การประยุกต์ใช้อัลตราโซนิกในไวรัสฝีดาษลิง
อัลตราโซนิกเป็นวิธีการประมวลผลที่สําคัญสําหรับการแยกไวรัสฝีดาษลิง (MPXV) จากตัวอย่างการวิเคราะห์สําหรับการกระจายตัวของดีเอ็นเอของไวรัสเช่นเดียวกับในการผลิตวัคซีนฝีดาษลิง สําหรับการเตรียมตัวอย่างก่อนการวินิจฉัยและวิเคราะห์ (PCR, ELISA เป็นต้น) อัลตราโซนิกจะใช้เพื่อสลายเซลล์เพื่อปล่อยไวรัสฝีดาษลิงออกจากภายในเซลล์และ / หรือเพื่อแยกส่วนดีเอ็นเอ ในการผลิตวัคซีนการใช้งานมีตั้งแต่การเตรียมอนุภาคไวรัส / DNA การห่อหุ้มในพาหะยาและการกําหนดสูตรวัคซีน
คุณสามารถค้นหาข้อมูลโดยละเอียดเกี่ยวกับการเตรียมตัวอย่างไวรัสฝีดาษลิงอัลตราโซนิก ตลอดจนการผลิตวัคซีน MPXV ด้วยอัลตราโซนิก
สิ่งที่คุณจะพบในหน้านี้:
- อัลตราโซนิก Lysis สําหรับการสกัดไวรัสฝีดาษลิง
- การกระจายตัวด้วยอัลตราโซนิกของ DNA ของไวรัสฝีดาษลิง
- การประยุกต์ใช้อัลตราโซนิกในการผลิตวัคซีน MPXV
อัลตราโซนิก Lysis และ DNA Fragmentation ก่อนปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส (PCR)
การตรวจพบการติดเชื้อไวรัสฝีดาษลิงโดยการทดสอบการขยายกรดนิวคลีอิก (NAAT) โดยใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสแบบเรียลไทม์หรือแบบธรรมดา (PCR) เพื่อตรวจหาลําดับเฉพาะของ DNA ของไวรัส ตัวอย่าง (เช่น จากการแลกเปลี่ยนโพรงจมูกหรือการตรวจชิ้นเนื้อที่ผิวหนัง) มีไวรัสอยู่ในเซลล์
สําหรับการวิเคราะห์ ไวรัสจะต้องถูกปล่อยออกจากเซลล์ และ DNA ของไวรัสจะต้องถูกแยกส่วนเพื่อ PCR
อัลตราโซนิกสลาย:
การหยุดชะงักของเซลล์อัลตราโซนิก / การสลายตัวเป็นวิธีที่เชื่อถือได้และมีประสิทธิภาพในการแยกไวรัสออกจากตัวอย่างเซลล์และด้วยเหตุนี้จึงเป็นเทคนิคที่ดีกว่าสารเคมีเช่นไลโซไซม์โปรตีเนสเคและผงซักฟอกต่างๆซึ่งใช้เป็นทางเลือกเพื่อให้เกิดการสลายเซลล์และการปล่อยดีเอ็นเอ
อย่างไรก็ตาม การใช้รีเอเจนต์เคมีดังกล่าวต้องใช้เวลาในการเตรียมตัวอย่างในหลายขั้นตอนก่อนการวิเคราะห์ PCR เพื่อป้องกันการยับยั้งปฏิกิริยา PCR เนื่องจากสารยับยั้ง PCR ส่งผลต่อประสิทธิภาพของการขยาย การเปลี่ยนแปลงเล็กน้อยของปริมาณสารยับยั้งที่ไม่ถูกกําจัดออกอาจนําไปสู่ความแปรปรวนอย่างมากในการขยายผลิตภัณฑ์ PCR (Diaco, 1995)
ข้อดีของอัลตราโซนิกสําหรับการสลายคือการหยุดชะงักของโครงสร้างเซลล์และการปล่อยดีเอ็นเอโดยสิ้นเชิงโดยไม่จําเป็นต้องใช้รีเอเจนต์การสลายและการเตรียมตัวอย่างที่ใช้เวลานานเป็นที่พึงปรารถนา (อ้างอิง Fykse et al., 2003)
การกระจายตัวของดีเอ็นเออัลตราโซนิก:
การกระจายตัวของดีเอ็นเออัลตราโซนิกนั้นง่ายและเชื่อถือได้เนื่องจากผลิตชิ้นส่วนดีเอ็นเอที่มีความยาวได้ (คู่เบส, bp) การใช้อัลตราซาวนด์ DNA สามารถแยกส่วนเป็นความยาว DNA เป้าหมายได้อย่างมีประสิทธิภาพ การควบคุมพารามิเตอร์อัลตราโซนิกที่แม่นยําและตัวเลือกการระบายความร้อนที่ซับซ้อนช่วยป้องกันการเสื่อมสภาพของดีเอ็นเอ
อ่านเพิ่มเติมเกี่ยวกับการกระจายตัวของดีเอ็นเออัลตราโซนิก!
การประยุกต์ใช้อัลตราโซนิกในวัคซีนไวรัสฝีดาษลิง
วัคซีนที่ใช้ต่อต้านไวรัสฝีดาษลิงในปัจจุบันเป็นวัคซีนไวรัสที่มีชีวิต วัคซีนที่พัฒนาขึ้นใหม่อาจใช้แพลตฟอร์มอื่น ๆ เช่น DNA ที่ใช้ปัจจุบัน Vaccinia Ankara viurs ที่ดัดแปลง ซึ่งเป็น orthopoxvirus ที่ลดทอนและไม่ทําซ้ํา นอกจากนี้ยังมี Tris (tris-aminomethane) และโซเดียมคลอไรด์ วัคซีนอาจมี DNA และโปรตีนจํานวนเล็กน้อยจากเซลล์ไฟโบรบลาสต์ตัวอ่อนไก่ ซึ่งใช้ในการเพาะปลูกไวรัสวัคซีน เบนโซเนส และสารประกอบยาปฏิชีวนะ เช่น gentamicin และ ciprofloxacin
การทําให้เป็นเนื้อเดียวกันด้วยอัลตราโซนิกใช้ในการผลิตวัคซีนไวรัสที่ลดทอนตัวมีชีวิตวัคซีนดีเอ็นเอค็อกเทลดีเอ็นเอหลายวาเลนต์วัคซีน mRNA วัคซีนโปรตีนรีคอมบิแนนท์วัคซีนอนุภาคคล้ายไวรัสเป็นต้น
- การกระจายตัวของอนุภาคและสารของไวรัส
- อิมัลชัน
- การยับยั้งการทํางานของไวรัส
- สูตรพาหะยา (NLC, SLN)
- การห่อหุ้ม
- การละลายของตัวแทน
- การเตรียมสารเสริม
- การไล่แก๊ส / การเติมอากาศ
คุณสามารถค้นหาข้อมูลเชิงลึกเพิ่มเติมเกี่ยวกับการใช้งานอัลตราโซนิกสําหรับการผลิตวัคซีนที่ดีขึ้น!
โปรโตคอลสําหรับการแยกอัลตราโซนิกของไวรัสฝีดาษลิง
ทีมวิจัยของ Stittelaar (2005) ใช้การสลายอัลตราโซนิกเพื่อปล่อยไวรัสฝีดาษลิงจากการเพาะเลี้ยงเซลล์โฮสต์การเจริญเติบโต เช่นเดียวกับจากเซลล์ที่ได้จากการแลกเปลี่ยนคอจากไพรเมตที่ติดเชื้อ
การเตรียมวัคซีนฝีดาษลิง:
ไวรัสฝีดาษลิงเติบโตบนเซลล์ไฟโบรบลาสต์ตัวอ่อนไก่ที่ปราศจากเชื้อโรคเฉพาะ หลังจากการฟักตัวเป็นเวลา 1 ถึง 2 วัน สารแขวนลอยของเซลล์ไวรัสจะถูกเก็บเกี่ยวโดยการละลายน้ําแข็งหนึ่งรอบ แล้วเข้มข้นโดยการหมุนเหวี่ยง เม็ดถูกระงับใหม่และอยู่ภายใต้การทําให้เป็นเนื้อเดียวกันด้วยอัลตราโซนิกหลายรอบ
การแยกไวรัสฝีดาษลิงจากลิงแสมที่ฉีดวัคซีนแล้ว:
ตัวอย่างถูกแช่แข็งละลายสามครั้งและโซนิกใน CupHorn อัลตราโซนิก การเจือจางสองครั้ง (1:10 และ 1:100) ในอาหารการขนส่งที่เสริมด้วยเซรั่มวัวในครรภ์ 1% ถูกนํามาใช้เพื่อฉีดวัคซีนเซลล์ Vero monolayers ในแผ่นหกหลุม หลังจากฟักตัวที่อุณหภูมิ 37°C 1 ชั่วโมง เชื้อจะถูกลบออกและแทนที่ด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อที่เสริมด้วยเซรั่มวัวในครรภ์ 1% การเพาะเลี้ยงชั้นเดียวเป็นเวลา 5 วันที่อุณหภูมิ 37°C และย้อมด้วยสารละลายคริสตัลไวโอเล็ต
(อ้างอิง Stittelaar et al., 2005)
เครื่องอัลตราโซนิกสําหรับการวิเคราะห์ไวรัสและการผลิตวัคซีน
กลุ่มผลิตภัณฑ์ที่กว้างขวางของ Hielscher Ultrasonics นําเสนอเครื่องอัลตราโซนิกในอุดมคติสําหรับห้องปฏิบัติการวิจัยและการวิเคราะห์ตลอดจนการผลิตวัคซีนอุตสาหกรรม
Hielscher Ultrasonics มีความเชี่ยวชาญในการออกแบบการผลิตและจัดจําหน่ายเครื่องอัลตราโซนิกประสิทธิภาพสูงและเครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพโซโนสําหรับใช้ในห้องปฏิบัติการวิจัยและวิเคราะห์ตลอดจนการนําไปใช้ในการผลิตวัคซีนอุตสาหกรรม (เช่น วัคซีน, เอพีไอ).
Sonication สามารถนําไปใช้กับภาชนะเปิดเครื่องปฏิกรณ์กวนอย่างต่อเนื่องแบบปิดและเครื่องปฏิกรณ์ไหลผ่านอย่างต่อเนื่อง ทุกส่วนของระบบอัลตราโซนิกซึ่งสัมผัสกับตัวกลางที่เป็นของเหลวทําจากสแตนเลสไทเทเนียมหรือแก้ว ชิ้นส่วนนึ่งฆ่าเชื้อและอุปกรณ์สุขภัณฑ์ช่วยให้มั่นใจได้ถึงการผลิตภายใต้ เงื่อนไขเกรดเภสัชกรรม
การบันทึกข้อมูลอัตโนมัติ: ซอฟต์แวร์อัจฉริยะจะบันทึกพารามิเตอร์ของกระบวนการ sonication โดยอัตโนมัติบนการ์ดหน่วยความจํา SD ในตัว การควบคุมพารามิเตอร์กระบวนการทั้งหมดอย่างแม่นยําช่วยให้มั่นใจได้ ความสามารถในการทําซ้ํา, มาตรฐานการผลิตและอํานวยความสะดวกในการปฏิบัติตามมาตรฐานความปลอดภัยของผลิตภัณฑ์ยา
Hielscher Ultrasonics’ โปรเซสเซอร์อัลตราโซนิกมีความน่าเชื่อถือสูงและสามารถควบคุมได้อย่างแม่นยํา เครื่องอัลตราโซนิกอุตสาหกรรมทั้งหมดสามารถปรับให้ได้เต็มช่วงตั้งแต่แอมพลิจูดต่ําไปจนถึงสูงมาก ความทนทานของระบบอัลตราโซนิกของ Hielscher ช่วยให้สามารถทํางานได้ตลอด 24 ชั่วโมงทุกวันภายใต้งานหนักและในสภาพแวดล้อมที่มีความต้องการสูง
ตารางด้านล่างให้ข้อบ่งชี้ถึงความสามารถในการประมวลผลโดยประมาณของเครื่องอัลตราโซนิกของเรา:
ปริมาณแบทช์ | อัตราการไหล | อุปกรณ์ที่แนะนํา |
---|---|---|
แผ่นมัลติเวล / ไมโครไทเตอร์ | ไม่มี | UIP400MTP |
1 ถึง 500 มล. | 10 ถึง 200 มล. / นาที | UP100H |
10 ถึง 2000 มล. | 20 ถึง 400 มล. / นาที | UP200 ฮิต, UP400ST |
0.1 ถึง 20L | 0.2 ถึง 4L / นาที | UIP2000hdt |
10 ถึง 100L | 2 ถึง 10L / นาที | UIP4000hdT |
ไม่มี | 10 ถึง 100L / นาที | UIP16000 |
ไม่มี | ขนาด ใหญ่ | คลัสเตอร์ของ UIP16000 |
ติดต่อเรา! / ถามเรา!
วรรณกรรม / อ้างอิง
- Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
- Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
- J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
- Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
- Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.
ข้อเท็จจริงที่ควรค่าแก่การรู้
ไวรัสฝีดาษลิง
โรคฝีดาษลิง (MPV, MPXV หรือ hMPXV) เป็นไวรัสดีเอ็นเอสายคู่ชนิดหนึ่ง ซึ่งทําให้เกิดโรคติดต่อจากสัตว์สู่คนจากไวรัส โรคนี้เรียกว่าการติดเชื้อฝีดาษลิงและสามารถเกิดขึ้นได้ในมนุษย์และสัตว์ มันอยู่ในสกุล Orthopoxvirus ในวงศ์ Poxviridae ไวรัสฝีดาษลิงเป็นหนึ่งในไวรัสออร์โธพอกซ์ของมนุษย์พร้อมกับไวรัส variola (VARV), ฝีดาษวัว (CPX) และวัคซีเนีย (VACV) ออร์โธพอกซ์ไวรัสมีลักษณะเป็นอนุภาคไวรัสรูปอิฐขนาดใหญ่ ซึ่งมีจีโนมดีเอ็นเอสองสายประมาณ 200,000 bp
การทดสอบ ELISA
ELISA ย่อมาจาก Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay และเป็นอิมมูโนแอสเซย์ที่มีฉลากซึ่งถือเป็นมาตรฐานทองคําของอิมมูโนแอสเซย์ ELISA เป็นการทดสอบภูมิครานวิทยาที่มีคุณค่าสําหรับความไวในการวินิจฉัยสูง ซึ่งใช้ในการตรวจจับและหาปริมาณโมเลกุล รวมถึงแอนติบอดี แอนติเจน โปรตีน ไกลโคโปรตีน และฮอร์โมน หลักการของ ELISA ขึ้นอยู่กับปฏิสัมพันธ์ระหว่างแอนติเจนกับแอนติบอดี ด้วยปฏิสัมพันธ์ระหว่างแอนติเจนกับแอนติบอดีแอนติบอดีจําเพาะจะจับกับแอนติเจนเป้าหมาย เฉพาะเมื่อมีปฏิสัมพันธ์เกิดขึ้นสารตั้งต้นสามารถจับกับเอนไซม์และสามารถสังเกตการแปลงสารตั้งต้นในภายหลังได้ซึ่งหมายความว่าจะได้ผลลัพธ์ที่เป็นบวก

Hielscher Ultrasonics ผลิตโฮโมจีไนเซอร์อัลตราโซนิกประสิทธิภาพสูงจาก ห้องทดลอง ถึง ขนาดอุตสาหกรรม