Ultraschall Probe Virbereedung fir ELISA Assays

Assays wéi ELISA gi wäit verbreet fir In-vitro Diagnostik, Krankheet-bezunn Protein Detektioun a Qualitéitskontroll (z. B. Iwwerwaachung vu Liewensmëttelallergenen). Ultraschall Proufvirbereedung ass eng séier, zouverléisseg a reproduzéierbar Technik fir Zell ze lyzen an intrazellulär Proteine, DNA, RNA an Organellen ze isoléieren. Hielscher Ultrasonics bitt verschidde Ultraschall-Léisunge fir déi bequem Virbereedung vun eenzelne Proben, méi Fläschen wéi och fir Mikrotiterplacken an 96-Wuelplacken.

ELISA – Enzymlinked Immunosorbent Assay

ELISA steet fir Enzym-verbonne immunosorbent Assay an ass eng wäit verbreet biochemesch Analysetechnik vun der Kategorie vu ligand-verbindlechen Assays. An ELISA gëtt eng flësseg Prouf op eng stationär zolitt Phase mat speziellen verbindlechen Eegeschafte bäigefüügt. Normalerweis gëtt déi stationär zolitt Phase als Beschichtung op eng gutt Plack oder ELISA Plack applizéiert. Duerno gi verschidde flësseg Reagenz sequentiell bäigefüügt, incubéiert a gewäsch, sou datt endlech eng optesch Ännerung (z. B. Faarfentwécklung duerch d'Produkt vun enger enzymatescher Reaktioun) an der leschter Flëssegkeet an der Brunn geschitt. Déi optesch Ännerung erlaabt d'Quantitéit vum Analyt duerch e sougenannte quantitative ze moossen “liesen “. Fir d'quantitativ Liesung gëtt e Spektrophotometer, Fluorometer oder Luminometer benotzt fir d'Intensitéit vum iwwerdroe Liicht z'entdecken an ze moossen. D'Sensibilitéit vun der Detektioun gëtt beaflosst vun der Verstäerkung vum Signal wärend den analytesche Reaktiounen. Well Enzymreaktiounen gutt ënnersicht ginn an zouverléisseg Verstäerkungsprozesser, ginn Enzyme benotzt fir d'Signal ze kreéieren. D'Enzyme si mat den Detektiounsreagenter a fixe Verhältnesser verbonnen fir eng korrekt Quantifizéierung z'erméiglechen, wat och den Numm "Enzymgebonne" immunosorbent Assay erkläert.
Wéi ELISA Assays a Mikrotiterplacke / 96-Wuelplacke gemaach ginn, ass et bekannt als Plackebaséiert Assay-Technik a gëtt zB a klinescher In-vitro Diagnostik, Fuerschung, Medikamententwécklung etc. an Hormoner.
D'ELISA Technik gëtt dacks als diagnostescht Instrument a Medizin, Biotech, Planz Pathologie benotzt an ass och eng wichteg Qualitéitskontrollmiessung a verschiddene Branchen.

Komplett VialTweeter Setup: VialTweeter Sonotrode bei Ultraslon Prozessor UP200St

D'Ultraschall Prouf Virbereedung Eenheet VialTweeter gëtt fir Zelllysis a Proteinenextraktioun virum ELISA Assays benotzt

Informatiounen ufroen




Notéiert eis Privatsphär Politik.


Ultraschall Probe Virbereedung virum ELISA

Virun der ELISA Assay kann ausgefouert ginn, erfuerderen d'Echantillonen Schrëtt fir Virbereedung sou Zelllysis an Extraktioun vun intrazellularer Proteinen, DNA, RNA asw. All dës Faktore si wichteg fir héichqualitativ Diagnostik a Fuerschungsresultater ze kréien

Virdeeler vun Ultraschall Lysis virum ELISA

  • Homogen Proufbehandlung
  • Komplett Lysis
  • Komplett Protein Extraktioun (z. B. Antikörper, DNA)
  • Optimal Upassung un den Zelltyp
  • Fir all Probe Gréisst
  • reproduzbar sinn
  • temperaturkontrolléiert
  • Automatesch Datenprotokolléierung op SD-Kaart

Protokoll fir Pre-ELISA Ultraschallzell Lysis

Probe-Typ Versécherung UP200St fir Lyse

  • Fir Zellkulturen: Virun der Ultraschallzell Lysis, Zentrifuge Zellen fir 5 Minutte bei 270 xg an enger Mikrozentrifuge. Ewechzehuelen der supernatant vun Striewe an resuspend Zellen an 30 - 100 μL vun RIPA Prellbock. Dann, incubéiert d'Zellpellet op Äis fir 30 min.
  • Elo ass d'Zell Probe prett fir Ultraschall Lysis:
    Benotzt e Sonde-Typ Ultraschall (z. B. UP200Ht mat S26d2 Sonde) oder engem Ultraschall-Multi-Probe-Apparat (z. B. VialTweeter fir eng simultan Opléisung vu bis zu 10 Fläschen oder den UIP400MPT fir Mikrotiterplacken / 96-Brunnplacken) ofhängeg vun der Unzuel u Prouwen déi Dir preparéiere musst.
    Fir d'Sonde-Typ Opléisung vun enger eenzeger Probe, plazéiert d'Zellen an 1,5 ml Mikrozentrifugéierungen.
  • Pre-Set Är Ultraschall Dauer, Total Energie Input, Zyklus Modus an / oder Temperatur Limiten am digitale Menü vum Ultraschall. Dëst garantéiert héich zouverléisseg Opléisung a Widderhuelbarkeet.
  • Setzt d'Sonotrode a schalt den Ultraschall-Apparat un. Beweegt de Mikro-Tipp vun der Ultraschallsonde duerch d'Probe fir d'Probe uniform ze sonikéieren.
    Fir déi meescht Zellen gëtt d'Ultraschall-Lysis no 2- -4 Zyklen vun 10 Sek.
  • No Opléisung, huelt d'Sonotrode aus der Probe. D'Echantillon sollte fir 5 min op Äis incubéiert ginn. Dann, zentrifuge bei 10.000 xg fir 20 min fir de Schutt ze pelletéieren. Transfert d'Supernatanten an en neie Mikrozentrifugéierréier. Label d'Analyte a späichert bei -20 ° C.
  • D'Ultraschall-Sonotrode kann gereinegt ginn andeems se se richteg mat Alkohol ofwëschen oder an engem Becher mat Alkohol gefëllt, zB 70% Ethanol. All Ultraschallsonden aus Titan sinn autoklaverbar.

Fir Tissue Homogenate:

  • Spull den Tissu mat äiskale PBS (0.01M, pH = 7.4) fir iwwerschësseg Hämolyseblutt grëndlech ze läschen.
  • Weeër den Tissu (Nier, Häerz, Long, Milz asw.) A mazeréiert et a kleng Stécker, déi a PBS homogeniséiert sinn. De Volume vun PBS erfuerderlech ass mam Gewiicht vum Gewebe bezunn. Als Daumenregel erfuerdert 1g Tissu ca. 9mL PBS. Et ass recommandéiert e Proteaseinhibitor op de PBS bäizefügen. (RIPA oder hypotonesche Lysepuffer mat Protease a Phosphatase-Inhibitor Cocktail kann alternativ benotzt ginn.)
  • Ofhängeg vun der Gewëssgréisst kann eng kuerz Wirbelbehandlung (ongeféier 1-2 min. A 15 Sek. Impulsen) hëllefräich sinn fir den Tissu virzebehandelen.
  • Montéiert e Mikro-Tipp, zB S26d2, op Ären Ultraschall. Maacht d'Proufrohre mam Tissu an engem Äisbad.
  • Sonikéiert d'Probe mat Ärem Ultraschall, zB UP200St (80% Amplitude) fir 1 min. am Puls-Modus (15sek un, 15sec Paus). Halt d'Probe am Äisbad.
  • D'Homogenate ginn dann zentrifugéiert fir spezifesch Pools (zytosolesch, nuklear, mitochondriell oder lysosomal) ze kréien, fir de Protein fir d'Analyse ze beräicheren. Duerch Zentrifugéiere vun der Probe fir 5 Minutte bei 5000 × g gëtt de Supernatant erëmfonnt.
D'Sonotrode MTP-24-8-96 huet aacht Ultraschall-Sonden fir d'Sonikatioun vun de Brunnen vu Mikrotiterplacken.

D'Sonotrode MTP-24-8-96 huet aacht Ultraschall-Sonden fir d'Sonikatioun vun de Brunnen vu Mikrotiterplacken.

Verléisslech Temperatur Kontroll während Sonication

Temperatur ass e wichtege Prozess beaflosst Faktor dee besonnesch wichteg ass fir d'Behandlung vu biologesche Proben, zB fir thermesch Degradatioun vu Proteinen ze vermeiden. Wéi all mechanesch Proufvirbereedungstechniken, Sonikatioun kreéiert Hëtzt. Wéi och ëmmer, d'Temperatur vun de Proben kann gutt kontrolléiert ginn wann Dir d'Hielscher Ultrasonics Geräter benotzt. Mir presentéieren Iech verschidden Optiounen fir d'Temperatur vun Äre Proben z'iwwerwaachen a kontrolléieren, wärend se mat engem Sonde-Typ Ultraschall oder dem VialTweeter pre-analytesch virbereet ginn.

  1. Iwwerwaachung vun der Probtemperatur: All Hielscher digital Ultraschallveraarbechter si mat enger intelligenter Software an engem pluggbaren Temperatursensor ausgestatt. Plug den Temperatursensor an den Ultraschall-Gerät (z. B. UP200Ht, An UP200St, An VialTweeter, UIP400MTP) a füügt den Tipp vum Temperatursensor an ee vun de Proufréier. Iwwer digital faarweg Touch-Display kënnt Dir am Menu vum Ultraschall-Prozessor e spezifescht Temperaturbereich fir Är Probe-Sonikatioun setzen. Den Ultraschall stoppt automatesch wann déi maximal Temperatur erreecht gëtt a pauséiert bis d'Prouftemperatur bis op de méi nidderege Wäert vun der festgeluechter Temperatur ∆. Da fänkt d'Sonikatioun automatesch erëm un. Dës intelligent Feature verhënnert Hëtztinduzéierter Degradatioun.
  2. Wat d'Ultraschall-Multi-Probe-Eenheet VialTweeter ugeet, kann den Titanblock, deen d'Proufrohren hält, virgekillt ginn. Setzt de VialTweeter Block (nëmmen d'Sonotrode ouni Transducer!) An de Frigo oder Gefrierschrank fir den Titanblock vir ze killen hëlleft d'Temperaturerhéijung an der Probe ze verréckelen. Wa méiglech kann d'Prouf selwer och virgekillt ginn.
  3. Benotzt en Äisbad oder dréchent Äis fir bei der Opléisung ofzekillen. Setzt Är Probe Tube (s) wärend der Sonikatioun an en Äisbad. Fir de VialTweeter benotzt e flaache Schacht gefëllt mat dréchenem Äis a plazéiert de VialTweeter op dat dréchent Äis, sou datt d'Hëtzt sech séier opléise kann.

Clienten weltwäit benotzen d'Hielscher Sonde-Ultraschaller wéi och d'Multiprobe-Sonikatiounseenheeten VialTweeter an UIP400MTP fir hir alldeeglech Proufvirbereedungsaarbecht a biologeschen, biochemeschen, medizineschen a klineschen Laboratoiren. Déi intelligent Software an d'Temperaturregelung vun den Hielscher Prozessoren, d'Temperatur gëtt zouverlässeg kontrolléiert an duerch Hëtzt induzéiert Probe Degradatioun vermeit. Ultraschall Probe Virbereedung mat Hielscher Ultraschall Léisunge liwwert héich zouverléisseg a reproduzéierbar Resultater!

Kontaktéiert eis! / Frot eis!

Frot méi Informatiounen

W.e.g. benotzt d'Form hei ënnen fir zousätzlech Informatiounen iwwer Ultrasonic Prozessoren, Uwendungen a Präis ze froen. Mir freeën eis Äre Prozess mat Iech ze diskutéieren an Iech en Ultrasonic System unzebidden, deen Är Ufuerderungen entsprécht!










Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

Hielscher Ultrasonics fabrizéiert performant Ultraschall-Homogeniséierer fir Uwendungen, Dispersioun, Emulgatioun an Extraktioun am Labo, Pilot an industrieller Skala ze vermëschen.

Literatur / Referenzen



Fakten Wësse wat weess

Zorte vun ELISA

Et gi verschidden Zorten vun ELISA, déi sech duerch hire funktionéierende Prinzip ënnerscheeden. Si sinn als direkt ELISA bekannt, indirekt ELISA, Sandwich ELISA, kompetitiv ELISA, an ëmgedréint ELISA. Hei drënner presentéiere mir Iech en Iwwerbléck iwwer déi verschidden ELISA Typen an hir Haaptcharakteristiken an Ënnerscheeder.
ELISA kann an engem qualitativen oder quantitativen Format gefouert ginn. Qualitativ Resultater bidden en einfacht positivt oder negativ Resultat, wärend a quantitativer ELISA déi optesch Dicht (OD) vun der Probe mat enger Standardkurve verglach gëtt, déi typesch eng seriell Verdënnung vun enger bekannter Konzentratiounsléisung vun der Zilmolekül ass.

Direkten ELISA

Déi direkt ELISA ass déi einfachst Assay Form vun Elisa, wou nëmmen en Enzymarkéierter Primär Antikörper benotzt gëtt a sekundär Antikörper net erfuerderlech sinn. D'Enzym-markéiert primär Antikörper bindet direkt un d'Zil, dh Antigen. Déi gebuffert Antigenléisung gëtt zu all Brunn vun enger Mikrotiterplack bäigefüügt (normalerweis 96-Wuelplacken, ELISA-Placken), wou se sech op déi plastesch Uewerfläch duerch Ladungsinteraktiounen halen. Wann den Enzym, deen un de primären Antikörper gekoppelt ass, mat sengem Substrat reagéiert, produzéiert en e sichtbart Signal, dat iwwer Spektrophotometer, Fluorometer oder Luminometer gemooss ka ginn.

Indirekt ELISA

Fir den indirekten ELISA Test si souwuel e primären Antikörper wéi och e sekundären Antikörper erfuerderlech. Wéi och ëmmer, am Géigesaz zum direkten ELISA, net de primären Antikörper, awer de sekundären Antikörper gëtt mat engem Enzym gezeechent. Den Antigen ass op d'Brunnplack immobiliséiert a vum primäre Antikörper gebonnen. Duerno bindet den Enzymmarkéierter sekundär Antikörper un de primären Antikörper. Schlussendlech reagéiert de Enzym deen mam sekundären Antikörper verlinkt ass mat sengem Substrat fir e sichtbart Signal ze produzéieren dat detektéiert ka ginn.

Sandwich ELISA

Wärend an direkten an indirekten ELISA Tester, gëtt den Antigen immobiliséiert an op d'Uewerfläch vun der Brunnplack beschichtet, am Sandwich ELISA gëtt den Antikörper immobiliséiert op d'Plastiksfläch vun der ELISA-Plack. Déi immobiliséiert Antikörper a Sandwich ELISA sinn als Capture Antikörper bekannt. Zousätzlech zu de Fangantikörper, sinn am Sandwich ELISA och sougenannte Detektiounsantikierper erfuerderlech. Detektioun Antikörper enthalen en net gekennzeechent Primär Detektioun Antikörper an en Enzymmarkéierter Sekundär Detektioun Antikörper.
Schrëttweis bindet den Antigen vun Interesse un de Fangantikörper immobiliséiert un der Plack. Dann ass de primäre Detektiounsantikörper un den Antigen gebonnen. Duerno bindet de sekundären Detektioun Antikörper un de primären Detektioun Antikörper. Am leschte Reaktiounsstuf reagéiert den Enzym mat sengem Substrat fir e sichtbart Signal ze produzéieren dat optesch detektéiert ka ginn.

Kompetitiv ELISA

Kompetitiv ELISA, och bekannt als Hemmung ELISA, ass dee komplexsten ELISA Typ well et d'Benotzung vun engem Inhibitor Antigen involvéiert. Jidd vun den dräi Formater, direkt, indirekt a Sandwich ELISA, kënnen dem kompetitive ELISA Format ugepasst ginn. Bei kompetitiver ELISA konkurréiere den Inhibitorantigen an den Antigen vun Interesse fir verbindlech mam primären Antikörper.
Fir kompetitiv ELISA gëtt onmarkéiert Antikörper a Präsenz vu sengem Antigen, also Probe incubéiert. Dës gebonne Antikörper / Antigen Komplexe ginn dann zu enger antigenbeschichteter Brunn bäigefüügt.
D'Plack gëtt gewäsch, sou datt ongebonne Antikörper ewechgeholl ginn. Kompetitiv ELISA huet säin Numm wéinst der Tatsaach, datt wat méi Antigen an der Probe ass, wat méi Antigen-Antikörperkomplexe geformt ginn. Dëst bedeit, et gi manner ongebonne Antikörper verfügbar fir dem Antigen an der Brunn ze bannen an d'Antigen mussen ëm en verfügbare Antikörper konkurréieren. E sekundärt Antikörper, passend zum primär Antikörper, gëtt derbäi. Dësen zweeten Antikörper ass mam Enzym verlinkt. Wann de Substrat bäigefüügt gëtt, produzéieren déi verbleiwen Enzyme e chromogen oder fluoreszéierend Signal.
Zu dësem Zäitpunkt gëtt d'Reaktioun gestoppt fir déi eventuell Sättigung vum Signal ze vermeiden.
E puer kompetitiv ELISA Kits enthalen en enzymgebonne Antigen amplaz en enzymgebonne Antikörper. Dat markéiert Antigen konkuréiert fir primär Antikörperverbindungsplaze mam Proufantigen (net gezeechent). Wat manner Antigen an der Probe ass, wat méi markéiert Antigen an der Brunn zréckbehale gëtt a wat d'Signal méi staark ass.

Ëmgedréit ELISA

Reverse ELISA benotzt net gutt Placken, awer léisst d'Antigenen an der Testfluid suspendéiert sinn. De Reverse ELISA Test moosst de Betrag vum gebonne Antikörper iwwer Antigen. Et gouf speziell entwéckelt fir de West Nile Virus Enveloppe Protein z'entdecken an z'ënnersichen a wéi et fäeg ass Virus-spezifesch Antikörper ze fannen.

Enzymatesche Marker Benotzt fir ELISA

D'Lëscht hei ënnendrënner déi meescht üblech enzymatesch Markéierer déi an ELISA Assays benotzt ginn, déi d'Resultater vum Assay no Ofschloss moossen.

  • OPD (o-Phenylendiamin-Dihydrochlorid) gëtt amber fir HRP (Meerrettich Peroxidase) z'entdecken, wat dacks als konjugéiert Protein benotzt gëtt.
  • TMB (3,3′, 5,5′-tetramethylbenzidine) gëtt blo wann et HRP detektéiert a gëtt giel no der Zousaz vu Schwiefel- oder Phosphorsäure.
  • ABTS (2,2′-Azinobis [3-Ethylbenzothiazolin-6-Sulfonsäure] -diammonium Salz) gëtt gréng beim HRP detektéieren.
  • PNPP (p-Nitrophenyl Phosphat, Dinatrium Salz) gëtt giel wann et alkalesch Phosphatase detektéiert.