Pufrové roztoky připravené pomocí ultrazvuku

Lyzační pufry lze efektivně a rychle připravit pomocí ultrazvukových tkáňových homogenizátorů. Protože jsou sonikátory ideálním nástrojem pro míchání, rozpouštění a dispergaci, umožňují spolehlivou a uživatelsky přívětivou přípravu lyzačních pufrů.

Ultrazvuková příprava lyzačních pufrů

Ultrazvukové tkáňové homogenizátory jsou běžným nástrojem pro dezintegraci buněk, lyzi a extrakci, a proto jsou k dispozici ve většině laboratoří. Sekundární aplikací sonikátorů sondového typu je příprava lyzačních pufrů.

Lyzační pufr je roztok, který se používá k rozrušení (lyzi) buněk a uvolnění jejich obsahu pro následnou analýzu. Konkrétní složení lyzačního pufru se může lišit v závislosti na typu lyzovaných buněk a na následné aplikaci. Typický lyzační pufr však obsahuje složky, jako jsou detergenty, soli a inhibitory proteáz. Pufrující soli (např. Tris-HCl) a iontové soli (např. NaCl) se běžně používají k regulaci pH a osmolarity lyzátu.
Při přípravě lyzačního pufru se složky smíchají ve vhodných koncentracích a při vhodném pH. Směs se obvykle míchá nebo protřepává, dokud se složky nerozpustí a roztok není homogenní.
Ultrazvuková homogenizace je metoda, která může pomoci připravit kvalitní lyzační pufr tím, že zlepšuje míchání a rozpouštění složek. Při této metodě se na směs aplikují ultrazvukové vlny – obvykle v rozsahu 20 až 30 kHz –, čímž vznikají kavitační bubliny, které kolabují a generují intenzivní lokální energii, což vede k mechanickému smyku a promíchání složek.
Proces ultrazvukové homogenizace může pomoci rozbít případné shluky nebo agregáty složek a zajistit, aby byl roztok rovnoměrně promíchán. Takto vylepšený lyzační pufr proto může vést k účinnější dezintegraci buněk a vyšším výtěžkům extrahovaného materiálu. Ultrazvuková homogenizace navíc může ve srovnání s tradičními metodami míchání nebo protřepávání zkrátit dobu potřebnou k přípravě lyzačního pufru.
Celkově je ultrazvuková homogenizace účinným nástrojem ke zlepšení kvality a efektivity přípravy lyzačního pufru.

Protokol pro ultrazvukovou přípravu lyzačního pufru

Toto je obecný protokol pro přípravu lyzačního pufru pomocí sonikátoru sondového typu:

Materiály:

• Detergent(y) dle volby (např. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Sůl (soli) dle volby (např. NaCl, KCl)
• Inhibitory proteáz (např. PMSF, aprotinin, leupeptin)
• Sonikátor
• Míchadlo
• Deionizovaná voda
• pH metr nebo pH proužky

 
 
Postup krok za krokem:

1. Určete složení lyzačního pufru podle buněk nebo tkáně, které budete lyzovat, a podle následných aplikací, pro které budete lyzát používat. Připravte zásobní roztoky detergentů, solí a inhibitorů proteáz v požadovaných koncentracích.
2. Přidejte zásobní roztoky detergentů, solí a inhibitorů proteáz do kádinky nebo baňky.
3. Přidejte deionizovanou vodu a doplňte objem na požadované množství pufru.
4. Smíchejte složky pomocí míchadla, abyste získali předběžně promíchaný roztok.
5. Změřte pH pufru pomocí pH metru nebo pH proužků a podle potřeby upravte pH malým množstvím kyseliny nebo zásady.
6. Pomocí sonikátoru sondového typu homogenizujte předběžně promíchaný roztok tak, abyste získali vysoce homogenní roztok. Za tímto účelem roztok sonikujte několik sekund, dokud není důkladně promíchán a dokud nejsou rozbity veškeré shluky nebo agregáty. Dobu trvání a výkon sonikace lze optimalizovat podle konkrétního lyzačního pufru a použitého sonikátoru.
7. Po sonikaci znovu změřte pH pufru a podle potřeby jej upravte.
8. Přefiltrujte pufr přes filtr 0,2 mikronu, abyste odstranili veškeré nečistoty nebo agregáty, které se mohly vytvořit během sonikace.
9. Lyzační pufr je nyní připraven k použití.

Poznámka: Přesné složení a pH lyzačního pufru se mohou lišit v závislosti na lyzovaných buňkách nebo tkáni a na následných aplikacích. Výše uvedený protokol je obecným vodítkem a pro konkrétní aplikace může být nutné jej optimalizovat.

Ultrazvukové homogenizátory se běžně používají k dezintegraci buněk a extrakci intracelulárních molekul. Proto mnoho lyzačních aplikací využívá sonikaci sondového typu nejen k přípravě lyzačního pufru, ale také k mechanické dezintegraci buněk a extrakci.
Díky tomu jsou ultrazvukové tkáňové homogenizátory všestranným nástrojem pro laboratoře, což vysvětluje široké využití sonikátorů v mikrobiologii, biotechnologii a vědách o živé přírodě.

Ultrazvukové laboratorní homogenizátory

Hielscher Ultrasonics vyrábí a dodává ultrazvukové homogenizátory a sondy (sonotrody) s různými výkony a pro různé objemy vzorků. Díky tomu vám můžeme nabídnout nejvhodnější ultrazvukový dezintegrátor pro přípravu vašich vzorků. Zaměřujeme se na nejvyšší kvalitu, vynikající uživatelský komfort a spolehlivé výsledky sonikace. Všechny digitální sonikátory jsou vybaveny inteligentním softwarem, programováním a přednastavením sonikačních protokolů, dálkovým ovládáním přes prohlížeč, regulací teploty, osvětlením vzorku a také automatickým záznamem dat na vestavěnou SD kartu.

Design, výroba a poradenství – kvalita Made in Germany

Sonikátory Hielscher jsou známé svou nejvyšší kvalitou a konstrukčními standardy. Robustnost a snadná obsluha umožňují bezproblémovou integraci našich sonikátorů do průmyslových zařízení. Sonikátory Hielscher snadno zvládají drsné podmínky a náročná prostředí.

Hielscher Ultrasonics je společnost s certifikací ISO a klade zvláštní důraz na vysoce výkonné sonikátory s nejmodernější technologií a uživatelskou přívětivostí. Sonikátory Hielscher samozřejmě vyhovují požadavkům CE a splňují požadavky UL, CSA a RoHs.

Následující tabulka vám poskytuje přehled našich různých laboratorních sonikátorů: