Pufrovací roztoky připravené ultrazvukem
Lýzní pufry lze efektivně a rychle připravit pomocí ultrazvukových tkáňových homogenizátorů. Vzhledem k tomu, že ultrasonikátory jsou vysněným nástrojem pro míchání, rozpouštění a dispergaci, umožňují spolehlivou a uživatelsky přívětivou přípravu lyzačních pufrů.
Ultrazvuková příprava lyzačních pufrů
Ultrazvukové tkáňové homogenizátory jsou běžným nástrojem pro narušení buněk, lýzu a extrakci, proto jsou k dispozici ve většině laboratoří. Sekundární aplikací pro ultrazvukové sondy je příprava lyzačních pufrů.
Lýzový pufr je roztok používaný k rozbití (lýze) buněk a uvolnění jejich obsahu pro následnou analýzu. Specifické složení lyzačního pufru se může lišit v závislosti na typu lyzovaných buněk a následné aplikaci. Typický lytizační pufr však obsahuje složky, jako jsou detergenty, soli a inhibitory proteázy. Pufrovací soli (např. Tris-HCl) a iontové soli (např. NaCl) se běžně používají k regulaci pH a osmolarity lyzátu.
Pro vytvoření lytického pufru se složky smíchají dohromady ve vhodných koncentracích a pH. Směs se obvykle míchá nebo protřepává, dokud se složky nerozpustí a roztok není homogenní.
Ultrazvuková homogenizace je metoda, kterou lze použít k vytvoření dobrého lyzačního pufru zlepšením míchání a rozpouštění složek. Při této metodě ultrazvukové vlny – běžně v rozsahu 20 až 30 kHz – jsou aplikovány na směs, která vytváří kavitační bubliny, které se zhroutí a generují intenzivní místní energii, což vede k mechanickému smyku a míchání složek.
Proces ultrazvukové homogenizace může pomoci rozbít jakékoli shluky nebo agregáty složek a zajistit, aby byl roztok rovnoměrně promíchán. V důsledku toho může takový vylepšený lýzní pufr vést k účinnějšímu narušení buněk a vyšším výtěžkům extrahovaného materiálu. Ultrazvuková homogenizace navíc může zkrátit čas potřebný k vytvoření lyzačního pufru ve srovnání s tradičními metodami míchání nebo protřepávání.
Celkově je ultrazvuková homogenizace výkonným nástrojem pro zlepšení kvality a efektivity přípravy lyzačního pufru.

Ultrazvukový laboratorní homogenizátor UP200Ht je populární ve výzkumných laboratořích pro přípravu vzorků, lýzu, extrakci, fragmentaci a rozpouštění DNA.
Protokol pro přípravu ultrazvukového lytického pufru
Toto je obecný protokol pro vytvoření lytického pufru pomocí ultrazvuku typu sondy:
Materiály:
- Prací prostředky dle výběru (např. Triton X-100, SDS, CHAPS)
- Sůl (soli) dle výběru (např. NaCl, KCl)
- Inhibitory proteázy (např. PMSF, aprotinin, leupeptin)
- Ultrazvukový přístroj
- Buřič
- Deionizovaná voda
- pH metr nebo pH proužky
Pokyny krok za krokem:
- Určete složení lytického pufru na základě buněk nebo tkáně, kterou budete lyzovat, a následných aplikací, pro které budete lyzát používat. Připravte si zásobní roztoky detergentů, solí a inhibitorů proteáz v požadovaných koncentracích.
- Přidejte zásobní roztoky detergentů, solí a inhibitorů proteáz do kádinky nebo baňky.
- Přidejte deionizovanou vodu, aby se objem zvýšil na požadované množství pufru.
- Složky se promíchají pomocí míchadla, aby se získal roztok předem namíchaný.
- Změřte pH pufru pomocí pH metru nebo pH proužků a podle potřeby upravte pH malým množstvím kyseliny nebo zásady.
- Použijte ultrazvukový přístroj typu sondy k homogenizaci roztoku před smícháním tak, aby se získal vysoce homogenní roztok. Proto roztok na několik sekund sonikujte, dokud se roztok důkladně nepromíchá a případné shluky nebo agregáty se nerozloží. Doba trvání a síla sonikace mohou být optimalizovány na základě specifického použitého lyzačního pufru a ultrasonicatoru.
- Po ultrazvuku znovu změřte pH pufru a upravte podle potřeby.
- Filtrujte pufr přes filtr 0,2 mikronu, abyste odstranili veškeré nečistoty nebo agregáty, které se mohly vytvořit během sonikace.
- Lytický pufr je nyní připraven k použití.
Poznámka: Přesné složení a pH lyzačního pufru se může lišit v závislosti na lyzovaných buňkách nebo tkáni a následných aplikacích. Výše uvedený protokol je obecným vodítkem a může být nutné jej optimalizovat pro konkrétní aplikace.
Ultrazvukové homogenizátory se běžně používají pro narušení buněk a extrakci intracelulárních molekul. Proto mnoho aplikací lýzy používá soniku typu sondy nejen pro přípravu lyzačního pufru, ale také pro mechanické narušení a extrakci buněk.
Díky tomu jsou ultrazvukové tkáňové homogenizátory všestranným nástrojem pro laboratoře a vysvětlují široké použití ultrazvukových zařízení v mikrobiologii, biotechnologii a biologických vědách.
Ultrazvukové laboratorní homogenizátory
Hielscher Ultrasonics vyrábí a dodává ultrazvukové homogenizátory a sondy (sonotrody) při různých výkonech a objemech vzorků. To nám umožňuje nabídnout vám nejvhodnější ultrazvukový disruptor pro přípravu vzorků. Zaměřujeme se na nejvyšší kvalitu, vynikající uživatelský komfort a spolehlivé výsledky sonikace. Všechny digitální ultrasonicators jsou vybaveny inteligentním softwarem, programováním a přednastavením sonikačních protokolů, dálkovým ovládáním prohlížeče, regulací teploty, osvětlením vzorku a automatickým záznamem dat na vestavěnou SD kartu.
Projekce, výroba a poradenství – Kvalita Made in Germany
Hielscher ultrasonicators jsou dobře známí pro své nejvyšší standardy kvality a designu. Robustnost a snadná obsluha umožňují hladkou integraci našich ultrazvukových zařízení do průmyslových zařízení. Drsné podmínky a náročná prostředí jsou snadno zvládnutelné Hielscher ultrasonikators.
Hielscher Ultrasonics je společnost certifikovaná ISO a klade zvláštní důraz na vysoce výkonné ultrasonicators s nejmodernější technologií a uživatelskou přívětivostí. Samozřejmě, Hielscher ultrasonicators jsou v souladu s CE a splňují požadavky UL, CSA a RoHs.
Níže uvedená tabulka vám poskytuje přehled o našich různých laboratorních ultrasonicators:
VialTweeter na UP200St | 200W | 26kHz | ultrazvuku malých lahviček, např. Eppendorf 1,5 ml |
UP50H | 50W | 30kHz | Ruční nebo stojanový laboratorní homogenizátor |
UP100H | 100W | 30kHz | Ruční nebo stojanový laboratorní homogenizátor |
UP200Ht | 200W | 26kHz | Ruční nebo stojanový laboratorní homogenizátor |
UP200St | 200W | 26kHz | Stojanový laboratorní homogenizátor |
UP400St | 400W | 24kHz | Stojanový laboratorní homogenizátor |
SonoStep | 200W | 26kHz | Laboratorní reaktor kombinování, ultrazvuku, čerpadlo, míchadlo a nádoba |
GDmini2 řekl: | 200W | 26kHz | Průtočná cela bez kontaminace |
Roh Poháru | 200W | 26kHz | intenzivní ultrazvuková lázeň pro lahvičky a kádinky |
UIP400MTP | 400W | 24kHz | ultrazvukový systém pro vícejamkové destičky / mikrotitrační destičky |

Ultrazvukový CupHorn pro intenzivní sonikaci uzavřených zkumavek a lahviček pro sterilní homogenizaci vzorků.
Kontaktujte nás! / Zeptejte se nás!

Ultrazvukový laboratorní homogenizátor UP400St se běžně používá pro přípravu lyzačního pufru a následné narušení buněk.
Literatura / Reference
- Fernandes, Luz; Santos, Hugo; Nunes-Miranda, J.; Lodeiro, Carlos; Capelo, Jose (2011): Ultrasonic Enhanced Applications in Proteomics Workflows: single probe versus multiprobe. Journal of Integrated OMICS 1, 2011.
- Priego-Capote, Feliciano; Castro, María (2004): Analytical uses of ultrasound – I. Sample preparation. TrAC Trends in Analytical Chemistry 23, 2004. 644-653.
- Welna, Maja; Szymczycha-Madeja, Anna; Pohl, Pawel (2011): Quality of the Trace Element Analysis: Sample Preparation Steps. In: Wide Spectra of Quality Control; InTechOpen 2011.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.

Hielscher Ultrasonics vyrábí vysoce výkonné ultrazvukové homogenizátory od laboratoř k průmyslová velikost.