Élesztősejtek lízise mikrolemezeken nagy intenzitású ultrahangos kezeléssel
Mikrobiológusok és élettudományi kutatók, akik a következő területeken dolgoznak: Sacharomyces cerevisiae, Pichia pastoris / Komagataella phaffii, és más élesztőrendszerek esetében is ismerős ez a kihívás: az élesztősejtek ellenállóak, a reprodukálható lízis nehézségekbe ütközhet, és a minták kézi felaprózása gyorsan szűk keresztmetszetté válik, ha számos törzset, klónt, tenyésztési körülményt vagy expressziós konstrukciót kell szűrni.
Nagy áteresztőképességű élesztősejt-lizis a mikrobiológia, a molekuláris biológia és a fehérjeanalitika területén
A Hielscher mikrolemezes ultrahangos készülékei, mint például az UIP400MTP (400 W) és az UIP550MTP (550 W), nagy áteresztőképességű megoldást nyújtanak az élesztősejtek mechanikus felbontásához közvetlenül a mikrolemezekben. Ahelyett, hogy a mintákat egyenként dolgoznák fel szondával, teljes mikrolemezeket lehet egyenletes körülmények között ultrahanggal kezelni. Ezáltal az élesztősejtek ultrahangos felbomlása gyorsabbá, jobban reprodukálhatóvá válik, és könnyebben integrálható a modern mikrobiológiai, fehérjeexpressziós, enzimszűrési és omikusi munkafolyamatokba.
Akár P. pastoris-ból kell rekombináns fehérjéket kivonni, akár élesztő-lizátumokat kell előkészíteni enzimvizsgálatokhoz, akár S. cerevisiae sejteket kell felbontani fehérjeelemzés céljából, akár több tucat élesztőklónt kell párhuzamosan szűrni, a Hielscher mikrolemezes ultrahangos készülékei precíz folyamatvezérlés mellett hatékony, kavitáción alapuló sejtfelbontást biztosítanak.
Szükség van a következő anyagok reprodukálható lízisére: Sütőélesztő, Atya, pásztor, vagy más élesztőtörzsek mikrolemezeken? Kérjük, adja meg a lemez formátumát, a minta térfogatát, a sejtsűrűséget és a vizsgálandó analitot. Segítünk meghatározni az UIP400MTP vagy UIP550MTP munkafolyamatához megfelelő ultrahangos kezelési paramétereket.
Hielscher többlyukú lemez-ultrahangos készülék élesztősejt-lizáláshoz – mintakészítés nagy áteresztőképességű eljárással
Miért van szükségük az élesztősejteknek a hatékony mechanikus lízisre?
Az élesztősejteket nehezebb felbontani, mint sok baktérium- vagy emlőssejtet, mivel azokat egy főként poliszacharidokból, glükánokból, mannoproteinokból és kitinből álló merev sejtfal védi. Ez a sejtfal mechanikai stabilitást biztosít, ugyanakkor korlátozza az intracelluláris fehérjék, nukleinsavak, metabolitok és enzimek felszabadulását.
A hagyományos élesztő-lizálási módszerek közé tartozik a gyöngyös őrlés, az enzimatikus emésztés, a fagyás–olvasztás ciklusok, a kémiai lizálás és a szondás ultrahangkezelés. Ezek a módszerek hatékonyak lehetnek, de vannak korlátaik is. A gyöngyös őrlés törmeléket és hőhatást okozhat, az enzimatikus emésztés megnöveli a költségeket és a variabilitást, míg az egyetlen mintára alkalmazott szondás ultrahangkezelés időigényes, ha nagy számú mintát kell feldolgozni.
A nagy intenzitású, fókuszált ultrahangos kavitáció ezeket a korlátokat úgy oldja meg, hogy erős mechanikai nyíróerőket, nyomásingadozásokat és mikroszivárgást fejt ki az élesztőszuszpenzióra. Ennek eredményeként a sejtfalak és a sejtmembránok gyorsan szétesnek, javul az intracelluláris felszabadulás, és rendkívül jól reprodukálható mintakészítés valósul meg lemezformátumban.
Mikrolemezes ultrahangkezelés párhuzamos élesztőminta-előkészítéshez
A Hielscher UIP400MTP és UIP550MTP készülékeket mikrolemezek, többlyukú lemezek, PCR-lemezek és megfelelő mintatartók egyenletes ultrahangos kezelésére tervezték. A szondás ultrahangos kezeléssel ellentétben a mintákat nem kell egyenként kezelni. A teljes lemez szabályozott ultrahangos energiának van kitéve, így a munkafolyamat kiválóan alkalmas párhuzamos mintakezelésre.
Ez különösen hasznos a következő esetekben:
- vetítés Sütőélesztő mutánsok vagy expressziós törzsek
- A … lízise Atya, pásztor / K. phaffii klónok a rekombináns fehérje expressziója után
- Élesztő-lizátumok előállítása enzimvizsgálatokhoz
- Fehérje-kivonás SDS-PAGE, Western blot, ELISA, LC-MS/MS vagy aktivitásvizsgálat céljára
- Intracelluláris metabolitok felszabadítása metabolomikai célokra
- A DNS- és RNS-minták előkészítése a megfelelő későbbi tisztítási lépések után
- A lízis-pufferek, adalékanyagok és extrakciós feltételek nagy áteresztőképességű optimalizálása
Hogyan rombolja le az ultrahangos kavitáció az élesztősejteket?
Az ultrahangkezelés során a fókuszált, nagy teljesítményű ultrahang váltakozó sűrítés- és ritkításciklusokat generál a folyékony mintában. Megfelelő intenzitás mellett ezek a nyomásingadozások akusztikus kavitációt idéznek elő. Kavitációs buborékok keletkeznek, rezegnek, majd összeomlanak, ami helyi nyíróerőket, mikrosugarakat, turbulenciát és erős nyomásgradienseket eredményez.
Az élesztőszuszpenziókban ezek a mechanikai hatások meggyengítik és megszakítják a sejtfalat és a sejtmembránt. Az intracelluláris fehérjék, enzimek, nukleinsavak és metabolitok a lízis-pufferbe kerülnek. Mivel a folyamat mechanikus jellegű, számos különböző pufferrendszerrel alkalmazható, és kombinálható proteázgátlókkal, redukálószerekkel, detergensekkel, sókkal vagy enyhe enzimatikus előkezeléssel.
Általános eljárás: Élesztősejtek lízise mikrolemezeken
Az alábbi protokoll gyakorlati kiindulási pontot nyújt az élesztősejtek felbontásához a Hielscher UIP400MTP vagy UIP550MTP mikrolemezes ultrahangos készülék használatával. A paramétereket az élesztőtörzs, a sejtsűrűség, a célmolekula, a puffer összetétele, a lemez típusa és a későbbi vizsgálat figyelembevételével kell optimalizálni.
1. Az élesztősejtek kinyerése és mosása
Tenyésszen Saccharomyces, Pichia, Hansenula, Debaryomyces vagy más élesztőtörzset a kívánt tenyésztési körülmények között. Centrifugálással válassza le a sejteket, majd távolítsa el a tenyésztőközeget. Mossa át a leülepedést hideg desztillált vízzel, PBS-sel vagy a kiválasztott lízis-pufferrel, hogy eltávolítsa a további elemzéseket zavaró maradék tenyésztőközeg-összetevőket.
A fehérje-kivonáshoz tartsa a mintákat hidegen, és gyorsan dolgozzon. Ha proteázok jelenthetnek problémát, előzetesen hűtse le az összes puffert és fogyóeszközt.
2. A sejtpelletet újra szuszpendáljuk
A sejtpelletet oldjuk fel egy megfelelő hideg lízis-pufferben. A fehérjék hatékony felszabadulása érdekében gyakran előnyös a magas sejtsűrűség. Kezdetnek használjunk körülbelül 10–20% (tömeg/térfogat) nedves sejtpelletet, vagy egy olyan sűrű szuszpenziót, amelynek optikai sűrűsége (OD)600 > 10, a vizsgálattól függően.
Egy tipikus élesztőfehérje-lizáló puffer az alábbiakat tartalmazhatja:
- pufferrendszer, például Tris-HCl, foszfátpuffer vagy HEPES
- só, például NaCl vagy KCl
- proteázgátló koktél
- opcionális redukálószer, például DTT vagy β-merkaptoetanol
- opcionális mosószer, például Triton X-100, NP-40, SDS vagy CHAPS, a későbbi fázisokkal való kompatibilitástól függően
- opcionális foszfatáz-gátlók foszforilációs vizsgálatokhoz
Nehéz kezelhetőségű élesztőtörzsek vagy rendkívül kíméletes fehérje-kivonás esetén az ultrahangkezelés előtt rövid előkezelés végezhető Zymolyase, Lyticase vagy más sejtfal-lebontó enzim alkalmazásával. Ez az enzimatikus előkezelés nem kötelező, de javíthatja a sejtfal-lebontás hatékonyságát, illetve csökkentheti a szükséges ultrahangintenzitást.
3. A minták átvitele egy megfelelő mikrolemezbe
Az élesztőszuszpenziót töltsük át egy ultrahangkezelésre alkalmas mikrolemezbe. Gyakran a kerekfenekű lemezeket részesítik előnyben, mivel ezek javítják a minta begyűjtését és csökkentik a holtzónákat. A reprodukálhatóság javítása érdekében minden üregbe azonos térfogatú mintát töltsünk.
A párolgás, az aeroszolképződés és a keresztszennyeződés megelőzése érdekében lezárja a lemezt egy megfelelő lezáró szőnyeggel vagy fóliával. Győződjön meg arról, hogy a lezárás összeegyeztethető a kiválasztott hőmérsékleti és ultrahangkezelési feltételekkel.
A jellemző munkatérfogat a lemez formátumától és az alkalmazástól függ. A leggyakrabban használt formátumok közé tartoznak a 96-lyukú lemezek, a mélylyukú lemezek, a PCR-lemezek, illetve a megfelelő csőtartók.
4. A hűtés beállítása
Az élesztősejtek felbomlásához nagy ultrahangintenzitás szükséges, és a mechanikai szétzúzás hőt termel. A hőmérséklet-szabályozás ezért rendkívül fontos, különösen fehérje-, enzim-, RNS- vagy foszforilációs elemzések esetén.
Alkalmazzon megfelelő hűtési stratégiát, például:
- előhűtött lízis-puffer
- előhűtött mikrolemezek
- hűtési szünetek az ultrahangkezelési szakaszok között
- a szonikációs platform külső hűtése, amennyiben szükséges
A cél az, hogy a mintát olyan hőmérsékleten tartsuk, amely megakadályozza a fehérjék denaturálódását, az enzimek inaktiválódását, az RNS lebomlását, valamint a hő hatására bekövetkező mintaváltozásokat.
5. Az élesztőszuszpenziót ultrahanggal kezeljük
Helyezze a lezárt lemezt a Hielscher UIP400MTP vagy UIP550MTP mikrolemez-ultrahangosítóba, és válasszon ki egy impulzusos ultrahangosítási programot. Az impulzusos üzemmód ajánlott, mivel ez lehetővé teszi a mechanikai felbomlást a bekapcsolt (ON) fázisokban, valamint a hőelvezetést a kikapcsolt (OFF) fázisokban.
Az élesztősejtek felbomlásának kiindulópontjaként:
| Paraméter | Ajánlott kezdő tartomány | Cél |
|---|---|---|
| amplitúdó | 60–100% | Magas kavitációs intenzitás a ellenálló élesztősejtek esetében |
| impulzus mód | 10–30 másodperc BE / 30–60 másodperc KI | Hatékony lízis szabályozott hőfelhalmozódás mellett |
| Összesített üzemidő | Öt–tizenöt perc | A beállítást a feszültség, a sűrűség és a célmolekula függvényében kell elvégezni |
| hőmérséklet | A mintákat hűtve kell tartani | A fehérjék, enzimek, RNS és metabolitok védelme |
| Lemezhegesztés | Ajánlott | Megakadályozza a párolgást, az aeroszolképződést és a keresztszennyeződést |
Erősen ellenálló élesztőszuszpenziók, sűrű P. pastoris biomassza vagy nehezen kivonható rekombináns fehérjék esetén fokozatosan növelje a kumulatív bekapcsolási időt. Hőérzékeny fehérjék vagy enzimvizsgálatok esetén rövidebb impulzusokat, hosszabb lehűlési szüneteket és alacsonyabb kiindulási amplitúdót használjon.
Nagy áteresztőképességű élesztő-lizálás többlyukú lemezeken az UIP400MTP segítségével
6. A lizátum tisztítása
Az ultrahangkezelés után centrifugálja a mikrolemezt, vagy helyezze át a mintákat csövekbe centrifugálás céljából. Megfelelő fordulatszámon és hőmérsékleten történő centrifugálással távolítsa el a sejttörmeléket. Gyűjtse össze a felülúszót a további elemzéshez.
Az alkalmazástól függően a lizátum a következőkre használható:
- A fehérjék mennyiségi meghatározása
- enzimaktivitás-vizsgálatok
- SDS-PAGE és Western blot
- ELISA és immunoassay-ek
- LC-MS/MS proteomika
- metabolitelemzés
- DNS- vagy RNS-tisztítás
7. A módszer optimalizálása és dokumentálása
Az élesztősejtek lebontásának reprodukálhatósága érdekében rögzítsen minden releváns paramétert, beleértve a törzset, a tenyésztési körülményeket és az OD-értéket600, a nedves cellatömeg, a puffer összetétele, a lemez típusa, a minta térfogata, az amplitúdó, az impulzusciklus, a kumulatív bekapcsolási idő, a hűtési módszer és a minta végső hőmérséklete.
Ha a Hielscher ultrahangos készülék automatikus adatfelvételi funkcióval rendelkezik, a folyamatadatok felhasználhatók dokumentációhoz, módszerfejlesztéshez, méretnöveléshez és minőség-ellenőrzéshez.
Optimalizálási tippek az élesztősejtek felbomlásához
A fehérjék maximális kiszabadulásához sűrű élesztőszuszpenziókat, magas ultrahangintenzitást és megfelelő kumulatív bekapcsolási időt használjon. Érzékeny fehérjék esetén csökkentse az amplitúdót, hosszabbítsa meg a hűtési szüneteket, és a futás teljes ideje alatt tartsa hidegen a lemezt.
Ha a lízis nem teljes, fokozatosan növelje az ultrahangkezelés időtartamát, próbálja ki az enzimatikus előkezelést, csökkentse a minta viszkozitását, vagy optimalizálja a puffert. Ha a fehérjék lebomlanak vagy elveszítik aktivitásukat, javítsa a hűtést, rövidítse az ON-intervallumokat, adjon hozzá inhibitorokat, és ellenőrizze, hogy a detergensrendszer kompatibilis-e a célfehérjével.
Mivel az élesztőtörzsek sejtfal-szerkezetük, növekedési fázisuk, expressziós rendszerük és biomassza-sűrűségük tekintetében jelentősen eltérnek egymástól, egy rövid optimalizációs mátrix alkalmazása ajánlott. Például teszteljen három amplitúdót, két impulzusciklust és két teljes bekapcsolási időt, majd értékelje a lízis hatékonyságát és a fehérje integritását.
Akár csak néhány vizsgálati lemezt dolgoz fel, akár nagy áteresztőképességű élesztő-szűrést végez, a Hielscher segíthet a megfelelő mikrolemez-ultrahangosító kiválasztásában és egy megbízható lízis-protokoll kidolgozásában. Vegye fel velünk a kapcsolatot, és ossza meg velünk az élesztőtörzsét, a munkafolyamatát és az áteresztőképességre vonatkozó követelményeit!
A Hielscher mikrolemez-ultrahangos készülékek előnyei az élesztősejtek felbomlasztásában
A Hielscher mikrolemez-ultrahangos készülékei ideálisak azoknak a laboratóriumoknak, ahol számos mintán reprodukálható lízisre van szükség. Megszüntetik a szondás ultrahangos kezelés lassú, „egyszerre egy minta” jellegű eljárását, és csökkentik a kézi szondapozicionálásból, a merülési mélységből, valamint a minták közötti kezelési eltérésekből adódó variabilitást.
A legfontosabb előnyök a következők:
- Nagy átviteli sebességű feldolgozás: Számos élesztőmintát dolgozzon fel párhuzamosan ultrahanggal mikrolemezeken vagy azokkal kompatibilis mintatartókban.
- A kísérlet megismételhető körülményei: Minden kút esetében azonos ultrahangkezelési feltételek az egyenletes, összehasonlítható lízis-eredmények érdekében.
- Nincs a szondák közötti keresztfertőzés: A minták az ultrahangkezelés során lezárt állapotban maradnak, ami csökkenti az átvitel kockázatát és a tisztítási lépések számát.
- Erős sejtekhez alkalmas: A nagy intenzitású ultrahang elősegíti az élesztősejtek sejtfalainak lebontását.
- Hatékony munkafolyamat: Ideális törzsek, klónok, expressziós feltételek és lízis-pufferek szűrésére.
- Hatékony munkafolyamat: Programozható beállítások, automatikus adatnaplózás, valamint laboratóriumi automatizálásra alkalmas.
Alkalmazások az élesztőbiotechnológiában és az élettudományi kutatásban
Az ultrahangos élesztő-lízis mikrolemezeken számos kutatási és szűrési munkafolyamatot támogat. A rekombináns fehérje-expresszió során a P. pastoris és S. cerevisiae klónok párhuzamosan lízálhatók az expressziós szintek vagy az enzimaktivitás összehasonlítása céljából. A rendszerbiológiában és az omikában a szabványosított lízis javítja a különböző körülmények közötti összehasonlíthatóságot. A mikrobiológiában az ultrahangos kezelés elősegíti a lizátumok gyors előállítását több törzsből, különböző táptalaj-körülményekből vagy stresszkezelésekből.
A tipikus alkalmazási területek a következők:
- élesztőfehérje-kivonás
- rekombináns fehérjék szűrése
- enzimaktivitás-szűrés
- klónok kiválasztása a transzformáció után
- az erjesztés optimalizálása
- proteomikai mintakészítés
- metabolomikai mintakészítés
- sejtfal-megsemmisítési vizsgálatok
- nagy áteresztőképességű mikrobiológiai vizsgálatok
A megbízható élesztő-lízis az ellenőrzött ultrahangkezeléssel kezdődik
A minták számának növekedésével az élesztősejt-felbomlás nehézkessé válhat, de a Hielscher mikrolemez-ultrahangos készülékei gyorsabbá, tisztábbá és jobban reprodukálhatóvá teszik a folyamatot. Az UIP400MTP és az UIP550MTP lehetővé teszi a kutatók számára, hogy teljes lemezeket dolgozzanak fel meghatározott ultrahangos feltételek mellett, javítva ezzel az átbocsátási képességet, miközben csökkentik a kézi munkát.
A mikrobiológusok, molekuláris biológusok, fehérjekutatók és biotechnológiai laboratóriumok számára a mikrolemez ultrahangos kezelése hatékony eszköz az élesztő sejten belüli komponenseinek hatékony és reprodukálható kivonására.
Gyakran feltett kérdések a mikrolemez-ultrahangos kezeléssel történő élesztősejt-lízisről
Az élesztősejtek ultrahangos kezeléssel felbonthatók-e?
Igen. Az olyan élesztősejtek, mint a Saccharomyces cerevisiae és a Pichia pastoris, nagy intenzitású ultrahangos kezeléssel felbonthatók. Az ultrahangos kavitáció erős mechanikai nyíróerőket hoz létre, amelyek megszakítják az élesztő sejtfalát és sejtmembránját, így felszabadítva a fehérjéket, enzimeket, nukleinsavakat és metabolitokat.
Miért nehezebb az élesztősejteket felbontani, mint a baktériumsejteket?
Az élesztősejtek vastag és mechanikailag ellenálló sejtfalat tartalmaznak, amely főként glükánokból, mannoproteinokból és kitinből áll. Ez a merev szerkezet miatt az élesztősejtek felbomlasztása nehezebb, mint sok baktérium- vagy emlőssejt esetében. Ezért az élesztősejtek felbomlasztásához általában nagyobb intenzitású, hosszabb feldolgozás vagy esetenként enzimatikus előkezelés szükséges.
Mely Hielscher ultrahangos készülékek alkalmasak az élesztő sejtjeinek felbomlasztására mikrolemezeken?
A Hielscher UIP400MTP és UIP550MTP készülékek mikrolemezeken végzett nagy áteresztőképességű élesztő-lizishez alkalmasak. Az UIP400MTP ideális a rutin párhuzamos mintakészítéshez, míg az UIP550MTP nagyobb ultrahangteljesítményt biztosít igényes lízis feladatokhoz, sűrű szuszpenziókhoz és ellenálló élesztőtörzsekhez.
A Pichia pastoris sejtjei mikrolemezes ultrahangos berendezésben felbonthatók-e?
Igen. A Pichia pastoris – más néven Komagataella phaffii – nagy intenzitású mikrolemezes ultrahangkezeléssel felbontható. Mivel a P. pastoris sűrű biomasszát képezhet, és erős sejtfalával rendelkezik, ajánlott az amplitúdó, az impulzusciklus, a hűtés és a teljes ultrahangkezelési idő optimalizálása.
Melyek a tipikus ultrahangos kezelési paraméterek az élesztősejtek felbomlasztásához?
Hasznos kiindulási tartomány az 50–80%-os amplitúdó, az impulzusos üzemmód (például 10–30 másodperc bekapcsolt állapot és 30–60 másodperc kikapcsolt állapot), valamint az 5–15 perces összesített bekapcsolt idő. A pontos paraméterek az élesztőtörzstől, a sejtsűrűségtől, a minta térfogatától, a lemez típusától, a puffertől és a célmolekulától függenek.
Miért kell az élesztő lízisét impulzusos üzemmódban elvégezni?
Az impulzusos üzemmód csökkenti a hőfelhalmozódást az ultrahangkezelés során. A BE fázisban az ultrahangos kavitáció felbomlasztja a sejteket. A KI fázisban a minta lehűlhet. Ez azért fontos, mert a túlzott hő hatására a fehérjék denaturálódhatnak, az enzimaktivitás csökkenhet, az RNS lebomolhat, és a kísérlet reprodukálhatósága romolhat.
Szükség van-e enzimatikus előkezelésre az élesztősejtek ultrahangos kezelése előtt?
Az enzimatikus előkezelés nem mindig szükséges, de javíthatja a lízis hatékonyságát. Az olyan enzimek, mint a Zymolyase vagy a Lyticase, részlegesen lebontják az élesztő sejtfalát, és csökkenthetik a teljes lízishoz szükséges ultrahangintenzitást vagy időtartamot. Ez érzékeny fehérjék vagy nehezen kezelhető törzsek esetében hasznos lehet.
Hogyan lehet megelőzni a túlmelegedést az élesztő ultrahangos kezelése során?
Használjon előhűtött puffereket, impulzusos üzemmódot, hűtési szüneteket és hűtött lemezbeállítást. Tartsa lezárva a mikrolemezt, és amennyiben lehetséges, figyelje a hőmérsékletet. Érzékeny fehérjék esetében rövidebb bekapcsolási és hosszabb kikapcsolási időközöket alkalmazzon, és a mintákat hideg körülmények között dolgozza fel.
A mikrolemezes ultrahangkezelés helyettesítheti-e a gyöngyös őrlést az élesztősejtek felbontásában?
Sok munkafolyamatban igen. A mikrolemezes ultrahangkezelés helyettesítheti a gyöngyös őrlést, ha tiszta, reprodukálható és párhuzamos lízisre van szükség. Ezzel elkerülhető a gyöngyök kezelése, csökken a fogyóeszközök bonyolultsága, és egyszerűbbé válik az automatizálás. Mindegyik alkalmazást azonban validálni kell a lízishozam, a fehérjeintegritás és a vizsgálati teljesítmény összehasonlításával.
Alkalmas-e a mikrolemezes ultrahangkezelés az élesztőből történő fehérje-kivonásra?
Igen. A mikrolemezes ultrahangkezelés kiválóan alkalmas fehérje-kivonásra élesztőből, különösen akkor, ha számos klónt vagy tenyésztési körülményt kell összehasonlítani. A proteázgátlók, a hideg pufferek és a szabályozott impulzusbeállítások segítik a fehérje minőségének megőrzését.
Ugyanaz a módszer alkalmazható-e a DNS, az RNS és a fehérje kivonására?
Ugyanaz az alapvető ultrahangos kezelési elv alkalmazható, de a puffert és a feldolgozási feltételeket a célmolekulához kell igazítani. A fehérje-feldolgozási folyamatokhoz proteázgátlásra és hőmérséklet-szabályozásra van szükség. Az RNS-feldolgozási folyamatokhoz RNáz-mentes kezelés és erős hűtés szükséges. A DNS-feldolgozási folyamatoknál eltérő lízis- és tisztítási feltételekre lehet szükség attól függően, hogy ép genomikus DNS-t vagy fragmentált DNS-t kívánunk-e előállítani.
Milyen típusú táptalajt kell használni az élesztő sejtjeinek felbomlásához?
Használjon ultrahangkezelésre alkalmas mikrolemezt vagy mélylyukú lemezt, megfelelő lezárással. A kerekfenekű lemezek gyakran hasznosak a szuszpenziók kezeléséhez. A lemeznek ki kell bírnia a kiválasztott ultrahangkezelési feltételeket, a minta hőmérsékletét és a centrifugálási lépéseket.
Honnan tudom, hogy az élesztő lízise befejeződött-e?
A lízis hatékonyságát mikroszkópos vizsgálattal, a fehérje-hozammal, az enzimaktivitással, a viszkozitáscsökkenéssel, SDS-PAGE-elemzéssel, a DNS/RNS-hozammal, illetve egy ismert lízis-módszerrel való összehasonlítással lehet ellenőrizni. A módszer kidolgozása során mind a felszabadult célmolekula hozamát, mind annak minőségét értékelni kell.
UIP400MTP vagy UIP550MTP: Melyik mikrolemez-ultrahangos készüléket válasszon?
Az UIP400MTP egy nagy teljesítményű mikrolemezes ultrahangos készülék a rutin jellegű, nagy áteresztőképességű mintakészítéshez, ideértve az élesztősejtek felbontását, a fehérje-kivonást, a DNS-darabolást, a biofilm leválasztását és a vizsgálati minták előkészítését. Olyan laboratóriumok számára alkalmas, ahol szabványos lemezformátumokban reprodukálható ultrahangkezelésre van szükség.
Az UIP550MTP nagyobb ultrahangteljesítményt biztosít, és olyan igényesebb alkalmazásokhoz ajánlott, ahol nagyobb akusztikus intenzitásra, rövidebb feldolgozási időre, nagyobb mintamennyiségre vagy robusztusabb felbomlasztási feltételekre van szükség. Az élesztő-lízis esetében az UIP550MTP különösen hasznos sűrű biomassza, nehezen kezelhető törzsek, nagyobb munkatérfogat és nagy áteresztőképességű expressziós szűrés esetén.
Automatizálható-e az élesztősejtek mikrolemezes ultrahangos felbomlása?
Igen. A mikrolemezen végzett ultrahangkezelés kiválóan alkalmas az automatizált laboratóriumi munkafolyamatokhoz, mivel a minták lemezformátumban maradnak. Ez lehetővé teszi az integrációt a pipettázó rendszerekkel, a lemezkezeléssel, a centrifugálással, a vizsgálatok előkészítésével, valamint a nagy áteresztőképességű szűrési munkafolyamatokkal.
Irodalom / Hivatkozások
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- FactSheet UIP550MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- Lauren E. Cruchley-Fuge, Martin R. Jones, Ossama Edbali, Gavin R. Lloyd, Ralf J. M. Weber, Andrew D. Southam, Mark R. Viant (2024): Automated extraction of adherent cell lines from 24-well and 96-well plates for multi-omics analysis using the Hielscher UIP400MTP sonicator and Beckman Coulter i7 liquid handling workstation. Metabomeeting 2024, University of Liverpool, 26-28th November 2024.
- Cosenza-Contreras M, Seredynska A, Vogele D, Pinter N, Brombacher E, Cueto RF, Dinh TJ, Bernhard P, Rogg M, Liu J, Willems P, Stael S, Huesgen PF, Kuehn EW, Kreutz C, Schell C, Schilling O. (2024): TermineR: Extracting information on endogenous proteolytic processing from shotgun proteomics data. Proteomics 2024.
