Pufrovací roztoky připravené ultrazvukem

Lýzní pufry lze efektivně a rychle připravit pomocí ultrazvukových tkáňových homogenizátorů. Vzhledem k tomu, že ultrasonikátory jsou vysněným nástrojem pro míchání, rozpouštění a dispergaci, umožňují spolehlivou a uživatelsky přívětivou přípravu lyzačních pufrů.

Ultrazvuková příprava lyzačních pufrů

Ultrazvukové tkáňové homogenizátory jsou běžným nástrojem pro narušení buněk, lýzu a extrakci, proto jsou k dispozici ve většině laboratoří. Sekundární aplikací pro ultrazvukové sondy je příprava lyzačních pufrů.

Lýzový pufr je roztok používaný k rozbití (lýze) buněk a uvolnění jejich obsahu pro následnou analýzu. Specifické složení lyzačního pufru se může lišit v závislosti na typu lyzovaných buněk a následné aplikaci. Typický lytizační pufr však obsahuje složky, jako jsou detergenty, soli a inhibitory proteázy. Pufrovací soli (např. Tris-HCl) a iontové soli (např. NaCl) se běžně používají k regulaci pH a osmolarity lyzátu.
Pro vytvoření lytického pufru se složky smíchají dohromady ve vhodných koncentracích a pH. Směs se obvykle míchá nebo protřepává, dokud se složky nerozpustí a roztok není homogenní.
Ultrazvuková homogenizace je metoda, kterou lze použít k vytvoření dobrého lyzačního pufru zlepšením míchání a rozpouštění složek. Při této metodě ultrazvukové vlny – běžně v rozsahu 20 až 30 kHz – jsou aplikovány na směs, která vytváří kavitační bubliny, které se zhroutí a generují intenzivní místní energii, což vede k mechanickému smyku a míchání složek.
Proces ultrazvukové homogenizace může pomoci rozbít jakékoli shluky nebo agregáty složek a zajistit, aby byl roztok rovnoměrně promíchán. V důsledku toho může takový vylepšený lýzní pufr vést k účinnějšímu narušení buněk a vyšším výtěžkům extrahovaného materiálu. Ultrazvuková homogenizace navíc může zkrátit čas potřebný k vytvoření lyzačního pufru ve srovnání s tradičními metodami míchání nebo protřepávání.
Celkově je ultrazvuková homogenizace výkonným nástrojem pro zlepšení kvality a efektivity přípravy lyzačního pufru.

Protokol pro přípravu ultrazvukového lytického pufru

Toto je obecný protokol pro vytvoření lytického pufru pomocí ultrazvuku typu sondy:
 
Materiály:

• Prací prostředky dle výběru (např. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Sůl (soli) dle výběru (např. NaCl, KCl)
• Inhibitory proteázy (např. PMSF, aprotinin, leupeptin)
• Ultrazvukový přístroj
• Buřič
• Deionizovaná voda
• pH metr nebo pH proužky

 
 
Pokyny krok za krokem:

1. Určete složení lytického pufru na základě buněk nebo tkáně, kterou budete lyzovat, a následných aplikací, pro které budete lyzát používat. Připravte si zásobní roztoky detergentů, solí a inhibitorů proteáz v požadovaných koncentracích.
2. Přidejte zásobní roztoky detergentů, solí a inhibitorů proteáz do kádinky nebo baňky.
3. Přidejte deionizovanou vodu, aby se objem zvýšil na požadované množství pufru.
4. Složky se promíchají pomocí míchadla, aby se získal roztok předem namíchaný.
5. Změřte pH pufru pomocí pH metru nebo pH proužků a podle potřeby upravte pH malým množstvím kyseliny nebo zásady.
6. Použijte ultrazvukový přístroj typu sondy k homogenizaci roztoku před smícháním tak, aby se získal vysoce homogenní roztok. Proto roztok na několik sekund sonikujte, dokud se roztok důkladně nepromíchá a případné shluky nebo agregáty se nerozloží. Doba trvání a síla sonikace mohou být optimalizovány na základě specifického použitého lyzačního pufru a ultrasonicatoru.
7. Po ultrazvuku znovu změřte pH pufru a upravte podle potřeby.
8. Filtrujte pufr přes filtr 0,2 mikronu, abyste odstranili veškeré nečistoty nebo agregáty, které se mohly vytvořit během sonikace.
9. Lytický pufr je nyní připraven k použití.

 
Poznámka: Přesné složení a pH lyzačního pufru se může lišit v závislosti na lyzovaných buňkách nebo tkáni a následných aplikacích. Výše uvedený protokol je obecným vodítkem a může být nutné jej optimalizovat pro konkrétní aplikace.
 
Ultrazvukové homogenizátory se běžně používají pro narušení buněk a extrakci intracelulárních molekul. Proto mnoho aplikací lýzy používá soniku typu sondy nejen pro přípravu lyzačního pufru, ale také pro mechanické narušení a extrakci buněk.
Díky tomu jsou ultrazvukové tkáňové homogenizátory všestranným nástrojem pro laboratoře a vysvětlují široké použití ultrazvukových zařízení v mikrobiologii, biotechnologii a biologických vědách.

Ultrazvukové laboratorní homogenizátory

Hielscher Ultrasonics vyrábí a dodává ultrazvukové homogenizátory a sondy (sonotrody) při různých výkonech a objemech vzorků. To nám umožňuje nabídnout vám nejvhodnější ultrazvukový disruptor pro přípravu vzorků. Zaměřujeme se na nejvyšší kvalitu, vynikající uživatelský komfort a spolehlivé výsledky sonikace. Všechny digitální ultrasonicators jsou vybaveny inteligentním softwarem, programováním a přednastavením sonikačních protokolů, dálkovým ovládáním prohlížeče, regulací teploty, osvětlením vzorku a automatickým záznamem dat na vestavěnou SD kartu.

Projekce, výroba a poradenství – Kvalita Made in Germany

Hielscher ultrasonicators jsou dobře známí pro své nejvyšší standardy kvality a designu. Robustnost a snadná obsluha umožňují hladkou integraci našich ultrazvukových zařízení do průmyslových zařízení. Drsné podmínky a náročná prostředí jsou snadno zvládnutelné Hielscher ultrasonikators.

Hielscher Ultrasonics je společnost certifikovaná ISO a klade zvláštní důraz na vysoce výkonné ultrasonicators s nejmodernější technologií a uživatelskou přívětivostí. Samozřejmě, Hielscher ultrasonicators jsou v souladu s CE a splňují požadavky UL, CSA a RoHs.

Níže uvedená tabulka vám poskytuje přehled o našich různých laboratorních ultrasonicators: