Ultraschallprouwevirbereedung fir ELISA-Assayen

Assaye wéi ELISA gi breet fir d’In-vitro-Diagnostik, den Noweis vu Proteinen am Zesummenhang mat Krankheeten an d’Qualitéitskontroll (z. B. d’Iwwerwaachung vu Liewensmëttelallergenen) agesat. D’Ultraschallprouwevirbereedung ass eng séier, zouverlässeg a reproduzéierbar Technik, fir Zellen ze lyséieren an intrazellulär Proteinen, DNA, RNA an Organellen ze isoléieren. Hielscher Ultrasonics bitt verschidden Ultraschallléisunge fir déi bequem Virbereedung vun eenzele Prouwen, méi Prouwefläschen esou wéi vu Mikrotiterplacken a Placke mat 96 Vertiefungen.

ELISA – enzymgekoppelten Immunosorbent-Assay

ELISA steet fir enzymgekoppelten Immunosorbent-Assay an ass eng breet agesate biocheemesch Analysetechnik aus der Kategorie vun de Ligandebindungsassayen. Bei ELISA gëtt eng flësseg Prouf op eng stationär fest Phas mat spezielle Bindungseegenschafte ginn. Normalerweis gëtt déi stationär fest Phas als Beschichtung op eng Plack mat Vertiefungen oder eng ELISA-Plack opgedroen. Duerno gi verschidde flësseg Reagenzien noeneen derbäiginn, inkubéiert a gewäsch, sou datt schliisslech eng optesch Verännerung (z. B. eng Faarwentwécklung duerch d’Produkt vun enger enzymatescher Reaktioun) an der leschter Flëssegkeet an der Vertiefung entsteet. Déi optesch Verännerung erlaabt et, d’Quantitéit vum Analyt duerch eng sougenannt quantitativ „Of liesung“ ze moossen. Fir déi quantitativ Ofliesung gëtt e Spektrofotometer, Fluorometer oder Luminometer benotzt, fir d’Intensitéit vum duerchgelossene Liicht z’erfaassen an ze moossen. D’Noweisempfindlechkeet gëtt duerch d’Verstäerkung vum Signal wärend den analytesche Reaktioune beaflosst. Well Enzymreaktioune gutt ënnersicht an zouverlässeg Verstäerkungsprozesser sinn, ginn Enzyme benotzt, fir d’Signal ze erzeugen. D’Enzyme sinn a feste Verhältnesser un d’Noweisreagenzie gekoppelt, fir eng genee Quantifizéierung z’erméiglechen, wat och d’Bezeechnung „enzymgekoppelt“ am Numm Immunosorbent-Assay erkläert.
Well ELISA-Assayen a Mikrotiterplacken / Placke mat 96 Vertiefungen duerchgefouert ginn, ass dës Technik als plackebaséiert Assaytechnik bekannt a gëtt z. B. an der klinescher In-vitro-Diagnostik, der Fuerschung an der Medikamentenentwécklung asw. fir den Noweis an d’Quantifizéierung vun Antikierperen, Peptiden, Proteinen an Hormone benotzt.
D’ELISA-Technik gëtt dacks als diagnostescht Instrument an der Medezin, der Biotechnologie an der Planzepathologie agesat an ass och eng wichteg Moossnam fir d’Qualitéitskontroll a verschiddenen Industrien.

Ultraschallprouwevirbereedung virun ELISA

Ier den ELISA-Assay duerchgefouert ka ginn, mussen d’Prouwe Virbereedungsschrëtt wéi d’Zelllys an d’Extraktioun vun intrazelluläre Proteinen, DNA, RNA asw. duerchlafen. De Virdeel vun der Ultraschallzelllys an der Proteinisolatioun läit an hirer héijer Effizienz, Zouverlässegkeet a Reproduzéierbarkeet. All dës Facteure si wichteg, fir eng héichwäerteg Diagnostik a Fuerschungsresultater vun héijer Qualitéit ze kréien

Protokoll fir d’Ultraschallzelllys virun ELISA

• Fir Zellkulturen: Zentrifugéiert d’Zelle virun der Ultraschallzelllys fir 5 Minutte bei 270 x g an enger Mikrozentrifug. Huelt den Iwwerstand duerch Ofsaugen ewech a resuspendéiert d’Zellen an 30 – 100 μL RIPA-Puffer. Inkubéiert duerno den Zellpellet fir 30 min op Äis.
• Elo ass d’Zellprouf prett fir d’Ultraschalllys:
  Benotzt en Ultraschallapparat mat Sond (z. B. UP200Ht mat enger S26d2-Sond) oder en Ultraschallapparat fir méi Prouwen (z. B. VialTweeter fir déi gläichzäiteg Beschallung vu bis zu 10 Prouwefläschen oder den UIP400MPT fir Mikrotiterplacken / Placke mat 96 Vertiefungen), jee nodeem wéi vill Prouwen Dir virbereede musst.
  Fir d’Beschallung vun enger eenzeler Prouf mat enger Sond gitt d’Zellen a Mikrozentrifugeréiercher vun 1,5 mL.
• Stellt d’Dauer vun der Ultraschallbehandlung, de gesamten Energieandrag, den Zyklusmodus an/oder d’Temperaturgrenzen am digitale Menü vum Ultraschallapparat am Viraus an. Dëst garantéiert eng héich zouverlässeg Beschallung a Widderhuelbarkeet.
• Féiert d’Sonotrod an a schalt den Ultraschallapparat un. Beweegt d’Mikrospëtzt vun der Ultraschallsond virsiichteg duerch d’Prouf, fir d’Prouf gläichméisseg mat Ultraschall ze behandelen.
  Bei de meeschten Zellen ass d’Ultraschalllys no 2–4 Zykle vun enger Ultraschallbehandlung vun jee 10 sec ofgeschloss.
• Huelt d’Sonotrod no der Ultraschallbehandlung aus der Prouf. D’Prouwe solle fir 5 min op Äis inkubéiert ginn. Zentrifugéiert duerno bei 10.000 x g fir 20 min, fir d’Zellreschter als Pellet ofzesetzen. Transfert d’Iwwerständ an en neit Mikrozentrifugeréierchen. Beschrëft d’Analyten a lagert se bei -20°C.
• D’Ultraschallsonotrod ka gebotzt ginn, andeems se grëndlech mat Alkohol ofgewëscht gëtt oder an engem mat Alkohol gefëllte Becherglas, z. B. mat 70% Ethanol, mat Ultraschall behandelt gëtt. All Ultraschallsonden aus Titan kënnen autoklavéiert ginn.

• Spullt den Tissu mat äiskalem PBS (0,01M, pH=7,4), fir iwwerschëssegt Hämolyseblutt grëndlech ze ewechzehuelen.
• Weit den Tissu (Nier, Häerz, Long, Mëlz asw.) a mazeréiert en a kleng Stécker, déi a PBS homogeniséiert ginn. Dat néidegt PBS-Volumen hänkt vum Gewiicht vum Tissu of. Als Fauschtreegel brauch 1g Tissu ongeféier 9mL PBS. Et gëtt recommandéiert, e bësse Protease-Inhibitor an de PBS derbäizeginn. (Alternativ kann RIPA oder en hypotonesche Lysepuffer mat engem Cocktail aus Protease- a Phosphatase-Inhibitore benotzt ginn.)
• Jee no Gréisst vum Tissu kann eng kuerz Vortexbehandlung (ongeféier 1–2 min. a Pulse vu 15 sec.) hëllefräich sinn, fir den Tissu virzebehandelen.
• Montéiert eng Mikrospëtzt, z. B. S26d2, op Ären Ultraschallapparat. Stellt d’Proufréierche mam Tissu an en Äisbad.
• Behandelt d’Prouf mat Ärem Ultraschallapparat, z. B. UP200St (80% Amplitud), fir 1 min. am Pulsmodus (15sec un, 15sec Paus). Loosst d’Prouf am Äisbad.
• D’Homogenater ginn duerno zentrifugéiert, fir spezifesch Fraktiounen (zytosolesch, nuklear, mitochondrial oder lysosomal) ze kréien, fir de Protein fir d’Analys unzeräicheren. Duerch d’Zentrifugéiere vun der Prouf fir 5 Minutte bei 5000×g gëtt den Iwwerstand gewonnen.

Zouverlässeg Temperaturkontroll wärend der Ultraschallbehandlung

D’Temperatur ass en entscheedende Faktor, deen de Prozess beaflosst a besonnesch fir d’Behandlung vu biologesche Prouwe wichteg ass, z. B. fir den thermeschen Ofbau vu Proteinen ze verhënneren. Wéi all mechanesch Technike fir d’Proufvirbereedung produzéiert d’Ultraschallbehandlung Hëtzt. D’Temperatur vun de Prouwe kann awer gutt kontrolléiert ginn, wann d’Apparater vun Hielscher Ultrasonics benotzt ginn. Mir stellen Iech verschidde Méiglechkeete vir, fir d’Temperatur vun Äre Prouwen ze iwwerwaachen an ze steieren, wärend Dir se mat engem Ultraschallapparat mat Sond oder mam VialTweeter virun der Analys virbereet.

1. Iwwerwaachung vun der Prouftemperatur: All digital Ultraschallveraarbechtungsapparater vun Hielscher si mat enger intelligenter Software an engem ustiechbaren Temperatursensor equipéiert. Stécht den Temperatursensor an den Ultraschallapparat (z. B. UP200Ht, UP200St, VialTweeter, Ultraschallapparat UIP400MTP fir Placke mat méi Verdéiwungen) a féiert d’Spëtzt vum Temperatursensor an ee vun de Proufréiercher an. Iwwer den digitale faarwegen Touchdisplay kënnt Dir am Menü vum Ultraschallveraarbechtungsapparat e spezifeschen Temperaturberäich fir d’Ultraschallbehandlung vun Ärer Prouf astellen. Den Ultraschallapparat stoppt automatesch, wann d’Maximaltemperatur erreecht ass, a pauséiert, bis d’Prouftemperatur op den ënneschte Wäert vum agestallten Temperatur-∆ gefall ass. Duerno fänkt d’Ultraschallbehandlung automatesch erëm un. Dës intelligent Funktioun verhënnert den duerch Hëtzt verursaachten Ofbau.
2. Beim Ultraschallapparat VialTweeter fir méi Prouwe kann den Titanblock, deen d’Proufréiercher hält, virgekillt ginn. Stellt de VialTweeter-Block (nëmmen d’Sonotrod ouni Ultraschallwandler!) an de Frigo oder an den Tifküler, fir den Titanblock virzekillen an esou d’Temperaturerhéijung an der Prouf ze verzögeren. Wa méiglech, kann och d’Prouf selwer virgekillt ginn.
3. Benotzt en Äisbad oder Dréchenäis fir d’Ofkillung wärend der Ultraschallbehandlung. Stellt Är Proufréierche wärend der Ultraschallbehandlung an en Äisbad. Fir de VialTweeter benotzt eng flaach Schuel mat Dréchenäis a stellt de VialTweeter op d’Dréchenäis, sou datt d’Hëtzt séier ofgeleet ka ginn.

Clientë weltwäit benotzen d’Hielscher Ultraschallapparater mat Sond souwéi d’Ultraschalleenheete fir méi Prouwe VialTweeter an UIP400MTP fir hir deeglech Proufvirbereedung a biologeschen, biocheemeschen, medezineschen a klinesche Laboratoiren. Mat der intelligenter Software an der Temperatursteierung vun den Hielscher Prozessoren gëtt d’Temperatur zouverlässeg kontrolléiert an en duerch Hëtzt verursaachten Ofbau vun de Prouwe verhënnert. D’Proufvirbereedung mat den Ultraschallléisunge vun Hielscher liwwert héich zouverlässeg a reproduzéierbar Resultater!
Liest méi iwwer d’Ultraschallbehandlung mat héijem Proufduerchsaz mam Ultraschallapparat UIP400MTP fir Placke mat méi Verdéiwunge fir Assays!