ASTM E2799-22 -protokolla antimikrobista arviointia varten

Hielscher UIP400MTP on tehokas ja tehokas monikuoppainen levysoitin, joka on suunniteltu virtaviivaistamaan sonikaatiovaihetta ASTM E2799-22 -protokollassa. Tuottamalla tasaista ultraäänienergiaa koko mikrotitterilevylle UIP400MTP varmistaa biokalvojen johdonmukaisen ja luotettavan irtoamisen tapin kansista vahingoittamatta soluja tai vaarantamatta näytteen eheyttä. Sen suuri suorituskyky ja käyttäjäystävällinen toiminta lyhentävät merkittävästi käsittelyaikaa ja parantavat toistettavuutta, mikä tekee siitä ihanteellisen ratkaisun laboratorioihin, jotka suorittavat biofilmien elinkelpoisuusmäärityksiä ja antimikrobisen tehokkuuden testausta.

ASTM E2799

ASTM E2799 on standardoitu testimenetelmä, joka on suunniteltu arvioimaan antimikrobisten aineiden tehoa biofilmejä vastaan, keskittyen erityisesti Pseudomonas aeruginosaan. Biokalvot ovat monimutkaisia mikrobiyhteisöjä, jotka tarttuvat pintoihin ja joilla on lisääntynyt vastustuskyky mikrobilääkehoidoille, mikä tekee niistä merkittävän haasteen terveydenhuollossa, teollisuudessa ja ympäristössä. Tässä menetelmässä käytetään MBEC-määritystä (Minimum Biofilm Eradication Concentration), joka tarjoaa luotettavan ja toistettavan kehyksen desinfiointiaineiden testaamiseksi realistisissa biofilmiolosuhteissa.

Miten sonikaatio edistää ASTM E2799: ää?

Sonikaatiolla on kriittinen rooli ASTM E2799 -protokollassa helpottamalla biokalvojen irrottamista testipinnoista, mikä varmistaa mikrobien elinkelpoisuuden tarkan arvioinnin käsittelyn jälkeen. Käyttämällä kontrolloitua ultraäänienergiaa protokolla saavuttaa tehokkaan ja johdonmukaisen biofilmin häiriön vahingoittamatta soluja, mikä mahdollistaa tarkat ja toistettavat tulokset. Tämä tekee ASTM E2799:stä olennaisen työkalun biofilmitutkimuksen edistämisessä ja tehokkaiden antimikrobisten strategioiden kehittämisessä.

Kuinka suorittaa MBEC-määritys ASTM E2799-22: n mukaisesti

ASTM E2799-22 -protokollassa hahmotellaan vaiheet mikrobilääkkeiden tehon arvioimiseksi biofilmejä vastaan. Kun käytät Hielscher UIP400MTP -mikrotitterilevyn sonikaattoria, protokollaa voidaan mukauttaa sisällyttämään tämä edistynyt sonikaatiomenetelmä biofilmin irtoamiseen. Alla on kuvaus vaiheista, jotka on räätälöity käyttämään mikrolevysonikaattoria UIP400MTP:

1. Biofilmien valmistus
   Valmista steriili 96-kuoppainen mikrotitterilevy, jossa on irrotettavat tapin kannet.
   Kuopat inokuloidaan standardoidulla bakteerisuspensiolla sopivaan kasvualustaan.
   Aseta tapin kansi levylle varmistaen, että tapit ovat täysin upotettuina bakteerisuspensioon.
   Inkuboidaan levyä valvotuissa olosuhteissa (esim. lämpötilassa ja ajassa), jotta tappeihin voi muodostua biokalvoa.
2. Hoito antimikrobisilla aineilla
   Biofilmin muodostumisen jälkeen elatusaine korvataan tuoreella elatusaineella, joka sisältää testimikrobilääkkeitä eri pitoisuuksina.
   Kiinnitä tapin kansi takaisin ja inkuboi testisuunnitelmassa määritellyissä olosuhteissa.
3. Valmistelu biofilmin irtoamiseen
   Käsittelyn jälkeen tapin kansi huuhdellaan upottamalla se steriiliin huuhteluliuokseen antimikrobisten aineiden jäämien ja löyhästi kiinnittyneiden planktonisten solujen poistamiseksi.
4. Biofilmin irtoaminen UIP400MTP Sonicatorilla
   Valmistetaan tuore 96-kuoppainen mikrotiitterilevy, joka sisältää keräyselatusaineen (esim. neutraloivan liemen).
   Irrota biokalvot asettamalla tapin kansi keräysväliainelevyn kuoppiin.
   Aseta levy UIP400MTP sonicatoriin varmistaen, että kansi ja levy on kohdistettu oikein.
   Aseta sonikaattori 70–80%: n amplitudiin ja sonikoidaan 3-4 minuutin ajan syklitilassa, jotta varmistetaan johdonmukainen biofilmin irtoaminen ilman solulyysiä.
5. Biofilmin elinkelpoisuuden arviointi
   Sonikoinnin jälkeen käsittele irrotettuja biofilmisoluja sisältävä talteenottoväliaine käyttämällä tavanomaisia mikrobiologisia tai analyyttisiä tekniikoita, kuten:
   • Pesäkkeitä muodostavien yksiköiden (CFU) lukumäärät: Suoritetaan sarjalaimennukset ja malja agarilla elinkelpoisten solujen laskemiseksi.
   • Optisen tiheyden (OD) mittaukset: Käytä spektrofotometristä analyysiä solun tiheyden arvioimiseksi.
   • Fluoresenssiin perustuvat elinkykymääritykset: Elävien ja kuolleiden solujen kvantifiointi fluoresoivilla väriaineilla.
6. Tietojen analysointi
   Vertaa käsiteltyjen ja käsittelemättömien biofilmien elinkelpoisuustietoja mikrobilääkkeiden tehon määrittämiseksi.
   Lasketaan biofilmin hävittämisen vähimmäispitoisuus (MBEC) elinkelpoisten biofilmisolujen eliminointiin tarvittavan pitoisuuden perusteella.
7. Laadunvalvonta
   Varmista johdonmukaiset sonikaatio-olosuhteet kalibroimalla UIP400MTP säännöllisesti ja varmistamalla, että biofilmin irtoamisprosessi ei johda merkittävään solujen hajoamiseen tai tuhoutumiseen.
   Tulosten validoimiseksi on käytettävä asianmukaisia kontrolleja, kuten käsittelemättömiä biofilmejä ja vain elatusaineessa käytettäviä aihioita.

Nastoille muodostetut biofilmisolut irrotettiin sonikaatiolla (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Saksa, UIP250MTP) 5 minuutin ajan 96-kuoppaisissa levyissä, jotka sisälsivät tuoretta viljelyalustaa solujen talteenottoa varten.
(Kuva ja tutkimus: ©de Oliveira et ai., 2016)

Kun UIP400MTP integroidaan ASTM E2799-22 -työnkulkuun, biofilmin irrotusprosessi optimoidaan yhdenmukaisuutta, tehokkuutta ja suuren suorituskyvyn sovelluksia varten.