Korvaa solujen kaavinta UIP400MTP High-throughput Sonicatorilla

Kiinnittyneiden solulinjojen irrottaminen ja uuttaminen monikuoppalevyiltä multiomiikka-analyysiä varten on päivittäinen tehtävä laboratorioissa. Korkean suorituskyvyn solujen irtoaminen monikuoppalevysonikoijalla korvaa UIP400MTP manuaalisen solujen kaavinnan, mikä johtaa korkeampiin RNA: n, kokonaislipidien ja polaaristen metaboliittien saantoihin. Uusi menetelmä integroi Hielscher UIP400MTP -sonikaattorin Beckman Coulter i7 -nesteenkäsittelytyöasemaan, mikä mahdollistaa solujen suurtehon, toistettavan ja tehokkaan käsittelyn RNA: ta, metaboliittia ja lipidien uuttamista varten. Esitetty menetelmä ylittää perinteiset manuaaliset solujen kaavintamenetelmät saavuttamalla erinomaisen toistettavuuden ja saannon eri solutyypeissä ja koeolosuhteissa.

Virtaviivaista solujen irtoamista Microplate Sonicator -UIP400MTP avulla

Toisiinsa kiinnittyneillä soluviljelyjärjestelmillä on ratkaiseva rooli toksikologisessa ja biolääketieteellisessä tutkimuksessa. Tässä yhteydessä Cruchley-Fuge et al. (2024) käsittelivät merkittävää haastetta PrecisionTox-projektissa, joka keskittyi omiikkateknologioiden hyödyntämiseen kemiallisten vaarojen arvioinnissa. Projektin tavoitteena oli tuhansien erilaisilla kemikaaleilla käsiteltyjen näytteiden korkean suorituskyvyn analyysi. Tämän kysynnän tyydyttämiseksi tutkijat kehittivät automatisoidun työnkulun, joka yhdistää UIP400MTP-sonikaattorin vakiintuneisiin kaksivaiheisiin uuttoprotokolliin nestekromatografia-massaspektrometrian (LC-MS) analyysiä varten. Heidän tutkimuksessaan arvioidaan UIP400MTP Multi-Well Plate Sonicatorin tehokkuutta tarttuvien solujen irrottamisessa verrattuna manuaaliseen kaavintaan ja muihin perinteisiin menetelmiin.

Multiomiikan virtaviivaistaminen: automaattinen tarttuvien solujen uuttaminen UIP400MTP

Laura Cruchley-Fugen tutkijaryhmä Birminghamin yliopistosta käytti kolmea ihmisen solulinjaa: HepG2 (maksasyöpäsolut), HepaRG (erilaistuneet hepatosyyttien kaltaiset solut) ja H295R (lisämunuaisen syöpäsolut). Näitä soluja viljeltiin 24- ja 96-kuoppalevyissä ja altistettiin testikemikaaleille, kuten aflatoksiini B1:lle ja forskoliinille.

Kokeellinen suunnittelu:

• Vaihe 1: UIP400MTP sonicatorin tehoasetusten optimointi ja vertailu manuaaliseen solujen kaavintaan ja äänivesihauteisiin. HepG2-soluja käytettiin RNA:n, metaboliitin ja lipidien talteenoton arviointiin.
• Vaihe 2: UIP400MTP integrointi kaksivaiheiseen uuttotyönkulkuun Beckman Coulter i7 -järjestelmän avulla. Validointi suoritettiin HepaRG- ja H295R-soluilla.

Poiminnan työnkulku: Työnkulku kattoi kemialliset altistukset monikuoppalevyissä, solujen irtoamisen UIP400MTP avulla ja kaksivaiheisen uuttamisen Blighin kautta & Värjäri (B&D) menetelmä. LC-MS-analyysi suoritettiin käyttämällä Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 -testiä lipofiilisille ja polaarisille yhdisteille. The B&D-menetelmä, kultainen standardi lipidien kvantifioinnissa, sisältää kaksivaiheisen uuttamisen metanolilla, kloroformilla ja vedellä, jota seuraa lipidien kvantifiointi kloroformifaasissa.

UIP400MTP mikrolevysonikaattori helpottaa tarttuvien solulinjojen irrottamista monikuoppalevyistä ja Petri-astioista

Tulokset:

• Vaihe 1: Optimaaliset sonikaatio-olosuhteet tunnistettiin 60%: n teholla.
  UIP400MTP tuotti korkeimman RNA-talteenoton poikkeuksellisella toistettavuudella verrattuna manuaaliseen kaavintaan ja äänikylpyihin.
  Polaarinen metaboliittien talteenotto oli yhdenmukaista kaikissa menetelmissä, kun taas lipidien talteenotto oli huomattavasti parempi kuin UIP400MTP.
• Vaihe 2: Validointi HepaRG- ja H295R-soluilla osoitti suurta toistettavuutta lipidomiikka- ja metabolomiikkatiedoissa, kuten tiiviisti klusteroidut PCA-pisteet osoittavat.
  Aflatoksiini B1- ja forskoliinihoidot erotettiin tehokkaasti verrokeista, mikä korosti menetelmän herkkyyttä ja luotettavuutta.

“Hielscher UIP400MTP -sonikaatiolaite tarjoaa laadukkaan ja toistettavan vaihtoehtoisen lähestymistavan manuaalisen solujen kaapimisen "kultastandardiin", mikä johtaa RNA: n, kokonaislipidien ja polaaristen metaboliittien suurempiin saantoihin.” (Cruchley-Fuge et ai., 2024)

korostavat UIP400MTP sonicatorin etuja tarttuvassa solujen käsittelyssä. Korvaamalla manuaalisen kaapimisen tämä menetelmä parantaa toistettavuutta, suorituskykyä ja saantoa, mikä tekee siitä korvaamattoman työkalun PrecisionToxin kaltaisissa suurissa tutkimuksissa. UIP400MTP integrointi automatisoituihin työnkulkuihin paitsi vähentää vaihtelua myös virtaviivaistaa työvoimavaltaisia prosesseja mahdollistaen laadukkaan multiomiikkadatan hankinnan.

(2024) helpottaa ja virtaviivaistaa kiinnittyneiden soluviljelmien käsittelyä multiomiikka-analyysiä varten. UIP400MTP-sonikaattorin integrointi automatisoituihin työnkulkuihin takaa johdonmukaisen ja tehokkaan näytteen valmistelun, mikä tekee siitä ihanteellisen korkean suorituskyvyn toksikologiseen tutkimukseen.
 

Suunnittelu, valmistus ja konsultointi – Laatu valmistettu Saksassa

Hielscher-ultraääniastiat ovat tunnettuja korkeimmista laatu- ja suunnittelustandardeistaan. Kestävyys ja helppokäyttöisyys mahdollistavat ultraäänilaitteidemme sujuvan integroinnin teollisuuslaitoksiin. Hielscher-ultraäänilaitteet käsittelevät helposti karkeita olosuhteita ja vaativia ympäristöjä.

Hielscher Ultrasonics on ISO-sertifioitu yritys, joka painottaa erityisesti korkean suorituskyvyn sonikaattoreita, joissa on huipputeknologia ja käyttäjäystävällisyys. Tietenkin, Hielscher-ultraäänilaitteet ovat CE-yhteensopivia ja täyttävät UL: n, CSA: n ja RoHs: n vaatimukset.