การประยุกต์ใช้อัลตราโซนิกในไวรัสฝีดาษลิง

อัลตราโซนิกเป็นวิธีการประมวลผลที่สําคัญสําหรับการแยกไวรัสฝีดาษลิง (MPXV) จากตัวอย่างการวิเคราะห์สําหรับการกระจายตัวของดีเอ็นเอของไวรัสเช่นเดียวกับในการผลิตวัคซีนฝีดาษลิง สําหรับการเตรียมตัวอย่างก่อนการวินิจฉัยและวิเคราะห์ (PCR, ELISA เป็นต้น) อัลตราโซนิกจะใช้เพื่อสลายเซลล์เพื่อปล่อยไวรัสฝีดาษลิงออกจากภายในเซลล์และ / หรือเพื่อแยกส่วนดีเอ็นเอ ในการผลิตวัคซีนการใช้งานมีตั้งแต่การเตรียมอนุภาคไวรัส / DNA การห่อหุ้มในพาหะยาและการกําหนดสูตรวัคซีน
คุณสามารถค้นหาข้อมูลโดยละเอียดเกี่ยวกับการเตรียมตัวอย่างไวรัสฝีดาษลิงอัลตราโซนิก ตลอดจนการผลิตวัคซีน MPXV ด้วยอัลตราโซนิก

สิ่งที่คุณจะพบในหน้านี้:

• อัลตราโซนิก Lysis สําหรับการสกัดไวรัสฝีดาษลิง
• การกระจายตัวด้วยอัลตราโซนิกของ DNA ของไวรัสฝีดาษลิง
• การประยุกต์ใช้อัลตราโซนิกในการผลิตวัคซีน MPXV

อัลตราโซนิก Lysis และ DNA Fragmentation ก่อนปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส (PCR)

การตรวจพบการติดเชื้อไวรัสฝีดาษลิงโดยการทดสอบการขยายกรดนิวคลีอิก (NAAT) โดยใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสแบบเรียลไทม์หรือแบบธรรมดา (PCR) เพื่อตรวจหาลําดับเฉพาะของ DNA ของไวรัส ตัวอย่าง (เช่น จากการแลกเปลี่ยนโพรงจมูกหรือการตรวจชิ้นเนื้อที่ผิวหนัง) มีไวรัสอยู่ในเซลล์
สําหรับการวิเคราะห์ ไวรัสจะต้องถูกปล่อยออกจากเซลล์ และ DNA ของไวรัสจะต้องถูกแยกส่วนเพื่อ PCR

อัลตราโซนิกสลาย:

การหยุดชะงักของเซลล์อัลตราโซนิก / การสลายตัวเป็นวิธีที่เชื่อถือได้และมีประสิทธิภาพในการแยกไวรัสออกจากตัวอย่างเซลล์และด้วยเหตุนี้จึงเป็นเทคนิคที่ดีกว่าสารเคมีเช่นไลโซไซม์โปรตีเนสเคและผงซักฟอกต่างๆซึ่งใช้เป็นทางเลือกเพื่อให้เกิดการสลายเซลล์และการปล่อยดีเอ็นเอ
อย่างไรก็ตาม การใช้รีเอเจนต์เคมีดังกล่าวต้องใช้เวลาในการเตรียมตัวอย่างในหลายขั้นตอนก่อนการวิเคราะห์ PCR เพื่อป้องกันการยับยั้งปฏิกิริยา PCR เนื่องจากสารยับยั้ง PCR ส่งผลต่อประสิทธิภาพของการขยาย การเปลี่ยนแปลงเล็กน้อยของปริมาณสารยับยั้งที่ไม่ถูกกําจัดออกอาจนําไปสู่ความแปรปรวนอย่างมากในการขยายผลิตภัณฑ์ PCR (Diaco, 1995)
ข้อดีของอัลตราโซนิกสําหรับการสลายคือการหยุดชะงักของโครงสร้างเซลล์และการปล่อยดีเอ็นเอโดยสิ้นเชิงโดยไม่จําเป็นต้องใช้รีเอเจนต์การสลายและการเตรียมตัวอย่างที่ใช้เวลานานเป็นที่พึงปรารถนา (อ้างอิง Fykse et al., 2003)

การกระจายตัวของดีเอ็นเออัลตราโซนิก:

การกระจายตัวของดีเอ็นเออัลตราโซนิกนั้นง่ายและเชื่อถือได้เนื่องจากผลิตชิ้นส่วนดีเอ็นเอที่มีความยาวได้ (คู่เบส, bp) การใช้อัลตราซาวนด์ DNA สามารถแยกส่วนเป็นความยาว DNA เป้าหมายได้อย่างมีประสิทธิภาพ การควบคุมพารามิเตอร์อัลตราโซนิกที่แม่นยําและตัวเลือกการระบายความร้อนที่ซับซ้อนช่วยป้องกันการเสื่อมสภาพของดีเอ็นเอ
อ่านเพิ่มเติมเกี่ยวกับการกระจายตัวของดีเอ็นเออัลตราโซนิก!

การประยุกต์ใช้อัลตราโซนิกในวัคซีนไวรัสฝีดาษลิง

วัคซีนที่ใช้ต่อต้านไวรัสฝีดาษลิงในปัจจุบันเป็นวัคซีนไวรัสที่มีชีวิต วัคซีนที่พัฒนาขึ้นใหม่อาจใช้แพลตฟอร์มอื่น ๆ เช่น DNA ที่ใช้ปัจจุบัน Vaccinia Ankara viurs ที่ดัดแปลง ซึ่งเป็น orthopoxvirus ที่ลดทอนและไม่ทําซ้ํา นอกจากนี้ยังมี Tris (tris-aminomethane) และโซเดียมคลอไรด์ วัคซีนอาจมี DNA และโปรตีนจํานวนเล็กน้อยจากเซลล์ไฟโบรบลาสต์ตัวอ่อนไก่ ซึ่งใช้ในการเพาะปลูกไวรัสวัคซีน เบนโซเนส และสารประกอบยาปฏิชีวนะ เช่น gentamicin และ ciprofloxacin

การทําให้เป็นเนื้อเดียวกันด้วยอัลตราโซนิกใช้ในการผลิตวัคซีนไวรัสที่ลดทอนตัวมีชีวิตวัคซีนดีเอ็นเอค็อกเทลดีเอ็นเอหลายวาเลนต์วัคซีน mRNA วัคซีนโปรตีนรีคอมบิแนนท์วัคซีนอนุภาคคล้ายไวรัสเป็นต้น

คุณสามารถค้นหาข้อมูลเชิงลึกเพิ่มเติมเกี่ยวกับการใช้งานอัลตราโซนิกสําหรับการผลิตวัคซีนที่ดีขึ้น!

โปรโตคอลสําหรับการแยกอัลตราโซนิกของไวรัสฝีดาษลิง

ทีมวิจัยของ Stittelaar (2005) ใช้การสลายอัลตราโซนิกเพื่อปล่อยไวรัสฝีดาษลิงจากการเพาะเลี้ยงเซลล์โฮสต์การเจริญเติบโต เช่นเดียวกับจากเซลล์ที่ได้จากการแลกเปลี่ยนคอจากไพรเมตที่ติดเชื้อ

การเตรียมวัคซีนฝีดาษลิง:

ไวรัสฝีดาษลิงเติบโตบนเซลล์ไฟโบรบลาสต์ตัวอ่อนไก่ที่ปราศจากเชื้อโรคเฉพาะ หลังจากการฟักตัวเป็นเวลา 1 ถึง 2 วัน สารแขวนลอยของเซลล์ไวรัสจะถูกเก็บเกี่ยวโดยการละลายน้ําแข็งหนึ่งรอบ แล้วเข้มข้นโดยการหมุนเหวี่ยง เม็ดถูกระงับใหม่และอยู่ภายใต้การทําให้เป็นเนื้อเดียวกันด้วยอัลตราโซนิกหลายรอบ

การแยกไวรัสฝีดาษลิงจากลิงแสมที่ฉีดวัคซีนแล้ว:

ตัวอย่างถูกแช่แข็งละลายสามครั้งและโซนิกใน CupHorn อัลตราโซนิก การเจือจางสองครั้ง (1:10 และ 1:100) ในอาหารการขนส่งที่เสริมด้วยเซรั่มวัวในครรภ์ 1% ถูกนํามาใช้เพื่อฉีดวัคซีนเซลล์ Vero monolayers ในแผ่นหกหลุม หลังจากฟักตัวที่อุณหภูมิ 37°C 1 ชั่วโมง เชื้อจะถูกลบออกและแทนที่ด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อที่เสริมด้วยเซรั่มวัวในครรภ์ 1% การเพาะเลี้ยงชั้นเดียวเป็นเวลา 5 วันที่อุณหภูมิ 37°C และย้อมด้วยสารละลายคริสตัลไวโอเล็ต
(อ้างอิง Stittelaar et al., 2005)

เครื่องอัลตราโซนิกสําหรับการวิเคราะห์ไวรัสและการผลิตวัคซีน

กลุ่มผลิตภัณฑ์ที่กว้างขวางของ Hielscher Ultrasonics นําเสนอเครื่องอัลตราโซนิกในอุดมคติสําหรับห้องปฏิบัติการวิจัยและการวิเคราะห์ตลอดจนการผลิตวัคซีนอุตสาหกรรม
Hielscher Ultrasonics มีความเชี่ยวชาญในการออกแบบการผลิตและจัดจําหน่ายเครื่องอัลตราโซนิกประสิทธิภาพสูงและเครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพโซโนสําหรับใช้ในห้องปฏิบัติการวิจัยและวิเคราะห์ตลอดจนการนําไปใช้ในการผลิตวัคซีนอุตสาหกรรม (เช่น วัคซีน, เอพีไอ).
Sonication สามารถนําไปใช้กับภาชนะเปิดเครื่องปฏิกรณ์กวนอย่างต่อเนื่องแบบปิดและเครื่องปฏิกรณ์ไหลผ่านอย่างต่อเนื่อง ทุกส่วนของระบบอัลตราโซนิกซึ่งสัมผัสกับตัวกลางที่เป็นของเหลวทําจากสแตนเลสไทเทเนียมหรือแก้ว ชิ้นส่วนนึ่งฆ่าเชื้อและอุปกรณ์สุขภัณฑ์ช่วยให้มั่นใจได้ถึงการผลิตภายใต้ เงื่อนไขเกรดเภสัชกรรม
การบันทึกข้อมูลอัตโนมัติ: ซอฟต์แวร์อัจฉริยะจะบันทึกพารามิเตอร์ของกระบวนการ sonication โดยอัตโนมัติบนการ์ดหน่วยความจํา SD ในตัว การควบคุมพารามิเตอร์กระบวนการทั้งหมดอย่างแม่นยําช่วยให้มั่นใจได้ ความสามารถในการทําซ้ํา, มาตรฐานการผลิตและอํานวยความสะดวกในการปฏิบัติตามมาตรฐานความปลอดภัยของผลิตภัณฑ์ยา
Hielscher Ultrasonics’ โปรเซสเซอร์อัลตราโซนิกมีความน่าเชื่อถือสูงและสามารถควบคุมได้อย่างแม่นยํา เครื่องอัลตราโซนิกอุตสาหกรรมทั้งหมดสามารถปรับให้ได้เต็มช่วงตั้งแต่แอมพลิจูดต่ําไปจนถึงสูงมาก ความทนทานของระบบอัลตราโซนิกของ Hielscher ช่วยให้สามารถทํางานได้ตลอด 24 ชั่วโมงทุกวันภายใต้งานหนักและในสภาพแวดล้อมที่มีความต้องการสูง

ตารางด้านล่างให้ข้อบ่งชี้ถึงความสามารถในการประมวลผลโดยประมาณของเครื่องอัลตราโซนิกของเรา: