Lyzační pufry lze efektivně a rychle připravit pomocí ultrazvukových homogenizátorů tkání. Vzhledem k tomu, ultrasonicators jsou snů nástroj pro míchání, rozpouštění a dispergaci, umožňují spolehlivou a uživatelsky přívětivou přípravu lyzačních pufrů.

Ultrazvuková příprava lyzačních pufrů

Ultrazvukové homogenizátory tkání jsou běžným nástrojem pro narušení buněk, lýzu a extrakci, proto jsou k dispozici ve většině laboratoří. Sekundární aplikací pro ultrazvukové sondy typu je příprava lyzačních pufrů.

Lysis pufr je roztok používaný k rozbití (lyse) buněk a uvolnění jejich obsahu pro následnou analýzu. Specifické složení lyzačního pufru se může lišit v závislosti na typu lyzovaných buněk a následné aplikaci. Typický lyzační pufr však obsahuje složky, jako jsou detergenty, soli a inhibitory proteázy. Pufrační soli (např. Tris-HCl) a iontové soli (např. NaCl) se běžně používají k regulaci pH a osmolarity lyzátu.
Pro vytvoření lyzačního pufru se složky smíchají v příslušných koncentracích a pH. Směs se obvykle míchá nebo protřepává, dokud se složky nerozpustí a roztok není homogenní.
Ultrazvuková homogenizace je metoda, která může být použita k vytvoření dobrého lyzačního pufru zlepšením míchání a rozpouštění složek. Při této metodě ultrazvukové vlny – běžně v rozsahu 20 až 30 kHz – se aplikují na směs, která vytváří kavitační bubliny, které se zhroutí a generují intenzivní místní energii, což vede k mechanickému smyku a míchání složek.
Ultrazvukový homogenizační proces může pomoci rozbít všechny shluky nebo agregáty složek a zajistit, aby byl roztok rovnoměrně promíchán. V důsledku toho může takový vylepšený lyzační pufr vést k účinnějšímu narušení buněk a vyšším výtěžkům extrahovaného materiálu. Navíc ultrazvuková homogenizace může zkrátit čas potřebný k vytvoření lyzačního pufru ve srovnání s tradičními metodami míchání nebo třepání.
Celkově je ultrazvuková homogenizace výkonným nástrojem pro zlepšení kvality a účinnosti přípravy lyzačního pufru.

Protokol pro přípravu ultrazvukového lyzačního pufru

Toto je obecný protokol pro vytvoření lyzačního pufru pomocí ultrazvuku typu sondy:
 
Materiály:

• Zvolený detergent (prostředky) (např. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Sůl (soli) dle výběru (např. NaCl, KCl)
• Inhibitory proteáz (např. PMSF, aprotinin, leupeptin)
• ultrazvukovač
• buřič
• Deionizovaná voda
• pH metr nebo pH proužky

 
 
Pokyny krok za krokem:

1. Určete složení lyzačního pufru na základě buněk nebo tkání, které budete lyzovat, a následných aplikací, pro které budete lyzát používat. Připravte zásobní roztoky detergentů, solí a inhibitorů proteáz v požadovaných koncentracích.
2. Zásobní roztoky detergentů, solí a inhibitorů proteáz se přidají do kádinky nebo baňky.
3. Přidejte deionizovanou vodu, aby se objem zvýšil na požadované množství pufru.
4. Smíchejte složky pomocí míchadla, abyste získali roztok předmíchaného mixu.
5. Změřte pH pufru pomocí pH metru nebo pH proužků a upravte pH podle potřeby malým množstvím kyseliny nebo zásady.
6. Použijte sondový ultrasonicator k homogenizaci roztoku premixu tak, aby se získal vysoce homogenní roztok. Proto sonikujte roztok na několik sekund, dokud se roztok důkladně nepromíchá a všechny shluky nebo agregáty se nerozloží. Doba trvání a síla sonikace může být optimalizována na základě specifického lyzačního pufru a ultrazvuku použitého.
7. Po ultrazvuku znovu změřte pH pufru a podle potřeby upravte.
8. Filtrujte pufr přes filtr 0,2 mikronu, abyste odstranili veškeré nečistoty nebo agregáty, které se mohly vytvořit během sonikace.
9. Lyzační pufr je nyní připraven k použití.

 
Poznámka: Přesné složení a pH lyzačního pufru se mohou lišit v závislosti na lyzovaných buňkách nebo tkáních a následných aplikacích. Výše uvedený protokol je obecným vodítkem a může být nutné jej optimalizovat pro konkrétní aplikace.
 
Ultrazvukové homogenizéry se běžně používají pro narušení buněk a extrakci intracelulárních molekul. Proto mnoho aplikací lýzy používá sonikaci sondy nejen pro přípravu lyzačního pufru, ale také pro mechanické narušení buněk a extrakci.
To dělá ultrazvukové tkáňové homogenizátory všestranným nástrojem pro laboratoře a vysvětluje široké využití ultrasonicators v mikrobiologii, biotechnologii a vědě o životě.

Ultrazvukové laboratorní homogenizátory

Hielscher Ultrasonics vyrábí a dodává ultrazvukové homogenizéry a sondy (sonotrody) při různých výkonech a objemech vzorků. To nám umožňuje nabídnout vám nejvhodnější ultrazvukový disruptor pro přípravu vzorků. Zaměřujeme se na nejvyšší kvalitu, vynikající uživatelský komfort a spolehlivé výsledky sonikace. Všechny digitální ultrasonicators funkce inteligentní software, programování a pre-nastavení protokolů sonikace, dálkové ovládání prohlížeče, regulace teploty, osvětlení vzorků, stejně jako automatické nahrávání dat na vestavěné SD karty.

Návrh, výroba a poradenství – Kvalita Vyrobeno v Německu

Hielscher ultrasonicators jsou dobře známé pro jejich nejvyšší kvalitu a designové standardy. Robustnost a snadná obsluha umožňují hladkou integraci našich ultrasonicators do průmyslových zařízení. Drsné podmínky a náročná prostředí jsou snadno zvládnutelné Hielscher ultrasonicators.

Hielscher Ultrasonics je společnost certifikovaná ISO a klade zvláštní důraz na vysoce výkonné ultrasonicators představovat state-of-the-art technologie a uživatelská přívětivost. Samozřejmě, Hielscher ultrasonicators jsou CE kompatibilní a splňují požadavky UL, CSA a RoHs.

The table below gives you an overview of our various lab ultrasonicators: