Hielscher ultrazvuková technologie

Lýza buněk BL21 buněk ultrazvuku

BL21 buňky jsou kmen E. coli, který je široce používán ve výzkumných laboratořích, biotechnologie a průmyslové výroby díky své schopnosti vyjádřit proteiny vysoce efektivní. Ultrazvukové narušení buněk, lýza a extrakce bílkovin je běžnou metodou izolovat a sbírat cílené proteiny z buněčného vnitřku buněk BL21. Ultrazvuku zcela narušuje buňku a uvolňuje všechny zachycené proteiny, takže 100% bílkovin je k dispozici.

BL21 Buňky pro expresi proteinu

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsBL21 buňka je chemicky kompetentní E. coli bakteriální kmen vhodný pro transformaci a expresi bílkovin na vysoké úrovni pomocí indukčního systému T7 RNA polymerázy-IPTG. Buňky BL21 umožňují vysoce účinnou expresi proteinů jakéhokoli genu, který je pod kontrolou promotoru T7. Kmen E. coli BL21(DE3) je kmen pro výrobu polymerázy na bázi T7 RNA v kombinaci s vektory exprese založenými na T7 a je široce používán v laboratořích a průmyslu k výrobě rekombinantních proteinů. V BL21(DE3) je exprese genu kódujícího rekombinantní protein přepsána chromozomálně kódovanou T7 RNA polymerázou (T7 RNAP), která přepisuje osmkrát rychleji než konvenční E. coli RNAP. Díky tomu je kmen BL21(DE3) vysoce účinný a mění se na jeden z nejoblíbenějších buněčných systémů pro expresi bílkovin.

Protokol pro ultrazvukovou lýzu a extrakci bílkovin z buněk BL21

Buněčná lýza buněk BL21 se většinou provádí pomocí ultrazvuku v kombinaci s lauroyl sarkosinátem sodným (také známý jako sarkosyl) jako lyzační pufr. Výhody narušení ultrazvukových buněk a extrakce bílkovin spočívají ve spolehlivosti, reprodukovatelnosti, stejně jako v jednoduchém, bezpečném a rychlém provozu ultrasonicators. Níže uvedený protokol poskytuje krok za krokem směr pro ultrazvukové BL21 buněčné lýzy:

Sondy typu insonifier UP200St pro lýzu

Ultrazvukový buněčný disruptor UP200St s mikro-tipem S26d2 pro lýzu a extrakci bílkovin

Žádost o informace





  • Za účelem odstranění proteinů garde byly bakteriální pelety BL21 resuspendovány v 50 ml ledového pufru Ed-EDTA (STE) (sestávající z 10 mM Tris-HCL, pH 8.0, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl doplněný o 100 mM PMSF).
  • Přidá se 500 ul lysozymu (10 mg/ ml) a buňky se inkubují na led po dobu 15 minut.
  • Poté se přidá 500 ul DTT a 7 ml sarkosylu (10% (w/v) zhoděného v STE pufru).
  • Je nezbytné, aby všechny čisticí pufry byly ledově studené a aby vzorky byly neustále udržovány na ledu. Všechny očistné kroky by měly být prováděny v chladné místnosti, pokud je to možné.
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • Pro ultrazvukovou lýzu a extrakci bílkovin jsou vzorky sonicated v VialTweeter MultiSample Ultrasonicator pro 4 x 30 sec při 100% amplitudě s intervalem 2 min mezi jednotlivými sonikacemi. Alternativně se může například ultrazvukový homogenizátor sondy s mikrokapou Uf200 ः t s S26d2 (3 x 30 sec, 2 min. pauza mezi ultrazvukovými cykly, 80% amplituda) může být použit.
  • Pro další čištění musí být vzorky uchovávány na ledu nebo alternativně skladovány při teplotě -80 °C až do dalšího zpracování.

Ultrazvuková lýza pod prescise regulace teploty

Při manipulaci s biologickými vzorky je rozhodující přesná a spolehlivá regulace teploty. Vysoké teploty iniciují tepelně indukovanou degradaci proteinů ve vzorcích.
Jako všechny techniky mechanické přípravy vzorků, použití ultrazvuku vytváří teplo. Nicméně, teplota vzorků může být dobře kontrolována při použití VialTweeter. Představujeme vám různé možnosti sledování a řízení teploty vašich vzorků při jejich přípravě pomocí VialTweeter a VialPress pro analýzu.

  1. Sledování teploty vzorku: Ultrazvukový procesor UP200St, který pohání VialTweeter, je vybaven inteligentním softwarem a připojitelným teplotním čidlem. Zapojte teplotní čidlo do up200St a vložte špičku teplotního čidla do jedné z zkumavek. Pomocí digitálního barevného dotykového displeje můžete nastavit v nabídce UP200St specifický teplotní rozsah pro použití vzorku. Ultrazvukový systém se automaticky zastaví, když je dosaženo maximální teploty, a pozastaví se, dokud teplota vzorku nesníží na nižší hodnotu nastavené teploty ∆. Pak se sonikace znovu spustí automaticky. Tato inteligentní funkce zabraňuje degradaci vyvolané teplem.
  2. Blok VialTweeter lze předchladit. Vložte blok VialTweeter (pouze sonotrodu bez snímače!) do chladničky nebo mrazničky, aby se titanový blok předchladl, pomáhá odložit zvýšení teploty ve vzorku. Pokud je to možné, může být vzorek sám předchlazen.
  3. Při použití ultrazvuku používejte suchý led k ochlazení. Použijte mělkou misku naplněnou suchým ledem a umístěte VialTweeter na led, aby se teplo rychle rozptýlilo.

Zákazníci po celém světě používají VialTweeter a VialPress pro každodenní přípravu vzorků v biologických, biochemických, lékařských a klinických laboratořích. Inteligentní software a regulace teploty procesoru UP200St, teplota je spolehlivě řízena a zabraňuje se degradaci vzorku vyvolané teplem. Ultrazvuková příprava vzorků s VialTweeter a VialPress přináší vysoce spolehlivé a reprodukovatelné výsledky!

Najděte optimální ultrazvukový disruptor pro vaši aplikaci Lysis

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Hielscher Ultrazvuk je dlouholetý zkušený výrobce vysoce výkonných ultrazvukových buněčných disruptorů a homogenizátorů pro laboratoře, stolní a průmyslové systémy. Vaše velikost bakteriální buněčné kultury, váš výzkum nebo výrobní cíl a objem buňky zpracovat za hodinu nebo den jsou základní faktory najít správné ultrazvukové buňky disruptor pro vaši aplikaci.
Hielscher Ultrasonics nabízí různá řešení pro současnou použití ultrazvuku více vzorků (až 10 lahviček s VialTweeter) a masové vzorky (tj. mikrotitrační desky / desky ELISA s UIP400MTP), stejně jako klasický laboratorní ultrazvukový přístroj typu sondy s různými úrovněmi výkonu od 50 do 400 wattů až po plně průmyslové ultrazvukové procesory s až 16 000wattů na jednotku pro komerční narušení buněk a extrakci bílkovin ve velké výrobě. Všechny Hielscher ultrasonicators jsou postaveny pro 24/7/365 provoz při plném zatížení. Robustnost a spolehlivost jsou základními funkcemi našich ultrazvukových zařízení.
Všechny digitální ultrazvukové homogenizátory jsou vybaveny inteligentním softwarem, barevným dotykovým displejem a automatickým protokolem dat, které činí ultrazvukové zařízení do pohodlného pracovního nástroje v laboratoři a výrobních zařízeních.
Dejte nám vědět, jaký druh buněk, jaký objem, s jakou frekvencí a s jakým cílem musíte zpracovat své biologické vzorky. Doporučíme vám nejvhodnější ultrazvukový buněčný disruptor pro vaše procesní požadavky.

Níže uvedená tabulka vám dává údaj o přibližné kapacitě zpracování našich ultrazvukových systémů od kompaktních ručních homogenizátorů a víceodvětvových ultrazvukových procesorů až po průmyslové ultrazvukové procesory pro komerční aplikace:

Hromadná dávka průtok Doporučené Devices
96-well / mikrotitrační desky na UIP400MTP
10 lahviček à 0,5 až 1,5 ml na VialTweeter na UP200St
0.01 až 250 ml 5 až 100 ml/min UP50H
0.01 až 500 ml 10 až 200 ml / min UP100H
10 až 2000ml 20 až 400 ml / min Uf200 ः t, UP400St
00,1 až 20L 00,2 až 4 litry / min UIP2000hdT
10 až 100L 2 až 10 l / min UIP4000hdT
na 10 až 100L / min UIP16000
na větší hrozen UIP16000

Kontaktujte nás! / Zeptej se nás!

Požádejte o další informace

Použijte prosím níže uvedený formulář a vyžádejte si další informace o ultrazvukových procesorech, aplikacích a ceně. Rádi s vámi probereme váš proces a nabídneme vám ultrazvukový systém splňující vaše požadavky!









Uvědomte si prosím naši Zásady ochrany osobních údajů,


Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

ultrazvukovač Uf200 ः t s 2mm mikrotipem S26d2 pro použití ultrazvuku malých vzorků

Literatura / Reference



Fakta Worth Knowing

Bakterie Escherichia Coli

Escherichia coli je typ bakterií, který je neformující spóry, gramnegativní a vyznačuje se formou rovné tyče. Bakterie E.coli jsou přítomny v prostředí, potraviny, a střeva lidí a zvířat. E. coli je obvykle motile pomocí peritrichous flagella, ale tam jsou nonmotile typy, taky. E.coli jsou takzvané fakultativně anaerobní chemoorganotrofní organismy, což znamená, že jsou schopné jak respiračního, tak fermentačního metabolismu. Většina typů E.coli je benigní a plní užitečné funkce v těle, např.
Escherichia coli buňka bakterií takzvaného typu B je zvláštní kategorie kmenů E.coli, které jsou široce používány ve výzkumu k vyšetření mechanismů, jako je bakteriofágová citlivost nebo systémy změny omezení. Kromě toho jsou bakterie E.coli oceňovány jako spolehlivý dříč pro expresi bílkovin v biotechnologických a biologických laboratořích. Například, E.coli se používají k syntéze sloučenin, jako jsou bílkoviny a oligosacharidy v průmyslovém měřítku. Vzhledem ke specifickým vlastnostem, jako je nedostatek proteázy, nízká produkce acetátu na vysoké úrovni glukózy a zvýšená propustnost, E. coli B buňky jsou nejčastěji používány hostitelské buňky pro výrobu geneticky modifikovaných proteinů.

Rekombinantní protein

Rekombinantní proteiny (rProt) získávají značný význam v rozmanitých odvětvích, včetně chemické výroby, farmaceutické, kosmetické, humánní a živočišné medicíny, zemědělství, potravin a průmyslu zpracování odpadů.
Produkce rekombinantního proteinu vyžaduje použití expresního systému. Jako vyjádření buněčných systémů pro výrobu rekombinantní DNA lze použít jak prokaryotické, tak eukaryotické buňky. Zatímco bakteriální buňky jsou nejvíce široce používány pro expresi bílkovin v důsledku faktorů, jako jsou nízké náklady, snadná škálovatelnost a jednoduché mediální podmínky, savčí, kvasinky, řasy, hmyz a bezbuněčné systémy jsou zavedeny alternativy. Typ proteinu, funkční aktivita, stejně jako požadovaný výtěžek exprimovaného proteinu ovlivňují výběr buněčného systému používaného pro expresi bílkovin.
Aby bylo možné exprimovat rekombinantní protein, musí být určitá buňka transfekována vektorem DNA obsahujícím šablonu rekombinantní DNA. Buňky transfected s šablonou jsou pak kultivované. V důsledku buněčného mechanismu buňky přepisují a překládají bílkovinu, která je zajímavá, čímž produkují cílový protein.
Vzhledem k tomu, že exprimované proteiny jsou zachyceny v buněčné matrici, musí být buňka lyzována (narušena a rozbita), aby se uvolnily bílkoviny. V následném kroku čištění je protein oddělen a čištěn.
První rekombinantní protein používaný při léčbě byl rekombinantní lidský inzulín v roce 1982. Dnes, více než 170 typů rekombinantních bílkovin jsou vyráběny po celém světě pro lékařské ošetření. Běžně používané rekombinantní proteiny používané v medicíně jsou například rekombinantní hormony, interferony, interleukiny, růstové faktory, faktory nekrózy nádoru, faktory srážení krve, trombolytické léky a enzymy pro léčbu závažných onemocnění, jako je cukrovka, zakrslost, infarkt myokardu, městnavé srdeční selhání, mozková apoplexie, roztroušená skleróza, neutropenie, trombocytopenie, anémie, hepatitida, revmatoidní artritida, astma, Crohnova choroba a léčba rakoviny. (srov. Phuc V. Pham, v Omics Technologies and Bio-Engineering, 2018)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Vysoce výkonný ultrazvuk! Hielscher je produktová řada pokrývá celé spektrum od kompaktní laboratoře ultrasonicator přes bench-top jednotky na full-průmyslové ultrazvukové systémy.