सेल Lysis के लिए Sonication: सेल व्यवधान और निष्कर्षण
अल्ट्रासोनिक सेल lysis जैव प्रौद्योगिकी प्रयोगशालाओं में एक नमूना तैयार करने की प्रक्रिया है। लक्ष्य जैविक अणुओं को छोड़ने के लिए सेल की दीवारों या पूरी कोशिकाओं को बाधित करना है। सोनिकेशन का उपयोग आमतौर पर सेल लाइसिस, सेल व्यवधान और निष्कर्षण के लिए किया जाता है। सेल लसीका के लिए sonicators का प्रमुख लाभ प्रक्रिया मापदंडों के सटीक नियंत्रण में निहित है, जैसे तीव्रता और तापमान, कोमल अभी तक कुशल सेल व्यवधान और निष्कर्षण के लिए अनुमति देता है।
अल्ट्रासाउंड का उपयोग करके सेल लाइसिस
अल्ट्रासोनिक सेल लसीका खुली कोशिकाओं को तोड़ने और उनकी सामग्री निकालने के लिए उच्च आवृत्ति ध्वनि तरंगों का उपयोग करता है। सोनिकेशन सेल व्यवधान और इंट्रासेल्युलर सामग्री के निष्कर्षण के लिए स्थापित और विश्वसनीय है, जैसे प्लास्मिड, रिसेप्टर परख, प्रोटीन, डीएनए और आरएनए। प्रक्रिया मापदंडों को समायोजित करके, अल्ट्रासोनिक तीव्रता को विशिष्ट अनुप्रयोग आवश्यकताओं को पूरा करने के लिए बारीक रूप से ट्यून किया जा सकता है, कोमल से तीव्र सोनीशन तक। लसीका के बाद के चरणों में अंश, ऑर्गेनेल अलगाव और प्रोटीन निष्कर्षण और शुद्धिकरण शामिल हैं। परिणामी लाइसेट को आगे की जांच या अनुप्रयोगों के लिए अलग किया जाना चाहिए, जैसे कि प्रोटिओमिक अनुसंधान।
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अल्ट्रासोनिक homogenizers UP100H (100 वाट) और UP400St (400 वाट): सेल lysis और निष्कर्षण के लिए Sonication।
सेल Lysis के लिए Sonication का उपयोग करने के लाभ
अन्य सेल lysis और निष्कर्षण विधियों की तुलना में, अल्ट्रासोनिक सेल lysis के कई फायदे हैं:
- गति: अल्ट्रासोनिक सेल लसीका और निष्कर्षण एक तेज़ तरीका है जो सेकंड के एक मामले में खुली कोशिकाओं को तोड़ सकता है। यह अन्य तरीकों जैसे कि होमोजेनाइजेशन, फ्रीज-विगलन या मनका-मिलिंग की तुलना में बहुत तेज है।
- दक्षता: अल्ट्रासोनिक सेल लसीका और निष्कर्षण का उपयोग एक साथ छोटे, बड़े या कई नमूनों के इलाज के लिए किया जा सकता है, जिससे यह अन्य तरीकों की तुलना में अधिक कुशल हो जाता है जिनके लिए छोटे नमूनों के व्यक्तिगत प्रसंस्करण की आवश्यकता होती है।
- रासायनिक मुक्त: अल्ट्रासोनिक सेल लसीका और निष्कर्षण एक गैर-इनवेसिव विधि है जिसमें कठोर रसायनों या एंजाइमों के उपयोग की आवश्यकता नहीं होती है। यह उन अनुप्रयोगों के लिए आदर्श बनाता है जहां सेल सामग्री की अखंडता को बनाए रखने की आवश्यकता होती है। नमूनों के अवांछित संदूषण से बचा जा सकता है।
- उच्च उपज: अल्ट्रासोनिक सेल लसीका और निष्कर्षण डीएनए, आरएनए और प्रोटीन सहित सेलुलर सामग्री की एक उच्च उपज निकाल सकते हैं। ऐसा इसलिए है क्योंकि उच्च आवृत्ति वाली ध्वनि तरंगें सेल की दीवारों को तोड़ती हैं और सामग्री को आसपास के घोल में छोड़ देती हैं।
- तापमान नियंत्रण: परिष्कृत अल्ट्रासोनसिएटर नमूने के सटीक तापमान नियंत्रण की अनुमति देते हैं। Hielscher डिजिटल sonicators एक प्लग करने योग्य तापमान सेंसर और तापमान निगरानी सॉफ्टवेयर से लैस हैं।
- पुनुरुत्पादनीय: अल्ट्रासोनिक सेल lysis के लिए प्रोटोकॉल आसानी से पुन: पेश किया जा सकता है और यहां तक कि एक साधारण रैखिक पैमाने पर विभिन्न बड़े या छोटे नमूना संस्करणों के लिए मिलान किया.
- बहुमुखी प्रतिभावाला: अल्ट्रासोनिक सेल लसीका और निष्कर्षण का उपयोग बैक्टीरिया, खमीर, कवक, पौधे और स्तनधारी कोशिकाओं सहित सेल प्रकारों की एक विस्तृत श्रृंखला को निकालने के लिए किया जा सकता है। इसका उपयोग प्रोटीन, डीएनए, आरएनए और लिपिड सहित विभिन्न प्रकार के अणुओं को निकालने के लिए भी किया जा सकता है।
- कई नमूनों की एक साथ तैयारी: Hielscher Ultrasonics आराम से एक ही प्रक्रिया शर्तों के तहत कई नमूनों की प्रक्रिया के लिए कई समाधान प्रदान करता है। यह लसीका और निष्कर्षण के नमूना तैयार करने के चरण को अत्यधिक कुशल और समय बचाने वाला बनाता है।
- प्रयोग करने में आसान: अल्ट्रासोनिक सेल लसीका और निष्कर्षण उपकरण का उपयोग करना आसान है और न्यूनतम प्रशिक्षण की आवश्यकता होती है। उपकरण किफायती भी है क्योंकि यह एक एकल निवेश है जिसमें निपटान की पुन: खरीद की कोई आवश्यकता नहीं है। यह शोधकर्ताओं और प्रयोगशालाओं की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए आकर्षक बनाता है।
कुल मिलाकर, अल्ट्रासोनिक सेल लसीका और निष्कर्षण सेलुलर सामग्री निकालने के लिए एक तेज़, कुशल, ठीक नियंत्रणीय और बहुमुखी विधि है। वैकल्पिक तरीकों पर इसके फायदे इसे अनुसंधान और औद्योगिक अनुप्रयोगों की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए एक आकर्षक विकल्प बनाते हैं।
अल्ट्रासोनिक सेल Lysis का कार्य सिद्धांत
अल्ट्रासोनिक सेल लसीका और निष्कर्षण कोशिकाओं को बाधित करने और उनकी सामग्री निकालने के लिए उच्च आवृत्ति ध्वनि तरंगों का उपयोग करता है। ध्वनि तरंगें आसपास के तरल में दबाव परिवर्तन पैदा करती हैं, जिससे छोटे बुलबुले बनते हैं और गुहिकायन नामक प्रक्रिया में ढह जाते हैं। ये बुलबुले स्थानीयकृत अत्यधिक तीव्र यांत्रिक बल उत्पन्न करते हैं जो खुली कोशिकाओं को तोड़ सकते हैं और उनकी सामग्री को आसपास के समाधान में छोड़ सकते हैं।
एक अल्ट्रासोनिकेटर का उपयोग करके सेल लसीका में आमतौर पर निम्नलिखित चरण शामिल होते हैं:
- नमूना एक तरल बफर के साथ एक ट्यूब या कंटेनर में रखा गया है।
- नमूने में एक अल्ट्रासोनिक जांच डाली जाती है, और लगभग 20-30 kHz के साथ उच्च आवृत्ति ध्वनि तरंगें लागू की जाती हैं।
- अल्ट्रासाउंड तरंगें आसपास के तरल में दोलन और गुहिकायन का कारण बनती हैं, जिससे स्थानीय बल उत्पन्न होते हैं जो खुली कोशिकाओं को तोड़ते हैं और उनकी सामग्री को छोड़ते हैं।
- नमूना किसी भी सेलुलर मलबे को हटाने के लिए अपकेंद्रित्र या फ़िल्टर किया जाता है, और निकाली गई सामग्री को बहाव विश्लेषण के लिए एकत्र किया जाता है।
शक्तिशाली अल्ट्रासाउंड तरंगें जैविक संरचनाओं के सेल मैट्रिक्स को बाधित करती हैं और बायोएक्टिव यौगिकों को छोड़ती हैं। संयंत्र सामग्री और विलायक (जैसे, बफर) के बीच बड़े पैमाने पर स्थानांतरण तेज है। (ग्राफिक: ©विल्खु एट अल।
सामान्य Lysis विधियों के नुकसान
प्रयोगशालाओं में अपने काम के दौरान, आप पहले से ही पारंपरिक यांत्रिक या रासायनिक lysis प्रोटोकॉल का उपयोग सेल lysis की परेशानी का अनुभव किया हो सकता है.
- यांत्रिक lysis: यांत्रिक लसीका विधियों, जैसे मोर्टार और मूसल के साथ पीसने या फ्रेंच प्रेस, मनका मिल, या रोटर-स्टेटर सिस्टम का उपयोग करके समरूपता में अक्सर सटीक नियंत्रण और समायोजन विकल्पों की कमी होती है। इसका मतलब है कि मिलिंग और पीसने का उपयोग जल्दी से गर्मी और कतरनी बल उत्पन्न कर सकता है जो नमूना और नकृति प्रोटीन को नुकसान पहुंचा सकता है। वे समय लेने वाले भी हो सकते हैं और बड़ी मात्रा में प्रारंभिक सामग्री की आवश्यकता होती है।
- रासायनिक lysis: रासायनिक लसीका विधियां, जैसे डिटर्जेंट-आधारित लाइसिस, लिपिड बाइलेयर को बाधित करके और प्रोटीन को विकृत करके नमूने को नुकसान पहुंचा सकती हैं। उन्हें कई चरणों की भी आवश्यकता हो सकती है और अवशिष्ट दूषित पदार्थों को छोड़ सकते हैं जो डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों में हस्तक्षेप करते हैं। डिटर्जेंट की इष्टतम खुराक ढूँढना एक अतिरिक्त चुनौती है।
- फ्रीज-पिघलना चक्र: फ्रीज-पिघलना चक्र कोशिका झिल्ली को टूटने का कारण बन सकता है, लेकिन दोहराया चक्र भी प्रोटीन विकृतीकरण और गिरावट का कारण बन सकता है। इस विधि में कई चक्रों की भी आवश्यकता हो सकती है, जो समय लेने वाली हो सकती है और अक्सर कम पैदावार में परिणाम देती है।
- एंजाइमेटिक लाइसिस: एंजाइमैटिक लाइसिस विधियां कुछ सेल प्रकारों के लिए विशिष्ट हो सकती हैं और उन्हें कई चरणों की आवश्यकता होती है, जिससे उन्हें समय लगता है। वे अपशिष्ट भी उत्पन्न करते हैं और नमूने के क्षरण से बचने के लिए सावधानीपूर्वक अनुकूलन की आवश्यकता होती है। एंजाइमेटिक लाइसिस किट अक्सर महंगे होते हैं। यदि आपकी वर्तमान एंजाइमैटिक लसीका प्रक्रिया अपर्याप्त परिणाम देती है, तो सेल व्यवधान को तेज करने के लिए सहक्रियात्मक विधि के रूप में सोनिकेशन लागू किया जा सकता है।
पारंपरिक यांत्रिक और रसायन सेल लसीका विधियों के विपरीत, सोनिकेशन सेल विघटन के लिए एक बहुत ही कुशल और विश्वसनीय उपकरण है जो सोनीशन मापदंडों पर पूर्ण नियंत्रण की अनुमति देता है। यह सामग्री रिलीज और उत्पाद शुद्धता पर एक उच्च चयनात्मकता सुनिश्चित करता है। [सीएफ. बालासुंदरम एट अल., 2009]
यह सभी सेल प्रकारों के लिए उपयुक्त है और छोटे और बड़े पैमाने पर आसानी से लागू होता है – हमेशा नियंत्रित परिस्थितियों में। अल्ट्रासोनिकेटर को साफ करना आसान है। एक अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइज़र में हमेशा क्लीन-इन-प्लेस (सीआईपी) और स्टरलाइज-इन-प्लेस (एसआईपी) फ़ंक्शन होता है। सोनोट्रोड में एक विशाल टाइटेनियम सींग होता है जिसे पानी या विलायक (काम करने वाले माध्यम के आधार पर) में मिटा दिया जा सकता है या बहाया जा सकता है। अल्ट्रासोनिकेटर का रखरखाव उनकी मजबूती के कारण लगभग उपेक्षित है।
अल्ट्रासोनिक Lysis और सेल व्यवधान
आम तौर पर, प्रयोगशाला में नमूनों के lysis 15 सेकंड और 2 मिनट के बीच ले जाएगा. चूंकि सोनीशन की तीव्रता आयाम द्वारा एक सोनीशन समय निर्धारित करने के साथ-साथ सही उपकरण चुनकर समायोजित करना बहुत आसान है, सेल संरचना के आधार पर और लाइसिस के उद्देश्य पर सेल झिल्ली को बहुत धीरे या बहुत अचानक बाधित करना संभव है (उदाहरण के लिए डीएनए निष्कर्षण के लिए नरम सोनिकेशन की आवश्यकता होती है, बैक्टीरिया के पूर्ण प्रोटीन निष्कर्षण के लिए अधिक तीव्र अल्ट्रासाउंड उपचार की आवश्यकता होती है)। प्रक्रिया के दौरान तापमान की निगरानी एक एकीकृत तापमान संवेदक द्वारा की जा सकती है और इसे आसानी से शीतलन (बर्फ स्नान या शीतलन जैकेट के साथ प्रवाह कोशिकाओं) या स्पंदित मोड में सोनिकेशन द्वारा नियंत्रित किया जा सकता है। पल्स-मोड सोनिकेशन के दौरान, 1-15 सेकंड की अवधि के लघु सोनीशन फट चक्र लंबे समय तक आंतरायिक अवधि के दौरान गर्मी लंपटता और शीतलन की अनुमति देते हैं।
सभी अल्ट्रासाउंड-संचालित प्रक्रियाएं पूरी तरह से प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और रैखिक रूप से स्केलेबल हैं।
वायलट्वीटर कई नमूनों की एक साथ, वर्दी और तेजी से बाँझ तैयारी के लिए एक अल्ट्रासोनिक homogenizer है।
सेल Lysis और निष्कर्षण के लिए अल्ट्रासोनिक Homogenizers
विभिन्न प्रकार के अल्ट्रासोनिक उपकरण नमूना तैयार करने के लक्ष्य से मेल खाने और उपयोगकर्ता-मित्रता और संचालन आराम को आश्वस्त करने की अनुमति देते हैं। प्रोब-प्रकार अल्ट्रासोनिकेटर प्रयोगशाला में सबसे आम उपकरण हैं। वे 1000mL तक 0.1mL की मात्रा के साथ छोटे और मध्यम आकार के नमूनों की तैयारी के लिए सबसे उपयुक्त हैं। विभिन्न शक्ति आकार और sonotrodes नमूना मात्रा और पोत के लिए अल्ट्रासोनिकेटर को सबसे प्रभावी और कुशल sonicating परिणामों के लिए अनुकूलित करने की अनुमति देते हैं। अल्ट्रासोनिक जांच डिवाइस सबसे अच्छा विकल्प है जब एकल नमूने तैयार किए जाने हैं।
यदि अधिक नमूने तैयार किए जाने हैं, उदाहरण के लिए सेल समाधान की 8-10 शीशियां, अल्ट्रासोनिक सिस्टम जैसे वायलट्वीटर या अल्ट्रासोनिक कपहॉर्न के साथ एक गहन अप्रत्यक्ष सोनिकेशन एक कुशल लसीका के लिए सबसे उपयुक्त समरूपता विधि है। कई शीशियों को एक ही समय में, एक ही तीव्रता पर sonicated किया जाता है। यह न केवल समय बचाता है, बल्कि सभी नमूनों के समान उपचार को भी सुनिश्चित करता है, जो नमूनों के बीच परिणाम विश्वसनीय और तुलनीय बनाता है। इसके अलावा, अल्ट्रासोनिक सोनोट्रोड (जिसे अल्ट्रासोनिक जांच, सींग, टिप या उंगली के रूप में भी जाना जाता है) को डुबोकर अप्रत्यक्ष सोनीशन क्रॉस-संदूषण के दौरान बचा जाता है। चूंकि व्यक्तिगत रूप से नमूना आकार मिलान शीशियों का उपयोग किया जाता है, इसलिए जहाजों के डिकैंटिंग के कारण समय लेने वाली सफाई और नमूना हानि को छोड़ दिया जाता है। मल्टीवेल या माइक्रोटिटर प्लेटों के समान सोनिकेशन के लिए, Hielscher UIP400MTP प्रदान करता है।
उच्च मात्रा के लिए, उदाहरण के लिए सेल अर्क के व्यावसायिक उत्पादन के लिए, प्रवाह सेल रिएक्टर के साथ निरंतर अल्ट्रासोनिक सिस्टम सबसे उपयुक्त हैं। संसाधित सामग्री का निरंतर और यहां तक कि प्रवाह एक समान सोनिकेशन का आश्वासन देता है। अल्ट्रासोनिक विघटन प्रक्रिया के सभी मापदंडों को अनुकूलित किया जा सकता है और आवेदन और विशिष्ट सेल सामग्री की आवश्यकताओं के लिए समायोजित किया जा सकता है।
जीवाणु कोशिकाओं के अल्ट्रासोनिक lysing के लिए अनुकरणीय प्रक्रिया:
- सेल निलंबन की तैयारी: सेल छर्रों पूरी तरह से homogenizing द्वारा एक बफर समाधान में निलंबित किया जाना चाहिए (निम्नलिखित विश्लेषण के साथ संगत अपने बफर समाधान का चयन, जैसे विशिष्ट क्रोमैटोग्राफी विधि). यदि आवश्यक हो तो लाइसोजाइम और / या अन्य योजक जोड़ें (उन्हें पृथक्करण / शुद्धिकरण साधनों के साथ भी संगत होना चाहिए)। पूर्ण निलंबन प्राप्त होने तक हल्के सोनिकेशन के तहत धीरे से समाधान को मिलाएं /
- अल्ट्रासोनिक lysis: एक बर्फ स्नान में नमूना रखें। सेल व्यवधान के लिए, 60-90 सेकंड फटने (अपने सोनिकेटर के पल्स मोड का उपयोग करके) पर निलंबन को सोनिकेट करें।
- पृथक्करण: लाइसेट को सेंट्रीफ्यूज करें (उदाहरण के लिए 10 मिनट 10,000 x ग्राम पर; 4 डिग्री सेल्सियस पर)। ध्यान से सेल गोली से सतह पर तैरनेवाला अलग करें. सतह पर तैरनेवाला कुल कोशिका lysate है। सतह पर तैरनेवाला के निस्पंदन के बाद, आप घुलनशील सेल प्रोटीन का एक स्पष्ट तरल पदार्थ प्राप्त करते हैं।
जीव विज्ञान और जैव प्रौद्योगिकी में अल्ट्रासोनिकेटर के लिए सबसे आम अनुप्रयोग हैं:
- सेल निकालने की तैयारी
- खमीर, बैक्टीरिया, पौधों की कोशिकाओं, नरम या कठोर कोशिका ऊतकों, न्यूक्लिक सामग्री का विघटन
- प्रोटीन निष्कर्षण
- एंजाइमों की तैयारी और अलगाव
- एंटीजन का उत्पादन
- डीएनए निष्कर्षण और/या लक्षित विखंडन
- लिपोसोम की तैयारी
जांच-प्रकार अल्ट्रासोनिकेटर के साथ सेल व्यवधान एक कुशल नमूना तैयार करने की विधि है।
नीचे दी गई तालिका आपको सेल व्यवधान और निष्कर्षण के लिए हमारे अल्ट्रासोनिकेटर पर एक सिंहावलोकन देती है। प्रत्येक अल्ट्रासोनिक homogenizer के बारे में अधिक जानकारी प्राप्त करने के लिए डिवाइस प्रकार पर क्लिक करें। हमारे अच्छी तरह से प्रशिक्षित और लंबे समय के अनुभव तकनीकी कर्मचारी आपके नमूनों के लिए सबसे उपयुक्त अल्ट्रासोनिकेटर चुनने में आपकी मदद करने में प्रसन्न होंगे!
| बैच वॉल्यूम | प्रवाह दर | अनुशंसित उपकरण |
|---|---|---|
| 10 शीशियों या ट्यूबों तक | एन.ए. | वायलट्वीटर |
| मल्टीवेल / माइक्रोटिटर प्लेट्स | एन.ए. | UIP400MTP |
| एकाधिक ट्यूब / | एन.ए. | कपहॉर्न |
| 1 से 500mL | 10 से 200mL/मिनट | यूपी100एच |
| 10 से 1000mL | 20 से 200mL/मिनट | यूपी200एचटी, यूपी200सेंट |
| 10 से 2000mL | 20 से 400mL/मिनट | UP400St |
अल्ट्रासाउंड शाखाओं के कई गुना अनुप्रयोग जैव प्रौद्योगिकी, बायोइंजीनियरिंग, माइक्रोबायोलॉजी, आणविक जीव विज्ञान, जैव रसायन, इम्यूनोलॉजी, बैक्टीरियोलॉजी, वायरोलॉजी, प्रोटिओमिक्स, जेनेटिक्स, फिजियोलॉजी, सेलुलर जीव विज्ञान, हेमेटोलॉजी और वनस्पति विज्ञान के क्षेत्रों में शाखाएं हैं।
Lysis: सेल संरचनाओं को तोड़ना
कोशिकाओं को एक अर्ध-पारगम्य प्लाज्मा झिल्ली द्वारा संरक्षित किया जाता है जिसमें एक फॉस्फो-लिपिड बाइलेयर (प्रोटीन-लिपिड बाइलेयर भी; एम्बेडेड प्रोटीन अणुओं के साथ हाइड्रोफोबिक लिपिड और हाइड्रोफिलिक फास्फोरस अणुओं द्वारा गठित) होता है और सेल अंदरूनी (साइटोप्लाज्म) और बाह्य वातावरण के बीच एक अवरोध पैदा करता है। पादप कोशिकाएँ और प्रोकैरियोटिक कोशिकाएँ एक कोशिका भित्ति से घिरी होती हैं। सेल्यूलोज की कई परतों की मोटी कोशिका भित्ति के कारण, पौधों की कोशिकाओं को पशु कोशिकाओं की तुलना में लाइज़ करना कठिन होता है। सेल इंटीरियर, जैसे ऑर्गेनेल, नाभिक, माइटोकॉन्ड्रियन, साइटोस्केलेटन द्वारा स्थिर होते हैं।
कोशिकाओं को लाइसिंग करके, इसका उद्देश्य ऑर्गेनेल, प्रोटीन, डीएनए, एमआरएनए या अन्य बायोमोलेक्यूल्स को निकालना और अलग करना है।
सेल Lysis के पारंपरिक तरीके और उनकी कमियां
कोशिकाओं को लाइसेट करने के कई तरीके हैं, जिन्हें यांत्रिक और रासायनिक तरीकों में विभाजित किया जा सकता है, जिसमें डिटर्जेंट या सॉल्वैंट्स का उपयोग, उच्च दबाव का अनुप्रयोग, या मनका मिल या फ्रेंच प्रेस का उपयोग शामिल है। इन विधियों का सबसे समस्याग्रस्त नुकसान प्रक्रिया मापदंडों का कठिन नियंत्रण और समायोजन है और इस तरह प्रभाव पड़ता है।
नीचे दी गई तालिका सामान्य लाइसिस विधियों के मुख्य नुकसान प्रदर्शित करती है:
तालिका: सेल लसीका के पारंपरिक तरीकों के प्रमुख नुकसान हैं
लसीका की प्रक्रिया
लसीका एक संवेदनशील प्रक्रिया है। लसीका के दौरान कोशिका झिल्ली की सुरक्षा नष्ट हो जाती है, हालांकि निष्क्रियता, विकृतीकरण और एक अशरीरी वातावरण (पीएच-मान से विचलन) द्वारा निकाले गए प्रोटीन के क्षरण को रोका जाना चाहिए। इसलिए, सामान्य तौर पर लसीका एक बफर समाधान में किया जाता है। अधिकांश कठिनाइयाँ अनियंत्रित सेल व्यवधान से उत्पन्न होती हैं जिसके परिणामस्वरूप सभी इंट्रासेल्युलर सामग्री या / और लक्ष्य उत्पाद के विकृतीकरण की एक अलक्षित रिलीज होती है।
सोनिकेशन और सेल लाइसिस के बारे में अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न
- क्या आप सोनिकेशन के साथ कोशिकाओं को लाइज़ कर सकते हैं? हां, सोनिकेशन प्रभावी रूप से उच्च आवृत्ति अल्ट्रासोनिक तरंगों का उपयोग करके कोशिकाओं को लाइज़ करता है जो गुहिकायन को प्रेरित करता है, एक ऐसी घटना जहां छोटे वाष्प बुलबुले बनते हैं और सेल निलंबन के भीतर हिंसक रूप से ढह जाते हैं। परिणामी यांत्रिक बल कोशिका झिल्ली को बाधित करते हैं और तरल में इंट्रासेल्युलर घटकों की रिहाई की सुविधा प्रदान करते हैं।
- सेल lysis के लिए एक sonicator का उपयोग कैसे करें? सेल lysis के लिए एक sonicator का उपयोग एक सेल निलंबन में sonicator जांच विसर्जित और आयाम और नाड़ी अवधि के रूप में मापदंडों को समायोजित करना शामिल है. प्रोटीन विकृतीकरण और एंजाइम निष्क्रियता को कम करते हुए सेल व्यवधान को अनुकूलित करने के लिए प्रक्रिया की बारीकी से निगरानी की जानी चाहिए।
- सेल लाइसिस के लिए सोनिकेशन का सिद्धांत क्या है? सोनिकेशन ध्वनिक गुहिकायन के सिद्धांत पर काम करता है। अल्ट्रासोनिक ऊर्जा तरल माध्यम में प्रेषित होती है, जिससे तेजी से दबाव में उतार-चढ़ाव होता है जो सूक्ष्म बुलबुले के गठन और विस्फोट की ओर ले जाता है। ये विस्फोट तीव्र कतरनी बलों और स्थानीयकृत उच्च तापमान उत्पन्न करते हैं, सेलुलर संरचनाओं को बाधित करते हैं और लाइसेट समरूपता को बढ़ाते हैं।
- सेल लाइसिस सोनिकेशन में कितना समय लगता है? सेल लाइसिस के लिए सोनिकेशन की अवधि सेल प्रकार, सेल घनत्व, सोनिकेटर पावर और उपयोग किए जाने वाले विशिष्ट प्रोटोकॉल जैसे कारकों के आधार पर काफी भिन्न हो सकती है। विशिष्ट प्रक्रियाएं कई सेकंड से लेकर कुछ मिनटों तक हो सकती हैं, जो अक्सर गर्मी उत्पादन का प्रबंधन करने और एक समान सेल व्यवधान सुनिश्चित करने के लिए चक्रों में की जाती हैं।
- प्रोटीन निष्कर्षण में सोनिकेशन का उद्देश्य क्या है? प्रोटीन निष्कर्षण में, सोनिकेशन कोशिका झिल्ली को कुशलतापूर्वक तोड़ने और प्रोटीन को घुलनशील करने का कार्य करता है। यह विधि सेलुलर डिब्बों के भीतर से प्रोटीन जारी करने के लिए विशेष रूप से उपयोगी है, जिससे यह लाइसेट्स तैयार करने के लिए आवश्यक है जिसमें से प्रोटीन को शुद्ध या विश्लेषण किया जाना है।
- निष्कर्षण के लिए सोनिकेशन का उपयोग क्यों किया जाता है? सोनिकेशन को इसकी तीव्र कार्रवाई और लक्षित ऊर्जा को लागू करने की क्षमता के कारण निष्कर्षण के लिए पसंद किया जाता है, कठोर रासायनिक उपचार के उपयोग के बिना बायोएक्टिव अणुओं को छोड़ने के लिए सेलुलर संरचनाओं को तोड़ना, जिससे निकाले गए यौगिकों की कार्यात्मक अखंडता को संरक्षित किया जाता है।
- क्या सोनिकेशन प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन को बाधित करता है? जबकि सोनिकेशन प्रभावी रूप से कोशिका झिल्ली को बाधित कर सकता है, यह प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन को भी बाधित कर सकता है। व्यवधान का स्तर सोनीशन तीव्रता और एक्सपोज़र अवधि पर निर्भर करता है, संभावित रूप से प्रोटीन परिसरों के विकृतीकरण या पृथक्करण के लिए अग्रणी होता है, जो बाद के विश्लेषणात्मक या कार्यात्मक अध्ययनों को प्रभावित कर सकता है।
- क्या सोनिकेशन का उपयोग ई कोलाई को लाइज़ करने के लिए किया जा सकता है? Hielscher sonicators इस तरह के ई कोलाई के रूप में बैक्टीरिया कोशिकाओं lysing के लिए विशेष रूप से प्रभावी हैं, जो मजबूत सेल दीवारों है. तकनीक कोशिका भित्ति और झिल्ली को कतरनी करने के लिए एक भौतिक विधि प्रदान करती है, जिससे यह आणविक जीव विज्ञान और जैव रसायन प्रयोगशालाओं में बैक्टीरिया के लाइसेट्स तैयार करने के लिए एक पसंदीदा तरीका बन जाता है।
साहित्य/संदर्भ
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