Hielscher Ultrasonics
Rádi s vámi probereme váš postup.
Zavolejte nám: +49 3328 437-420
Napište nám: info@hielscher.com

Ultrazvukové aplikace u viru opičích neštovic

Ultrazvuku je důležitou metodou zpracování pro izolaci viru opičích neštovic (MPXV) z analytických vzorků, pro fragmentaci DNA viru a také při výrobě vakcíny proti opičím neštovicím. Pro přípravu vzorku před diagnostikou a analýzou (PCR, ELISA atd.) se ultrazvuku používá k lýze buněk, aby se uvolnil virus opičích neštovic z vnitřku buňky a? nebo fragmentace DNA. Při výrobě vakcín se aplikace pohybují od přípravy virových částic? DNA, přes zapouzdření do nosičů léčiv až po formulaci inokuly.
Níže naleznete podrobné informace o přípravě vzorku viru opičích neštovic ultrazvukem a také o ultrazvukem asistované výrobě vakcíny MPXV.

 

Co najdete na této stránce:

Žádost o informace




Všimněte si našich Zásady ochrany osobních údajů.




Vysoce výkonné ultrasonicators jsou kritickým zpracovatelským nástrojem při výrobě mnoha vakcín.

Tento systém 2x 1kW ultrasonicators pro nepřetržitý průtok je instalován v zařízení na výrobu vakcín.

Ultrazvuková lýza a fragmentace DNA před polymerázovou řetězovou reakcí (PCR)

Infekce virem opičích neštovic se detekuje testováním amplifikace nukleových kyselin (NAAT) pomocí polymerázové řetězové reakce v reálném čase nebo konvenční polymerázové řetězové reakce (PCR) pro detekci jedinečných sekvencí virové DNA. Vzorek (např. z výměny nosohltanu nebo kožní biopsie) obsahuje virus v buňkách.
Pro analýzu musí být virus uvolněn z buněk a virová DNA musí být fragmentována pro PCR.

Ultrazvuková lýza:

Ultrasonicator UP200Ht s mikrohrotem S26d2 pro ultrazvukovou lýzu biologických vzorkůUltrazvukové narušení? lýza buněk je spolehlivá a účinná metoda izolace virů z buněčných vzorků, a tím preferovaná technika před chemickými činidly, jako je lysozym, proteináza K a různé detergenty, které se alternativně používají k dosažení lýzy buněk a uvolnění DNA.
Použití takových chemických činidel však vyžaduje časově náročnou přípravu vzorku v několika krocích před analýzou PCR, aby se zabránilo inhibici PCR reakce. Vzhledem k tomu, že inhibitory PCR ovlivňují účinnost amplifikace, malé odchylky v množství inhibitorů, které nejsou odstraněny, mohou vést k velkým variacím v amplifikaci produktu PCR (Diaco, 1995).
Výhodou ultrazvuku pro lýzu je, že je žádoucí úplné narušení buněčných struktur a uvolnění DNA bez nutnosti lýzových činidel a časově náročné přípravy vzorku. (srov. Fykse et al., 2003)

Ultrazvuková fragmentace DNA:

Ultrazvuková fragmentace DNA je jednoduchá a spolehlivá, protože produkuje fragmenty DNA laditelné na délku (páry bází, bp). Pomocí ultrazvuku lze DNA účinně fragmentovat na cílovou délku DNA. Přesná kontrola nad ultrazvukovými parametry a sofistikované možnosti chlazení zabraňují degradaci DNA.
Přečtěte si více o ultrazvukové fragmentaci DNA!

 

Video ukazuje ultrazvukový systém přípravy vzorků UIP400MTP, který umožňuje spolehlivou přípravu vzorků jakýchkoli standardních vícejamkových destiček pomocí ultrazvuku s vysokou intenzitou. Mezi typické aplikace UIP400MTP patří buněčná lýza, stříhání DNA, RNA a chromatinu, stejně jako extrakce proteinů.

Ultrasonicator UIP400MTP pro sonikaci vícejamkových desek

Miniatura videa

Žádost o informace




Všimněte si našich Zásady ochrany osobních údajů.




Ultrazvukové aplikace ve vakcíně proti viru opičích neštovic

Ultrazvuku se používá k výrobě vakcín, jako jsou vakcíny proti opičím neštovicím. Vakcíny používané proti viru opičích neštovic jsou v současné době vakcíny s živým virem. Nově vyvinuté vakcíny by mohly využívat jiné platformy, jako je DNA založené na V současné době obsahuje modifikovaný Vaccinia Ankara viurs, oslabený, nereplikující se orthopoxvirus. Obsahuje také Tris (tris-aminomethan) a chlorid sodný. Vakcína může také obsahovat malé množství DNA a proteinu z fibroblastových buněk kuřecích embryí, které se používají k růstu vakcinačního viru, benzonázy a antibiotických sloučenin, jako je gentamicin a ciprofloxacin.

Ultrazvuková homogenizace se používá při výrobě živých atenuovaných virových vakcín, DNA vakcín, vícevalentních DNA koktejlů, mRNA vakcín, rekombinantních proteinových vakcín, viru podobných částicových vakcín atd.

Aplikace ultrazvuku při výrobě vakcín sahají od

  • disperze virových částic a agens
  • Emulgace
  • Inaktivace virů
  • formulace lékových nosičů (NLC, SLN)
  • zapouzdření
  • Rozpouštění činidel
  • Příprava adjuvans
  • Odplyňování? odvzdušňování

 

Můžete najít podrobnější informace o ultrazvukových aplikacích pro lepší výrobu vakcín!

Protokol pro ultrazvukovou izolaci viru opičích neštovic

Výzkumný tým Stittelaara (2005) použil ultrazvukovou lýzu k uvolnění viru opičích neštovic z růstové kultury hostitelských buněk a také z buněk získaných výměnou hrdla od infikovaných primátů.

Příprava vakcíny proti opičím neštovicím:

Viry opičích neštovic byly pěstovány na fibrózních buňkách kuřecích embryí bez specifických patogenů. Po inkubaci po dobu 1 až 2 dnů byla suspenze virových buněk odebrána jedním kolem zmrazení a rozmrazení a poté koncentrována centrifugací. Peleta byla resuspendována a podrobena několika kolům ultrazvukové homogenizace.

Izolace viru opičích neštovic od očkovaných makaků:

Vzorky byly třikrát zmrazeny a sonikovány v ultrazvukovém CupHornu. K inokulaci monovrstev Vero buněk v šestijamkových destičkách byla použita dvě ředění (1:10 a 1:100) v transportním médiu doplněné o 1% fetální hovězí sérum. Po 1 hodině inkubace při 37 °C byly inokuly odstraněny a nahrazeny kultivačním médiem doplněným o 1% fetálního bovinního séra. Monovrstvy byly kultivovány po dobu 5 dnů při 37 °C a obarveny roztokem krystalové violeti.
(srov. Stittelaar et al., 2005)

V tomto videu vám ukážeme ultrazvukový systém o výkonu 2 kilowattů pro inline provoz v proplachovatelné skříni. Hielscher dodává ultrazvuková zařízení téměř do všech průmyslových odvětví, jako je chemický průmysl, farmaceutický, kosmetický, petrochemický proces, stejně jako pro extrakční procesy na bázi rozpouštědel. Tato proplachovatelná skříň z nerezové oceli je určena pro provoz v nebezpečných oblastech. Za tímto účelem může zákazník utěsněnou skříň propláchnout dusíkem nebo čerstvým vzduchem, aby se zabránilo vniknutí hořlavých plynů nebo par do skříně.

2x 1000 W Ultrasonicators v proplachovatelné skříni pro instalaci v nebezpečných oblastech

Miniatura videa

Ultrasonicators pro analýzu virů a výrobu vakcín

Hielscher Ultrasonics široké portfolio produktů nabízí ideální ultrasonikátor pro výzkumné a analytické laboratoře, stejně jako pro průmyslovou výrobu vakcín.
Hielscher Ultrasonics se specializuje na návrh, výrobu a distribuci vysoce výkonných ultrazvukových přístrojů a sono-bioreaktorů pro použití ve výzkumných a analytických laboratořích, jakož i pro implementaci v průmyslové výrobě vakcín (např. Vakcíny, Rozhraní api).
Přesná kontrola nad parametry ultrazvukového procesu pomocí Hielscher Ultrasonics' Inteligentní softwareSonikace může být aplikována na otevřené nádoby, uzavřené kontinuálně míchané reaktory a kontinuální průtokové reaktory. Všechny části ultrazvukových systémů, které přicházejí do styku s kapalným médiem, jsou vyrobeny z nerezové oceli, titanu nebo skla. Autoklávovatelné díly a sanitární armatury zajišťují výrobu za podmínek podmínky farmaceutické kvality.
Automatické zaznamenávání dat: Inteligentní software zaznamenává parametry procesu sonikace automaticky na integrovanou paměťovou kartu SD. Přesné řízení všech procesních parametrů zajišťuje reprodukovatelnost, Standardizace výrobya usnadňuje plnění norem bezpečnosti farmaceutických výrobků.
Hielscher Ultrasonics’ Ultrazvukové procesory jsou vysoce spolehlivé a lze je přesně ovládat. Všechny průmyslové ultrasonicators lze upravit tak, aby poskytovaly plný rozsah od nižších po velmi vysoké amplitudy. Robustnost ultrazvukových systémů Hielscher umožňuje provoz 24 hodin denně, 7 dní v týdnu při velkém zatížení a v náročných prostředích.

Níže uvedená tabulka vám poskytuje přibližný přehled o zpracovatelské kapacitě našich ultrasonicators:

Objem dávky Průtok Doporučená zařízení
vícejamkové? mikrotitrační destičky není k dispozici UIP400MTP
1 až 500 ml 10 až 200 ml? min UP100H
10 až 2000 ml 20 až 400 ml/min UP200Ht, UP400St
0.1 až 20L 0.2 až 4 l/min UIP2000hdT
10 až 100 l 2 až 10 l/min UIP4000hdT
není k dispozici 10 až 100 l? min UIP16000
není k dispozici větší shluk UIP16000

Kontaktujte nás!? Zeptejte se nás!

Vyžádejte si více informací

Použijte prosím níže uvedený formulář a vyžádejte si další informace o ultrazvukových procesorech, aplikacích a ceně. Rádi s vámi prodiskutujeme váš proces a nabídneme vám ultrazvukový systém, který bude vyhovovat vašim požadavkům!









Vezměte prosím na vědomí naše Zásady ochrany osobních údajů.




Ultrazvukové homogenizátory jsou spolehlivé pro stříhání DNA

Ultrazvukové stříhání DNAPřevzato z Jkwchui pod CC-BY-SA.03



Literatura? Reference

  • Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
  • Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
  • J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
  • Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
  • Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.

Fakta, která stojí za to vědět

Virus opičích neštovic

Opičí neštovice (MPV, MPXV nebo hMPXV) jsou druhem dvouvláknového DNA viru, který způsobuje virové zoonotické onemocnění. Toto onemocnění je známé jako infekce opičími neštovicemi a může se vyskytovat u lidí a zvířat. Patří do rodu Orthopoxvirus v čeledi Poxviridae. Virus opičích neštovic je jedním z lidských orthopoxvirů spolu s viry varioly (VARV), kravských neštovic (CPX) a vakcinie (VACV). Orthopoxviry se vyznačují velkými virovými částicemi ve tvaru cihly, které obsahují dvouřetězcový genom DNA přibližně 200 000 bp.

Test ELISA

ELISA je zkratka pro Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay a je značený imunotest, který je považován za zlatý standard imunoanalýz. ELISA je imunologický test, ceněný pro svou vysokou diagnostickou citlivost, používá se k detekci a kvantifikaci molekul, včetně protilátek, antigenů, proteinů, glykoproteinů a hormonů. Princip testu ELISA je založen na interakci antigen-protilátka. Při této interakci antigen-protilátka se specifické protilátky vážou na svůj cílový antigen. Teprve když dojde k interakci, substrát se může vázat na enzym a lze pozorovat následnou přeměnu substrátu, což znamená, že je dosaženo pozitivního výsledku.


Vysoce výkonný ultrazvuk! Sortiment produktů Hielscher pokrývá celé spektrum od kompaktního laboratorního ultrasonicator přes stolní jednotky až po plně průmyslové ultrazvukové systémy.

Hielscher Ultrasonics vyrábí vysoce výkonné ultrazvukové homogenizátory od laboratoř k průmyslová velikost.

Rádi s vámi probereme váš postup.

Let's get in contact.