प्लेटलेट-समृद्ध सीरम की अल्ट्रासोनिक तैयारी

• प्लेटलेट-समृद्ध प्लाज़्मा (PRP) ऐसा रक्त प्लाज़्मा है जिसे प्लेटलेट्स से समृद्ध किया गया है और जिसका उपयोग चिकित्सा तथा सौंदर्य उपचारों के लिए किया जाता है।
• अल्ट्रासोनिक लयन और कंडीशनिंग प्लेटलेट-समृद्ध प्लाज़्मा तैयार करने की एक अत्यंत प्रभावी विधि है।
• Hielscher Ultrasonics रक्त प्रसंस्करण की आवश्यकताओं के अनुरूप विभिन्न अल्ट्रासोनिक प्रणालियाँ प्रदान करता है (उदा. क्लीन रूम के अंदर और बाहर तैयारी के लिए)।

प्लेटलेट-समृद्ध सीरम

वृद्धि कारकों को मुक्त करने के लिए स्वजातीय रक्त सीरम में मौजूद प्लेटलेट्स का लयन करने की सोनिकेशन एक विश्वसनीय और आसान विधि है। प्लेटलेट-व्युत्पन्न अंशों – जिन्हें स्वजातीय कंडीशन्ड सीरम (ACS) भी कहा जाता है – का उपयोग ऊतक की मरम्मत या सौंदर्य उपचारों के लिए किया जाता है। सर्वोत्तम परिणाम प्राप्त करने के लिए इंजेक्शन से पहले PRP को समृद्ध किया जाता है।
कोशिका वृद्धि कारकों से समृद्ध प्लाज़्मा तैयार करने के लिए, कोशिका झिल्लियों का लयन करने और प्लेटलेट्स से लगभग सभी कोशिका वृद्धि कारकों को मुक्त करने की सोनिकेशन एक अत्यंत प्रभावी और दक्ष विधि है। अल्ट्रासोनिक लयन और कंडीशनिंग द्वारा प्रतिस्कंदित रक्त का भी उपयोग किया जा सकता है।
सोनिकेशन द्वारा PRP की कंडीशनिंग सांद्रित वृद्धि कारक प्राप्त करने का एक सुविधाजनक और किफ़ायती तरीका है।

प्लेटलेट-समृद्ध प्लाज़्मा (PRP) का अल्ट्रासोनिक लयन

अल्ट्रासोनिक लयन के प्रभाव

रक्त सीरम के अल्ट्रासोनिक प्रसंस्करण से प्लेटलेट्स का एकसमान लयन होता है, जिससे उनके भीतर मौजूद वृद्धि कारक (वृद्धि कारक AB (PDGF-AB), वृद्धि कारक AA (PDGF-AA), वृद्धि कारक BB (PDGF-BB), संवहनी अंतःकला वृद्धि कारक (VEGF), रूपांतरण वृद्धि कारक β (TGF-β), अधिचर्मीय वृद्धि कारक (EGF), इंसुलिन-सदृश वृद्धि कारक (IGF), उपकला कोशिका वृद्धि कारक ECGF और फ़ाइब्रोब्लास्टिक वृद्धि कारक (FGF)) मुक्त होते हैं। प्लेटलेट्स और उनकी अल्फ़ा-कणिकाओं को सोनिकेशन द्वारा विघटित किया जाता है। इसमें ध्वनिक कैविटेशन की परिघटना का उपयोग होता है। प्लेटलेट लयन के लिए अल्ट्रासोनिक कैविटेशन का उपयोग, बार-बार जमाने और पिघलाने की विधि से वृद्धि कारकों की सक्रियता पर पड़ने वाले संभावित नकारात्मक प्रभाव को कम करता है।

अल्ट्रासोनिक PRP तैयारी के लिए प्रोटोकॉल

ताज़ा एकत्र किए गए लगभग 16mL स्वजातीय रक्त नमूने को एक ट्यूब में धीरे-धीरे 8–10 बार उलटा-पलटा जाता है, ताकि रक्त और प्रतिस्कंदक अच्छी तरह मिल जाएँ। इसके बाद नमूने को कमरे के तापमान पर 1800 g पर 20 min तक अपकेंद्रित किया जाता है। अपकेंद्रीकरण के बाद प्लेटलेट्स और एककेंद्रकीय कोशिकाएँ प्लाज़्मा की परत के निचले हिस्से में एक सफ़ेद-सी परत बनाती हैं, जिसे प्लेटलेट-समृद्ध प्लाज़्मा (PRP) कहा जाता है। ऊपरी परत को प्लेटलेट-अल्प प्लाज़्मा (PPP) कहा जाता है। एककेंद्रकीय कोशिकाओं को हटाया जा सकता है या नमूने में रहने दिया जा सकता है। अतिरिक्त चरणों से बचने के लिए अक्सर एककेंद्रकीय कोशिकाओं को PRP नमूने में रहने दिया जाता है, क्योंकि इन चरणों में संदूषण का जोखिम होता है।
ध्यान दें: स्वजातीय PRP का अल्ट्रासोनिक प्रसंस्करण निर्जीवाणु परिस्थितियों में किया जाना चाहिए।
PRP और PPP को अलग करके एकत्र किया जाता है। PPP में 1.5mL 10% कैल्शियम क्लोराइड विलयन मिलाया जाता है, जबकि PRP में 0.5mL 5% एथेनॉल मिलाया जाता है। दोनों निलंबनों को धीरे-धीरे हिलाया जाता है और कमरे के तापमान पर 5 min तक स्थिर रहने दिया जाता है। अंत में PRP निलंबन में 1mL PPP मिलाया जाता है और उसे फ़ाइब्रिन का थक्का बनने तक स्थिर रहने दिया जाता है।
अल्ट्रासोनिक प्रसंस्करण: चूँकि बना हुआ प्लेटलेट जेल मुक्त हुए वृद्धि कारकों के भंडार के रूप में कार्य करता है, इसलिए उपलब्ध वृद्धि कारकों को मुक्त करने के लिए फ़ाइब्रिन जेल को विघटित करना आवश्यक है। अल्ट्रासोनिक लयन और वृद्धि कारकों को मुक्त करने के लिए प्राचल निम्नलिखित हैं: ट्यूब में मौजूद नमूने का सोनिकेशन UP200Ht या UP200St (200W, 26kHz) के साथ सोनोट्रोड S26d2 का उपयोग करके करें। रक्त नमूने को अत्यधिक गर्म होने से बचाने के लिए सोनिकेशन स्पंदित चक्रों में किया जा सकता है (उदा. 10 sec. चालू, 30 sec. बंद)। शीतलन के लिए नमूने को बर्फ़ पर रखना चाहिए, ताकि तापमान सर्वोत्तम रूप से 2–5°C के बीच बना रहे। सोनिकेशन के बाद नमूने को कमरे के तापमान पर 16,000 g पर 5 min. तक अपकेंद्रित किया जाता है। अधिप्लवी द्रव को एकत्र किया जाता है और उसे -70°C पर भंडारित किया जा सकता है।
साहित्य में वर्णित संपूर्ण रक्त की औसत प्लेटलेट संख्या की तुलना में, सोनिकेशन विधि में PRP अंश की प्लेटलेट सांद्रता 1.7–4.5 गुना बढ़ी।

PRP को वसा-व्युत्पन्न स्टेम कोशिका चिकित्सा के साथ संयोजित किया गया है (वसा ऊतक से अल्ट्रासोनिक रूप से मुक्त की गई स्वजातीय स्टेम कोशिकाओं को PRP के साथ मिलाकर मरम्मत के लिए रोगी के ऊतक में वापस इंजेक्ट किया जाता है)।

अल्ट्रासोनिक उपकरण

Hielscher Ultrasonics परिष्कृत और विश्वसनीय अल्ट्रासोनिक प्रौद्योगिकी का विशेषज्ञ है। हमारे अल्ट्रासोनिक उपकरणों का उपयोग दुनिया भर में लयन, निष्कर्षण और नमूना तैयारी के लिए किया जाता है – प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष रूप से। ऑटोक्लेव में निर्जीवाणुकृत किए जा सकने वाले तथा एक बार उपयोग के बाद फेंके जाने वाले सहायक उपकरण स्वजातीय रक्त नमूनों का संदूषण-मुक्त प्रसंस्करण सुनिश्चित करते हैं। हमारी अधिकांश प्रणालियों का उपयोग स्टेम कोशिकाओं और PRP के अल्ट्रासोनिक लयन के लिए किया जा सकता है, जिससे हमारे अल्ट्रासोनिक उपकरण आर्थिक दृष्टि से और भी अधिक दक्ष बनते हैं।
नीचे दी गई तालिका में प्लेटलेट-समृद्ध प्लाज़्मा की तैयारी के लिए उपयुक्त हमारे अल्ट्रासोनिक उपकरण और प्रत्येक के लिए अनुशंसित नमूना आयतन दिए गए हैं। अधिक बड़े अल्ट्रासोनिकेटर और आवश्यकतानुसार अनुकूलित प्रणालियाँ भी उपलब्ध हैं।

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