अल्ट्रासोनिकेशन द्वारा प्लास्मिड तैयार करना
अल्ट्रासोनिकेशन प्लास्मिड DNA का खंडन करने की एक विश्वसनीय तकनीक है। प्लास्मिड को क्षति पहुँचाए बिना उसका खंडन करने के लिए सटीक रूप से नियंत्रित किया जा सकने वाला आयाम, स्पंदन मोड और तापमान नियंत्रण अल्ट्रासोनिकेटर की सबसे महत्वपूर्ण विशेषताएँ हैं। इसके अतिरिक्त, कुछ विशिष्ट पदार्थों का उपयोग प्लास्मिड के अपघटन से बचाने में मदद करता है। Hielscher Ultrasonics नियंत्रित प्लास्मिड खंडन के लिए विभिन्न समाधान प्रदान करता है, जिनमें एकल वायल से लेकर अनेक नमूनों का एक साथ सोनिकेशन तथा मल्टी-वेल प्लेटों का सोनिकेशन शामिल है। सफल अल्ट्रासोनिक प्लास्मिड खंडन के बारे में और जानें!
UIP400MTP मल्टी-वेल प्लेटों का सटीक रूप से नियंत्रित अल्ट्रासोनिकेशन संभव बनाता है। UIP400MTP के अनुप्रयोगों में से एक है प्लास्मिड DNA का खंडन करके विशेष रूप से लक्षित लंबाई के खंड प्राप्त करना।
अल्ट्रासोनिकेशन द्वारा प्लास्मिड का अपरूपण
जब DNA नमूनों को अल्ट्रासोनिक तरंगों के संपर्क में लाया जाता है, तो अल्ट्रासोनिक रूप से उत्पन्न कंपन द्रव में ध्वनिक कैविटेशन पैदा करते हैं, जो यांत्रिक बलों के माध्यम से उच्च आणविक भार वाले DNA अणुओं का अपरूपण करता है या उन्हें तोड़ता है। बड़ी मात्रा में DNA के अपरूपण संबंधी प्रयोगों के लिए सोनिकेशन सबसे अधिक उपयोग की जाने वाली विधि है। इन प्रयोगों में क्रोमैटिन इम्यूनोप्रेसिपिटेशन (ChIP) जैसे अनुप्रयोग भी शामिल हैं, जिनमें उच्च विभेदन प्राप्त करने के लिए छोटे आकार के खंड अत्यंत आवश्यक होते हैं। (cf. Tseng et al., 2012)
प्लास्मिड DNA (pDNA), DNA का एक विशिष्ट रूप है, जिसकी पहचान उसके वलयाकार आकार से होती है और जो जीवाणुओं तथा कुछ यूकैरियोटों में पाया जाता है।
सुपरकुंडलित pDNA, प्लास्मिड DNA का वांछित रूप है, क्योंकि यह स्वचालित अनुक्रमण और ट्रांसफेक्शन जैसी आगे की प्रक्रियाओं में सर्वोत्तम परिणाम देता है। अल्ट्रासोनिकेशन, सुपरकुंडलित pDNA सहित pDNA का सफलतापूर्वक खंडन करने के लिए उपयुक्त है।
Thompson et al. (2008) ने प्रदर्शित किया कि प्लास्मिड सोनिकेशन, जो सुपरकुंडलित DNA का खंडन करने के लिए जाना जाता है, अनुक्रम की phred20 रीड लंबाइयों को इस हद तक बेहतर बनाने का एक प्रभावी तरीका है कि वे Beckman Coulter के नियंत्रण टेम्पलेट या एंजाइमों द्वारा रैखिक बनाए गए प्लास्मिडों से उल्लेखनीय रूप से भिन्न नहीं रहतीं।
- सटीक रूप से नियंत्रित किया जा सकता है
- पुनरुत्पादनीय परिणाम
- लक्षित DNA खंड लंबाइयों के अनुसार समायोजित किया जा सकता है
- तापमान नियंत्रण
- किसी भी नमूना आकार के अनुरूप इसका पैमाना बदला जा सकता है
प्लास्मिड वाहकों का उपयोग
प्लास्मिडों का उपयोग अक्सर जीनों की क्लोनिंग, स्थानांतरण और उनमें बदलाव करने के उपकरणों के रूप में किया जाता है। जब इन उद्देश्यों के लिए प्रयोगों में प्लास्मिडों का उपयोग किया जाता है, तो उन्हें वाहक कहा जाता है। DNA खंडों या जीनों को किसी प्लास्मिड वाहक में प्रविष्ट करके एक तथाकथित पुनर्संयोजक प्लास्मिड बनाया जा सकता है। प्लास्मिड वाहकों का उपयोग पुनर्संयोजक DNA को मेज़बान कोशिका में पहुँचाने के साधनों के रूप में किया जाता है और ये आणविक क्लोनिंग का एक प्रमुख घटक हैं।
“विभिन्न जटिल रोगों के उपचार के लिए जीन थेरेपी में संभावित उपयोग को लेकर गैर-विषाणु वाहकों का व्यापक अध्ययन किया जा रहा है। गैर-विषाणु वाहक प्लास्मिड DNA को भौतिक, रासायनिक और एंजाइमी अपघटन से बचाते हैं और DNA अणु को लक्ष्य स्थल तक पहुँचाते हैं। उदाहरण के लिए, धनायनिक लिपोसोम, काइटोसान और अन्य धनावेशित नैनोकण स्थिरवैद्युत अंतःक्रियाओं के माध्यम से प्लास्मिड DNA के साथ संकुल बनाते हैं। हालाँकि, आसानी से बनने वाले धनायनिक लिपोसोम/प्लास्मिड DNA संकुल अपेक्षाकृत बड़े (अर्थात, 300–400 nm) और प्रकृति में विषम होते हैं, जिससे औषधीय अनुप्रयोगों में उनका उपयोग कठिन हो जाता है। बड़े और विषम प्लास्मिड DNA/लिपोसोम, प्लास्मिड DNA/एरोसोल और प्लास्मिड DNA/पेप्टाइड संकुलों को अल्ट्रासोनिकेशन का उपयोग करके छोटे और समरूप कणों में बदला जा सकता है।” (Sarker et al., 2019)
प्लास्मिड वाहकों के उपयोग का एक प्रमुख उदाहरण CRISPR–Cas9 है। CRISPR–Cas9 प्रणाली को सामान्यतः एक बड़े प्लास्मिड या कई छोटे प्लास्मिडों के रूप में कोशिकाओं तक पहुँचाया जाता है, जो एक लक्ष्य अनुक्रम, एक CRISPR गाइड और Cas9 को कूटबद्ध करते हैं।
नैनोअवक्षेपण द्वारा DNA से लदे PLGA नैनोकणों की अल्ट्रासोनिक तैयारी
Jo et al. (2020) ने प्राथमिक अस्थि मज्जा से प्राप्त मैक्रोफेजों में एक मॉडल CRISPR–Cas9 प्लास्मिड पहुँचाने के लिए नैनोकण वाहक बनाने हेतु पॉली(लैक्टिक-को-ग्लाइकोलिक अम्ल) (PLGA) का उपयोग किया। PLGA नैनोकणों के नैनोअवक्षेपण के लिए दो अलग-अलग अंत समूहों (एस्टर और ऐमीन समूहों) वाले PLGA का उपयोग इस उद्देश्य से किया गया कि धनावेशित ऐमीन अंत समूहों और DNA के ऋणावेशित मुख्य ढाँचे के बीच आवेशीय अंतःक्रियाओं के कारण संपुटन दक्षता और लोडिंग बढ़े। एक 50 mL पॉलीप्रोपाइलीन शंक्वाकार अपकेंद्रण ट्यूब में, 100 mg Pluronic F127 को 20 mL ऑटोक्लेव किए गए विआयनीकृत (DI) जल में वॉर्टेक्स मिश्रण द्वारा घोला गया, जिसके बाद अल्ट्रासोनिक बाथ का उपयोग करके 30 min तक हल्का सोनिकेशन किया गया (CupHorn देखें)। एक ऑटोक्लेव की गई चुंबकीय स्टिरिंग बार डाली गई और अन्य विलयन तैयार किए जाने के दौरान इस विलयन को 600 RPM पर 30 min तक मिलाया गया। DNA के असंविशिष्ट अधिशोषण को न्यूनतम रखने के लिए पूरी प्रक्रिया में काँच के प्रयोगशाला पात्रों के स्थान पर प्लास्टिक के प्रयोगशाला पात्रों का उपयोग किया गया। DMF में घुले PLGA (44.48 mg/ ml) और THF में घुले TIPS pentacene (0.667 mg/ml) के विलयन अलग-अलग बनाए गए। PLGA को 30 min तक सोनिकेशन करने से पहले DMF में भीगने के लिए 30 min तक बिना हिलाए छोड़ दिया गया। (पूर्ण प्रोटोकॉल के लिए Jo et al., 2020 देखें)
- DNA का निष्कर्षण
- DNA का संपुटन
- नैनोकण-लेपित DNA का परिक्षेपण
- कोशिकाओं में प्लास्मिड DNA पहुँचाना
नमूनों के अप्रत्यक्ष सोनिकेशन के लिए UP200St CupHorn, जैसे DNA के निष्कर्षण और खंडन के लिए।
सोनिकेशन के दौरान प्लास्मिड DNA की सुरक्षा
प्लास्मिड और सुपरकॉइल्ड प्लास्मिड सहित DNA अपघटन के प्रति अत्यधिक संवेदनशील होते हैं। उपलब्ध सभी खंडन विधियों की कुछ कमियाँ ज्ञात हैं। अल्ट्रासोनिक DNA खंडन पसंदीदा विधियों में से एक है, क्योंकि सुरक्षात्मक उपायों के साथ नियंत्रित सोनिकेशन DNA रज्जुओं को अपरूपण और ऊष्मा से होने वाली क्षति कम करने में सक्षम बनाता है।
अल्ट्रासोनिक DNA अपरूपण के दौरान कम आयाम की सेटिंग्स, स्पंदन मोड और तापमान नियंत्रण के अलावा, कुछ एजेंटों के उपयोग ने DNA अपघटन के विरुद्ध उल्लेखनीय सुरक्षात्मक प्रभाव दिखाया। उदाहरण के लिए, विभिन्न बहुलक, पेप्टाइड और लिपिड अल्ट्रासोनिकेशन के दौरान प्लास्मिड DNA की रक्षा करते हैं।
अल्ट्रासोनिक अपरूपण प्रतिबल के विरुद्ध प्लास्मिड DNA और प्लास्मिड DNA/IL नैनोकॉम्प्लेक्सों की स्थिरता की जाँच ऐगरोज़ जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस परीक्षण द्वारा की गई। प्लास्मिड DNA और प्लास्मिड DNA/IL नैनोकॉम्प्लेक्सों, दोनों को अलग-अलग समयावधियों के लिए अल्ट्रासोनिक अपरूपण प्रतिबल के अधीन रखा गया। प्लास्मिड DNA को 0, 10, 20, 30, और 40 मिनट तक अल्ट्रासोनिक अपरूपण प्रतिबल के अधीन रखा गया। हालाँकि, प्लास्मिड DNA/IL नैनोकॉम्प्लेक्सों को 0, 10, 20, 30, 40, 60, 90, और 120 मिनट तक अल्ट्रासोनिक अपरूपण प्रतिबल के अधीन रखा गया।
(अध्ययन और चित्र: ©Sarker et al., 2019)
Sarker et al. (2019) ने प्रदर्शित किया कि जब प्लास्मिड DNA / आयनिक द्रव (pDNA/IL) नैनोसंरचनाओं को 0, 10, 20, 30, 40, 60, 90, और 120 min तक अल्ट्रासोनिक अपरूपण प्रतिबल के अधीन रखा गया और व्यावसायिक रूप से उपलब्ध धनायनिक जीन वितरण एजेंट लिपोफेक्टामीन के साथ उनके कॉम्प्लेक्स बनाए गए, तो प्रतिदीप्ति-पॉज़िटिव कोशिकाओं का प्रतिशत क्रमशः 80%, 98%, 97%, 85%, 78%, 65%, 65%, और 50% था (नीचे दिया गया चार्ट देखें)। नैनोसंरचनाओं को 10, और 20 min तक अल्ट्रासोनिक अपरूपण प्रतिबल के अधीन रखने पर प्रतिदीप्ति-पॉज़िटिव कोशिकाओं का प्रतिशत बढ़ा और उसके बाद धीरे-धीरे घटा।
आयनिक द्रव [Bmim][PF6] का COS7 कोशिकाओं में प्लास्मिड DNA पहुँचाने पर प्रभाव। प्लास्मिड DNA/IL (आयनिक द्रव) नैनोकॉम्प्लेक्सों को 120 मिनट तक अल्ट्रासोनिक अपरूपण प्रतिबल के अधीन रखा गया और COS7 कोशिकाओं में पहुँचाने से पहले LA के साथ उनके कॉम्प्लेक्स बनाए गए। आँकड़े 10 अलग-अलग सूक्ष्मदर्शीय दृश्य क्षेत्रों में गिनी गई GFP-पॉज़िटिव HeLa कोशिकाओं की औसत संख्या (%) दिखाते हैं और यह प्रयोग तीन अलग-अलग दिनों में कई बार किया गया था। (अध्ययन और चार्ट: ©Sarker et al., 2019)
अल्ट्रासोनिक खंडन से पहले एक एजेंट मिलाकर प्लास्मिड DNA की रक्षा की जा सकती है: नग्न pDNA (A) और 1.5 mM CaCl2 तथा 20 % (v/v) t-butanol के साथ तैयार किए गए pDNA (B) का सोनिकेशन-प्रेरित अपघटन
नमूनों का सोनिकेशन 20W प्रोब से 120s तक किया गया, जैसा कि प्रत्येक लेन के ऊपर दर्शाया गया है। लेन H, Hyperladder I ™️ मार्कर के अनुरूप है। OC और SC प्लास्मिड बैंड दर्शाए गए हैं।
(अध्ययन और चित्र: ©Wu et al., 2009)
अल्ट्रासोनिक लाइसेट तैयारी
अल्ट्रासोनिक कोशिका लयन प्रोटोकॉल
कोशिकाओं के ऐसे समृद्ध नमूने से शुरू करें जिसे किसी कोशिका पृथक्करण विधि (जैसे, इम्यूनोमैग्नेटिक कोशिका पृथक्करण, प्रतिदीप्ति-सक्रिय कोशिका छँटाई (FACS), घनत्व प्रवणता अपकेंद्रीकरण, इम्यूनोडेंसिटी कोशिका पृथक्करण) से तैयार किया गया हो।
कोशिका नमूनों में लयन बफ़र की मात्रा प्रयोग के उद्देश्य और प्रोब-प्रकार के अल्ट्रासोनिकेटर के अनुरूप होनी चाहिए।
हाइपोटोनिक बफ़र को प्राथमिकता दी जाती है क्योंकि वे अल्ट्रासोनिक कोशिका लयन को बढ़ाते हैं। यह महत्वपूर्ण है कि योजकों और लवण की सांद्रता का उचित ढंग से उपयोग किया जाए।
अपना अल्ट्रासोनिक लयन उपकरण चुनें: वायल के अप्रत्यक्ष सोनिकेशन के लिए VialTweeter या CupHorn की अनुशंसा की जाती है। मल्टीवेल प्लेटों के लिए UIP400MTP आदर्श अल्ट्रासोनिकेटर है। और पारंपरिक प्रोब-प्रकार के सोनिकेशन के लिए माइक्रो-टिप वाला UP100H या UP200Ht जैसा अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइज़र सबसे उपयुक्त है।
प्रोब-प्रकार के सोनिकेशन का प्रोटोकॉल: माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब में मौजूद नमूने में अल्ट्रासोनिकेटर प्रोब डालें और लगभग 10 सेकंड तक सोनिकेशन करें। DNA नमूने के आधार पर सोनिकेशन को एक या दो बार और दोहराया जा सकता है। आवश्यक अल्ट्रासोनिक ऊर्जा निवेश (Ws/mL) नमूने की श्यानता और DNA के प्रकार पर निर्भर करता है। बर्फ के स्नान से शीतलन और अल्ट्रासोनिकेटर का स्पंदन मोड नमूने को ऊष्मीय अपघटन से बचाने में मदद करते हैं।
अल्ट्रासोनिक लयन के बाद, पेलेट मलबे (जिसमें बिना लयन वाली कोशिकाएँ, केंद्रक और बिना लयन वाले कोशिकांग होते हैं) को अलग करने के लिए नमूने का अपकेंद्रीकरण किया जाता है।
यदि नमूने को तुरंत आगे संसाधित नहीं किया जाता है, तो उसकी जीवनीयता बनाए रखने के लिए उसे उपयुक्त तापमान पर संग्रहित किया जा सकता है, किया जा सकता है।
DNA खंडन के लिए अल्ट्रासोनिकेटर
Hielscher Ultrasonics, DNA, RNA और क्रोमैटिन के खंडन के लिए विभिन्न अल्ट्रासाउंड-आधारित प्लेटफ़ॉर्म प्रदान करता है। इन विभिन्न प्लेटफ़ॉर्म में अल्ट्रासोनिक प्रोब (सोनोट्रोड), कई ट्यूबों या मल्टी-वेल प्लेटों (जैसे, 96-वेल प्लेटें, माइक्रोटाइटर प्लेटें) में एक साथ नमूना तैयार करने के लिए अप्रत्यक्ष सोनिकेशन समाधान, सोनोरिएक्टर और अल्ट्रासोनिक cuphorns शामिल हैं। DNA के अपरूपण के लिए सभी प्लेटफ़ॉर्म आवृत्ति-समायोजित, उच्च-प्रदर्शन वाले अल्ट्रासोनिक प्रोसेसरों से संचालित होते हैं, जिन्हें सटीक रूप से नियंत्रित किया जा सकता है और जो पुनरुत्पादनीय परिणाम देते हैं।
नमूनों की किसी भी संख्या और आकार के लिए अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर
Hielscher के बहु-नमूना अल्ट्रासोनिकेटर VialTweeter (10 टेस्ट ट्यूबों तक के लिए) और UIP400MTP (माइक्रोप्लेटों/ मल्टीवेल प्लेटों के लिए) से तीव्र और सटीक रूप से नियंत्रित किए जा सकने वाले अल्ट्रासोनिकेशन के कारण नमूना प्रसंस्करण का समय कम करना आसानी से संभव हो जाता है, साथ ही DNA खंडों का वांछित आकार वितरण और प्राप्ति भी हासिल होती है। अल्ट्रासोनिक DNA खंडन प्लास्मिड तैयारी के चरणों को कुशल, विश्वसनीय और मापनीय बनाता है। अल्ट्रासाउंड मापदंडों को स्थिर रखते हुए प्रोटोकॉल को एक नमूने से अनेक नमूनों तक रैखिक रूप से बढ़ाया जा सकता है।
एक से पाँच उँगलियों वाले प्रोब अल्ट्रासोनिकेटर कम संख्या में नमूने तैयार करने के लिए आदर्श हैं। Hielscher के प्रयोगशाला अल्ट्रासोनिकेटर विभिन्न शक्ति स्तरों में उपलब्ध हैं, ताकि आप DNA से संबंधित अपने अनुप्रयोग के लिए आदर्श अल्ट्रासोनिक विघटक चुन सकें।
अल्ट्रासोनिक बहु-नमूना तैयारी इकाई VialTweeter एक साथ 10 वायल तक का सोनिकेशन संभव बनाती है। क्लैंप-ऑन उपकरण VialPress की सहायता से तीव्र सोनिकेशन के लिए 4 अतिरिक्त ट्यूबों तक को सामने के हिस्से से सटाकर दबाया जा सकता है।
सटीक प्रक्रिया नियंत्रण
सटीक रूप से नियंत्रित की जा सकने वाली सोनिकेशन सेटिंग्स अत्यंत महत्वपूर्ण हैं, क्योंकि अत्यधिक सोनिकेशन DNA, RNA और क्रोमैटिन को नष्ट कर सकता है, जबकि अपर्याप्त अल्ट्रासोनिक अपरूपण से DNA और क्रोमैटिन के खंड बहुत लंबे रह जाते हैं। Hielscher के डिजिटल अल्ट्रासोनिकेटर में सोनिकेशन प्राचलों को आसानी से सटीक मानों पर सेट किया जा सकता है। उसी प्रक्रिया को तेज़ी से दोहराने के लिए विशिष्ट सोनिकेशन सेटिंग्स को प्रोग्राम की गई सेटिंग के रूप में भी सहेजा जा सकता है।
सभी सोनिकेशन प्रक्रियाओं का विवरण स्वचालित रूप से दर्ज किया जाता है और अंतर्निर्मित SD-कार्ड पर CSV फ़ाइल के रूप में सहेजा जाता है। इससे किए गए परीक्षणों का सटीक दस्तावेज़ीकरण होता है और सोनिकेशन प्रक्रियाओं के रिकॉर्ड की आसानी से समीक्षा की जा सकती है।
ब्राउज़र रिमोट कंट्रोल के माध्यम से सभी डिजिटल अल्ट्रासोनिकेटर को किसी भी मानक ब्राउज़र से संचालित किया जा सकता है और उनकी निगरानी की जा सकती है। अतिरिक्त सॉफ़्टवेयर इंस्टॉल करने की आवश्यकता नहीं है, क्योंकि LAN कनेक्शन एक बहुत ही सरल प्लग-एंड-प्ले सेटअप है।
अल्ट्रासोनिक DNA तैयारी के दौरान सर्वोच्च उपयोगकर्ता-अनुकूलता
सभी Hielscher अल्ट्रासोनिकेटर उच्च-प्रदर्शन अल्ट्रासाउंड प्रदान करने के लिए डिज़ाइन किए गए हैं और साथ ही हमेशा अत्यंत उपयोगकर्ता-अनुकूल तथा संचालित करने में आसान होते हैं। सभी सेटिंग्स एक स्पष्ट मेनू में सुव्यवस्थित हैं, जिसे रंगीन टच-डिस्प्ले या ब्राउज़र रिमोट कंट्रोल के माध्यम से आसानी से खोला जा सकता है। प्रोग्राम करने योग्य सेटिंग्स और स्वचालित डेटा रिकॉर्डिंग वाला स्मार्ट सॉफ़्टवेयर विश्वसनीय तथा पुनरुत्पादनीय परिणामों के लिए इष्टतम सोनिकेशन सेटिंग्स सुनिश्चित करता है। स्पष्ट और उपयोग में आसान मेनू इंटरफ़ेस Hielscher अल्ट्रासोनिकेटर को उपयोगकर्ता-अनुकूल और कुशल उपकरण बनाता है।
नीचे दी गई तालिका कोशिका लयन और DNA खंडन के लिए हमारे प्रयोगशाला अल्ट्रासोनिकेटर की अनुमानित प्रसंस्करण क्षमता का संकेत देती है:
| बैच आयतन | प्रवाह दर | अनुशंसित उपकरण |
|---|---|---|
| मल्टी-वेल प्लेटें | n/a | UIP400MTP |
| वायल, छोटा बीकर | n/a | Ultrasonic CupHorn |
| 10 वायल तक | n/a | VialTweeter |
| 1 से 500mL | 10 से 200mL/min | UP100H |
| 10 से 2000mL | 20 से 400mL/min | UP200Ht, UP400St |
हमसे संपर्क करें! / हमसे पूछें!
साहित्य / संदर्भ
- Mark D. Thompson, Kelly G. Aukema, Dana M. O’Bryan, Stephen D. Rader, Brent W. Murray (2008): Plasmid sonication improves sequencing efficiency and quality in the Beckman Coulter CEQ system. BioTechniques 2008, 45:3, 327-329
- Fykse, Else; Olsen, Jaran; Skogan, Gunnar (2003): Application of sonication to release DNA from Bacillus cereus for quantitative detection by real-time PCR. Journal of microbiological methods 55, 2003. 1-10.
- Ming L. Wu; Sindélia S. Freitas; Gabriel A. Monteiro; Duarte M. F. Prazeres; José A. L. Santos (2009). Stabilization of naked and condensed plasmid DNA against degradation induced by ultrasounds and high-shear vortices. Biotechnology Applied Biochemistry 53(4), 2009.
- Sarker, Satya Ranjan; Ball, Andrew S.; Bhargava, Suresh Kumar; Soni., Sarvesh K. (2019): Evaluation of plasmid DNA stability against ultrasonic shear stress and its in vitro delivery efficiency using ionic liquid [Bmim][PF6]. RSC Advances 9, 2019. 29225-29231.
- Miguel Larguinho, Hugo M. Santos, Gonçalo Doria, H. Scholz, Pedro V. Baptista, José L. Capelo (2010): Development of a fast and efficient ultrasonic-based strategy for DNA fragmentation. Talanta, Volume 81, Issue 3, 2010. 881-886.
- Julie Ann Wyber; Julie Andrews; Antony D’Emanuele (1997): The Use of Sonication for the Efficient Delivery of Plasmid DNA into Cells. Pharmaceutical Research 14(6), 1997. 750–756.
जानने योग्य तथ्य
प्लास्मिड क्या हैं?
प्लास्मिड एक छोटा वृत्ताकार DNA अणु है, जो गुणसूत्रीय DNA से भौतिक रूप से अलग होता है और स्वतंत्र रूप से प्रतिकृति बनाता है। प्लास्मिड अक्सर ऐसे जीनों से जुड़े होते हैं जो किसी जीव के जीवित रहने में योगदान देते हैं और विशिष्ट लाभ प्रदान करते हैं, जैसे एंटीबायोटिक प्रतिरोध। प्लास्मिड सबसे अधिक बैक्टीरिया में छोटे वृत्ताकार, द्विसूत्री DNA अणुओं के रूप में पाए जाते हैं; हालांकि, प्लास्मिड कभी-कभी आर्किया और यूकैरियोटिक जीवों में भी मौजूद होते हैं। प्लास्मिड आणविक जीवविज्ञान, आनुवंशिकी, जैवरसायन और जीवन विज्ञान में महत्वपूर्ण साधन हैं। आनुवंशिक अभियांत्रिकी में वेक्टर के नाम से जाने जाने वाले प्लास्मिड का उपयोग कुछ विशिष्ट जीनों की प्रतिकृति बनाने या उन्हें अभिव्यक्त करने के लिए किया जाता है। किसी वेक्टर में लक्षित परिवर्तन को वेक्टर डिज़ाइन कहा जाता है।
कोशिका अनुसंधान में GFP विश्लेषण
हरित प्रतिदीप्त प्रोटीन (GFP) शारीरिक प्रक्रियाओं की निगरानी करने, प्रोटीन के स्थानीयकरण को दृश्यमान बनाने और जीवित जीव में ट्रांसजीन की अभिव्यक्ति का पता लगाने के लिए एक बहुउपयोगी जैविक मार्कर है। GFP को 488 nm की लेज़र रेखा से उत्तेजित किया जा सकता है और इसका इष्टतम पता लगाना 510 nm पर होता है।
Hielscher Ultrasonics उच्च-प्रदर्शन अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइज़र का निर्माण करता है, जिनका आकार प्रयोगशाला स्तर से लेकर औद्योगिक स्तर तक होता है।