwerung vun Albumin aus Kürbissablack

Ultrasloner Tissue Homogeniséier UP400St mat S24d40 - fir Protein Extraktioun aus Planz an Tier Gewëss (Klick op d'Vergréisserung!)Fir d'Ultraschallprotein Extraktioun vum Albumin aus Feinklumpe Kürbis Keimpudder, 10 g entfouert Kürbiskraaftpulver a 100 ml entioniséiertem Waasser als Léisungsmëttel ginn an engem 250mL Glas Becher erofgeschnidden. D'Proteinnekraktioun besteht aus zwee Schrëtt: Eischtens gëtt d'Probe mat engem Ultraschallsonde vun engem Sonde gelant UP400St (400W, 24kHz) mat der Sonotrode S24d7. De Glas Becher gëtt während enger Ultraschallhomogenéierung an engem kale Waasserbad gegeben. D'Ëmfeld vum Ultraschall UP400St mat dem Stecktemperatur-Sensor assuréiert datt d'Probe-Temperatur ëmmer ënner 30 ° C gehal ginn ass. Duerch d'präzis Temperatursteuerung bei der Opléisung gëtt eng Denaturatioun vum Albumin vermeigt. Zweetens ass d'Extraktioun mat engem Mischer mat 200 RPM Geschwindegkeet an 30 ° C ausgeführt. Duerno gëtt de Becher an engem thermostatesche Shaker übertragen. Globulin ass iwwer Dialyse mat destilléiert Waasser ofgehale ginn. Nodeem d'Globulinentfernung de Protein-Extrait kann zur Determinatioun vum Albumin-Profil erfëllt ginn an duerno duerno op pI = 3.0 benotzt gëtt mat 0,1 M HCl fir Albumin-Koagulatioun. Déi feste Phase gëtt duerch Zentrifugatioun vu 5000 g, 20 ° C ofgetrennt a erofgeholl an deioniséiertem Waasser. Albumin Koagulatioun gëtt zweemol benotzt fir d'Protein Verhältnis am Albumin Konzentrat ze erhéijen.

D'Ultraschall-Alkoholprotein-Extraktioun fir d'Virbereedung vum Proteinkonzentraten aus der Reisbran ass datt d'Ultraschallbehandlung zu méi héijen Protein Ausbeuten an enger deutlech méi kierter Extraktiounzäit – am Verglach mat konventionell Extramethoden.

Ultraschellenger VialTweeter fir Protein Extraktioun aus Gewierproben (Klick op d'Vergréisserung!)

VialTweeter indirekt Akkumulation.

Virdeeler

  • Rapid
  • héich Resultat
  • héich Effizienz
  • Präzise Kontroll vun Parameteren
  • Reproducible Resultater
  • Linear Skaléierbarkeet

Probe Préparat Probe fir funktionell iNOS Enzym

Fir e voll funktionell iNOS-Enzym ze kréien (zB fir Drogeproblemer), gëtt de folgend Protokoll recommandéiert: D'Zellsuspension sollt op Eis gestierzt ginn a sonik mat engem UP100H Bei 10μm Amplitude am Zyklusmodus vu 5 s. sonication an 25 sec. Rescht op Äis. D'Prozedur soll ca. 3 Kéieren. D'Reschtzäit tëscht Sonnekriibes reduzéiert de Temperaturerhéijung a wäert dofir de Risiko vun der Denaturatioun reduzéieren.

Ultraschall Protein Solubilatioun

Sonication kann den Protein Solubilisatiounsprozess beschleunigen, wat normalerweis e puer Stonnen erfordert. Fir d'Préparatioun vun der Probe ze verhënneren a Proteinabbau a Modifikatioune bei der Léisung vu Harnstoff ze verhënneren, däerfe d'Ultraschallspur nët méi laang sinn wéi e puer Sekonnen.

General Instruktioune

Temperaturregelung: Fir e gudden Protein Ausbezuelen ouni thermesche Denaturatioun ze garantéieren, muss d'Temperatur bei der Extraktioun kontrolléiert ginn. Hielscher's State-of-Art Ultraschallhomogenisatoren – och als Ultraschall-Desintegrator oder Sonifikator genannt – sinn genee kontrolléiert. Si kommen mat engem Stecktemperatur-Sensor. An de Parameteren vum Ultraschall Homogenisateur kann e maximal Temperatur sinn. Wann dës Temperatur maximal erreecht gëtt, hält den Ultraschall automatesch op, bis d'Probe geklomm ass.
Buffer: D'Wiel vun engem passende Puffer an de richtege Volumen vu Puffer hänkt vun Gewier u Gewëss aus a muss aus Versuch-a-Fehler-Tester erausfuerderen.
Isolatioun / Puren: Proteins Lysate kënnen e Plus vun Biomolekülen wéi DNA oder Kuelegen, déi duerch Protein-Ausfällung (Deoxycholat-Trichloressigsäure) oder Pufferaustausch beseechen kann enthale sinn.

Chittapalo an Noomhorm (2009) bericht dass d'Protein Ausgab mat Verwöhnung verstärkt huet an datt den Ultraschallgewënn Homogeniséierung a Lyseprozeet existéiere kann fir existent Auswierkungsprozess méi – fir nei kommerziell Ausnahmegesetzer z'erhéijen.

Soundschutz mat Hielscher Sound Sound SPB-L an Ultraschall UP200St. (Klickt fir ze vergréisseren)

Ultrasone Tissue Homogenisateur UP200St fir efficace Protein Extraktioun

Präzise Kontroll vun der Ultraschallbehandlung (Klickt fir ze vergréisseren)

Browser Kontroll fir präzis Operatioun an Iwwerwaachung vun der Ukënnegungsprozedur

Ultraschall Ausrüstung fir Protein Extraktioun

Hielscher Ultrasonics biedt eng breet Palette vun Ultraschallhomogeniseren fir d'Zerfall vun Zellen, Gewëss, Bakterien, Mikroorganismen, Hefegen an Spore.
Hielscher Labor Ultraschaller sinn staark a liicht ze bedreiwen. Built fir 24/7 Operatioun, si sinn als robust a effizient Labor- a Bank-Top-Geräter entwéckelt. Fir all Apparater, kann d'Energieausbeeferung an d'Amplitude präzis kontrolléiert ginn. Déi breet Palette vu Accessoiren fiert weider Setupoptioune. Déi digitale Geräter wéi VialTweeter, An UP200Ht, An UP200St, an UP400St hunn eng integréiert Temperaturregelung an eng integraert SD-Kaart fir automatesch Datemaperaarbecht.
Fir d'indirekt, krankem Kontaminatioun-fräi a gläichzäiteg Oplangung vu verschidde Proben, proposéieren mir d' VialTweeter oder der Ultraschall CupHorn.
Ofhängeg vun Ärer Applikatioun, Material a vun de Volume Band, proposéiere mir Iech déi besser konfiguréiert Setup fir Äre Préavispräpung. Kontaktéiert eis haut!

Kontaktéiert eis! / Frot eis!

Benotzt weg de Formulaire hei, wann Dir méi Informatiounen iwwer d'Ultraschallhomogenéierung bitt. Mir wäerte frou sin Iech un engem Ultraschallsystem ze bidden deen Är Ufuerderungen entsprécht.










Literatur / nëmmen

  • Chittapalo T, Noomhorm A (2009): Ultraschall assistéiert Alkalizextraktioun vu Protein aus entfesselt Rice Branche an Eegeschaften vum Proteinkonzentraten. Int J Food Sci Technol 44: 1843-1849.
  • Simões, André ES:; Pereira, Diane M.; Amaral, Joana D.; Nunes, Ana F.; Gomes, Sofia E .; Rodrigues, Pedro M.; Lo, Adrian C.; D'Hooge, Rudi; Steer, Clifford J.; Thibodeau, Stephen N.; Borralho, Pedro M.; Rodrigues, Cecília MP (2013): Effektiv Erhuelung vu Proteinen aus multiple Quelleproben nom Trizol oder Trizol LS RNA Extraktioun a laangfristeg Lagerung. BMC Genomics 2013, 14: 181.


Fakten Wësse wat weess

Proteomics

Proteomics ass de Fuerschungsfeld, deen Proteinen un Proteom huet. Proteinen fullfil eng rieseg Array vu Vitalfunktiounen am Organismen. De Proteom ass den ganzen Satz vun Proteinen, ausgedréckt vu Genom, Zell, Gewëss oder Organismus zu enger Zäit. De Proteom schwätzt mat Zäit a verschidde Besoinen, oder betount, datt eng Zell oder Organismus erfuerscht. Méi spezifesch ass et den Satz vun Expriméiert Proteinen an enger bestëmmter Zell oder Organismus, zu enger Zäit, ënner definéierte Bedingungen. De Begrëff ass eng Mëschung vu Proteinen an Genomen. Proteomik ass d'Studie vum Proteom.

Protein

Proteine si grouss Biomolekele, sougenannte Makromolekülen – déi aus enger oder méi laang Ketten vun Aminosäurereschterstécker besteet. Proteine sinn an all Organismen vu vegetareschen a Déiereschaffen an si sinn entscheedend fir déi meescht vun den biologesche Funktiounen. Well Proteinen vill biologesch Informatiounen enthale sinn, ginn se fir analytesch Zwecker extraktéiert, zB fir proteomesch Recherche. Déi wichtegst Funktioun vun Proteinen besteet aus der Katalyse vu metabolesche Reaktiounen, der DNA-Replikatioun, der Reaktioun op Reizen, an dem Transport vun de Molekülen aus engem Standuert op en aneren. Proteinen ënnerscheeden sech virun allem an hirer Sequenz vun Aminosäuren, déi duerch d'Nukleotidsequenz vun hiren Genen diktéiert gëtt, an déi normalerweis e Protokoll fëllen an eng spezifesch dreidimensionaler Struktur, déi seng Aktivitéit bestëmmt. Proteinen sinn – ausser Peptiden – Ee vun de wichtegste Komponente vun der Iessen. D'Proteomik ass also e staarkt Instrument fir d'Liewenswëssenschaft fir Prozesse, Liewensmëttelsécherheet an Ernährungsbeurteilung optiméieren.

Gel Electrophoresis

Gel Elektrophorese ass d'Haaptmetall fir d'Trennung an Analyse vu Makromoleküle wéi DNA, RNA a Proteine wéi och hir Fragmenter, baséiert op hir Gréisst a Frachnung. Et gëtt an der klinescher Chemie benotzt fir Proteine ze trennen fir d'Ladung a / oder d'Gréisst (IEF Agarose, am wesentleche Gréisst unabhänglech) an an der Biochemie, Molekularbiologie a Proteomik fir eng gemëscht Populatioun vun DNA- a RNA-Fragmenter ze trennen, fir d'Gréisst vun der DNA ze schätzen a RNA-Fragmenter oder fir Proteine ze trennen.

Zell Kulturen

D'Zellkultur ass de kontrolléierten ëmmer méi wëssenschaftleche Prozess, duerch deen Zellen ënner kontrolléierte Konditioune cultivéiert ginn. Zellkulturbedingunge variéieren fir all Zortyp. Am Allgemengen ass d'Ëmwelt vun enger Zellkultur aus engem passenden Schouss (z. B. Petri) mat Substrat oder Medium, deen d'essentielle Nährstoffer ubelaangt (Aminosäuren, Kachbuden, Vitamine, Mineralstoffer), Wuestum Faktoren, Hormonen a Gasen (CO2, O2) a regelt d'physio-chemesch Emwelt (pH-Puffer, osmotesch Drock, Temperatur). Déi meescht Zellen brauchen eng Uewerfläch oder e künstleche Substrat, während aner Zellkulturen fräi am Kulturmedium fräi kënne ginn (Suspensionskultur, Zellsuspension).
Mass Kulturen vun Déierenzelllinen ginn an der Industrieproduktioun vu viralen Impfstécker an aner biotechnologësch Produkter benotzt. Mënschliche Stammzellen ginn agefouert fir d'Zuel vun Zellen auszublänzen an d'Zellen a verschidden Zommatzzorten fir Transplantatiounszwecker ze differenzéieren.

Tissue-Beispiller

De Begrëff Tissue beschreift en zellularen Zwëschenprodukt, wou d'Zellmaterial op enger organisatorescher Basis tëscht Zellen a engem komplett Uergel läit. Am Tissu, ähnlech Zellen, aus dem selwechte Urspronk, déi zesummen eng spezifesch Funktion maachen, agefouert ginn. Duerch déi funktionell Gruppéierung vu multiple Gewëss sinn déi komplex Strukturen vun den Organer geformt ginn.
Tissue gëtt gepréift fir Fuerschung an der Biologie, Histologie / Histopathologie, Parasitologie, Biochemie, Immunohistochemie wéi och fir DNA ze kultivéieren an auszewéckelen. Et kann tëscht Déieren (Ënnerdeelung: Mammegewebe) a Planzewebe ënnerscheet ginn. Déieren Tissuë ginn an déi véier Basis Aarte vu Bindegewierer, Muskelen, Nerven an Epithelgewebe gruppéiert. Planzewebe gëtt an de folgenden dräi Tissesystemer ënnerdeelt: d'Epidermis, de Buedemweb, an de vaskuläre Tissu.
Tissueproblemer kënnen aus Tier- oder Pflanzenteilen preparéiert ginn, z. B. Knuewel, Muskel, Blieder, etc.

Kierzelen

Blutt, Serum, Plasma, Cerebrospinal Flëss, Sphär a Synovialflëssegkeet sinn Kierstlechflëssegkeeten, déi eng grouss Quell vun diagnostesch relevanten Informatioune bidden. Dofir ass eng raffinéiert Preparatioun vu Kierperféierungsproblemer fir Analyse wichteg. Déi éischt Schwieregkeet ass mat der breeder dynamescher Distanz vu Komponenten ass an der Kierperfluid ass.

Bestëmmung vu Protein Konzentratioun

Bradford ass Assay, Lowry Assay a Bicinchoninsäure (BCA) assay normal Assays, fir d'Konzentratioun vu Proteinen ze bestëmmen. Bovine Serum Albumin (BSA) ass ee vun den heefegsten gebrauchten Proteinstandard.

Lysis Buffer

Lysis-Puffer muss aus dem Zellmaterial oder Gewëss gewise ginn (Gewësskultur, Planz, Bakterien, Pilze, etc.), an ob d'Zellen an enger Struktur an der Struktur stinn. Eng breet Palette vun Lyphis-Puffer fir d'Extrait vun Proteinen, Membranen a Orgel a formuléiert mat engem oder méi vereinfacht. Den Detergent gëtt normalerweis iwwer Test- a Fehler-Tester gewielt – wann et ze verfügbar – no engem existent Protein Extrait Protokoll. Den Detergent muss kompatibel sinn mat der Gewiererquelle an de Proteinen. Am allgemengen ass de mëlleste Sphär, deen fir e spezifeschen Gewebe / Protein funktionéiert, gewielt fir d'maximal Funktioun vum Extrakt ze erhalen. En plus, am Fall vun enger Extraktioun vu Membranen an Organellen, hält e mëttlere Sphuelm d'Membran intakt. Allgemeng gebraucht Wäschmëttelen an Lysepuffern sinn mexikanesch oder zwitterionesch, zB CHAPS, Deoxycholat, Triton ™ X-100, NP40 a Tween 20.
Zum Beispill kënnen Tissue wéi Gehir, Liewer, Dessert, Niere, Milet etc. och einfach mat PIPA gepufferte ginn. – awer Protease-Inhibitoren an DTT (zB bei Gelelektrophorese) sollen agebaut ginn.
Lysis-Puffer fir Skelett Muskelgewebe (eis kale): 20 mM Tris (pH 7,8), 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 1 mM MgCl 2, Triton X-100, 10% G / , 1 mM Dithiothreitol ergänzt mat Protease- an Phosphatase-Inhibitor-Cocktail
Table of gemeinsam Puffer an hirem pH-Bereich. Allgemeng sinn dës Puffer normalerweis zu Konzentratioune vu 20-50 mM benotzt.

Buffer pH-Streck
Zitrouneseier – NaOH 2.2 – 6.5
Sodiumcitrat – Zitrouneseier 3.0 – 6.2
Natriumacetat – Essigsäure 3.6 – 5,6
Cacodylsäure Natriumsalz – HCl 5.0 – 7.4
MES – NaOH 5,6 – 6.8
Natrium-Dihydrogenphosphat – Dinatriumwasserstoffphosphat 5.8 – 8.0
Imidazole – HCl 6.2 – 7.8
MOPS – KOH 6.6 – 7.8
Triethanolamin Hydrochlorid – NaOH 6.8 – 8.8
Tris – HCl 7.0 – 9.0
HEPES – NaOH 7.2 – 8.2
Tricine – NaOH 7,6 – 8.6
Sodiumtetraborat – Borsäure 7,6 – 9.2
Bicine – NaOH 7.7 – 8.9
Glycin – NaOH 8.6 – 10,6

Déi meescht Puffer verlaangen eng pH-Ofhängegkeet mat der Temperatur. Dëst gëllt speziell fir Tris Buffer. De pKa changéiert vun 8,06 op 25 ° C bis 8.85 um 0 ° C.
(pH a pKa vun engem Puffer: pH misst d'Konzentratioun vu Waasserstoff an enger wässrer Léisung behalen. pKa (= Disserdossierung konstant) ass eng relancéiert, awer méi spezifesch Mass, datt et hëlleft fir ze prognéiren wéi e Molekiil op eng spezifesch pH value.)

TRIzol

TRIzol ass eng chemesch Léisung déi benotzt gëtt fir RNA / DNA / Protein bei der Guanidinium-Thiocyanat-Phenol-Chloroform Extraktioun auszerechnen. D'Verwäertung vun der Ultraschall assistéiert TRIzol-Austraktioun ergëtt eng grouss DNA, RNA a Protein vu der selwechter Probe erauszefannen an excels domat aner Extramethoden.