Příprava vzorku před analýzou může vyžadovat různé předanalytické procesy, jako je homogenizace tkání, lýza, extrakce proteinů, DNA, RNA, organely a další intracelulární látky, rozpouštění a odplynění. VialTweeter je unikátní ultrazvukové zařízení, které připravuje více vzorků zkumavek současně za přesně stejných podmínek. Vzhledem k nepřímé použití ultrazvuku uzavřených zkumavek, křížové kontaminace a ztráty vzorku je zabráněno.

Příprava ultrazvukových vzorků

Ultrazvuku je běžná technika ošetření vzorku s cílem získat vzorek připraven pro analýzy, jako jsou polymery řetězové reakce (PCR), Západní Skvrny, testy, molekulární sekvenování, chromatografie atd. Ultrazvuku je technika široce používán v laboratořích k léčbě vzorků pre-analyticky. Hlavní výhodou použití ultrazvuku je, že pracovní princip ultrazvuku je založen na čistě mechanických silách. Ultrazvuková lýza a narušení buněk je dosaženo sonomechanickými smykovými silami, což dává ultrazvuku výhodu, že rozpouštědla používaná pro extrakci bílkovin mohou být použita i během lýzy. Ultrazvukové buněčné disruptory, jako je VialTweeter rozbít buněčné stěny / membrány a podporovat přenos hmoty mezi vnitřek buněk a rozpouštědla. Tím se analyt (např. DNA, RNA, proteiny, organely atd.) účinně přenáší z buněčné matrice do rozpouštědla. To znamená, že kroky kalení a extrakce překrývají s procesem narušení ultrazvukových buněk, což činí ultrazvukovou lýzu velmi účinnou. Ultrazvukový přípravek vzorku navíc nevyžaduje detergenty a jiná lýzová činidla, která by mohla změnit a zničit strukturu lyzátu a je známá pro následné potíže s čištěním. Další metodou lýzy je enzymatické narušení, které vyžaduje dlouhé inkubační časy a přináší často nereprodukovatelné výsledky. Ultrazvukový příprava vzorku překonává běžné problémy v přípravě vzorku, jako je homogenizace tkání, narušení buněk, lýza, extrakce bílkovin a solubilizace lyzátu. Vzhledem k tomu, že intenzita ultrazvukového ošetření může být přesně řízena a přizpůsobena biologickému vzorku, je zabráněno rozkladu a ztrátě vzorku. Automaticky monitorovaná a řízená teplota vzorku, pulzní režim a doba použití ultrazvuku zajišťují optimální výsledky.
 

VialTweeter je obzvláště vhodný pro laboratorní práci, která vyžaduje současnou přípravu více vzorků za stejných podmínek. VialTweeter je ultrazvuková bloková sonotroda, která pojme až 10 lahviček (např. Vzhledem k tomu, že ultrazvuková energie je spojena stěnami lahviček do média vzorku, lahvičky se během léčby udržují uzavřené. Tím je zcela zabráněno ztrátě vzorku a křížové kontaminaci.

Injekční lahvičky a trubice, které jsou vhodné pro vikádu

VialTweeter je vhodný pro uložení 10 běžných kuželových nebo kulatých trubek, jako je Eppendorf, odstředivka, kryo-lahvičky a různé typy lahviček NUNC, ale otvory lze přizpůsobit na jiné velikosti lahviček a trubek na vyžádání. Prosím, dejte nám vědět, jaký druh zkumavek chcete použít, abychom mohli upravit váš VialTweeter odpovídajícím způsobem. Pro větší zkumavky, jako jsou falconové trubky a další zkušební nádoby, kádinky a nádoby, je VialPress vhodným řešením.

VialTweeter s VialPress

Zatímco samotný VialTweeter se svými otvory 10 trubek je již jedinečným a vysoce funkčním ultrazvukovým zařízením, doplněk VialPress činí VialTweeter ještě univerzálnější a flexibilnější pro provoz. VialPress je příslušenství pro VialTweeter sestávající z svorky-na bar, který umožňuje fixovat větší vzorkové trubky, jako jsou Falcon trubky nebo jiné malé až středně velké zkušební kádinky na přední straně VialTweeter. Obrázek na levé straně ukazuje VialTweeter drží 10 Eppendorf lahvičky v bloku, zatímco VialPress fixuje jednu větší zkumavku dopředu pro použití ultrazvuku. VialPress je schopen pojmout až 5 větších zkumavek pro intenzivní použití ultrazvuku.

Protokoly o přípravě vzorků VialTweeter

VialTweeter je široce používán k sonicate biologických vzorků. Před analýzou musí být připraveny vzorky pro biochemické nebo biofyzikální analýzy a testy, např. VialTweeter spolehlivě splňuje tyto ultrazvukové procesy a poskytuje reprodukovatelné výsledky. Běžnou aplikací VialTweeter je lýza/narušení buněk tkání savců (lidí a zvířat), stejně jako bakteriálních buněk a virových částic. Úspěšně vialtweeter-ošetřené biologické vzorky patří lidské plicní epitelové buňky, hematopoetické kmenové buňky, myeloidní leukemické buňky, Escherichia coli, Bacillus podtilis, Bacillus anthracis, Francisella tularensis, Yersinia pestis, Streptokokové pyogeny, Caulobacter crescentus, Mycoplasma pneumoniae, mykobakterií / Mycobacterium tuberculosis komplex (MTBC) a mnoho dalších bakteriálních, botanických a mikrobiálních buněk.
Níže naleznete několik vybraných protokolů s vialtweeterem.

E.Coli Lysis s vialTweeter pro stanovení glutathionu In-Vivo

Bakterie Escherichia coli kmene MG1655 byly pěstovány v minimálním médiu MOPS v celkovém objemu 200 ml, dokud nebylo dosaženo A600 0,5. Kultura byla rozdělena do 50 ml kultur pro stresovou léčbu. Po 15 minutách inkubace s 0,79 mM allicin, 1 mM diamid nebo dimethylsulfoxid (kontrola) byly buňky sklizeny při 4000 g při 4 °C po dobu 10 minut. Buňky byly před resuspenzemi pelet v 700μl KPE pufru dvakrát promyty KPE pufrem. Pro deproteinaci bylo před narušením buněk ultrazvukem přidáno 300 μl 10% (w /v) kyseliny sulfosalicylové (3 x 1 min; VialTweeter ultrasonicator). Supernatanty byly shromážděny po odstředění (30 min, 13 000 g, 4 °C). Koncentrace kyseliny sulfosalicylové byly sníženy na 1 % přidáním 3 objemů KPE pufru. Měření celkového glutathionu a GSSG byla provedena, jak je popsáno výše. Buněčné koncentrace glutathionu byly vypočteny na základě objemu E. coli buněk 6,7×10-15 litru a hustoty buněk A600 0,5 (ekvivalentní 1×108 buněk ml-1 kultury). Koncentrace GSH byly vypočteny odečtením 2[GSSG] od celkového glutathionu. (Müller et al. 2016)

Fragmentace fibrily alfa-synukleinu pomocí VialTweeter

Sonikátor VialTweeter je široce používán pro spolehlivou a účinnou fragmentaci fibril a stuh alfa-synucleinu. Klikněte zde pro podrobné popisy, protokoly a odkazy na fragmentaci alfa-synucleinu pomocí VialTweeter!

Lýza buněk s VialTweeter před grafitové pece atomové absorpční spektrometrie

Bacillus subtilis 168 (trpC2) byly vystaveny 15 min antibiotik, pak byly buňky sklizeny při 3320 x g, pětkrát promyty 100 mM Tris/1 mM EDTA, pH 7,5, resuspendovány v 10 mM Tris, pH 7,5 a narušeny ultrazvuku v hielscherském vialtweeterovém přístroji. (Wenzel et al. 2014)

Příprava vzorku VialTweeter před hmotnostní spektrometrií

Lyofilizované buněčné pelety lidských CD34􏰀 hematopoetické kmenové/progenitorové buňky byly resuspendovány v 10μ􏰇l (200μl pro hromadnou přípravu HEK293 pro peptidovou ředění) 8 M 1 0 močovina v 100 mM uhličitanu vodíku alysed pomáhal sofikování s Hielscher VialTweeter na amplitudu 60%, cyklus 60% a trvání 20s po dobu třikrát s mezipřistání chlazení na ledu. (Amon et al. 2019)

Protokoly o přípravě vzorků pomocí nástroje VialPress

Čerstvý hlávkový salát (Lactuca sativa) byl homogenizován v pufru HEPES o velikosti 0,5 M (pH 8, upraveno koh) v poměru 1 g rostlin (čerstvá hmotnost) k 200, 100, 50 nebo 20 ml pufru. Poměr hmotnosti rostliny k objemu tlumivého roztoku se lišil, aby se celkový homogenní objem udržel mezi 3,5 a 12 ml. Poměr hmotnosti rostliny k objemu tlumivého roztoku se lišil, aby se udržel celkový homogenní objem mezi 3,5 a 12 ml, což umožnilo homogenizaci sondou. Homogenáty pak podstoupily nepřímou ultrazvuku pomocí UP200St s VialTweeter vybavený 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, Německo) po dobu 3 minut (80% puls a 100% výkon). Používáním tohoto přístroje se zabránilo kontaminaci. (Laughton et al. 2019)

Spolehlivá regulace teploty během sonikace s VialTweeter

Teplota je klíčovým faktorem ovlivňujícím proces, který je obzvláště důležitý pro léčbu biologických vzorků. Jako všechny techniky mechanické přípravy vzorků, použití ultrazvuku vytváří teplo. Nicméně, teplota vzorků může být dobře kontrolována při použití VialTweeter. Představujeme vám různé možnosti sledování a řízení teploty vašich vzorků při jejich přípravě pomocí VialTweeter a VialPress pro analýzu.

1. Sledování teploty vzorku: Ultrazvukový procesor UP200St, který pohání VialTweeter, je vybaven inteligentním softwarem a připojitelným teplotním čidlem. Zapojte teplotní čidlo do up200St a vložte špičku teplotního čidla do jedné z zkumavek. Pomocí digitálního barevného dotykového displeje můžete nastavit v nabídce UP200St specifický teplotní rozsah pro použití vzorku. Ultrazvukový systém se automaticky zastaví, když je dosaženo maximální teploty, a pozastaví se, dokud teplota vzorku nesníží na nižší hodnotu nastavené teploty ∆. Pak se sonikace znovu spustí automaticky. Tato inteligentní funkce zabraňuje degradaci vyvolané teplem.
2. Blok VialTweeter lze předchladit. Vložte blok VialTweeter (pouze sonotrodu bez snímače!) do chladničky nebo mrazničky, aby se titanový blok předchladl, pomáhá odložit zvýšení teploty ve vzorku. Pokud je to možné, může být vzorek sám předchlazen.
3. Při použití ultrazvuku používejte suchý led k ochlazení. Použijte mělkou misku naplněnou suchým ledem a umístěte VialTweeter na suchý led, aby se teplo rychle rozptýlilo.

Zákazníci po celém světě používají VialTweeter a VialPress pro každodenní přípravu vzorků v biologických, biochemických, lékařských a klinických laboratořích. Inteligentní software a regulace teploty procesoru UP200St, teplota je spolehlivě řízena a zabraňuje se degradaci vzorku vyvolané teplem. Ultrazvuková příprava vzorků s VialTweeter a VialPress přináší vysoce spolehlivé a reprodukovatelné výsledky!

Technické detaily vialtweeter

VialTweeter je blok sonotroda vyrobená z titanu, který může pojmout až 10 lahviček v otvorech uvnitř bloku. Kromě toho lze pomocí VialPress upnout až 5 větších zkumavek na přední stranu VialTweeter. VialTweeter je navržen tak, že ultrazvuková energie je rovnoměrně rozložena do každé vložené lahvičky, aby byly zajištěny spolehlivé a jednotné výsledky použití ultrazvuku. Malý čep upravuje VialTweeter sonotrodu na nerovné zemi a srovnejte zkumavky svisle.

Výhody VialTweeter v kostce

• Intenzivní použití ultrazvuku až 10 lahviček současně
• Nepřímá sonikace ve vysokém ultrazvukové intenzitě přes stěnu plavidla do vzorku
• Nepřímé sonikace zabrání křížové kontaminaci a vzorku ztrátu
• Reprodukovatelné výsledky z důvodu nastavitelné a kontrolovatelné amplitudy sonikace
• VialPress umožňuje sonanovat větší trubice
• Nastavitelná amplituda od 20 do 100%
• Režim nastavitelný puls od 0 do 100%
• autoklávovatelná

VialTweeter je poháněn UP200St, 200 wattů výkonný ultrazvukový procesor. UP200St je vybaven inteligentním softwarem, který umožňuje přesnou kontrolu nad všemi důležitými parametry ultrazvukového procesu, jako je amplituda, doba použití ultrazvuku, pulzace a teplota. Díky tomu je VialTweeter spolehlivým nástrojem pro úspěšné reprodukovatelné výsledky procesu v biologických a biochemických laboratořích.
Amplituda může být nastavena mezi 20 a 100% a umožňuje tak přizpůsobit ultrazvukovou intenzitu vzorku. Například stříhání a fragmentace DNA a RNA vyžaduje mírnější amplitudu, aby se zabránilo produkci příliš malých fragmentů DNA, tkáňová homogenizace myšího mozku potřebuje vysokou intenzitu sonikace. Vyberte si ideální amplitudu, intenzitu a trvání ultrazvuku prostřednictvím inteligentní a intuitivní nabídky na procesoru UP200St. Menu a nastavení lze snadno přistupovat a ovládat pomocí barevného dotykového displeje. V nastavení můžete přednastavit parametry použití ultrazvuku, jako je amplituda, pulzace / režim cyklu, doba použití ultrazvuku, celkový příkon energie a teplotní limity. Ve výzkumu a výrobě je rozhodující opakovatelnost zkoušek a výsledků testů. To znamená, že přesné zaznamenávání procesních podmínek a ultrazvukových protokolů je naprosto důležité. Automatické datové protokolování zapíše všechna data použití ultrazvuku do souboru CSV na integrované SD-kartě, takže můžete snadno zkontrolovat a porovnat různé sonication běží. Všechna ultrazvuková procesní data lze snadno přistupovat a sdílet jako soubor CSV.
Hielscher Ultrazvuk se snaží poskytnout vám pokročilé technologie pro usnadnění a zlepšení vaší výzkumné práce!