Ultrazvukové aplikace v MonkeyPox Virus

Ultrazvuku je důležitou metodou zpracování pro izolaci viru opičích neštovic (MPXV) z analytických vzorků, pro fragmentaci DNA viru, stejně jako při výrobě vakcíny proti opičím neštovicím. Pro přípravu vzorků před diagnostikou a analýzou (PCR, ELISA atd.) ultrazvuku se používá k lyzaci buněk za účelem uvolnění viru opičích neštovic z buněčného vnitřku a / nebo fragmentace DNA. Při výrobě vakcín se aplikace pohybují od přípravy virových částic / DNA, zapouzdření v nosičích léčiv a formulaci inokula.
Níže naleznete podrobné informace o ultrazvukové přípravě vzorků viru opičích neštovic, stejně jako ultrazvukem asistované výrobě vakcíny MPXV.

 

Co najdete na této stránce:

Žádost o informace





Vysoce výkonné ultrasonicators jsou kritickým nástrojem zpracování při výrobě mnoha vakcín.

Tento systém 2x 1kW ultrasonicators pro nepřetržitý průtok provozu je instalován v zařízení na výrobu vakcín.

Ultrazvuková lýza a fragmentace DNA před polymerázovou řetězovou reakcí (PCR)

Infekce virem opičích neštovic je detekována amplifikací nukleových kyselin (NAAT) pomocí real-time nebo konvenční polymerázové řetězové reakce (PCR) pro detekci jedinečných sekvencí virové DNA. Vzorek (např. z výměny nosohltanu nebo kožní biopsie) obsahuje virus v buňkách.
Pro analýzu musí být virus uvolněn z buněk a virová DNA musí být fragmentována pro PCR.

Ultrazvuková lýza:

Ultrasonicator UP200Ht s mikrotipem S26d2 pro ultrazvukovou lýzu biologických vzorkůUltrazvukové narušení / lýza buněk je spolehlivá a účinná metoda izolace virů z buněčných vzorků, a tím vhodnější technika před chemickými látkami, jako je lysozym, proteináza K a různé detergenty, které se alternativně používají k dosažení buněčné lýzy a uvolnění DNA.
Použití takových chemických činidel však vyžaduje časově náročnou přípravu vzorku v několika krocích před analýzou PCR, aby se zabránilo inhibici reakce PCR. Vzhledem k tomu, že inhibitory PCR ovlivňují účinnost amplifikace, malé odchylky v množství inhibitorů, které nejsou odstraněny, mohou vést k velkým odchylkám v amplifikaci produktu PCR (Diaco, 1995).
Výhodou ultrazvuku pro lýzu je, že úplné narušení buněčných struktur a uvolnění DNA bez nutnosti lyzujících činidel a časově náročné přípravy vzorků jsou žádoucí. (srov. Fykse et al., 2003)

Ultrazvuková fragmentace DNA:

Ultrazvuková fragmentace DNA je jednoduchá a spolehlivá, protože produkuje fragmenty DNA laditelné na délku (basepairs, bp). Pomocí ultrazvuku může být DNA účinně fragmentována na cílovou délku DNA. Přesná kontrola ultrazvukových parametrů a sofistikované možnosti chlazení zabraňují degradaci DNA.
Přečtěte si více o ultrazvukové fragmentaci DNA!

 

Video ukazuje ultrazvukový systém přípravy vzorků UIP400MTP, který umožňuje spolehlivou přípravu vzorků všech standardních vícejamkových desek pomocí ultrazvuku s vysokou intenzitou. Typické aplikace UIP400MTP zahrnují buněčnou lýzu, DNA, RNA a stříhání chromatinu, stejně jako extrakci proteinů.

Ultrasonicator UIP400MTP pro více-well deskové použití ultrazvuku

Žádost o informace





Ultrazvukové aplikace ve vakcíně proti viru opičích neštovic

Ultrazvuku se používá k výrobě vakcín, jako jsou vakcíny proti opičím neštovicím. Vakcíny používané proti viru opičích neštovic jsou v současné době živými virovými vakcínami. Nově vyvinuté vakcíny mohou používat jiné platformy, jako je DNA-based V současné době obsahuje modifikovaný Vaccinia Ankara viurs, oslabený, nereplikující se orthopoxvirus. Obsahuje také Tris (tris-aminomethan) a chlorid sodný. Vakcína může také obsahovat malé množství DNA a bílkovin z fibroblastových buněk kuřecího embrya, které se používají k růstu vakcinačního viru, benzonázy a antibiotických sloučenin, jako je gentamicin a ciprofloxacin.

Ultrazvuková homogenizace se používá při výrobě živých oslabených virových vakcín, DNA vakcín, multivalentních DNA koktejlů, mRNA vakcín, rekombinantních proteinových vakcín, virových částicových vakcín atd.

Aplikace ultrazvuku při výrobě vakcín se pohybují od

  • disperze virových částic a činidel
  • emulgace
  • deaktivace virů
  • formulace nosiče léčiv (NLC, SLN)
  • zapouzdření
  • rozpouštění činidel
  • příprava adjuvans
  • Odplynění / Odpíchnutí

 

Můžete najít podrobnější informace o ultrazvukových aplikacích pro lepší výrobu vakcín!

Protokol pro ultrazvukovou izolaci viru opičích neštovic

Výzkumný tým Stittelaar (2005) použil ultrazvukovou lýzu k uvolnění viru opičích neštovic z růstové hostitelské buněčné kultury, stejně jako z buněk získaných prostřednictvím výměn hrdla od infikovaných primátů.

Příprava vakcíny proti opičím neštovicím:

Viry opičích neštovic byly pěstovány na fibroblastových buňkách kuřecích embryí bez specifických patogenů. Po inkubaci po dobu 1 až 2 dnů byla suspenze virových buněk odebrána jedním kolem zmrazení a poté koncentrována centrifugací. Peleta byla resuspendována a podrobena několika kolům ultrazvukové homogenizace.

Izolace viru opičích neštovic od očkovaných makaků:

Vzorky byly třikrát zmrazeny a sonikovány v ultrazvukovém CupHornu. K naočkování monovrstev Vero buněk v šestijamkových destičkách byla použita dvě ředění (1:10 a 1:100) v transportním médiu doplněná 1% fetálním bovinním sérem. Po 1 hodině inkubace při teplotě 37 °C byly inokuly odstraněny a nahrazeny kultivačním médiem doplněným 1% fetálním bovinním sérem. Monovrstvy byly kultivovány po dobu 5 dnů při teplotě 37 °C a obarveny krystalifaliálním roztokem.
(srov. Stittelaar et al., 2005)

V tomto videu vám ukážeme 2 kilowattový ultrazvukový systém pro inline provoz v proplachovatelné skříni. Hielscher dodává ultrazvukové zařízení téměř do všech průmyslových odvětví, jako je chemický průmysl, farmaceutický, kosmetický, petrochemické procesy, stejně jako pro extrakční procesy na bázi rozpouštědel. Tato vyjímatelná nerezová skříň je určena pro provoz v prostředí s nebezpečím výbuchu. Za tímto účelem může zákazník uzavřenou skříň vyčistit dusíkem nebo čerstvým vzduchem, aby se zabránilo vniknutí hořlavých plynů nebo par do skříně.

2x 1000 wattů Ultrasonicators v proplachovací skříni pro instalaci v prostředí s nebezpečím výbuchu

Ultrasonicators pro analýzu virů a výrobu vakcín

Hielscher Ultrasonics široké portfolio produktů nabízí ideální ultrasonicator pro výzkumné a analytické laboratoře, stejně jako pro průmyslovou výrobu vakcín.
Hielscher Ultrasonics se specializuje na návrh, výrobu a distribuci vysoce výkonných ultrasonicators a sono-bioreaktorů pro použití ve výzkumných a analytických laboratořích, stejně jako pro implementaci v průmyslové výrobě vakcín (např. vakcíny, Rozhraní api).
Přesná kontrola nad parametry ultrazvukového procesu Hielscher Ultrasonics' inteligentní softwareSonikace může být aplikována na otevřené nádoby, uzavřené kontinuálně míchané reaktory a kontinuální průtokové reaktory. Všechny části ultrazvukových systémů, které se dostanou do kontaktu s kapalným médiem, jsou vyrobeny z nerezové oceli, titanu nebo skla. Autoklávovatelné díly a sanitární armatury zajišťují výrobu pod farmaceutické podmínky.
Automatické nahrávání dat: Inteligentní software zaznamenává parametry procesu sonikace automaticky na integrovanou paměťovou kartu SD. Přesná kontrola všech parametrů procesu zajišťuje reprodukovatelnost, standardizace výrobya usnadňuje plnění norem bezpečnosti farmaceutických výrobků.
Hielscher Ultrazvuk’ ultrazvukové procesory jsou vysoce spolehlivé a mohou být přesně řízeny. Všechny průmyslové ultrasonicators mohou nastavit tak, aby poskytovaly plný rozsah od nižších až po velmi vysoké amplitudy. Robustnost Hielscherových ultrazvukových systémů umožňuje provoz 24/7 při vysokém zatížení a v náročných prostředích.

Níže uvedená tabulka vám dává informaci o přibližné zpracovatelské kapacity našich ultrasonicators:

Hromadná dávka průtok Doporučené Devices
multi-well / mikrotitrační desky není k dispozici UIP400MTP
1 až 500 ml 10 až 200 ml / min UP100H
10 až 2000ml 20 až 400 ml / min Uf200 ः t, UP400St
00,1 až 20L 00,2 až 4 litry / min UIP2000hdT
10 až 100L 2 až 10 l / min UIP4000hdT
není k dispozici 10 až 100L / min UIP16000
není k dispozici větší hrozen UIP16000

Kontaktujte nás! / Zeptej se nás!

Požádejte o další informace

Použijte prosím níže uvedený formulář a vyžádejte si další informace o ultrazvukových procesorech, aplikacích a ceně. Rádi s vámi probereme váš proces a nabídneme vám ultrazvukový systém splňující vaše požadavky!









Uvědomte si prosím naši Zásady ochrany osobních údajů,


Ultrazvukové homogenizátory jsou spolehlivé pro stříhání DNA

Ultrazvukové DNA Stříhání
Upraveno z Jkwchui pod CC-BY-SA.03



Literatura / Reference

  • Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
  • Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidovudine in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
  • J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
  • Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
  • Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.

Fakta Worth Knowing

Virus opičích neštovic

Opičí neštovice (MPV, MPXV nebo hMPXV) je druh dvouvláknového DNA viru, který způsobuje virové zoonotické onemocnění. Toto onemocnění je známé jako infekce opičích neštovic a může se vyskytnout u lidí a zvířat. Patří do rodu Orthopoxvirus v rodině Poxviridae. Virus opičích neštovic je jedním z lidských orthopoxvirů spolu s viry varioly (VARV), kravských neštovic (CPX) a vaccinie (VACV). Orthopoxviry jsou charakterizovány velkými virovými částicemi ve tvaru cihel, které obsahují dvouvláknový genom DNA přibližně 200 000 bp.

Test ELISA

ELISA je zkratka pro Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay a je značená imunoanalýza, která je považována za zlatý standard imunotestů. ELISA je imunologický test, ceněný pro svou vysokou diagnostickou citlivost, se používá k detekci a kvantifikaci molekul, včetně protilátek, antigenů, proteinů, glykoproteinů a hormonů. Princip ELISA je založen na interakci antigen-protilátka. Touto interakcí antigen-protilátka se specifické protilátky vážou na cílový antigen. Pouze v případě interakce se substrát může vázat na enzym a lze pozorovat následnou konverzi substrátu, což znamená, že se získá pozitivní výsledek.


Vysoce výkonný ultrazvuk! Hielscherův sortiment pokrývá celé spektrum od kompaktního laboratorního ultrasonicatoru přes bench-top jednotky až po plně průmyslové ultrazvukové systémy.

Hielscher Ultrasonics vyrábí vysoce výkonné ultrazvukové homogenizátory od Laboratoř na průmyslové velikosti.