Ultrasonic Sample Prep fir ELISA Assays

Assays wéi ELISA gi wäit benotzt fir In-vitro Diagnostik, Krankheet-relatéiert Protein Detektioun a Qualitéitskontroll (zB Iwwerwaachung vun Liewensmëttelallergènen). Ultrasonic Probe Virbereedung ass eng séier, zouverléisseg a reproduzéierbar Technik fir Zellen ze lyséieren an intrazellulär Proteinen, DNA, RNA an Organellen ze isoléieren. Hielscher Ultrasonics bitt verschidde Ultraschallléisungen fir déi bequem Virbereedung vun eenzel Proben, Multiple Vials wéi och fir Mikrotiterplacken a 96-Well Placken.

ELISA – Enzym-Linked Immunosorbent Assay

ELISA steet fir Enzym-verbonne Immunosorbent Assay an ass eng wäit benotzt biochemesch Analyse Technik vun der Kategorie vu Ligandbindende Assays. An ELISA gëtt eng flësseg Probe op eng stationär fest Phase mat spezielle Bindungseigenschaften bäigefüügt. Normalerweis gëtt déi stationär zolidd Phase als Beschichtung op eng Wellplack oder ELISA Plack applizéiert. Duerno gi verschidde flësseg Reagenser sequenziell derbäigesat, inkubéiert a gewäsch, sou datt endlech eng optesch Ännerung (zB Faarfentwécklung duerch d'Produkt vun enger enzymatescher Reaktioun) an der Finale Flëssegkeet am Brunn geschitt. D'optesch Ännerung erlaabt d'Quantitéit vum Analyt duerch e sougenannte Quantitativ ze moossen “liesen ". Fir déi quantitativ Liesung gëtt e Spektrofotometer, Fluorometer oder Luminometer benotzt fir d'Intensitéit vum iwwerdroene Liicht z'entdecken an ze moossen. D'Sensibilitéit vun der Detektioun gëtt beaflosst vun der Verstäerkung vum Signal während den analytesche Reaktiounen. Zënter Enzymreaktiounen sinn gutt ënnersicht an zouverlässeg Amplifikatiounsprozesser, ginn Enzyme benotzt fir d'Signal ze kreéieren. D'Enzyme si mat den Detektiounsreagenser a fixe Verhältnisser verbonnen fir eng korrekt Quantifizéierung z'erméiglechen, wat och den Numm "Enzym-verbonne" Immunosorbent Assay erkläert.
Well ELISA Assays a Mikrotiterplaten / 96-Well Placken ausgefouert ginn, ass et bekannt als Plattebaséiert Assay Technik a gëtt zB an der klinescher In-vitro Diagnostik, Fuerschung, Medikamententwécklung etc. an Hormonen.
D'ELISA Technik gëtt dacks als diagnostescht Instrument an der Medizin, Biotech, Planzepathologie benotzt an ass och eng wichteg Qualitéitskontrollmessung a ville Industrien.

Ultrasonic Sample Prep virun ELISA

Virun der ELISA Assay ka gemaach ginn, erfuerderen d'Proben Schrëtt vun der Virbereedung wéi Zelllysis an Extraktioun vun intrazelluläre Proteinen, DNA, RNA asw. All dës Faktore si wichteg fir qualitativ héichwäerteg Diagnostik a Fuerschungsresultater ze kréien

Protokoll fir Pre-ELISA Ultraschall Zell Lysis

• Fir Zellkulturen: Virun der Ultraschallzelllysis, centrifuge Zelle fir 5 Minutten bei 270 xg an enger Mikrocentrifuge. Huelt den Supernatant duerch Aspiratioun a resuspendéiert Zellen an 30 - 100 μL RIPA Puffer. Dann, inkubéiert d'Zellpellet op Äis fir 30 min.
• Elo ass d'Zellprobe prett fir Ultraschalllyse:
  Benotzt e Sonde-Typ Ultraschall (z UP200Ht mat S26d2 Sonde) oder en Ultraschall Multi-Sample-Apparat (zB VialTweeter fir gläichzäiteg Sonikatioun vu bis zu 10 Fläschen oder den UIP400MPT fir Mikrotiterplacke / 96-Well Placke) jee no der Unzuel vun de Proben déi Dir braucht ze preparéieren.
  Fir d'Sonde-Typ Sonikatioun vun enger eenzeger Probe, setzen d'Zellen an 1,5 ml Mikrocentrifuge-Tubes.
• Pre-set Är Ultrasonic Dauer, Gesamtenergie-Input, Zyklusmodus an / oder Temperaturgrenzen am digitale Menü vum Ultrasonicator. Dëst garantéiert héich zouverlässeg Sonication a Widderhuelbarkeet.
• Setzt d'Sonotrode a schalt den Ultraschallapparat un. Beweegt sanft de Mikro-Tipp vun der Ultraschallsonde duerch d'Probe fir d'Probe eenheetlech ze sonicéieren.
  Fir déi meescht Zellen gëtt d'Ultraschalllyse no 2 -4 Zyklen vun 10 Sekonnen Sonikatioun ofgeschloss.
• No sonication, ewechzehuelen der sonotrode aus der Prouf. D'Proben sollen op Äis fir 5 min inkubéiert ginn. Dann centrifuge bei 10.000 xg fir 20 min fir d'Schutt ze pelleten. Transfert d'Supernatanten an en neit Mikrocentrifuge-Röhre. Label d'Analyten a späicheren bei -20 ° C.
• D'Ultraschall-Sonotrode kann gereinegt ginn andeems se se richteg mat Alkohol wëschen oder an engem Becher gefëllt mat Alkohol, zB 70% Ethanol, sonikatéieren. All Ultraschallsonden aus Titan sinn autoklaverbar.

• Spülen den Tissu mat äiskale PBS (0,01M, pH = 7,4) fir iwwerschësseg Hämolyse Blutt grëndlech ze entfernen.
• Weegt den Tissu (Nier, Häerz, Lunge, Milz etc.) a maceréiert et a kleng Stécker, déi am PBS homogeniséiert ginn. De Volume vu PBS erfuerderlech ass mat dem Gewiicht vum Tissu verbonnen. Als Fauschtregel brauch 1g Tissu ca. 9ml PBS. Et ass recommandéiert e puer Protease-Inhibitor fir de PBS ze addéieren. (RIPA oder hypotonesch Lysisbuffer mat Protease a Phosphatase-Inhibitor Cocktail kann alternativ benotzt ginn.)
• Ofhängeg vun der Tissuegréisst, kann eng kuerz Wirbelbehandlung (ongeféier 1-2 min. a 15 Sekonnen Impulsen) hëllefräich sinn fir de Tissu virzebehandelen.
• Mount e Mikro-Tipp, zB S26d2, op Ären Ultraschall. Setzt de Proberöhre mam Tissu an engem Äisbad.
• Sonicate d'Probe mat Ärem Ultraschall, zB UP200St (80% Amplitude) fir 1 min. am Pulsmodus (15 Sekonnen, 15 Sekonnen Paus). Halt d'Probe am Äisbad.
• D'Homogenate ginn dann centrifugéiert fir spezifesch Pools ze kréien (cytosolic, nuklear, mitochondrial oder lysosomal) fir de Protein fir d'Analyse ze beräicheren. Duerch d'Zentrifugerung vun der Probe fir 5 Minutten bei 5000 × g, gëtt de Supernatant erëmfonnt.

Zuverlässeg Temperaturkontroll während Sonication

Temperatur ass e wesentleche Prozess-beaflossende Faktor, dee besonnesch wichteg ass fir d'Behandlung vu biologesche Proben, zB fir thermesch Degradatioun vu Proteinen ze vermeiden. Wéi all mechanesch Probepräparatiounstechniken, erstellt Sonikatioun Hëtzt. Allerdéngs kann d'Temperatur vun de Proben gutt kontrolléiert ginn wann Dir d'Hielscher Ultrasonics Geräter benotzt. Mir presentéieren Iech verschidde Méiglechkeeten fir d'Temperatur vun Äre Proben ze iwwerwaachen an ze kontrolléieren wärend se mat engem Sonde-Typ Ultrasonicator oder dem VialTweeter pre-analytesch virbereet.

1. Iwwerwaachung vun der Probetemperatur: All Hielscher Digital Ultrasonic Prozessoren si mat enger intelligenter Software an engem pluggable Temperatursensor ausgestatt. Plug den Temperatursensor an den Ultraschallapparat (z.B. UP200Ht, UP 200 St, VialTweeter, UIP400MTP) a setzt den Tipp vum Temperatursensor an ee vun de Proberöhren. Via digital faarweg Touch-Display kënnt Dir am Menü vum Ultraschallprozessor e spezifescht Temperaturbereich fir Är Probe-Sonicatioun setzen. Den Ultraschall stoppt automatesch wann d'maximal Temperatur erreecht gëtt a pausen bis d'Probetemperatur erof op den ënneschten Wäert vun der festgeluegter Temperatur ∆ ass. Da fänkt d'Sonication automatesch erëm. Dës intelligent Feature verhënnert Hëtzt-induzéiert Degradatioun.
2. Wat d'Ultraschall Multi-Sample-Eenheet VialTweeter ugeet, kann den Titanblock, deen d'Probe-Tubes halen, virgekillt ginn. Setzt de VialTweeter Block (nëmmen d'Sonotrode ouni Transducer!) An de Frigo oder de Frigo fir den Titanblock ze precoolen hëlleft d'Temperaturerhéijung an der Probe ze posten. Wa méiglech, kann d'Probe selwer och virgekillt ginn.
3. Benotzt en Äisbad oder dréchen Äis fir während der Sonikatioun ze killen. Place Är Probe Rouer (en) während sonication an engem Äis Bad. Fir de VialTweeter, benotzt e flachen Schacht gefëllt mat Dréchent a setzt de VialTweeter op d'Trocken Äis sou datt d'Hëtzt séier opléise kann.

D'Clientë weltwäit benotzen d'Hielscher Sonde-Ultrasonikatoren wéi och d'Multi-Sample-Sonication-Eenheeten VialTweeter an UIP400MTP fir hir alldeeglech Probepräparatiounsaarbecht an biologeschen, biochemeschen, medizineschen a klineschen Laboratoiren. Déi intelligent Software an d'Temperaturkontrolle vun den Hielscher Prozessoren, d'Temperatur gëtt zouverlässeg kontrolléiert an d'Hëtzt-induzéiert Probe Degradatioun vermeit. Ultrasonic Probe Virbereedung mat Hielscher Ultraschallléisungen liwwert héich zouverlässeg a reproduzéierbar Resultater!