Hielscher ultrazvuková technologie

Ultrazvukový vzorek Prep pro testy ELISA

Testy, jako je ELISA, jsou široce používány pro diagnostiku in vitro, detekci bílkovin souvisejících s onemocněním a kontrolu kvality (např. sledování potravinových alergenů). Ultrazvukový příprava vzorku je rychlá, spolehlivá a reprodukovatelná technika pro lyse buněk a izolaci intracelulárních proteinů, DNA, RNA a organel. Hielscher Ultrasonics nabízí různé ultrazvukové roztoky pro pohodlnou přípravu jednotlivých vzorků, více lahviček, stejně jako pro mikrotitrační desky a desky 96-well.

Elisa – Enzymově vázané imunosobentní test

ELISA je zkratka pro enzymatý imunosobentní test a je široce používanou biochemickou analytickou technikou kategorie testů vazebných na ligand. V systému ELISA se do stacionární pevné fáze se speciálními vazebnými vlastnostmi přidá kapalný vzorek. Za normálních okolností se stacionární pevná fáze aplikuje jako povlak na vrtnou desku nebo desku ELISA. Poté se postupně přidávají, inkubují a perou různá tekutá činidla, takže nakonec dojde v konečné kapalině ve studni k optické změně (např. vývoj barev produktem enzymatické reakce). Optická změna umožňuje měřit množství analytu tzv. “čtení". Pro kvantitativní odečty se používá spektrofotometr, fluorometr nebo luminometr pro detekci a měření intenzity přenášeného světla. Citlivost detekce je ovlivněna zesílením signálu během analytických reakcí. Vzhledem k tomu, že enzymové reakce jsou dobře zkoumány a spolehlivé amplifikační procesy, enzymy se používají k vytvoření signálu. Enzymy jsou spojeny s detekčními činidly v pevných poměrech, aby bylo možné přesně kvantifikovat, což vysvětluje také název imunosobentní test "vázané na enzymy".
Vzhledem k tomu, že testy ELISA se provádějí v mikrotitračních deskách / 96-vrtných deskách, je znám jako technika stanovení na bázi desek a používá se například v klinické diagnostice in vitro, výzkumu, vývoji léků atd.
Technika ELISA se často používá jako diagnostický nástroj v medicíně, biotechnologiích, patologii rostlin a je také důležitým měřením kontroly kvality v mnoha průmyslových odvětvích.

Kompletní instalace VialTweeter: VialTweeter sonotroda při ultrazvukové procesor UP200St

Ultrazvukový vzorek prep jednotky VialTweeter se používá k lýze buněk a extrakci bílkovin před testy ELISA

Žádost o informace





Ultrazvukový vzorek Prep před ELISA

Před provedením testu ELISA vyžadují vzorky kroky přípravy, jako je lýza buněk a extrakce intracelulárních proteinů, DNA, RNA atd. Výhodou ultrazvukové buněčné lýzy a izolace bílkovin je jeho vysoká účinnost, spolehlivost a reprodukovatelnost. Všechny tyto faktory jsou důležité pro získání vysoce kvalitních diagnostických a výzkumných výsledků

Výhody ultrazvukové lýzy před ELISA

  • Homogenní ošetření vzorků
  • Kompletní lýza
  • Kompletní extrakce bílkovin (např. protilátky, DNA)
  • Optimální přizpůsobení typu buňky
  • Pro jakoukoli velikost vzorku
  • reprodukovatelné
  • Řízená teplota
  • Automatické datové protokoly na SD kartě

Protokol pro pre-ELISA ultrazvukové buněčné lýzy

Sondy typu insonifier UP200St pro lýzu

  • Pro buněčné kultury: Před ultrazvukovou lýzou se odstřeďuje buňky po dobu 5 minut při 270 x g v mikrocentináře. Supernatant se odstraní aspiračními a resuspendovými buňkami v 30 – 100 μL pufru RIPA. Poté se buněčná peleta inkubuje na ledu po dobu 30 minut.
  • Nyní je vzorek buňky připraven k ultrazvukové lýze:
    Použijte ultrazvuku typu sondy (např. Uf200 ः t se sondou S26d2) nebo ultrazvukovým zařízením s více vzorky (např. vialtweeter pro současnou použití ultrazvuku až 10 lahviček nebo UIP400MPT pro mikrotitrační desky / desky 96-well) v závislosti na množství vzorků, které potřebujete připravit.
    Pro sondu typu použití jednoho vzorku umístěte buňky do 1,5 ml mikrocentrifuge trubek.
  • Před nastavte ultrazvukové trvání, celkový příkon energie, režim cyklu a/ nebo teplotní limity v digitální nabídce ultrasonicator. To zajišťuje vysoce spolehlivou použití ultrazvuku a opakovatelnost.
  • Vsazeno sonotrody a zapněte ultrazvukové zařízení. Jemně přesuňte mikro-špičku ultrazvukové sondy přes vzorek, aby se vzorek sonikoval rovnoměrně.
    Pro většinu buněk, ultrazvuková lýza bude dokončena po 2 -4 cykly 10 sec použití ultrazvuku.
  • Po použití ultrazvuku odstraňte sonotrodu ze vzorku. Vzorky by měly být inkubovány na ledu po dobu 5 minut. Poté se odstřeďujte při 10 000 x g po dobu 20 minut, abyste trosek pelety. Přeneste supernatanty do nové mikrocentrifuge trubice. Analyty označte a uchovávejte při teplotě -20 °C.
  • Ultrazvuková sonotroda může být vyčištěna pořádně otřením alkoholem nebo sonikátem v kádince naplněné alkoholem, např. Všechny ultrazvukové sondy vyrobené z titanu jsou autoklávovatelné.

Pro tkáňové homogenáty:

  • Tkáň opláchněte ledově studeným PBS (0,01 M, pH=7,4), aby se důkladně odstranila přebytečná hemolýzová krev.
  • Vážit tkáň (ledviny, srdce, plíce, slezina atd.) a macerovat na malé kousky, které jsou homogenizovány v PBS. Potřebný objem PBS souvisí s hmotností tkáně. 1g tkáně zpravidla vyžaduje přibližně 9 ml PBS. Doporučuje se přidat nějaký inhibitor proteázy do PBS. (Ripa nebo hypotonický lýzový pufr obsahující koktejl z proteázy a fosfatázy lze použít alternativně.)
  • V závislosti na velikosti tkáně může být krátká léčba vírů (cca 1-2 min. za 15 sekund) užitečná pro předběžnou léčbu tkáně.
  • Namontujte mikro-tip, například S26d2, do svého ultrasonicator. Zkumavka se vzorkem s tkání se vloží do ledové lázně.
  • Sonikujte vzorek s ultrazvukem, například UP200St (80% amplituda) po dobu 1 min. v pulzním režimu (15sec on, 15sec pause). Uchovávejte vzorek v ledové lázni.
  • Homogenáty se pak odstřeďují, aby se získaly specifické pooly (cytosolické, nukleární, mitochondriální nebo lysozomální) za účelem obohacení proteinu pro analýzu. Odstřeďováním vzorku po dobu 5 minut při 5000 ×g se supernatant získá.
Sonotroda MTP-24-8-96 má osm ultrazvukových sond pro použití ultrazvuku jamek mikrotitračních desek.

Sonotroda MTP-24-8-96 má osm ultrazvukových sond pro použití ultrazvuku jamek mikrotitračních desek.

Spolehlivá regulace teploty během použití ultrazvuku

Teplota je klíčovým faktorem ovlivňujícím proces, který je obzvláště důležitý pro zpracování biologických vzorků, např. Jako všechny techniky mechanické přípravy vzorků, použití ultrazvuku vytváří teplo. Nicméně, teplota vzorků může být dobře kontrolována při použití Hielscher Ultrazvuk zařízení. Představujeme vám různé možnosti sledování a řízení teploty vašich vzorků při jejich přípravě pomocí ultrazvuku typu sondy nebo pre-analyticky VialTweeter.

  1. Sledování teploty vzorku: Všechny digitální ultrazvukové procesory Hielscher jsou vybaveny inteligentním softwarem a připojitelným teplotním čidlem. Zapojte teplotní čidlo do ultrazvukového zařízení (např. Uf200 ः t, UP200St, VialTweeter, UIP400MTP) a vložte špičku teplotního čidla do jedné z zkumavek se vzorkem. Prostřednictvím digitálního barevného dotykového displeje můžete nastavit v nabídce ultrazvukového procesoru specifický teplotní rozsah pro použití vzorku. Ultrazvukový systém se automaticky zastaví, když je dosaženo maximální teploty, a pozastaví se, dokud teplota vzorku nesníží na nižší hodnotu nastavené teploty ∆. Pak se sonikace znovu spustí automaticky. Tato inteligentní funkce zabraňuje degradaci vyvolané teplem.
  2. Pokud jde o ultrazvukovou jednotku s více vzorky VialTweeter, titanový blok, který drží vzorkové zkumavky, může být předchlazen. Vložte blok VialTweeter (pouze sonotrodu bez snímače!) do chladničky nebo mrazničky, aby se titanový blok předchladl, pomáhá odložit zvýšení teploty ve vzorku. Pokud je to možné, může být vzorek sám předchlazen.
  3. Použijte ledovou lázeň nebo suchý led, aby se ochladilo během použití ultrazvuku. Umístěte vzorek zkumavky (y) během použití ultrazvuku do ledové lázně. Pro VialTweeter použijte mělkou misku naplněnou suchým ledem a umístěte VialTweeter na suchý led, aby se teplo rychle rozptýlilo.

Zákazníci po celém světě používají Hielscher sondy ultrasonicators, stejně jako multi-vzorek sonication jednotky VialTweeter a UIP400MTP pro jejich každodenní přípravu vzorků práce v biologických, biochemických, lékařských a klinických laboratoří. Inteligentní software a regulace teploty procesorů Hielscher, teplota je spolehlivě řízena a zabraňuje se degradaci vzorku vyvolané teplem. Ultrazvuková příprava vzorků s ultrazvukovými roztoky Hielscher přináší vysoce spolehlivé a reprodukovatelné výsledky!

Kontaktujte nás! / Zeptej se nás!

Požádejte o další informace

Použijte prosím níže uvedený formulář a vyžádejte si další informace o ultrazvukových procesorech, aplikacích a ceně. Rádi s vámi probereme váš proces a nabídneme vám ultrazvukový systém splňující vaše požadavky!









Uvědomte si prosím naši Zásady ochrany osobních údajů,


Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

Hielscher Ultrazvuk vyrábí vysoce výkonné ultrazvukové homogenizátory pro míchání aplikací, disperze, emulgaci a extrakce v laboratoři, pilotním a průmyslovém měřítku.

Literatura / Reference



Fakta Worth Knowing

Typy ELISA

Existuje několik typů ELISA, které se vyznačují svým funkčním principem. Jsou známé jako přímá ELISA, nepřímá ELISA, sendvičová ELISA, konkurenční ELISA a reverzní ELISA. Níže vám představujeme přehled různých typů ELISA a jejich hlavních charakteristik a rozdílů.
ELISA může být provozována ve kvalitativním nebo kvantitativním formátu. Kvalitativní výsledky poskytují jednoduchý pozitivní nebo negativní výsledek, zatímco v kvantitativním testu ELISA se optická hustota (OD) vzorku porovnává se standardní křivkou, což je typicky sériové ředění roztoku známé koncentrace cílové molekuly.

Přímé ELISA

Přímá ELISA je nejjednodušší zkušební forma elisy, kde se používá pouze primární protilátka označená enzymy a nejsou vyžadovány sekundární protilátky. Primární protilátka označená enzymy se váže přímo na cíl, tj. Do každé studny mikrotitrační destičky (obvykle 96-vrtné desky, destičky ELISA) se přidává pufrovaný roztok antigenu, kde se přilne k plastovému povrchu prostřednictvím interakcí náboje. Když enzym spojený s primární protilátkou reaguje se svým substrátem, vytváří viditelný signál, který lze měřit pomocí spektrofotometru, fluorometru nebo luminometru.

Nepřímá ELISA

Pro nepřímý test ELISA se vyžaduje jak primární protilátka, tak sekundární protilátka. Nicméně, na rozdíl od přímé ELISA, ne primární protilátka, ale sekundární protilátka je označena enzymem. Antigen je imobilizován na vrtnou desku a vázán primární protilátkou. Následně se enzymaticky značená sekundární protilátka váže na primární protilátku. Nakonec enzym spojený se sekundární protilátkou reaguje se svým substrátem a vytváří viditelný signál, který lze detekovat.

Sendvič ELISA

Zatímco v přímých a nepřímých testech ELISA je antigen znehybněn a potažen na povrch vrtné desky, v sendviči ELISA je protilátka znehybněna na plastový povrch desky ELISA. Imobilizované protilátky v sendviči ELISA jsou známé jako protilátky zachycování. Kromě protilátek zachycování jsou v sendviči ELISA vyžadovány také takzvané detekční protilátky. Detekční protilátky zahrnují neoznačenou primární detekční protilátku a enzymatenzískovou sekundární detekční protilátku.
Postupně se antigen zájmu váže na protilátku zachycené imobilizované na desku. Poté se primární detekční protilátka váže na antigen. Poté se sekundární detekční protilátka váže na primární detekční protilátku. V posledním reakčním kroku enzym reaguje se svým substrátem, aby vytvořil viditelný signál, který může být opticky detekován.

Konkurenční ELISA

Konkurenční ELISA, také známý jako inhibice ELISA, je nejsložitější typ ELISA, protože zahrnuje použití antigenu inhibitoru. Každý ze tří formátů, přímý, nepřímý a sendvičový ELISA, lze přizpůsobit konkurenčnímu formátu ELISA. V konkurenčním testu ELISA konkuruje antigen inhibitoru a směřující antigen o vazbu na primární protilátku.
Pro konkurenční elisa se neznačená protilátka inkubuje za přítomnosti antigenu, tj. Tyto vázané protilátky / antigen komplexy jsou pak přidány do antigen-potažené dobře.
Deska se umyje, takže jsou odstraněny nespoutané protilátky. Konkurenční ELISA má své jméno vzhledem k tomu, že čím více antigenu je ve vzorku, tím více antigen-protilátky komplexy jsou tvořeny. To znamená, že jsou k dispozici méně nevázaných protilátek, které se váží na antigen ve studni, a antigeny musí soutěžit o dostupnou protilátku. Přidá se sekundární protilátka odpovídající primární protilátce. Tato druhá protilátka je spojena s enzymem. Když je přidán substrát, zbývající enzymy produkují chromogenní nebo fluorescenční signál.
V tomto okamžiku je reakce zastavena, aby se zabránilo případnému nasycení signálu.
Některé konkurenční soupravy ELISA obsahují antigen vázýlý na enzymy namísto protilátky vázané na enzymy. Označený antigen soutěží o místa vazby primárních protilátek s antigenem vzorku (neoznačeným). Čím méně antigenu ve vzorku, tím více označeného antigenu je zachován ve studně a čím silnější je signál.

Obrátit ELISA

Reverzní ELISA nepoužívá dobře desky, ale ponechává antigeny suspendované ve zkušební tekutině. Reverzní test ELISA měří množství vázané protilátky antigenem. Byl vyvinut speciálně pro detekci a vyšetření západonilské virové obálky proteinu a jak je schopen najít virus-specifické protilátky.

Enzymatický marker používaný pro ELISA

Níže uvedený seznam uvádí nejběžnější enzymatické markery používané v testech ELISA, které umožňují měřit výsledky testu po dokončení.

  • OPD (o-fenylenediamin dihydrochlorid) se změní na jantarovou detekci HRP (Křenová peroxidáza), která se často používá jako konjugovaný protein.
  • TMB (3,3′,5,5′-tetramethylbenzidin) při detekci HRP zbarví modře a po přidání kyseliny síry nebo fosforečné zežloutne.
  • ABTS (2,2′-Azinobis [3-ethylbenzothiazololin-6-sulfonová kyselina]-diamonium sůl) zezelená při detekci HRP.
  • PNPP (p-Nitrofenyl fosfát, Diodová sůl) zežloutne při detekci alkalické fosfatázy.