Eluce protilátek sonikací pomocí vysokokapacitní sonikace

Afinitní chromatografie je výkonná technika pro purifikaci proteinů, která vyžaduje Ultrazvukem asistovaná nespecifická eluce je spolehlivá technika přípravy vzorků pro získání protilátek z afinitní chromatografie. Účinná a reprodukovatelná eluce cílových protilátek vázaných na afinitní matrice je výrazně zlepšena sonikací. Vysoce výkonný sonikátor desek, UIP400MTP je optimálně vhodný pro eluaci vysokého počtu vzorků v 96-jamkových, mikrotitračních a vícejamkových destičkách a usnadňuje obnovu protilátek v afinitní chromatografii.

Jak sonikace usnadňuje eluci?

Pomocí ultrazvukem zesílené nespecifické eluce mohou laboratorní pracovníci a vědci účinně obnovit purifikované protilátky z kolon afinitní chromatografie. Tyto purifikované protilátky procházejí následnými aplikacemi v různých oblastech, jako je imunologie, biotechnologie a lékařská diagnostika.

Eluce je krok přípravy vzorku, který se běžně používá pro afinitní chromatografii: Afinitní chromatografie využívá vysoce specifické interakce mezi cílovou molekulou (jako je protilátka) a ligandem imobilizovaným na chromatografické matrici. To umožňuje selektivní purifikaci cílové molekuly ze složité směsi pomocí specifické vazebné afinity molekul, např. protilátek.
Specifická vazba protilátek: Protilátky jsou často purifikovány pomocí afinitní chromatografie, kde se selektivně vážou na ligand imobilizovaný na chromatografické pryskyřici. Může to být antigen, protein A/G nebo jakákoli jiná molekula, která interaguje specificky se sledovanou protilátkou.
Vymývání: Po navázání cílové protilátky na matrici je dalším krokem eluace (nebo vymývání) navázané protilátky z pryskyřice. Tento eluční krok obvykle zahrnuje narušení specifické vazby mezi protilátkou a ligandem. Tento krok může být usnadněn sonikací.
Ultrazvuková sonda UP50H je laboratorní homogenizátor, který se často používá jako buněčný disruptor, dispergátor a emulgátor v laboratořích.Ultrazvukem asistovaná nespecifická eluce: Na rozdíl od specifických elučních metod, které narušují pouze interakci protilátka-ligand, nespecifické eluční metody narušují všechny interakce na pryskyřici, včetně nespecifických. To může být výhodné při práci se silně vázanými kontaminanty, které by mohly narušit proces čištění. Zde přichází do hry sonikace! Ultrazvukové vlny se používají ke generování kavitačních bublin v elučním pufru. Když se tyto bubliny zhroutí v blízkosti pryskyřičné matrice, produkují intenzivní lokalizované smykové síly a mikroproudění. Toto mechanické narušení pomáhá při rozbíjení nespecifických interakcí mezi protilátkou a ligandem, což usnadňuje eluci navázané protilátky z matrice.

96jamkové destičky a další vícejamkové destičky se nejlépe zpracovávají pomocí sonikátoru UIP400MTP. Tento ultrazvukový systém je ideální pro lýzu, fragmentaci DNA a zpracování vzorků pro solubilizaci buněk ve vysoké kapacitě.

Vysoce výkonný sonikátor UIP400MTP usnadňuje vymývání protilátek a proteinů

Žádost o informace





 

Tento tutoriál vysvětluje, jaký typ sonikátoru je nejlepší pro vaše úkoly přípravy vzorků, jako je lýza, narušení buněk, izolace proteinů, fragmentace DNA a RNA v laboratořích, analýza a výzkum. Vyberte ideální typ sonikátoru pro vaši aplikaci, objem vzorku, počet vzorků a propustnost. Hielscher Ultrasonics má ideální ultrazvukový homogenizátor pro vás!

Jak najít perfektní sonikátor pro narušení buněk a extrakci bílkovin ve vědě a analýze

Miniatura videa

 

Výhody ultrazvukové eluce pomocí sonikace

Ultrazvuková eluce nabízí několik výhod, zejména v souvislosti s technikami purifikace proteinů, jako je afinitní chromatografie.
Například sonikace vyniká alternativními metodami, pokud jde o integritu proteinů, regeneraci, čistotu, všestrannost a účinnost. Díky těmto výhodám je ultrazvuková eluce preferovanou volbou pro procesy čištění proteinů, zejména v aplikacích, kde je nezbytné udržovat strukturu a aktivitu proteinů. Ultrazvuková eluce navíc vyniká svou jednoduchostí, účinností, všestranností a kompatibilitou se širokou škálou proteinů a afinitních matric. Ultrazvuková eluce, která používá ultrazvukové vlny k narušení interakcí protein-matrice, nabízí šetrnou a rychlou metodu čištění proteinů, zajišťuje vysokou míru obnovy a zachovává integritu proteinů pro následné aplikace.

Šetrnější ke struktuře proteinů: Eluce s nízkým pH zahrnuje použití kyselých pufrů k narušení vazby mezi cílovým proteinem (např. protilátkami) a afinitní matricí. Vystavení nízkému pH však může denaturovat proteiny, což může ohrozit jejich strukturu a biologickou aktivitu. Naproti tomu ultrazvuková eluce se primárně spoléhá spíše na mechanické narušení než na chemickou denaturaci, díky čemuž je šetrnější ke struktuře proteinu. To je zvláště výhodné při čištění jemných proteinů nebo protilátek citlivých na změny pH.

  • Snížené riziko agregace: Eluce s nízkým pH může zvýšit riziko agregace proteinů v důsledku rozkládání proteinů a expozice hydrofobních oblastí. Agregace může vést ke ztrátě aktivity bílkovin a obtížím při následném zpracování. Ultrazvuková eluce ve srovnání s tím minimalizuje riziko agregace využitím mechanických sil k narušení interakcí mezi proteinem a afinitní matricí, aniž by se významně změnila nativní konformace proteinu.
  • Vylepšená výtěžnost a čistota: Ultrazvuková eluce může dosáhnout vyšší míry výtěžnosti a úrovně čistoty ve srovnání s alternativními metodami eluce. Mechanické narušení poskytované ultrazvukem účinně uvolňuje vázané proteiny z afinitní matice a zároveň minimalizuje nespecifické interakce. To má za následek zvýšenou výtěžnost cílového proteinu se sníženou kontaminací z nespecificky vázaných molekul, což přispívá k vyšší čistotě eluované frakce.
  • Zpracování s vysokou propustností: Hielscher Ultrasonics nabízí různé sonikátory pro ultrazvukem asistované čištění proteinů, eluce a biopanning. Mikrotitrační deska-sonikátor UIP400MTP umožňuje hromadné zpracování vzorků v 96jamkových a jiných vícejamkových destičkách. VialTweeter je ideální pro bezproblémovou a simultánní sonikaci až 10 zkumavek, jako jsou lahvičky Eppendorf, za stejných podmínek. CupHorn je všestranný sonikátor ideální pro několik zkumavek, malých kádinek a dalších nádob. A samozřejmě, klasické sonátory typu sondy s mikrohroty jsou dobře zavedeným laboratorním nástrojem pro přípravu vzorků. Produktová řada Hielscher Ultrasonics má ideální sonikátor pro nastavení experimentu a velikost vzorku.
  • Všestrannost a kompatibilita: Ultrazvuková eluce je kompatibilní se širokou škálou proteinů a afinitních matric a nabízí všestrannost v aplikacích čištění. Naproti tomu eluce s nízkým pH nemusí být vhodná pro určité proteiny, které jsou citlivé na kyselé podmínky, nebo pro afinitní matrice, které jsou náchylné k degradaci nebo vyluhování při nízkém pH. Ultrazvuková eluce poskytuje šetrnou a univerzálně použitelnou alternativu, kterou lze přizpůsobit specifickým potřebám čištění, aniž by byla ohrožena integrita proteinu nebo stabilita matrice.
  • Čas a efektivita: Ultrazvuková eluce obvykle vyžaduje kratší dobu eluce ve srovnání s jinými elučními metodami. Rychlé a účinné uvolňování vázaných proteinů usnadněné ultrazvukem zkracuje dobu zpracování a zvyšuje celkovou účinnost čištění, což z něj činí atraktivní volbu pro aplikace s vysokou propustností nebo když jsou vyžadovány časově citlivé výsledky.
96-jamková deska Sonikator UIP400MTP pro buněčnou lýzu, extrakci DNA, fragmentaci DNA, buněčnou solubilizaci a purifikaci proteinů.

96-jamkový talířový sonikátor UIP400MTP pro sonikaci vícejamkových destiček, PCR a ELISA destiček

 

VialTweeter na ultrazvukovém procesoru UP200ST

VialTweeter sonikátor pro simultánní sonikaci 10 vzorků, např. k narušení buněk a k extrakci proteinů

Ultrazvukem asistované biopanování

Biopanning je kritickou technikou při čištění protilátek, zejména když je třeba získat vysoce specifické protilátky pro výzkum nebo lékařskou diagnostiku. Biopanning je proces, při kterém jsou protilátky izolovány ze směsi protilátek, tzv. knihovny protilátek.

Jak funguje ultrazvukové biopanování?

Začíná to knihovnou protilátek, směsí různých protilátek. Každá protilátka se vyznačuje svým jedinečným tvarem a specifičností. Pro analýzu a terapii musí být izolovány specifické protilátky, které rozpoznávají konkrétní cíl, jako je virus nebo rakovinná buňka. Pomocí biopanningu lze tyto specifické protilátky izolovat. Ultrazvuku pomáhá usnadnit proces biopanningu, čímž se zefektivňuje čištění protilátek.

Počínaje knihovnou protilátek jsou protilátky obvykle zobrazeny na povrchu bakteriofága, kvasinkové buňky nebo jiného zobrazovacího systému. Tato knihovna představuje pestrou škálu protilátek.
V prvním kroku je tato knihovna vystavena vaší cílové molekule. Protilátky, které se vážou na cíl, se uchytí, zatímco ostatní se odplaví. K odstranění nenavázaných protilátek se vzorky několikrát promyjí tlumivým roztokem.

Nyní máme vzorky obsahující pouze navázané protilátky. To však znamená, že protilátky jsou stále připojeny k jejich zobrazovacímu systému. Aby se uvolnily, musí být přerušena interakce protilátka-ligand. Tento krok je známý jako eluce. Vzorky mohou být eluovány pomocí roztoku, který narušuje vazbu, např. pomocí specifického elučního pufru, chaotropika, snížením hodnoty pH, aplikací tepla atd. Tyto eluční techniky ničí vazbu protilátka-ligand, ale také mohou zhoršit samotné protilátky. To je důvod, proč se sonikace používá jako alternativní technika k jemnému odstranění protilátek z jejich cíle.

Po dokončení elučního kroku získáme purifikované protilátky, připravené k použití ve výzkumu, diagnostice nebo terapii.

Biopanning je výkonná technika při čištění protilátek a ultrazvuková eluce usnadňuje a zesiluje účinnost – Výsledkem jsou vysoce purifikované, nepoškozené protilátky. Ultrazvukové biopanování umožňuje vědcům izolovat vysoce specifické protilátky ze složitých vzorků, což otevírá dveře široké škále aplikací.

Sonikátory pro čištění protilátek

Hielscher sonikátory jsou dobře zavedené nástroje používané v nejlepších výzkumných zařízeních po celém světě. Hielscher sonikátory, ceněné pro svůj nejmodernější design a vynikající výkon, jsou považovány za nepostradatelné laboratorní nástroje v oblasti biotechnologie a molekulární biologie. Hielscher Ultrasonics nabízí sonikátory pro přípravu jednoho vzorku i vysoce výkonného vzorku, které usnadňují účinné čištění protilátek a eluci molekul vázaných na cíl a umožňují efektivní biopanning k izolaci specifických protilátek s přesností a rychlostí.
V souvislosti s čištěním protilátek, Hielscher sonikátory vynikají při usnadňování promývání a eluce kroky účinným odstraňováním nenavázaných protilátek při zachování integrity cílových komplexů. Jejich přesné řízení a škálovatelnost umožňují přizpůsobit podmínky zpracování a zajistit optimální výsledky čištění v širokém rozsahu objemů a složitostí vzorků.
Hielscher sonikátory představují technologickou inovaci v ultrazvukovém zpracování, které nabízejí bezkonkurenční schopnosti pro čištění protilátek, eluci a biopanning. Díky své přesnosti, spolehlivosti a snadnému ovládání nabízejí různé ultrazvukové systémy optimální účinnost a všestrannost pro biofarmaceutický výzkum, diagnostiku a terapii.
Kontaktujte nás nyní, abyste se dozvěděli více o Hielscher sonikátory pro čištění protilátek, eluci a biopanning! Náš zkušený technický personál s vámi rád prodiskutuje vaši aplikaci související s protilátkami!

Proto Hielscher Ultrazvuk?

  • vysoká účinnost
  • Nejmodernější technologie
  • spolehlivost & robustnost
  • nastavitelné, přesné řízení procesu
  • várka & v souladu
  • pro jakýkoli svazek
  • inteligentní software
  • inteligentní funkce (např. programovatelné, datové protokolování, dálkové ovládání)
  • Snadné a bezpečné ovládání
  • Nízké nároky na údržbu
  • CIP (čisté na místě)

Žádost o informace





Návrh, výroba a poradenství – Kvalita Vyrobeno v Německu

Hielscher ultrasonicators jsou dobře známé pro jejich nejvyšší kvalitu a designové standardy. Robustnost a snadná obsluha umožňují hladkou integraci našich ultrasonicators do průmyslových zařízení. Drsné podmínky a náročná prostředí jsou snadno zvládnutelné Hielscher ultrasonicators.

Hielscher Ultrasonics je společnost certifikovaná ISO a klade zvláštní důraz na vysoce výkonné ultrasonicators představovat state-of-the-art technologie a uživatelská přívětivost. Samozřejmě, Hielscher ultrasonicators jsou CE kompatibilní a splňují požadavky UL, CSA a RoHs.

Kontaktujte nás! / Zeptej se nás!

Požádejte o další informace

Použijte níže uvedený formulář a vyžádejte si další informace o ultrazvukových procesorech, aplikacích a ceně. Rádi s vámi probereme váš proces a nabídneme vám ultrazvukový systém splňující vaše požadavky!









Uvědomte si prosím naši Zásady ochrany osobních údajů,


Video ukazuje ultrazvukový systém přípravy vzorků UIP400MTP, který umožňuje spolehlivou přípravu vzorků všech standardních vícejamkových desek pomocí ultrazvuku s vysokou intenzitou. Typické aplikace UIP400MTP zahrnují buněčnou lýzu, DNA, RNA a stříhání chromatinu, stejně jako extrakci proteinů.

Ultrasonicator UIP400MTP pro více-well deskové použití ultrazvuku

Miniatura videa

Srovnání ultrazvukové eluce s tradičními elučními technikami

  1. Gradientní eluce: Při gradientové eluci se vazebná síla mezi cílovým proteinem a afinitní matricí postupně snižuje změnou složení elučního pufru. To může zahrnovat změnu faktorů, jako je pH, koncentrace soli nebo koncentrace konkurenčních ligandů. Gradientová eluce umožňuje jemné doladění elučních podmínek tak, aby selektivně uvolnily cílový protein a zároveň minimalizovaly nespecifickou vazbu.
    Výhody ultrazvukové eluce: Ultrazvuková eluce nabízí rychlejší a rovnoměrnější uvolňování vázaných proteinů ve srovnání s gradientovou elucí. Zatímco gradientová eluce vyžaduje pečlivou optimalizaci a monitorování podmínek eluce, ultrazvuková eluce poskytuje jednodušší a účinnější metodu pro obnovu proteinů.
  2. Konkurenční eluce: Při kompetitivní eluci je do elučního pufru zavedena vysoká koncentrace konkurenčního ligandu, aby se narušila vazba mezi cílovým proteinem a afinitní matricí. Konkurenční ligand soutěží s cílovým proteinem o vazebná místa na matrici, čímž vytlačuje protein a uvolňuje jej do eluátu.
    Výhody ultrazvukové eluce: Ultrazvuková eluce nabízí šetrnější a univerzálnější alternativu ke konkurenční eluci. Kompetitivní eluce může vyžadovat použití vysokých koncentrací chaotropních činidel (tj. korozpuštěné látky, která narušuje síť vodíkových vazeb mezi molekulami vody a snižuje stabilitu nativního stavu proteinů oslabením hydrofobního účinku) nebo agresivních chemikálií, které mohou ovlivnit stabilitu a aktivitu proteinů. Naproti tomu ultrazvuková eluce poskytuje mechanické narušení bez potřeby dalších chemických činidel, zachovává integritu proteinů a zajišťuje vysokou míru obnovy.
  3. Eluce vyvolaná teplotou: Teplotou indukovaná eluce zahrnuje změnu teploty elučního pufru, aby se narušila vazba mezi cílovým proteinem a afinitní matricí. Toho lze dosáhnout buď zvýšením nebo snížením teploty v závislosti na konkrétní interakci protein-matrice.
    Výhody ultrazvukové eluce: Ultrazvuková eluce nabízí rychlejší a kontrolovanější metodu eluce proteinů ve srovnání s metodami indukovanými teplotou. Zatímco teplotou indukovaná eluce může vyžadovat přesnou kontrolu teplotních gradientů a delší doby rovnováhy, ultrazvuková eluce poskytuje okamžité mechanické narušení, což má za následek kratší dobu eluce a lepší účinnost.
  4. Enzymatická eluce: Enzymatická eluce využívá specifické enzymy, které štěpí vazby mezi cílovým proteinem a afinitní matricí a uvolňují protein do eluátu. Tato metoda je zvláště užitečná pro proteiny, které jsou pevně vázány na matrici, nebo pro aplikace vyžadující přesnou kontrolu nad elučními podmínkami.
    Výhody ultrazvukové eluce: Ultrazvuková eluce nabízí neenzymatickou a bezchemickou alternativu k enzymatickému eluci. Zatímco enzymatická eluce může vyžadovat optimalizaci koncentrace enzymu, inkubační doby a podmínek pH, ultrazvuková eluce poskytuje přímou a univerzálně použitelnou metodu pro obnovu proteinů bez potřeby dalších činidel nebo specializovaného vybavení.
Sonikátor pro přípravu vzorků s vysokou propustností! Sonikátor UIP400MTP desky usnadňuje lýzu, extrakci proteinů, fragmentaci DNA a buněčnou solubilizaci biologických vzorků v 96jamkových destičkách.

Sonikátor desek UIP400MTP pro všechny 96jamkové desky, mikrotitrační desky a vícejamkové desky.



Literatura / Reference


Vysoce výkonný ultrazvuk! Sortiment produktů Hielscher pokrývá celé spektrum od kompaktního laboratorního ultrasonicatoru přes bench-top jednotky až po plně průmyslové ultrazvukové systémy.

Hielscher Ultrasonics vyrábí vysoce výkonné ultrazvukové homogenizátory od Laboratoř na průmyslové velikosti.


Rádi probereme váš proces.

Pojďme se spojit.