Ultrasonication का उपयोग कर प्लाज्मिड तैयारी
अल्ट्रासोनिकेशन प्लास्मिड डीएनए को टुकड़ा करने के लिए एक विश्वसनीय तकनीक है। सटीक रूप से नियंत्रणीय आयाम, धड़कन मोड और तापमान नियंत्रण गैर-हानिकारक प्लास्मिड विखंडन के लिए एक अल्ट्रासोनिकेटर की सबसे महत्वपूर्ण विशेषताएं हैं। इसके अतिरिक्त, कुछ एजेंटों का उपयोग प्लास्मिड गिरावट से बचाने में मदद करता है। Hielscher Ultrasonics एकल शीशियों से नियंत्रित प्लाज्मिड विखंडन के लिए विभिन्न समाधान प्रदान करता है, साथ ही साथ कई नमूनों के साथ-साथ बहु-अच्छी प्लेटों का sonication। सफल अल्ट्रासोनिक प्लाज्मिड विखंडन के बारे में अधिक जानें!
The UIP400MTP बहु-अच्छी तरह से प्लेटों के ठीक नियंत्रित ultrasonication के लिए अनुमति देता है। UIP400MTP के अनुप्रयोगों में से एक विशेष रूप से लक्षित लंबाई के टुकड़े प्राप्त करने के लिए प्लास्मिड डीएनए का विखंडन है।
प्लाज्मिड बाल काटना अल्ट्रासोनिकेशन का उपयोग कर
जब डीएनए के नमूनों को अल्ट्रासोनिक तरंगों के अधीन किया जाता है, तो अल्ट्रासोनिक रूप से उत्पन्न कंपन तरल में ध्वनिक गुहिकायन पैदा करते हैं जो यांत्रिक बलों के माध्यम से उच्च आणविक भार डीएनए अणुओं को कैंची या तोड़ता है। सोनिकेशन क्रोमैटिन इम्यूनोप्रिपिटेशन (सीएचआईपी) जैसे अनुप्रयोगों सहित थोक डीएनए कतरनी प्रयोगों के लिए सबसे व्यापक रूप से उपयोग की जाने वाली विधि है, जिसके लिए उच्च संकल्प प्राप्त करने के लिए छोटे टुकड़े आकार बिल्कुल महत्वपूर्ण हैं। , 2012)
प्लास्मिड डीएनए (पीडीएनए) डीएनए का विशिष्ट रूप है, जो इसकी अंगूठी के आकार की विशेषता है और बैक्टीरिया और कुछ यूकेरियोट्स में पाया जाता है।
सुपरकॉइल्ड पीडीएनए प्लास्मिड डीएनए का वांछित रूप है क्योंकि यह स्वचालित अनुक्रमण और अभिकर्मक जैसी डाउन-स्ट्रीम प्रक्रियाओं में सर्वोत्तम परिणाम दिखाता है। अल्ट्रासोनिकेशन पीडीएनए को टुकड़ा करने के लिए उपयुक्त है, जिसमें सुपरकॉइल्ड पीडीएनए भी शामिल है, सफलतापूर्वक।
थॉम्पसन एट अल (2008) ने प्रदर्शित किया कि प्लास्मिड सोनिकेशन, जो सुपरकॉइल डीएनए को टुकड़ा करने के लिए जाना जाता है, अनुक्रम phred20 पढ़ने की लंबाई को इस बिंदु पर सुधारने का एक प्रभावी तरीका है कि वे बेकमैन कूल्टर के नियंत्रण टेम्पलेट या एंजाइमेटिक रूप से रैखिक प्लास्मिड से काफी अलग नहीं हैं।
- ठीक से नियंत्रणीय
- प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम
- डीएनए टुकड़ा लंबाई को लक्षित करने के लिए समायोज्य
- तापमान नियंत्रण
- किसी भी नमूना आकार के लिए स्केलेबल
प्लास्मिड वैक्टर का उपयोग
प्लास्मिड को अक्सर जीन को क्लोन, स्थानांतरित और हेरफेर करने के लिए उपकरण के रूप में उपयोग किया जाता है। जब इन उद्देश्यों के लिए प्लास्मिड का प्रयोगात्मक रूप से उपयोग किया जाता है, तो उन्हें वैक्टर कहा जाता है। डीएनए के टुकड़े या जीन को एक प्लास्मिड वेक्टर में डाला जा सकता है, जिससे एक तथाकथित पुनः संयोजक प्लास्मिड बन सकता है। प्लास्मिड वैक्टर का उपयोग वाहनों के रूप में पुनः संयोजक डीएनए को एक मेजबान सेल में चलाने के लिए किया जाता है और आणविक क्लोनिंग का एक प्रमुख घटक है।
“विभिन्न जटिल बीमारियों के इलाज के लिए जीन थेरेपी में उनके संभावित उपयोग के लिए गैर-वायरल वैक्टर का बड़े पैमाने पर अध्ययन किया जा रहा है। गैर-वायरल वैक्टर भौतिक, रासायनिक और एंजाइमी गिरावट के खिलाफ प्लास्मिड डीएनए की रक्षा करते हैं और डीएनए अणु को लक्ष्य स्थल तक पहुंचाते हैं। उदाहरण के लिए, धनायनित लिपोसोम, चिटोसन और अन्य सकारात्मक रूप से चार्ज किए गए नैनोकण इलेक्ट्रोस्टैटिक इंटरैक्शन के माध्यम से प्लास्मिड डीएनए के साथ परिसरों का निर्माण करते हैं। हालांकि, आसानी से गठित धनायनित लिपोसोम/प्लास्मिड डीएनए कॉम्प्लेक्स अपेक्षाकृत बड़े (यानी, 300-400 एनएम) और प्रकृति में विषम होते हैं जिससे उन्हें दवा अनुप्रयोगों में उपयोग करना मुश्किल हो जाता है। बड़े और विषम प्लास्मिड डीएनए / लिपोसोम, प्लास्मिड डीएनए / एरोसोल, और प्लास्मिड डीएनए / पेप्टाइड्स परिसरों को अल्ट्रासोनिकेशन का उपयोग करके छोटे, और सजातीय कणों में कम किया जा सकता है।” (सरकार एट अल., 2019)
प्लास्मिड वैक्टर के उपयोग के लिए एक प्रमुख उदाहरण सीआरआईएसपीआर-कैस 9 है। CRISPR-Cas9 प्रणाली आमतौर पर कोशिकाओं को एक बड़े प्लास्मिड या कई छोटे प्लास्मिड के रूप में वितरित की जाती है जो एक लक्ष्य अनुक्रम, एक CRISPR गाइड और Cas9 को एन्कोड करती है।
नैनोप्रेसिपिटेशन द्वारा डीएनए से भरे पीएलजीए नैनोकणों की अल्ट्रासोनिक तैयारी
जो एट अल (2020) ने प्राथमिक अस्थि मज्जा व्युत्पन्न मैक्रोफेज में एक मॉडल CRISPR-Cas9 प्लास्मिड की डिलीवरी के लिए एक नैनोपार्टिकल वाहक बनाने के लिए पॉली (लैक्टिक-सह-ग्लाइकोलिक एसिड) (PLGA) का उपयोग किया। पीएलजीए नैनोकणों की नैनोवर्षा के लिए, दो अलग-अलग अंत समूहों (एस्टर और अमाइन समूहों) के साथ पीएलजीए का उपयोग इस उद्देश्य से किया गया था कि सकारात्मक रूप से चार्ज किए गए अमाइन एंड कैप एनकैप्सुलेशन दक्षता और लोडिंग को बढ़ाते हैं क्योंकि इसके और डीएनए की नकारात्मक चार्ज रीढ़ के बीच चार्ज इंटरैक्शन के कारण। 50 एमएल पॉलीप्रोपाइलीन शंक्वाकार अपकेंद्रित्र ट्यूब में, 100 मिलीग्राम प्लूरोनिक एफ 127 को भंवर मिश्रण द्वारा 20 एमएल ऑटोक्लेव्ड डीआई पानी में भंग कर दिया गया था, इसके बाद अल्ट्रासोनिक स्नान (कपहॉर्न देखें). एक आटोक्लेव चुंबकीय सरगर्मी पट्टी जोड़ा गया था और समाधान 30 मिनट के लिए 600 आरपीएम पर मिलाया गया था, जबकि अन्य समाधान किए गए थे। डीएनए के निरर्थक सोखना को कम करने के लिए कांच के बने पदार्थ के बजाय प्लास्टिक लैबवेयर का उपयोग किया गया था। डीएमएफ (44.48 मिलीग्राम/एमएल) में घुलने वाले पीएलजीए और टीएचएफ (0.667 मिलीग्राम/एमएल) में घुलने वाले टीआईपीएस पेंटासीन के घोल अलग-अलग बनाए गए थे। पीएलजीए को 30 मिनट के लिए सोनिकेट होने से पहले 30 मिनट के लिए डीएमएफ में गीला करने के लिए चुपचाप छोड़ दिया गया था (पूर्ण प्रोटोकॉल के लिए जो एट अल., 2020 देखें)
- डीएनए का निष्कर्षण
- डीएनए का एनकैप्सुलेशन
- नैनोकण-लेपित डीएनए का फैलाव
- कोशिकाओं में प्लास्मिड डीएनए की डिलीवरी
नमूनों के अप्रत्यक्ष sonication के लिए UP200St CupHorn, उदाहरण के लिए डीएनए निष्कर्षण और विखंडन के लिए।
सोनिकेशन के दौरान प्लास्मिड डीएनए संरक्षण
प्लास्मिड और सुपरकॉइल प्लास्मिड सहित डीएनए अत्यधिक संवेदनशील गिरावट हैं। उपलब्ध सभी विखंडन विधियां कुछ नुकसानों के लिए जानी जाती हैं। अल्ट्रासोनिक डीएनए विखंडन पसंदीदा तरीकों में से एक है क्योंकि सुरक्षात्मक उपायों के साथ संयोजन में नियंत्रित सोनिकेशन डीएनए किस्में के कतरनी और गर्मी से प्रेरित नुकसान को कम करने की अनुमति देता है।
अल्ट्रासोनिक डीएनए कतरनी के दौरान कम आयाम सेटिंग्स, धड़कन मोड और तापमान नियंत्रण के अलावा, कुछ एजेंटों के उपयोग ने डीएनए क्षरण के खिलाफ महत्वपूर्ण सुरक्षात्मक प्रभाव दिखाया। उदाहरण के लिए, विभिन्न पॉलिमर, पेप्टाइड्स और लिपिड अल्ट्रासोनिकेशन के दौरान प्लास्मिड डीएनए की रक्षा करते हैं।
अल्ट्रासोनिक कतरनी तनाव के खिलाफ प्लास्मिड डीएनए और प्लास्मिड डीएनए / आईएल नैनोकॉम्प्लेक्स की स्थिरता की जांच अगारोज जेल वैद्युतकणसंचलन परख का उपयोग करके की गई थी। प्लास्मिड डीएनए और प्लास्मिड डीएनए/आईएल नैनोकॉम्प्लेक्स दोनों को अलग-अलग समय बिंदुओं के लिए अल्ट्रासोनिक कतरनी तनाव के अधीन किया गया था। प्लास्मिड डीएनए 0, 10, 20, 30 और 40 मिनट के लिए अल्ट्रासोनिक कतरनी तनाव के संपर्क में था। हालांकि, प्लास्मिड डीएनए/आईएल नैनोकॉम्प्लेक्स 0, 10, 20, 30, 40, 60, 90 और 120 मिनट के लिए अल्ट्रासोनिक कतरनी तनाव के संपर्क में थे।
(अध्ययन और चित्र: ©सरकार एट अल।
(2019) ने प्रदर्शित किया कि जब प्लास्मिड डीएनए/आयनिक तरल (पीडीएनए/आईएल) नैनोस्ट्रक्चर को 0, 10, 20, 30, 40, 60, 90 और 120 मिनट के लिए अल्ट्रासोनिक कतरनी तनाव के अधीन किया गया था और व्यावसायिक रूप से उपलब्ध धनायनित जीन वितरण एजेंट लिपोफेक्टामाइन के साथ जटिल किया गया था, फ्लोरोसेंट पॉजिटिव कोशिकाओं का प्रतिशत 80%, 98%, 97%, 85%, 78%, 65%, क्रमशः 65%, और 50% (नीचे चार्ट देखें)। फ्लोरोसेंट पॉजिटिव कोशिकाओं का प्रतिशत तब बढ़ा जब नैनोस्ट्रक्चर को 10 और 20 मिनट के लिए अल्ट्रासोनिक कतरनी तनाव के अधीन किया गया, और उसके बाद धीरे-धीरे कमी आई।
"COS7 कोशिकाओं को प्लास्मिड डीएनए के वितरण पर आयनिक तरल [Bmim][PF6] का प्रभाव"। प्लास्मिड डीएनए/आईएल (आयनिक तरल) नैनोकॉम्प्लेक्स को 120 मिनट तक अल्ट्रासोनिक कतरनी तनाव के अधीन किया गया था और COS7 कोशिकाओं में पहुंचाने से पहले एलए के साथ जटिल किया गया था। डेटा 10 अलग-अलग सूक्ष्म क्षेत्रों में गिने गए GFP पॉजिटिव HeLa कोशिकाओं की औसत संख्या (%) दिखाता है और प्रयोग तीन अलग-अलग दिनों में कई बार किया गया था। (अध्ययन और चार्ट: ©सरकार एट अल।
प्लास्मिड डीएनए अल्ट्रासोनिक विखंडन से पहले एक एजेंट जोड़ने संरक्षित किया जा सकता है: नग्न pDNA के Sonication प्रेरित गिरावट (ए) और पीडीएनए CaCl2 के 1.5 मिमी और 20% (वी / वी) टी butanol (बी) के साथ तैयार
नमूने 120s तक के लिए एक 20W जांच के साथ sonicated थे, के रूप में प्रत्येक लेन के शीर्ष पर संकेत दिया है. लेन एच हाइपरलैडर I ™️ मार्कर से मेल खाती है। ओसी और एससी प्लाज्मिड बैंड का संकेत दिया जाता है।
(अध्ययन और चित्र: ©वू एट अल।
अल्ट्रासोनिक लाइसेट तैयारी
अल्ट्रासोनिक सेल Lysis प्रोटोकॉल
कोशिकाओं के एक समृद्ध नमूने के साथ शुरू करें जो सेल पृथक्करण विधि (जैसे, इम्यूनोमैग्नेटिक सेल पृथक्करण, प्रतिदीप्ति-सक्रिय सेल सॉर्टिंग (एफएसीएस), घनत्व ढाल सेंट्रीफ्यूजेशन, इम्यूनोडेंसिटी सेल अलगाव) के माध्यम से तैयार किया गया था।
सेल के नमूनों को एक लाइसिस बफर की मात्रा दिखानी चाहिए जो प्रयोगात्मक लक्ष्य और जांच-प्रकार अल्ट्रासोनिकेटर के लिए उपयुक्त है।
हाइपोटोनिक बफ़र्स को प्राथमिकता दी जाती है क्योंकि वे अल्ट्रासोनिक सेल लसीका को बढ़ाते हैं। यह महत्वपूर्ण है कि एडिटिव्स और नमक एकाग्रता का उपयोग उचित तरीके से किया जाता है।
अपने अल्ट्रासोनिक lysis डिवाइस का चयन करें: शीशियों के अप्रत्यक्ष sonication के लिए, VialTweeter या CupHorn की सिफारिश की जाती है। मल्टीवेल-प्लेटों के लिए, UIP400MTP आदर्श अल्ट्रासोनिकेटर है। और शास्त्रीय जांच-प्रकार sonication, एक अल्ट्रासोनिक homogenizer के रूप में UP100H या UP200Ht एक माइक्रो-टिप के साथ सबसे उपयुक्त हैं।
जांच-प्रकार sonication के लिए प्रोटोकॉल: अल्ट्रासोनिकेटर जांच को माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब में नमूना मात्रा में रखें और लगभग 10 सेकंड के लिए सोनिकेट करें। डीएनए नमूने के आधार पर, सोनीशन को एक या दो बार दोहराया जा सकता है। आवश्यक अल्ट्रासोनिक ऊर्जा इनपुट (Ws/mL) नमूना चिपचिपाहट और डीएनए प्रकार पर निर्भर करता है। अल्ट्रासोनिकेटर के बर्फ स्नान और धड़कन मोड के माध्यम से ठंडा करने से यह रोकने में मदद मिलती है कि नमूना थर्मल रूप से नीचा है।
अल्ट्रासोनिक लसीका के बाद, नमूना गोली मलबे को अलग करने के लिए centrifuged है (unlysed कोशिकाओं, नाभिक, और unlysed organelles युक्त)
यदि नमूना तुरंत आगे संसाधित नहीं किया जाता है, तो इसकी व्यवहार्यता को बनाए रखने के लिए इसे उचित तापमान पर संग्रहीत किया जा सकता है।
डीएनए विखंडन के लिए अल्ट्रासोनिकेटर
Hielscher Ultrasonics डीएनए, आरएनए, और क्रोमैटिन विखंडन के लिए विभिन्न अल्ट्रासाउंड आधारित प्लेटफार्मों प्रदान करता है। इन विभिन्न प्लेटफार्मों में अल्ट्रासोनिक जांच (सोनोट्रोड्स), कई ट्यूबों या मल्टी-वेल प्लेटों (जैसे, 96-अच्छी प्लेट, माइक्रोटिटर प्लेट्स), सोनोरेएक्टर्स और अल्ट्रासोनिक कपहॉर्न के एक साथ नमूना तैयार करने के लिए अप्रत्यक्ष सोनीशन समाधान शामिल हैं। डीएनए कतरनी के लिए सभी प्लेटफॉर्म आवृत्ति-ट्यून, उच्च-प्रदर्शन अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर द्वारा संचालित होते हैं, जो ठीक नियंत्रणीय होते हैं और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम प्रदान करते हैं।
किसी भी नमूना संख्या और आकार के लिए अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर
Hielscher के बहु नमूना ultrasonicators VialTweeter (अप करने के लिए 10 टेस्ट ट्यूब के लिए) और UIP400MTP (microplates / multiwell प्लेटों के लिए) के साथ, यह तीव्र और ठीक नियंत्रणीय ultrasonication के कारण नमूना प्रसंस्करण समय को कम करने के लिए आसानी से संभव हो जाता है, जबकि वांछित डीएनए टुकड़ा आकार वितरण और उपज प्राप्त करने। अल्ट्रासोनिक डीएनए विखंडन प्लास्मिड तैयारी कदम कुशल, विश्वसनीय और स्केलेबल बनाता है। प्रोटोकॉल लगातार अल्ट्रासाउंड मापदंडों को लागू करके एक से कई नमूनों तक रैखिक रूप से बढ़ाया जा सकता है।
एक से पांच उंगलियों के साथ जांच अल्ट्रासोनिकेटर छोटे नमूना संख्याओं की तैयारी के लिए आदर्श हैं। Hielscher की प्रयोगशाला अल्ट्रासोनिकेटर विभिन्न शक्ति स्तरों के साथ उपलब्ध हैं ताकि आप अपने डीएनए से संबंधित अनुप्रयोग के लिए आदर्श अल्ट्रासोनिक विघटनकारी चुन सकें।
अल्ट्रासोनिक बहु-नमूना तैयारी इकाई VialTweeter अप करने के लिए 10 शीशियों के एक साथ sonication के लिए अनुमति देता है. क्लैंप-ऑन डिवाइस वायलप्रेस के साथ, तीव्र सोनीशन के लिए 4 अतिरिक्त ट्यूबों को सामने की ओर दबाया जा सकता है।
सटीक प्रक्रिया नियंत्रण
सटीक रूप से नियंत्रणीय सोनीशन सेटिंग्स महत्वपूर्ण हैं क्योंकि संपूर्ण सोनिफिकेशन डीएनए, आरएनए और क्रोमैटिन को नष्ट कर सकता है, लेकिन अपर्याप्त अल्ट्रासोनिक कतरनी के परिणामस्वरूप बहुत लंबे डीएनए और क्रोमैटिन टुकड़े होते हैं। Hielscher के डिजिटल अल्ट्रासोनिकेटर आसानी से सटीक sonication पैरामीटर के लिए सेट किया जा सकता है। विशिष्ट सोनीशन सेटिंग्स को उसी प्रक्रिया की तेजी से पुनरावृत्ति के लिए प्रोग्राम की गई सेटिंग के रूप में भी सहेजा जा सकता है।
सभी sonication स्वचालित रूप से प्रोटोकॉल और एक निर्मित एसडी कार्ड पर सीएसवी फ़ाइल के रूप में संग्रहीत कर रहे हैं. यह प्रदर्शन किए गए परीक्षणों के सटीक प्रलेखन की अनुमति देता है और सोनीशन रन को आसानी से संशोधित करना संभव बनाता है।
ब्राउज़र रिमोट कंट्रोल के माध्यम से, सभी डिजिटल अल्ट्रासोनिकेटर को किसी भी मानक ब्राउज़र के माध्यम से संचालित और मॉनिटर किया जा सकता है। अतिरिक्त सॉफ़्टवेयर की स्थापना की आवश्यकता नहीं है, क्योंकि लैन कनेक्शन एक बहुत ही सरल प्लग-एन-प्ले सेटअप है।
अल्ट्रासोनिक डीएनए तैयारी के दौरान उच्चतम उपयोगकर्ता-मित्रता
सभी Hielscher अल्ट्रासोनिकेटर उच्च प्रदर्शन अल्ट्रासाउंड देने के लिए डिज़ाइन किए गए हैं, जबकि एक ही समय में हमेशा बहुत उपयोगकर्ता के अनुकूल और आसानी से संचालित किया जा रहा है। सभी सेटिंग्स एक स्पष्ट मेनू में अच्छी तरह से संरचित हैं, जिसे रंगीन टच-डिस्प्ले या ब्राउज़र रिमोट कंट्रोल के माध्यम से आसानी से एक्सेस किया जा सकता है। प्रोग्राम करने योग्य सेटिंग्स और स्वचालित डेटा रिकॉर्डिंग के साथ स्मार्ट सॉफ्टवेयर विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणामों के लिए इष्टतम सोनीशन सेटिंग्स सुनिश्चित करता है। स्वच्छ और उपयोग में आसान मेनू इंटरफ़ेस Hielscher अल्ट्रासोनिकेटर को उपयोगकर्ता के अनुकूल और कुशल उपकरणों में बदल देता है।
नीचे दी गई तालिका आपको सेल लसीका और डीएनए विखंडन के लिए हमारी प्रयोगशाला अल्ट्रासोनिकेटर की अनुमानित प्रसंस्करण क्षमता का संकेत देती है:
| बैच वॉल्यूम | प्रवाह दर | अनुशंसित उपकरण |
|---|---|---|
| मल्टी-वेल प्लेट्स | n/a | UIP400MTP |
| शीशियों, छोटे बीकर | n/a | अल्ट्रासोनिक CupHorn |
| 10 शीशियों तक | n/a | वायलट्वीटर |
| 1 से 500mL | 10 से 200mL/मिनट | यूपी100एच |
| 10 से 2000mL | 20 से 400mL/मिनट | यूपी200एचटी, UP400St |
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साहित्य/सन्दर्भ
- Mark D. Thompson, Kelly G. Aukema, Dana M. O’Bryan, Stephen D. Rader, Brent W. Murray (2008): Plasmid sonication improves sequencing efficiency and quality in the Beckman Coulter CEQ system. BioTechniques 2008, 45:3, 327-329
- Fykse, Else; Olsen, Jaran; Skogan, Gunnar (2003): Application of sonication to release DNA from Bacillus cereus for quantitative detection by real-time PCR. Journal of microbiological methods 55, 2003. 1-10.
- Ming L. Wu; Sindélia S. Freitas; Gabriel A. Monteiro; Duarte M. F. Prazeres; José A. L. Santos (2009). Stabilization of naked and condensed plasmid DNA against degradation induced by ultrasounds and high-shear vortices. Biotechnology Applied Biochemistry 53(4), 2009.
- Sarker, Satya Ranjan; Ball, Andrew S.; Bhargava, Suresh Kumar; Soni., Sarvesh K. (2019): Evaluation of plasmid DNA stability against ultrasonic shear stress and its in vitro delivery efficiency using ionic liquid [Bmim][PF6]. RSC Advances 9, 2019. 29225-29231.
- Miguel Larguinho, Hugo M. Santos, Gonçalo Doria, H. Scholz, Pedro V. Baptista, José L. Capelo (2010): Development of a fast and efficient ultrasonic-based strategy for DNA fragmentation. Talanta, Volume 81, Issue 3, 2010. 881-886.
- Julie Ann Wyber; Julie Andrews; Antony D’Emanuele (1997): The Use of Sonication for the Efficient Delivery of Plasmid DNA into Cells. Pharmaceutical Research 14(6), 1997. 750–756.
जानने के योग्य तथ्य
प्लास्मिड क्या हैं?
एक प्लास्मिड एक छोटा गोलाकार डीएनए अणु है जो क्रोमोसोमल डीएनए से शारीरिक रूप से अलग होता है और स्वतंत्र रूप से प्रतिकृति करता है। प्लास्मिड अक्सर जीन से जुड़े होते हैं जो किसी जीव के अस्तित्व में योगदान करते हैं और विशिष्ट लाभ प्रदान करते हैं, जैसे एंटीबायोटिक प्रतिरोध। प्लास्मिड आमतौर पर बैक्टीरिया में छोटे गोलाकार, डबल-फंसे डीएनए अणुओं के रूप में पाए जाते हैं; हालांकि, प्लास्मिड कभी-कभी आर्किया और यूकेरियोटिक जीवों में मौजूद होते हैं। प्लास्मिड आणविक जीव विज्ञान, आनुवंशिकी, जैव रसायन और जीवन विज्ञान में महत्वपूर्ण उपकरण हैं। जेनेटिक इंजीनियरिंग में वैक्टर के रूप में जाना जाता है, प्लास्मिड का उपयोग कुछ जीनों को दोहराने या व्यक्त करने के लिए किया जाता है। एक वेक्टर के लक्षित परिवर्तन को वेक्टर डिजाइन कहा जाता है।
सेल अनुसंधान में GFP विश्लेषण
ग्रीन फ्लोरोसेंट प्रोटीन (जीएफपी) शारीरिक प्रक्रियाओं की निगरानी, प्रोटीन स्थानीयकरण की कल्पना करने और विवो में ट्रांसजेनिक अभिव्यक्ति का पता लगाने के लिए एक बहुमुखी जैविक मार्कर है। जीएफपी 488 एनएम लेजर लाइन से उत्साहित हो सकता है और 510 एनएम पर बेहतर पता लगाया जाता है।
Hielscher Ultrasonics से उच्च प्रदर्शन अल्ट्रासोनिक homogenizers बनाती है प्रयोगशाला तक औद्योगिक आकार।