लाइसिस के लिए सोनिकेशन: सेल व्यवधान और निष्कर्षण
सेल विघटन या लाइसिस बायोटेक प्रयोगशालाओं में दैनिक नमूना तैयारी का एक सामान्य हिस्सा है। लाइसिस का लक्ष्य जैविक अणुओं को छोड़ने के लिए कोशिका भित्ति या पूर्ण कोशिका के कुछ हिस्सों को बाधित करना है। अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइज़र का व्यापक रूप से सफल सेल लाइसिस के लिए उपयोग किया जाता है। परिष्कृत अल्ट्रासोनिकेटर का प्रमुख लाभ तीव्रता और तापमान जैसे प्रक्रिया मापदंडों पर सटीक नियंत्रण है, जो एक सौम्य, अभी तक अत्यधिक कुशल सेल व्यवधान और निष्कर्षण की अनुमति देता है।
अल्ट्रासाउंड का उपयोग कर सेल लाइसिस
अल्ट्रासोनिक सेल लाइसिस और निष्कर्षण एक विधि है जिसका उपयोग खुली कोशिकाओं को तोड़ने और उच्च आवृत्ति ध्वनि तरंगों, यानी अल्ट्रासाउंड का उपयोग करके सामग्री निकालने के लिए किया जाता है। सोनिकेशन एक लाइसिस तकनीक है, जिसका व्यापक रूप से सेल विघटन और इंट्रासेल्युलर सामग्री के निष्कर्षण के एक स्थापित और विश्वसनीय तरीकों के रूप में उपयोग किया जाता है। अल्ट्रासोनिक लाइसिस लाइसेट युक्त लाइसेट तैयार करने के लिए एक विश्वसनीय तकनीक है जैसे प्लास्मिड, रिसेप्टर परख, प्रोटीन, डीएनए, आरएनए आदि। चूंकि अल्ट्रासोनिक तीव्रता को प्रक्रिया मापदंडों को समायोजित करके समतल किया जा सकता है, विशिष्ट अनुप्रयोग आवश्यकताओं को पूरा करने के लिए प्रत्येक पदार्थ और माध्यम के लिए बहुत नरम से तीव्र तक इष्टतम सोनिकेशन तीव्रता को व्यक्तिगत रूप से सेट किया जा सकता है। लाइसिस के निम्नलिखित चरण फ्रैक्शनेशन, ऑर्गेनेल अलगाव या / और प्रोटीन निष्कर्षण और शुद्धिकरण हैं। निकाली गई सामग्री (= लाइसेट) को अलग किया जाना है और यह आगे की जांच या अनुप्रयोगों के अधीन है, उदाहरण के लिए प्रोटिओमिक अनुसंधान के लिए।
लाइसिस और निष्कर्षण जैसे नमूना तैयार करने के लिए अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइज़र यूपी 100 एच (100 वाट) और यूपी 400 एसटी (400 वाट)।
अन्य सेल लाइसिस और निष्कर्षण विधियों की तुलना में, अल्ट्रासोनिक सेल लाइसिस के कई फायदे हैं:
- गति: अल्ट्रासोनिक सेल लाइसिस और निष्कर्षण एक तेज़ विधि है जो कुछ ही सेकंड में खुली कोशिकाओं को तोड़ सकती है। यह अन्य तरीकों जैसे होमोजेनाइजेशन, फ्रीज़-पिघलना या बीड-मिलिंग की तुलना में बहुत तेज है।
- दक्षता: अल्ट्रासोनिक सेल लाइसिस और निष्कर्षण का उपयोग एक बार में छोटे, बड़े या कई नमूनों के इलाज के लिए किया जा सकता है, जिससे यह अन्य तरीकों की तुलना में अधिक कुशल हो जाता है जिनके लिए छोटे नमूनों के व्यक्तिगत प्रसंस्करण की आवश्यकता होती है।
- रसायन मुक्तअल्ट्रासोनिक सेल लाइसिस और निष्कर्षण एक गैर-इनवेसिव विधि है जिसे कठोर रसायनों या एंजाइमों के उपयोग की आवश्यकता नहीं होती है। यह उन अनुप्रयोगों के लिए आदर्श बनाता है जहां सेल सामग्री की अखंडता को बनाए रखने की आवश्यकता होती है। नमूनों के अवांछित संदूषण से बचा जा सकता है।
- उच्च उपज: अल्ट्रासोनिक सेल लाइसिस और निष्कर्षण डीएनए, आरएनए और प्रोटीन सहित सेलुलर सामग्री की उच्च उपज निकाल सकते हैं। ऐसा इसलिए है क्योंकि उच्च आवृत्ति ध्वनि तरंगें सेल की दीवारों को तोड़ती हैं और सामग्री को आसपास के समाधान में छोड़ती हैं।
- तापमान नियंत्रण: परिष्कृत अल्ट्रासोनसीटर नमूने के सटीक तापमान नियंत्रण की अनुमति देते हैं। Hielscher डिजिटल अल्ट्रासोनिक एक प्लग करने योग्य तापमान सेंसर और तापमान निगरानी सॉफ्टवेयर से लैस हैं।
- पुनुरुत्पादनीय: अल्ट्रासोनिक सेल लाइसिस के लिए प्रोटोकॉल को आसानी से पुन: पेश किया जा सकता है और यहां तक कि एक साधारण रैखिक स्केल-अप द्वारा विभिन्न बड़े या छोटे नमूना संस्करणों से मिलान किया जा सकता है।
- परिवर्तनशील: अल्ट्रासोनिक सेल लाइसिस और निष्कर्षण का उपयोग बैक्टीरिया, खमीर, कवक, पौधे और स्तनधारी कोशिकाओं सहित सेल प्रकारों की एक विस्तृत श्रृंखला निकालने के लिए किया जा सकता है। इसका उपयोग प्रोटीन, डीएनए, आरएनए और लिपिड सहित विभिन्न प्रकार के अणुओं को निकालने के लिए भी किया जा सकता है।
- कई नमूनों की एक साथ तैयारी: Hielscher Ultrasonics बिल्कुल एक ही प्रक्रिया स्थितियों के तहत कई नमूनों को आराम से संसाधित करने के लिए कई समाधान प्रदान करता है। यह लाइसिस और निष्कर्षण के नमूना तैयारी चरण को अत्यधिक कुशल और समय की बचत बनाता है।
- उपयोग करने में आसान: अल्ट्रासोनिक सेल लाइसिस और निष्कर्षण उपकरण का उपयोग करना आसान है और न्यूनतम प्रशिक्षण की आवश्यकता होती है। उपकरण किफायती भी है क्योंकि यह एक एकल निवेश है जिसमें निपटान की पुन: खरीद की कोई आवश्यकता नहीं है। यह शोधकर्ताओं और प्रयोगशालाओं की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए आकर्षक बनाता है।
कुल मिलाकर, अल्ट्रासोनिक सेल लाइसिस और निष्कर्षण सेलुलर सामग्री निकालने के लिए एक तेज, कुशल, सटीक नियंत्रणीय और बहुमुखी विधि है। वैकल्पिक तरीकों पर इसके फायदे इसे अनुसंधान और औद्योगिक अनुप्रयोगों की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए एक आकर्षक विकल्प बनाते हैं।
अल्ट्रासोनिक सेल लाइसिस का कार्य सिद्धांत
अल्ट्रासोनिक सेल लाइसिस और निष्कर्षण कोशिकाओं को बाधित करने और उनकी सामग्री को निकालने के लिए उच्च आवृत्ति ध्वनि तरंगों का उपयोग करता है। ध्वनि तरंगें आसपास के तरल में दबाव परिवर्तन पैदा करती हैं, जिससे छोटे बुलबुले बनते हैं और गुहिकायन नामक प्रक्रिया में ढह जाते हैं। ये बुलबुले स्थानीयकृत अत्यधिक तीव्र यांत्रिक बल उत्पन्न करते हैं जो खुली कोशिकाओं को तोड़ सकते हैं और उनकी सामग्री को आसपास के समाधान में छोड़ सकते हैं।
अल्ट्रासोनिकेटर का उपयोग करके सेल लाइसिस में आमतौर पर निम्नलिखित चरण शामिल होते हैं:
- नमूना एक तरल बफर के साथ एक ट्यूब या कंटेनर में रखा जाता है।
- नमूने में एक अल्ट्रासोनिक जांच डाली जाती है, और लगभग 20-30 kHz के साथ उच्च आवृत्ति ध्वनि तरंगें लागू होती हैं।
- अल्ट्रासाउंड तरंगें आसपास के तरल में दोलन और गुहिकायन का कारण बनती हैं, जिससे स्थानीय बल उत्पन्न होते हैं जो खुली कोशिकाओं को तोड़ते हैं और उनकी सामग्री को छोड़ते हैं।
- किसी भी सेलुलर मलबे को हटाने के लिए नमूना सेंट्रीफ्यूज या फ़िल्टर किया जाता है, और निकाली गई सामग्री को डाउनस्ट्रीम विश्लेषण के लिए एकत्र किया जाता है।
शक्तिशाली अल्ट्रासाउंड तरंगें जैविक संरचनाओं के सेल मैट्रिक्स को बाधित करती हैं और बायोएक्टिव यौगिकों को छोड़ती हैं। संयंत्र सामग्री और विलायक (जैसे, बफर) के बीच द्रव्यमान हस्तांतरण तेज हो जाता है। (ग्राफिक: ©विल्खू एट अल।
सामान्य लाइसिस विधियों के नुकसान
प्रयोगशालाओं में अपने काम के दौरान, आप पहले से ही पारंपरिक यांत्रिक या रासायनिक लाइसिस प्रोटोकॉल का उपयोग करके सेल लाइसिस की परेशानी का अनुभव कर सकते हैं।
- यांत्रिक लाइसिस: यांत्रिक लाइसिस विधियां, जैसे मोर्टार और मूसल के साथ पीसना या फ्रेंच प्रेस, बीड मिल, या रोटर-स्टेटर सिस्टम का उपयोग करके होमोजेनाइजेशन में अक्सर प्रीसिस नियंत्रण और समायोजन विकल्पों की कमी होती है। इसका मतलब है कि मिलिंग और पीसने का उपयोग जल्दी से गर्मी और कतरनी बल उत्पन्न कर सकता है जो नमूना और डिनेचर प्रोटीन को नुकसान पहुंचा सकता है। वे समय लेने वाले भी हो सकते हैं और बड़ी मात्रा में प्रारंभिक सामग्री की आवश्यकता होती है।
- रासायनिक लाइसिस: रासायनिक लाइसिस विधियां, जैसे डिटर्जेंट-आधारित लाइसिस, लिपिड बाइलेयर को बाधित करके और प्रोटीन को विकृत करके नमूने को नुकसान पहुंचा सकती हैं। उन्हें कई चरणों की भी आवश्यकता हो सकती है और अवशिष्ट दूषित पदार्थों को छोड़ सकते हैं जो डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगों में हस्तक्षेप करते हैं। डिटर्जेंट की इष्टतम खुराक ढूंढना एक अतिरिक्त चुनौती है।
- फ्रीज-पिघलना चक्र: फ्रीज-पिघलना चक्र कोशिका झिल्ली को टूटने का कारण बन सकता है, लेकिन बार-बार चक्र प्रोटीन विकृतीकरण और गिरावट का कारण भी बन सकता है। इस विधि को कई चक्रों की भी आवश्यकता हो सकती है, जो समय लेने वाली हो सकती है और अक्सर कम पैदावार का परिणाम होती है।
- एंजाइमैटिक लाइसिस: एंजाइमैटिक लाइसिस विधियां कुछ सेल प्रकारों के लिए विशिष्ट हो सकती हैं और कई चरणों की आवश्यकता होती है, जिससे उन्हें समय लगता है। वे अपशिष्ट भी उत्पन्न करते हैं और नमूने के क्षरण से बचने के लिए सावधानीपूर्वक अनुकूलन की आवश्यकता होती है। एंजाइमैटिक लाइसिस किट अक्सर महंगे होते हैं। यदि आपकी वर्तमान एंजाइमेटिक लाइसिस प्रक्रिया अपर्याप्त परिणाम देती है, तो सेल व्यवधान को तेज करने के लिए सहक्रियात्मक विधि के रूप में सोनिकेशन लागू किया जा सकता है।
पारंपरिक यांत्रिक और रसायन सेल लाइसिस विधियों के विपरीत, सोनिकेशन सेल विघटन के लिए एक बहुत ही कुशल और विश्वसनीय उपकरण है जो सोनिकेशन मापदंडों पर पूर्ण नियंत्रण की अनुमति देता है। यह सामग्री रिलीज और उत्पाद शुद्धता पर एक उच्च चयनात्मकता सुनिश्चित करता है। [सीएफ बालासुंदरम एट अल।
यह सभी सेल प्रकारों के लिए उपयुक्त है और छोटे और बड़े पैमाने पर आसानी से लागू होता है – हमेशा नियंत्रित परिस्थितियों में। अल्ट्रासोनिकेटर को साफ करना आसान है। एक अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइज़र में हमेशा क्लीन-इन-प्लेस (सीआईपी) और स्टरलाइज़-इन-प्लेस (एसआईपी) फ़ंक्शन होता है। सोनोट्रोड में एक विशाल टाइटेनियम सींग होता है जिसे पानी या विलायक (काम करने वाले माध्यम के आधार पर) में पोंछा या फ्लश किया जा सकता है। अल्ट्रासोनिकेटर का रखरखाव उनकी मजबूती के कारण लगभग उपेक्षित है।
अल्ट्रासोनिक लाइसिस और सेल व्यवधान
आम तौर पर, प्रयोगशाला में नमूने का विश्लेषण 15 सेकंड और 2 मिनट के बीच ले जाएगा। चूंकि sonication की तीव्रता एक sonication समय के साथ-साथ सही उपकरण चुनकर आयाम द्वारा समायोजित करना बहुत आसान है, सेल संरचना और एलिसिस के उद्देश्य पर सेल झिल्ली को बहुत धीरे-धीरे या अचानक अचानक बाधित करना संभव है। उदाहरण के लिए डीएनए निष्कर्षण को नरम sonication की आवश्यकता होती है, बैक्टीरिया के पूर्ण प्रोटीन निष्कर्षण के लिए एक अधिक तीव्र अल्ट्रासाउंड उपचार की आवश्यकता होती है)। प्रक्रिया के दौरान तापमान पर एक एकीकृत तापमान संवेदक द्वारा निगरानी की जा सकती है और इसे ठंडा करने (ठंडा जैकेट के साथ बर्फ स्नान या प्रवाह कोशिकाओं) या स्पंदित मोड में sonication द्वारा आसानी से नियंत्रित किया जा सकता है। पल्स-मोड sonication के दौरान, 1-15 सेकंड की अवधि के छोटे sonication विस्फोट चक्र लंबी अंतराल अवधि के दौरान गर्मी अपव्यय और शीतलन के लिए अनुमति देते हैं।
सभी अल्ट्रासाउंड चालित प्रक्रियाओं पूरी तरह से प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और रैखिक स्केलेबल हैं।
द वायल ट्वीटर कई नमूनों की एक साथ, समान और तेजी से बाँझ तैयारी के लिए एक अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइज़र है।
सेल लाइसिस और निष्कर्षण के लिए अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइज़र
विभिन्न प्रकार के अल्ट्रासोनिक डिवाइस नमूना तैयारी लक्ष्य से मेल खाने और उपयोगकर्ता-मित्रता और संचालन आराम का आश्वासन देने की अनुमति देते हैं। प्रोब-टाइप अल्ट्रासोनिकेटर प्रयोगशाला में सबसे आम उपकरण हैं। वे 1000 एमएल तक 0.1 एमएल की मात्रा के साथ छोटे और मध्यम आकार के नमूने तैयार करने के लिए सबसे उपयुक्त हैं। विभिन्न शक्ति आकार और सोनोट्रोड्स अल्ट्रासोनिकेटर को नमूना मात्रा और सबसे प्रभावी और कुशल ध्वनि परिणामों के लिए पोत के अनुकूल बनाने की अनुमति देते हैं। अल्ट्रासोनिक जांच उपकरण सबसे अच्छा विकल्प है जब एकल नमूने तैयार किए जाने हैं।
यदि अधिक नमूने तैयार किए जाने हैं, उदाहरण के लिए सेल समाधान की 8-10 शीशियां, अल्ट्रासोनिक सिस्टम जैसे कि वायल्वीटर या अल्ट्रासोनिक कपहॉर्न के साथ एक तीव्र अप्रत्यक्ष सोनिकेशन एक कुशल लाइसिस के लिए सबसे उपयुक्त होमोजेनाइजेशन विधि है। एक ही समय में, एक ही तीव्रता पर कई शीशियों को सोनिकेट किया जाता है। यह न केवल समय बचाता है, बल्कि सभी नमूनों के समान उपचार को भी सुनिश्चित करता है, जो नमूनों के बीच परिणामों को विश्वसनीय और तुलनीय बनाता है। इसके अलावा, अल्ट्रासोनिक सोनोट्रोड (जिसे अल्ट्रासोनिक जांच, सींग, टिप या उंगली के रूप में भी जाना जाता है) को डुबोकर अप्रत्यक्ष सोनिकेशन क्रॉस-संदूषण से बचा जाता है। चूंकि व्यक्तिगत रूप से नमूना आकार मिलान शीशियों का उपयोग किया जाता है, इसलिए जहाजों के विघटन के कारण समय लेने वाली सफाई और नमूना हानि को छोड़ दिया जाता है। मल्टीवेल या माइक्रोटिटर प्लेटों के समान सोनिकेशन के लिए, Hielscher UIP400MTP प्रदान करता है।
अधिक मात्रा के लिए, उदाहरण के लिए सेल के अर्क के वाणिज्यिक उत्पादन के लिए, एक प्रवाह सेल रिएक्टर के साथ निरंतर अल्ट्रासोनिक प्रणाली सबसे उपयुक्त हैं। प्रसंस्कृत सामग्री के निरंतर और यहां तक कि प्रवाह एक और भी sonication भरोसा दिलाते हैं। अल्ट्रासोनिक विघटन की प्रक्रिया के सभी मानकों को अनुकूलित और आवेदन और विशेष सेल सामग्री की आवश्यकताओं को समायोजित किया जा सकता है।
बैक्टीरियल कोशिकाओं की अल्ट्रासोनिक lysing के लिए अनुकरणीय प्रक्रिया:
- सेल निलंबन की तैयारी: सेल छर्रों पूरी तरह से homogenizing (अपने बफर समाधान निम्नलिखित विश्लेषण, जैसे विशिष्ट क्रोमैटोग्राफी विधि के साथ संगत चुनें) द्वारा एक बफर समाधान में निलंबित कर दिया जाना चाहिए। lysozymes और / या अन्य additives जोड़ें, यदि आवश्यक हो तो (वे भी जुदाई / शुद्धि साधन के साथ संगत होना चाहिए)। मिक्स / हल्के sonication के तहत धीरे समाधान homogenize जब तक पूरा निलंबन हासिल की है।
- अल्ट्रासोनिक lysis: एक बर्फ स्नान में नमूना रखें। सेल विघटन के लिए, 60-90 दूसरा फटने (अपने ultrasonicator के पल्स मोड का उपयोग) पर निलंबन sonicate।
- (। जैसे 10 मिनट 10,000 पर एक्स जी; 4degC पर): पृथक्करण अपकेंद्रित्र lysate। सेल गोली ध्यान से से सतह पर तैरनेवाला अलग करें। सतह पर तैरनेवाला कुल सेल lysate है। सतह पर तैरनेवाला के निस्पंदन के बाद, आप घुलनशील सेल प्रोटीन का एक स्पष्ट किया तरल पदार्थ प्राप्त करते हैं।
जीव विज्ञान और जैव प्रौद्योगिकी में ultrasonicators के लिए सबसे आम अनुप्रयोगों हैं:
- सेल निकालने की तैयारी
- खमीर, बैक्टीरिया, पौधे की कोशिकाओं, नरम या कठोर कोशिका ऊतक, न्यूक्लिक सामग्री का विघटन
- प्रोटीन निष्कर्षण
- तैयारी और एंजाइमों के अलगाव
- एंटीजन का उत्पादन
- डीएनए निष्कर्षण और / या लक्षित विखंडन
- लाइपोसोम तैयारी
जांच-प्रकार अल्ट्रासोनिकेटर के साथ सेल व्यवधान एक कुशल नमूना तैयारी विधि है।
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| बैच वॉल्यूम | प्रवाह की दर | अनुशंसित उपकरणों |
|---|---|---|
| 10 शीशियों या ट्यूबों तक | एन.ए. | VialTweeter |
| मल्टीवेल / माइक्रोटिटर प्लेटें | एन.ए. | यूआईपी400एमटीपी |
| कई ट्यूब / | एन.ए. | कपहॉर्न |
| 1 से 500 एमएल | 10 से 200 मील / मिनट | UP100H |
| 10 से 1000 mL | 20 से 200 mL/ | UP200Ht, UP200St |
| 10 से 2000 मील | 20 से 400 एमएल / मिनट | UP400St |
जैव प्रौद्योगिकी, जैव इंजीनियरी, सूक्ष्म जीव विज्ञान, आणविक जीव विज्ञान, जैव रसायन, इम्यूनोलॉजी, जीवाणु, विषाणु विज्ञान, प्रोटिओमिक्स, आनुवंशिकी, शरीर विज्ञान, कोशिका जीव विज्ञान, रुधिर विज्ञान, विज्ञान और वनस्पति विज्ञान के क्षेत्रों में बाहर अल्ट्रासाउंड शाखाओं में से कई गुना अनुप्रयोगों।
लाइसिस: ब्रेकिंग सेल संरचनाएं
कोशिकाएं एक अर्द्ध पारगम्य प्लाज्मा झिल्ली एक phospho-लिपिड दोहरी परत (भी प्रोटीन लिपिड बाईलेयर; हाइड्रोफोबिक लिपिड और एम्बेडेड प्रोटीन अणुओं के साथ हाइड्रोफिलिक फास्फोरस अणुओं द्वारा गठित) में होते हैं जो द्वारा सुरक्षित हैं और (कोशिका द्रव्य) सेल अंदरूनी के बीच एक बाधा पैदा करता है और बाह्य वातावरण। संयंत्र कोशिकाओं और प्रोकेरियोटिक कोशिकाओं एक कोशिका दीवार से घिरे हैं। कई परतों सेल्यूलोज की मोटी सेल की दीवार के कारण, पौधों की कोशिकाओं पशु कोशिकाओं की तुलना में ल्य्से करने के लिए कठिन है। इस तरह के अंगों, नाभिक, माइटोकांड्रिया के रूप में सेल इंटीरियर,, cytoskeleton द्वारा स्थिर है।
कोशिकाओं lysing करके, यह निकालने और अंगों, प्रोटीन, डीएनए, mRNA या अन्य जैविक अणुओं को अलग करने के उद्देश्य से है।
सेल लाइसिस के पारंपरिक तरीके और उनकी कमियां
वहाँ कोशिकाओं है, जो यांत्रिक और रासायनिक विधियों, जो डिटर्जेंट या सॉल्वैंट्स के उपयोग, उच्च दबाव के आवेदन, या एक मनका मिल के या एक फ्रांसीसी प्रेस का उपयोग शामिल है में बांटा जा सकता lysate करने के लिए कई तरीके हैं। इन तरीकों में से सबसे समस्याग्रस्त नुकसान मुश्किल नियंत्रण और प्रक्रिया मापदंडों का समायोजन और इस तरह प्रभाव है।
नीचे दी गई तालिका सामान्य लाइसिस विधियों के मुख्य नुकसान प्रदर्शित करती है:
तालिका: सेल के पारंपरिक तरीकों प्रमुख नुकसान है
लाइसिस की प्रक्रिया
Lysis एक संवेदनशील प्रक्रिया है। lysis के दौरान कोशिका झिल्ली की सुरक्षा को नष्ट कर दिया है, लेकिन निष्क्रियता, एक unphysiological पर्यावरण (पीएच-मूल्य से विचलन) द्वारा विकृतीकरण और निकाले प्रोटीन की गिरावट को रोका जाना चाहिए। इसलिए, सामान्य lysis में एक बफर समाधान में किया जाता है। अधिकांश कठिनाइयों सभी intracellular सामग्री या / और लक्ष्य उत्पाद का विकृतीकरण के अलक्षित रिलीज में जिसके परिणामस्वरूप अनियंत्रित कोशिका विघटन से उत्पन्न होती हैं।
साहित्य / संदर्भ
- Balasundaram, B.; Harrison, S.; Bracewell, D. G. (2009): Advances in product release strategies and impact on bioprocess design. Trends in Biotechnology 27/8, 2009. pp. 477-485.
- Vilkhu, K.; Manasseh, R.; Mawson, R.; Ashokkumar, M. (2011): Ultrasonic Recovery and Modification of Food ingredients. In: Feng/ Barbosa-Cánovas/ Weiss (2011): Ultrasound Technologies for Food and Bioprocessing. New York: Springer, 2011. pp. 345-368.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.