Ultrasonic Virbereedung vun C. Elegans Echantillon

C. elegans, en Nematodenwurm, ass e wäit benotzte Modellorganismus an der Biologie. Probepräparatioun virun der Analyse erfuerdert Lysis, Protein a Lipid Extraktioun souwéi RNA Fragmentatioun, déi zouverlässeg iwwer Sonikatioun duerchgefouert ka ginn. Ultrasonic Zell Stéierungen sinn zouverlässeg, raffinéiert an einfach ze benotzen Apparater fir déi séier Virbereedung vun C. elegans Echantillon.

Ultrasonic Virbereedung vun C. Elegans Echantillon

C. elegans si Ronnwürmer, déi wäit an de Fuerschungslaboratoiren benotzt gi fir Genomik, Entwécklungsbiologie a Krankheeten z'ënnersichen. Vill Genen am Genom vun C. elegans hunn funktionell Géigeparteien am Mënsch. Dofir ass den Nematodenwurm en extrem nëtzlecht Modell fir mënschlech Krankheeten. Aner Virdeeler fir déi breet Benotzung vu C. elegans sinn seng einfach a bëlleg Kultivatioun op Placke mat Bakterien (zB E. coli), seng Transparenz, bequem Handhabung, wéi och d'Méiglechkeet d'Würmer fir eng méi laang Zäit ze afréieren an ze späicheren.
Protein- a Lipidanalyse si reegelméisseg Prozeduren an Laboratoiren an d'Ultraschallpréparatioun ass déi etabléiert Method fir C. elegans Nematoden an all Entwécklungsstadium ze lyséieren (dh Embryonen, Larven L1-L4, Erwuessener). Zënter datt C. elegans och als Proteinausdrocksystem benotzt gëtt fir geziilte Proteinen ze iwwerzeegen, ass eng zouverlässeg, reproduzéierbar Lysis- a Proteinextraktiounsmethod, déi héich Proteinausgaben gëtt, erfuerderlech. Ultraschall Zell Stéierungen an Extraktioun Systemer sinn als Sonde-Typ Homogenisatoren an als Multi-Probe Ultrasonicators sinn. Catering fir praktesch Probepräparatioun an all Zort vu Probegréissten Zuelen, Hielscher Ultrasonics huet den idealen Ultraschallzellverbriechen fir Är Labo Prozedur.

Ultraschall C. elegans Lysis fir

Virbereedung vun Würmerhomogenaten
Protein Extraktioun
Lipid Extraktioun
Proteinquantifikatioun
Immunoprecipitatioun
Western Blotting
RNA Extraktioun
Enzymatesch Assays

VialTweeter am Ultraschallprozessor UP200ST

VialTweeter Multi-Sample Virbereedung Eenheet fir déi simultan sonication vun 10 Reagenzglieser.

Ultrasonic Protokoller fir C. Elegans Stéierungen a Lysis

Ultraschall Homogeniséierung a Lysis vu C. elegans an déi spéider Protein- a Lipidextraktioun kënne mat ënnerschiddleche Prozedure mat verschiddene Homogeniséierungs- a Lysis-Puffer etc. All Lysis-Protokoller hunn gemeinsam datt d'Proben kontinuéierlech op Äis gehal ginn fir Proteindegradatioun ze verhënneren. Hei drënner presentéiere mir Iech e puer zouverlässeg a séier Ultraschall-Lys- an Extraktiounsprotokoller fir d'Virbereedung vu qualitativ héichwäerteg Protein- oder Lipid-enthale C. elegans Proben.

Virdeeler vun Ultraschall C. elegans Lysis

Zouverlässeg
reproduzéierbar
präzis Temperaturkontrolléiert
zouverlässeg Prozess Kontroll
sanft Method
einfach ze gëllen
Sécher

Ultrasonic Protein Extraktioun aus C. elegans Samples

Ultrasonic Lysis an Protein Extraktioun vun C. elegans Wuerm kann mat verschiddene Protokoller duerchgefouert ginn. Drënner presentéiere mir Iech e puer zouverlässeg a séier Lysisprotokoller fir reproduzéierbar Proteinextraktiounsresultater.

Rapid Virbereedung vun Cytosolic Extrait aus C. elegans Worms vun Sonication

Mat de folgende Protokoll kënnt Dir C. elegans lysates a manner wéi 30 Minutten virbereeden.
Kollektioun vun C. elegans
Wielt déi gewënschte C. elegans Würmer an eng 1.5ml Röhre phosphat gebufferte Salins (PBS) oder wäscht se vun enger Plack mat 1.5ml PBS. Zentrifuge bei 1 min bei 2000 U/min fir ze pelleten. Halt d'Proben zu all Moment op Äis.
Dann wäschen d'Würmer zweemol mat PBS.
Duerno wäschen d'Würmer zweemol mat ddH₂O.
Resuspendéiert d'Würmer an op d'mannst 500ul Homogeniséierungsbuffer (HB). D'Wurm Echantillon sinn elo prett fir Ultraschall Lysis.
Fir méi héich Proteinextraktqualitéit, wëllt Dir vläicht bakteriell Kontaminatioun reduzéieren andeems Dir d'Würmer fir 5min all an PBS a sterilt, ultrareint Waasser wäscht (ddH)₂O) oder Sucrose Floatation ausféieren. Halen d'Wuerm Echantillon kontinuéierlech op Äis.

Ultraschall C. elegans Lysis Protokoll

Vergewëssert Iech datt Dir den Ultraschall virbereet, sou datt den Ultraschallhomogenisator prett ass fir ze benotzen (Sonde montéiert, Sonikatiounsprogramm virausgesat).

Wann Ären Ultrasonicator Stand-montéiert ass, plazéiert d'Äisbad mat Äre Probetuben ënner der Ultraschallsonde an setzt d'Ultraschallsonde an den 1.5ml Röhre.

Fir C. elegans Lysis mat der UP200St oder UP200Ht, soll d'Ultraschall mat engem Mikrotip (zB 2mm Sonde S26d2; kuckt Bild lénks) bei 40% Amplitude fir 1sec mat 30sec Pausen tëscht. 5 sonication Zyklen fir all 1 Sekonn mat 30sec Pausen sinn ideal fir C. elegans lysis. Wann Dir d'Lyse fir d'éischte Kéier ausféiert, kënnt Dir d'Lysprogressioun a klenge Aliquoten vun der Probe no all Puls mat engem Mikroskop iwwerpréiwen.
Lysis ass erfollegräich ofgeschloss wann d'Würmer gestéiert ginn. Iwwer-Sonicatioun resultéiert am Broch vun Kären a gëtt sichtbar wann d'Probe viskos oder Schaum gëtt. Fir Probedegradatioun ze vermeiden, benotzt méi Impulser wann néideg. Erhéicht net d'Zäit vun all Ultraschallpulszyklus fir qualitativ héichwäerteg Proteinextrakter ze kréien.
Kloer Zelllysat andeems d'Ultraschall lyséiert Würmer bei 14.000 RPM fir 10min bei 4ºC centrifugéiert.
Dann transferéiert de Supernatant an e frësche Rouer a preparéiert op Immunoprecipitatioun oder aner Assays.

Notiz fir Homogeniséierungsbuffer: Bereet den Homogeniséierungsbuffer fir den Ultraschalllysisprotokoll hei uewen wéi follegt:

15 mM Hepes pH 7,6 – 15 ml vun 0,5 M

10 mM KCl – 2,5 ml vun 2 M

1,5 mM MgCl2 – 0.75 ml vun 1 M

0.1 mM EDTA – 100 ul vun 0,5 M

0.5 mM EGTA – 2,5 ml vun 0,1 M

44 mM Saccharose – 14,7 ml vun 50%

Füügt direkt virum Gebrauch: 1mM DTT – 1000x vun 1M

plus e Protease-Inhibitor

Dësen Tutorial erkläert wéi eng Zort Sonicator am Beschten ass fir Är Probepräparatiounsaufgaben wéi Lysis, Zellstéierung, Proteinisolatioun, DNA a RNA Fragmentatioun an Laboratoiren, Analyse a Fuerschung. Wielt déi ideal Sonicator-Typ fir Är Uwendung, Probevolumen, Probenummer an Duerchgang. Hielscher Ultrasonics huet den ideale Ultraschallhomogenisator fir Iech!

Wéi fannt Dir de perfekte Sonicator fir Zellstéierung a Proteinextraktioun an der Wëssenschaft an der Analyse

High-Throughput Lysis vun C. elegans an 96-Well Placke mat der UIP400MTP Plate Sonicator

C. elegans Lysis (erwuessene Nematoden)
UIP400MTP 80% Amplitude, 20 Zyklen (all Sonikatiounszyklus: 30 Sekonnen ON, 30 Sekonnen OFF)
Lysisbuffer:

Optioun 1) 4% SDS, 0,1 M Tris/HCl pH 8,0, 1 mM EDTA
Optioun 2) fir Co-Immunoprecipitatioun (Co-IP): 10 mM Tris HCl (pH 7,5), 150 mM NaCl, 0,5 mM EDTA, 0,5% NP-40 (Complete Proteinase Inhibitor Cocktail)

High-Throughput DNA Fragmentatioun
C. elegans (erwuessene Nematoden) DNA 200-300bp: UIP400MTP Platte Sonicator – setzen 80% Amplitude, 30 Puls – all 30 Sekonnen op, 30 Sekonnen aus

UIP400MTP Plate Sonicator fir High-Throughput Probe Virbereedung: Den UIP400MTP sonicéiert eenheetlech Proben a Multi-Well, Mikrotiterplacken an 96-Well Placken, déi Zellen stéieren, Proteinen extrahéieren, DNA, RNA an Alpha-Synuclein Fibrillen fragmentéieren.

UIP400MTP Plate Sonicator fir High-Throughput Probe Virbereedung sonicéiert eenheetlech Proben a Multi-Well, Mikrotiterplacken an 96-Well Placken

Ultrasonic Lysis vun C. elegans fir Quantitative Affinitéit Purification Assays

C. elegans Embryonen (~ 2 Millioune pro Replikat) goufe frësch a biologescher Triplikat gesammelt andeems jonk schwanger Hermaphroditen bleichen an op Äis sonicéiert goufen (Zyklus: 0,5 s, Amplitude: 40-45%, 5 Schlag/Sessioun, 5 Sessiounen, Intervall tëscht Sessiounen : 30 s; UP200S Ultraschall Prozessor mat Mikro-Tipp S26d2 (Hielscher Ultrasonics GmbH)) am Lysisbuffer (Gesamtvolumen: ~600 μl; 50 mm Tris-HCl, pH 7,4, 100 mm KCl, 1 mm MgCl2, 1 mm EGTA, 1 mm DTT, 10% Glycerol , Protease-Inhibitor-Mëschung, 0,1% Nonidet P-40 Ersatz). No der Sonikatioun gouf Nonidet P-40 Ersatz bis zu 1% bäigefüügt an d'Lysate goufen mat Kapp iwwer Schwanzrotatioun bei 4 ° C fir 30 min inkubéiert, gefollegt vun der Zentrifugéierung bei 20.000 × g fir 20 min bei 4 ° C. Gekloert lysate gouf dann aspiréiert ouni déi iewescht Lipidschicht ze stéieren an duerch d'Halschent opgedeelt an entweder d'Anti-GFP Agarose Perlen oder d'blockéiert Kontrollpärelen (40-50 μl). No Kapp iwwer Schwanz Rotatioun bei 4 ° C fir 60-90 min, goufen d'Pärelen eemol mat Lysis Puffer mat 0,1% Nonidet P-40 Ersatz gewäsch, gefollegt vun zwee Mol vun wäschen an entweder Puffer I (25 mm Tris-HCl, pH) 7,4, 300 mm NaCl, 1 mm MgCl2) oder Puffer II (1 mm Tris-HCl, pH 7,4, 150 mm NaCl, 1 mm MgCl2) oder béid. Fir GFP:MBK-2 Pull-Downs, goufen zwee separat Experimenter mat verschiddene Wäschbedéngungen gemaach. Proteine goufen duerch Orbital Shaking an 50 μl vun 6 m urea / 2 M thiourea bei Raumtemperatur elued. Fir d'MBK-1 :: GFP Pull-Down Experimenter goufen Proteinen zweemol eluéiert andeems se an 50μl vun 8 m Guanidiniumchlorid bei 90 ° C schüttelen, gefollegt vun Ethanol Nidderschlag. Eluéiert Protein Echantillon goufen dann an-Léisung verdaut.
(cf. Chen et al., 2016)

De Sonotrode MTP-24-8-96 huet aacht Ultraschallsonden fir d'Sonicatioun vun de Wells vu Mikrotiterplacken.

Ultrasonic Worm Homogeniséierung a Lysis

Fir C.elegans lysis an Protein Extraktioun Prozedur, 30.000 nemotoden vun der zoustänneger Etapp sech pro Prouf gesammelt an an äiskal S-Basal gewäsch, vun centrifugation bei 1500 RPM- fir 2 min konzentréiert, sechs Mol mat äiskal S- gewäsch. basal fir Rescht Bakterien ze läschen, an dann op Äis gespäichert bis se prett sinn fir ze benotzen. Fir Protein Extraktioun, schwanger-erwuesse Wuerm goufen erlaabt eng kompakt Pellet no der leschter S-Basal wäschen ze Form. Wuermpellets goufen dann an 1 ml äiskalem Extraktiounsbuffer [20 mM Kaliumphosphat, pH 7,4, 2 mM EDTA, 1% Triton-X-100, Protease-Inhibitoren (Sigma P2714)] resuspendéiert an direkt veraarbecht.
~30.000 Schwanger-Erwuessene Würmer (entspriechend ~100 mg naass Gewiicht), goufen op Äis sonicéiert mat engem Sonde-Typ Ultraschall (zB UP50H mat Mikrotip MS2) bei 40% Amplitude fir 10 Zyklen vun 3 Sekonnen op, 30 Sekonnen aus, 1 ml äiskal Extraktiounsbuffer. (cf. Baskharan et al. 2012)

Ultraschall Lipid Extraktioun aus C. elegans

A Lipidomik, eng Branche vu Metabolomik, gëtt de Lipidkomplement vu biologesche Systemer charakteriséiert an analyséiert. C. elegans gi wäit an der Lipidomik benotzt fir d'Interaktioun vu metabolesche Lipiden an hir Effekter op d'Gesondheet an d'Liewensdauer z'ënnersichen.
Ultrasonic Lysis an Extraktioun gëtt benotzt fir Lipiden wéi Sphingolipiden aus C. elegans Embryonen, Larven an Erwuessene Würmer ze befreien. Ultrasonication gëtt benotzt fir Wurmhomogenaten ze preparéieren an duerno d'Lipiden aus der Probe ze extrahieren.
Protokoll fir Ultraschall Lipid Extraktioun aus C. elegans
Thaw de C. elegans Pellet op Äis a resuspendéiert mat 0,5 ml Ultrawasser. Sonicate d'C. elegans Proben an 1,5mL Reagenzglieser, wärend d'Proben kontinuéierlech op Äis behalen.
Sonication kann mat engem Sonde-Ultrasoneschor wéi den UP200Ht, d'Ultraschall-Probe-Prep-Eenheet VialTweeter (Simultan sonication vun 10 Echantillon) oder der UIP400MTP (fir d'Sonication vu Multi-Well Placke wéi 96-Well Placke). Fir Ultraschalllyse mat der UP200Ht benotzt de Mikro-Tipp S26d2. Pre-set den Ultraschall Zyklus Modus am digitale Menü. Setzt d'Amplitude op 10% an d'Sonicatiounszyklusmodus vun 2 Sekonnen Impulsen vun 20 Zyklen mat enger Paus vun 30 Sekonnen. tëscht all Ultraschall Pulsatiounsausbroch.
Transfert d'Supernatanten op Glasröhren mat Schrauwenkapp. Füügt d'Folch-Extraktioun andeems Dir 1 ml Ultrawasser an all Glasröhre bäidréit, gefollegt vu 6 ml Chloroform / Methanol (Verhältnis = 2: 1) Mëschung an all Glasröhre.
Vortex all Glas Röhre fir 30 Sekonnen fir 4 Mol. Zentrifuge d'Röhre bei 1,258 xg fir 15 min (Eppendorf, 5810 R) fir d'Phasenrennung weider ze verbesseren. Transfert déi ënnescht hydrophobe Fraktioun an e proppert Glasröhre mat enger Glas Pasteur Pipette. Dréchent déi ënnescht hydrophobe Fraktioun ënner Stickstofffloss an engem Stickstoffverdamper. Späichert déi gedréchent Pellet an engem -80 °C Gefrier bis zum Gebrauch.

Ultraschall Virbereedung vu Worm Lysates

Wurmlysat: L4 Stuf Würmer goufen gesammelt an dräimol mat M9 Puffer (42,26 mM Na) gewascht₂HPO₄, 22,04 mM KH₂PO₄, 85,56 mM NaCl, 0,87 mM MgSO₄) fir all Bakterien ze läschen. Nodeem sou vill wéi méiglech vum M9-Puffer ewechgeholl gouf, goufen d'Würmer am Lysis-Puffer resuspendéiert: 50 mM HEPES, 50 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 5 mM Phosphat-β-Glycerin, 0,1% (v/v) Triton X-100, 50 mM Natriumfluorid, 1 mM Natriumorthovanadat, 5 mM Natriumpyrophosphat, 0,2 mM Phenylmethansulfonylfluorid a Protease-Inhibitor. Würmer goufen a flëssege Stickstoff gefruer an dräimol bei 37 ° C opgedaucht, duerno goufen d'Würmer op dréchent Äis mat enger Ultraschall-VialTweeter-Eenheet fir d'simultan Virbereedung vun 10 Probe Tubes sonicated. Sonication gouf bei 50% Amplituden an 10 Zyklen vun 2 Sekonnen duerchgefouert. mat 30 Sekonnen Paus tëscht de Sonikatiounsausbréch. Duerno goufen d'Proben bei 12000 rpm bei 4 ° C fir 15 min centrifugéiert. De Supernatant gouf gesammelt a bei -70 ° C gelagert. En Aliquot gouf fir Proteinquantifikatioun vum Bradford Assay benotzt.
Bestëmmung vum Total Glutathion, GSH a GSSG: Fir Glutathion Quantifikatioun, Lysate an Determinatioun goufen de selwechten Dag gemaach. Glukose gefiddert a Kontroll L4 Larven goufen gesammelt a mat M9 Puffer dräimol gewäsch. Nodeem sou vill wéi méiglech vum M9-Puffer ewechgeholl gouf, goufen d'Würmer an äiskale Metaphosphorsäure (5% w/v) resuspendéiert, duerno goufen d'Würmer an Äis mat engem Ultraschall VialTweeter bei 50% Amplitude an zéng Sonikatiounszyklen vun 2 Sekonnen sonicated. mat 30 Sek. Paus tëscht all Zyklus. Duerno centrifugéiert bei 12000 rpm bei 4 ̊C fir 15 min.
(cf. Alcántar-Fernández et al., 2018)

C. elegans Sample Prep virun Immunoprecipitatioun a Western Blotting

Kuerz gesot, fir embryonal Extrakter, goufen C. elegans L1 Larven a grousser Flëssegkeet S-medium Kulturen bis Adulthood ugebaut. Embryoen goufen mat der Standard Bleechmethod gesammelt an an der Lysisbuffer (50 mM Tris, pH 7,5, 100 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM MgCl2, 8,7% Glycerol, 0,05% NP-40, 1° Protease-Inhibitor, an 1® Phosphatase Inhibitor Cocktail I an II), séier a flëssege Stickstoff gefruer, a lyséiert duerch Ultraschallzellstéierung mat Hëllef vun engem Ultraschall mat Mikrotip wéi UP200Ht mat S26d2 fir 10 Impulser iwwer 10 s bei 30% Amplituden. Wann eng méi grouss Unzuel u Proben muss den Ultraschall virbereet ginn VialTweeter oder de MultiSample-Ultrasonicator UIP400MTP fir Wellplacke recommandéiert. No der Sonikatioun goufen d'Extrakter virgeschloen duerch Zentrifugatioun bei 30.000g fir 20 min bei 4 ° C. De pre-geläscht Extrait (300 µg vum Gesamtprotein) gouf inkubéiert mat 40µg vun Anti-CDC-25.1 Affinitéit gereinegt Antikörper (dës Studie) vernetzt mam Protein A-Agarose, oder als Kontroll, eng ähnlech Quantitéit vun Kanéngchen Immunoglobulin (Ig) G vernetzt mat Protein A-Agarose gouf an engem Gesamtvolumen vun 200 μl Lysis-Puffer mat 1% NP-40 benotzt, d'Inklusioun vun deem d'onspezifesch Bindung vu Proteinen un d'Matrix reduzéiert huet. D'Probe goufen fir 1 h bei 4 ° C rotéiert, d'Kärelen goufen dräimol mat Lysis-Puffer gewäsch, a mat 30 µl Glycin / HCl an 200 mM NaCl, pH 2,2 eluéiert. No der Immunoprecipitatioun goufen d'Eluaten an 30µµl SDS Probebuffer verdünnt, op 95 ° C fir 4 min erhëtzt, an typesch 3% vum Gesamt fir Input an 30% fir d'Eluaten goufen op SDS-PAGE applizéiert gefollegt vum Western Blotting mat Anti -CDC-25.1 (1:400), Anti-LIN-23 (1:750), Anti-Ubiquitin (1:1000), Anti-GSK3o (1:500), oder Anti-β-Actin (1: 2000) Antikörper. Wou Extrakter net un Immunoprecipitatioun ënnerworf goufen, gouf déiselwecht Quantitéit vum Gesamtprotein ofgeleet vun dësen Extrakten am SDS Probebuffer resuspendéiert, op 95 ° C erhëtzt, an dann direkt op SDS-PAGE applizéiert an duerch Western Blotting analyséiert. (cf. Segref et al. 2020)

Ultraschall Zell Disruptor UP200St mat Mikro-Tipp S26d2 fir Lysis an Protein Extraktioun

Ultrasonic Lysis ënner Präzise Temperaturkontroll

Déi präzis an zouverlässeg Temperaturkontroll ass entscheedend beim Ëmgang mat biologesche Proben. Héich Temperaturen initiéieren thermesch induzéiert Proteindegradatioun a Proben.
Wéi all mechanesch Probepräparatiounstechniken, erstellt Sonikatioun Hëtzt. Wéi och ëmmer, d'Temperatur vun de Proben kann gutt kontrolléiert ginn wann Dir de VialTweeter benotzt. Mir presentéieren Iech verschidde Méiglechkeeten fir d'Temperatur vun Äre Proben ze iwwerwaachen an ze kontrolléieren wärend Dir se mam VialTweeter a VialPress fir Analyse virbereet.

Iwwerwaachung vun der Probetemperatur: Den Ultraschallprozessor UP200St, deen den VialTweeter dréit, ass mat enger intelligenter Software an engem pluggbare Temperatursensor ausgestatt. Steet den Temperatursensor an den UP200St an setzt den Tipp vum Temperatursensor an ee vun de Proberöhren. Via digital faarweg Touch-Display kënnt Dir am Menü vun der UP200St e spezifescht Temperaturbereich fir Är Probe-Sonicatioun setzen. Den Ultraschall stoppt automatesch wann d'maximal Temperatur erreecht gëtt a pausen bis d'Probetemperatur erof op den ënneschten Wäert vun der festgeluegter Temperatur ∆ ass. Da fänkt d'Sonication automatesch erëm. Dës intelligent Feature verhënnert Hëtzt-induzéiert Degradatioun.
De VialTweeter Block kann virgekillt ginn. Setzt de VialTweeter Block (nëmmen d'Sonotrode ouni Transducer!) An de Frigo oder de Frigo fir den Titanblock ze precoolen hëlleft d'Temperaturerhéijung an der Probe ze posten. Wa méiglech, kann d'Probe selwer och virgekillt ginn.
Benotzt dréchen Äis fir während der Sonikatioun ze killen. Benotzt e flaache Schacht gefëllt mat trockenem Äis a setzt de VialTweeter op d'Dréchenäis sou datt d'Hëtzt séier opléise kann.

Fannt den Optimal Ultrasonic Cell Disruptor fir Är Lysis Applikatioun

Hielscher Ultrasonics ass e laangjärege erfuerene Fabrikant vu High-Performance Ultrasonic Zell Disrupters an Homogenisatoren fir Laboratoiren, Bench-Top an industriell Skala Systemer. Är bakteriell Zellkulturgréisst, Är Fuerschungs- oder Produktiounsziel an de Volume vun der Zell fir pro Stonn oder Dag ze veraarbecht sinn wesentlech Faktore fir de richtegen Ultraschallzellstéierer fir Är Uwendung ze fannen.
Hielscher Ultrasonics bitt verschidde Léisunge fir d'simultan Sonikatioun vu Multi-Proben (bis zu 10 Fläschen) wéi och Masseproben (dh Mikrotiterplacke / 96-Well Placken), de klassesche Sonde-Typ Labo Ultrasonicator mat verschiddene Kraaftniveauen vu 50 bis 400 Watt fir voll industriell Ultraschallprozessoren mat bis zu 16.000 Watt pro Eenheet fir kommerziell Zell Stéierungen a Protein Extraktioun a grousser Produktioun. All Hielscher Ultraschaller si fir d'24/7/365 Operatioun ënner voller Laascht gebaut. Robustheet an Zouverlässegkeet si Kärfeatures vun eisen Ultraschallapparater.
All digital Ultrasonic Homogenisatoren si mat Smart Software, faarwege Touch Display an automatesch Dateprotokolléierung ausgestatt, déi den Ultraschallapparat zu engem prakteschen Aarbechtsinstrument an Labo a Produktiounsanlagen maachen.
Loosst eis wëssen, wéi eng Zellen, wéi engem Volume, mat wéi enger Frequenz a mat wéi engem Zil Dir Är biologesch Proben veraarbecht hutt. Mir recommandéieren Iech de gëeegentste Ultraschallzellstéierer fir Är Prozessfuerderunge.

D'Tabell hei drënner gëtt Iech eng Indikatioun iwwer d'ongeféier Veraarbechtungskapazitéit vun eisen Ultraschallsystemer vu kompakten Handgehalten Homogenisatoren a MultiSample Ultrasonicatoren bis industriell Ultraschallprozessoren fir kommerziell Uwendungen:

Batch Volume	Duerchflossrate	Recommandéiert Apparater
96-Well / microtiter Placke	na	UIP400MTP
10 Fläschen à 0,5 bis 1,5 ml	na	VialTweeter bei UP200St
001 bis 250 ml	5 bis 100 ml/min	UP50H
001 bis 500 ml	10 bis 200 ml/min	UP100H
10 bis 2000 ml	20 bis 400 ml/min	UP200Ht, UP 400 St
0.1 bis 20L	02 bis 4 l/min	UIP2000hdT
10 bis 100 l	2 bis 10 l/min	UIP4000hdT
na	10 bis 100 l/min	UIP16000
na	méi grouss	Stärekoup vun UIP16000

Kontaktéiert eis! / Frot eis!

Ultrasonic High-Shear Homogenisatoren ginn am Labo, Bench-Top, Pilot an Industrieveraarbechtung benotzt.

Hielscher Ultrasonics fabrizéiert High-Performance Ultrasonic Homogenisatoren fir d'Vermëschung vun Uwendungen, Dispersioun, Emulsifikatioun an Extraktioun op Labo, Pilot an Industrieskala.

Literatur / Referenzen

Chen J.-X; Cipriani P.G.; Mecenas D.; Polanowska J.; Piano F.; Gunsalus K.C.; Selbach M. (2016): In Vivo Interaction Proteomics in Caenorhabditis elegans Embryos Provides New Insights into P Granule Dynamics. Molecular & Cellular Proteomics 15.5; 2016. 1642-1657.
Jonathan Alcántar-Fernández, Rosa E. Navarro, Ana María Salazar-Martínez, Martha Elva Pérez-Andrade, Juan Miranda-Ríos (2018): Caenorhabditis elegans respond to high-glucose diets through a network of stress-responsive transcription factors. PLoS One 13(7); 2018.
Segref, A.; Cabello, J.; Clucas, C.; Schnabel, R.; Johnstone I.L. (2010): Fate Specification and Tissue-specific Cell Cycle Control of the Caenorhabditis elegans Intestine. Molecular Biology of the Cell Vol. 21, 2010. 725–738.
Henderson S.T., Bonafe M., Johnson T.E. (2006): daf-16 protects the nematode Caenorhabditis elegans during food deprivation. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 2006; 61:444–60.

Zesummenhang Themen

Fakten Worth Wëssen

Caenorhabditis elegans

C. elegans ass e fräiliewende transparenten Nematoden (Rondewuerm) ongeféier 1 mm laang, deen op Bakterien (z. B. E. coli) ernährt an e relativ kuerze Liewenszyklus huet. Bei 20 °C huet d'Laborstam vu C. elegans (N2) eng duerchschnëttlech Liewensdauer ëm 2-3 Wochen an eng Generatiounszäit vun 3 bis 4 Deeg. Wann C. elegans a grousser Zuel ugebaut ginn, wat einfach ënner präzis kontrolléiert Labobedingunge gemaach ka ginn, kënne se einfach op den Aarbechtsprinzip vun neien Drogen wéi och hir Effekter an Interaktioun bannent komplexe molekulare Prozesser an der mënschlecher Krankheet gepréift ginn. De kuerze Genom, de kuerze Liewenszyklus an den einfachen Ëmgank an de Labo-Astellunge maachen C. elegans en ideale Modellorganismus fir Fuerschung wéi Genomik, Proteomik, Entwécklungsbiologie, Krankheetsfuerschung, Drogenentwécklung etc.
Caenorhabditis elegans Würmer kënnen entweder männlech oder Hermaphrodite sinn. Hermaphroditen hu béid männlech a weiblech reproduktive Organer. Wéi och ëmmer, weiblech Würmer existéieren net. Hermaphrodite kënnen entweder selbstbefruchten oder kënnen och mat männleche Würmer wuessen. C. elegans kënnen all Dag iwwer 1.000 Eeër produzéieren.
Well C. elegans ee vun den einfachsten Organismen mat engem Nervensystem ass, gëtt den Nematodenwurm zënter 1963 als Modellorganismus fir Fuerschung benotzt. D'Neuronen brennen keng Handlungspotentialer, a drécke keng Spannungsgated Natriumkanäl aus. An der Hermaphrodite enthält dëse System 302 Neuron, deem Muster ëmfaassend kartéiert gouf, a wat als Connectome bekannt ass.
Vill vun de Genen am C. elegans Genom hunn funktionell Géigeparteien am Mënsch, wat et en extrem nëtzlecht Modell fir mënschlech Krankheeten mécht an zum Beispill benotzt gëtt fir d'Entwécklungsbiologie, d'Alterung a Faktoren, déi d'Längegkeet beaflossen, ze studéieren. Ausserdeem liwweren C. elegans Mutanten Modeller fir vill mënschlech Krankheeten, dorënner neurologesch Stéierungen (zB Alzheimer), kongenital Häerzkrankheeten an Nier Krankheet.
Dës Faktoren hunn C. elegans e ganz wäertvollt Modell fir vill Fuerschungsberäicher gemaach. Dofir war C. elegans deen éischte multicellulären Organismus dee säi ganze Genom sequenzéiert huet. De Genom enthält eng geschätzte 20.470 Protein-kodéierend Genen. Ongeféier 35% vun C. elegans Genen hunn mënschlech Homologen. Bemierkenswäert, mënschlech Genen goufen ëmmer erëm gewisen hir C. elegans Homologen ze ersetzen wann se an C. elegans agefouert goufen. Ëmgekéiert kënne vill C. elegans Genen ähnlech wéi Mamendéieren Genen funktionnéieren.

D'Liewensdauer vum C. elegans ass ca. 3 Wochen a besteet aus sechs Liewensstadien: Embryogenese (Eeërstadium), véier Larvalstadien (L1 bis L4) an déi Erwuessenestadium. D'Nematoden zéien aus Eeër als L1 Larven aus 560 Zellen. Wuesstem während all Larvalstadium geschitt duerch Zell Divisioun a vun Zell Hypertrophie. Kutikulär Molting punktuéiert all Larvalstadium. Wann haart Ëmweltbedéngungen dem Entwécklungswuerm signaliséieren datt d'Konditioune onwahrscheinlech erwuesse Fruchtbarkeet ënnerstëtzen, kann C. elegans seng Entwécklung änneren an eng alternativ L3-Larvalstadium bilden, wou d'Larven an eng Dauerstadium ginn. An dësem Zoustand sinn Déieren aussergewéinlech Stress-tolerant a laangliewend a kënnen dräi bis néng Méint iwwerliewen. Dauer-Larven isoléieren sech vun der Néierlag andeems se hir buccal an anal Huelraim versécheren, hiren Darm schrumpfen, an en Daf-16 / FOXO-ofhängeg genetesche Programm ausschalten, deen ënner anerem zum Ausdrock vun enger Dauer-spezifescher Kutikula féiert. (cf. Henderson et al., 2006)

C. elegans Dauer Larven

Dauer-Larven ass de Begrëff fir Nematodenlarven, déi an eng alternativ Entwécklungsstadium agaangen sinn. De Begrëff "Dauer Larven" gëtt besonnesch fir Würmer vun der Rhabditidsfamill benotzt, dorënner Caenorhabditis elegans. D'Wuert "Dauer" ass vun däitschen Hierkonft a bedeit d'Dauer” am Sënn vun “eng Zäitperiod". Dauer Larven ginn an eng Aart vu Stasis a kënnen haart Konditiounen iwwerliewen. Wann a wéini eng Larve an d'Dauerstadium erakënnt, hänkt vun den Ëmweltbedéngungen of. Dauer-Larve ginn extensiv an der Biologie studéiert, well d'Larven eng aussergewéinlech Fäegkeet weisen fir haart Ëmfeld ze iwwerliewen a fir länger Zäit ze liewen. Zum Beispill kënnen d'C. elegans Dauer Larven bis zu véier Méint iwwerliewen, vill méi laang wéi hir duerchschnëttlech Liewensdauer vun ongeféier dräi Wochen während der normaler reproduktiver Entwécklung.

Iwwersiicht iwwer C. elegans Life Cycle

C. elegans Entwécklung a gënschteg Ëmfeld:
Caenorhabditis elegans (C. elegans) weisen ënnerschiddlech Entwécklungsprogressioun ënner gënschteg an ongënschteg Ëmweltbedéngungen.

C. elegans Äntwert op gënschteg Konditiounen:
Bei gënschtege Konditiounen ass de mikroskopesche Ronnworm Caenorhabditis elegans (C. elegans) e gutt definéierten Entwécklungswee. Den Nematoden geet typesch duerch säi Liewenszyklus zimlech séier wann d'Ëmweltbedéngungen optimal sinn, typesch bei Temperaturen tëscht 15 ° C an 20 ° C.

Reproduktiv Entwécklung: C. elegans fänkt säi Liewenszyklus als Embryo un. Et geet dann duerch véier verschidde Larvalstadien, verkierzt als L1 bis L4.
Erwuessener Etapp: Nom Ofschloss vun de véier Larvalstadien erreecht C. elegans an nëmmen 3 bis 5 Deeg d'Erwuessenestadium. An dëser Etapp si se fäeg ze reproduzéieren a weider 2 bis 3 Wochen ze liewen, ofhängeg vun Ëmweltfaktoren.

C. elegans Äntwert op ongënschteg Konditiounen:

Wéi och ëmmer, C. elegans ass e elastesche Organismus a kann sech un ongënschteg Konditiounen upassen duerch e Prozess genannt Dauerbildung.

Dauer Formation: Wann d'Ëmweltbedéngungen ongënschteg ginn, sou wéi Iwwerbezuelung, limitéiert Liewensmëttelversuergung oder héich Temperaturen, kënnen C. elegans an eng aussergewéinlech drëtt Larvalstadie kommen, genannt “dauer,” als L3d verkierzt.
Dauer Survival: Dauer-Larve si speziell ugepasst fir an haarde Konditiounen ze iwwerliewen. Si kënne fir e puer Méint an dëser Etapp liewen, Energie spueren an usprochsvollen Ëmfeld widderstoen.

Erhuelung a gënschteg Ëmfeld:
De bemierkenswäerten Aspekt vum C. elegans ass seng Fäegkeet fir op en normale Liewenszyklus zréckzekommen wann d'Konditioune verbesseren.

Zréck op gënschteg Konditiounen: Wann d'C. elegans Dauer Larven erëm gënschteg Konditioune begéinen, wéi genuch Iessen, manner Populatiounsdicht a gëeegent Temperaturen, fille se d'Verännerung vun der Ëmwelt.
Erhuelung a Reproduktioun: Als Äntwert op dës verbessert Konditiounen, ginn Dauer Larven e Prozess genannt “Erhuelung.” Wärend der Genesung ginn se zréck an d'Larvalstadien a ginn schlussendlech reproduktive Erwuessener mat normale Liewensdauer.

Dës Fäegkeet tëscht Entwécklungsstadien an Äntwert op Ëmweltbedéngungen ze wiesselen ass e speziellen Aspekt vun der C. elegans Biologie. Et erlaabt hinnen effektiv an enger breeder Palette vu Konditiounen ze iwwerliewen an ze reproduzéieren, sou datt se e wäertvollen Modellorganismus fir wëssenschaftlech Fuerschung maachen, besonnesch an der Studie vun der Entwécklung, Genetik an Alterung.

Ultrasonic Virbereedung vun C. Elegans Echantillon