อัลตราโซนิกเตรียมตัวอย่างสําหรับ ELISA Assays

เอลิซา – เอนไซม์ที่เชื่อมโยงภูมิคุ้มกัน

ELISA ย่อมาจากการทดสอบภูมิคุ้มกันที่เชื่อมโยงเอนไซม์และเทคนิคการวิเคราะห์ทางชีวเคมีที่ใช้กันอย่างแพร่หลายของประเภทของการทดสอบ ligand ผูกพัน ใน ELISA ตัวอย่างของเหลวจะถูกเพิ่มเข้าสู่เฟสที่เป็นของแข็งนิ่งที่มีคุณสมบัติผูกพันพิเศษ โดยปกติเฟสของแข็งนิ่งถูกนําไปใช้เป็นเคลือบแผ่นดีหรือแผ่น ELISA จากนั้นน้ํายาเคมีชนิดต่างๆจะถูกเพิ่มตามลําดับการบ่มและล้างเพื่อให้ในที่สุดการเปลี่ยนแปลงแสง (เช่นการพัฒนาสีโดยผลิตภัณฑ์ของปฏิกิริยาของเอนไซม์) เกิดขึ้นในของเหลวสุดท้ายในดี การเปลี่ยนแปลงแสงช่วยให้การวัดปริมาณของการวิเคราะห์โดยสิ่งที่เรียกว่าปริมาณ “"อ่าน" สําหรับการอ่านเชิงปริมาณ เครื่องวัดสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ฟลูออโรมิเตอร์ หรือ luminometer จะถูกใช้เพื่อตรวจจับและวัดความเข้มของแสงที่ส่ง ความไวของการตรวจจับได้รับอิทธิพลจากการขยายสัญญาณในระหว่างปฏิกิริยาการวิเคราะห์ เนื่องจากปฏิกิริยาของเอนไซม์มีการตรวจสอบอย่างดีและกระบวนการขยายที่เชื่อถือได้, เอนไซม์ที่ใช้ในการสร้างสัญญาณ. เอนไซม์ที่เชื่อมโยงกับสารตรวจสอบในสัดส่วนคงที่เพื่อให้ปริมาณที่ถูกต้อง, ซึ่งอธิบายยังชื่อ"เอนไซม์ที่เชื่อมโยง"ทดสอบภูมิคุ้มกัน.
เป็น ELISA ทดสอบจะดําเนินการในแผ่นไมโครไทเทอร์ / แผ่นดี 96, เป็นที่รู้จักกันเป็นแผ่นที่ใช้เทคนิคการทดสอบและใช้เช่นในการวินิจฉัยในหลอดทดลองทางคลินิก, การวิจัย, การพัฒนายาเสพติด ฯลฯ สําหรับการตรวจสอบและปริมาณแอนติบอดี, เปปไทด์, โปรตีน, และฮอร์โมน.
เทคนิค ELISA มักถูกใช้เป็นเครื่องมือวินิจฉัยในการแพทย์, เทคโนโลยีชีวภาพ, พยาธิวิทยาพืชและยังเป็นการวัดการควบคุมคุณภาพที่สําคัญในหลายอุตสาหกรรม.

อัลตราโซนิกเตรียมตัวอย่างก่อน ELISA

ก่อนที่ ELISA ทดสอบสามารถดําเนินการตัวอย่างต้องมีขั้นตอนในการเตรียมการสลายเซลล์ดังกล่าวและการสกัดโปรตีนภายในเซลล์ดีเอ็นเออาร์เอ็นเอเป็นต้น ประโยชน์ของการสลายเซลล์อัลตราโซนิกและการแยกโปรตีนคือประสิทธิภาพสูงความน่าเชื่อถือและการทําซ้ํา ปัจจัยเหล่านี้ทั้งหมดมีความสําคัญเพื่อให้ได้การวินิจฉัยและผลการวิจัยที่มีคุณภาพสูง

โปรโตคอลสําหรับพรีเอลิซาอัลตราโซนิกเซลล์สลาย

• สําหรับวัฒนธรรมของเซลล์: ก่อนที่จะสลายเซลล์อัลตราโซนิกเซลล์หมุนเหวี่ยงเป็นเวลา 5 นาทีที่ 270 x กรัมในไมโครเซนทริฟัจ ลบเหนือธรรมชาติโดยแรงบันดาลใจและเซลล์ที่ฟื้นคืนตัวใน 30 - 100 μL ของบัฟเฟอร์ RIPA. จากนั้นให้ใส่เม็ดเซลล์บนน้ําแข็งเป็นเวลา 30 นาที
• ตอนนี้ตัวอย่างเซลล์พร้อมสําหรับการสลายอัลตราโซนิก:
  ใช้อัลตราโซนิกชนิดโพรบ (เช่น Uf200 ःที ด้วยโพรบ S26d2) หรืออุปกรณ์หลายตัวอย่างอัลตราโซนิก (เช่น VialTweeter สําหรับ sonication พร้อมกันถึง 10 ขวดหรือ UIP400MPT สําหรับแผ่นไมโครไทเทอร์ / แผ่น 96 ดี) ขึ้นอยู่กับจํานวนของตัวอย่างที่คุณต้องเตรียม
  สําหรับ sonication ชนิดโพรบของตัวอย่างเดียวให้วางเซลล์ในหลอดไมโครเซนทริฟ 1.5 มิลลิลิตร
• ตั้งค่าล่วงหน้าระยะเวลาล้ําของคุณ, พลังงานรวม, โหมดวงจรและ / หรือขีดจํากัดอุณหภูมิในเมนูดิจิตอลของ ultrasonicator นี้ช่วยให้มั่นใจ sonication ที่เชื่อถือได้สูงและทําซ้ํา
• ใส่ sonotrode และสลับอุปกรณ์อัลตราโซนิกบน ค่อยๆย้ายปลายไมโครของโพรบอัลตราโซนิกผ่านตัวอย่างเพื่อ sonicate ตัวอย่างสม่ําเสมอ
  สําหรับเซลล์ส่วนใหญ่, อัลตราโซนิกสลายจะแล้วเสร็จหลังจาก 2 -4 รอบของ sonication 10 วินาที.
• หลังจาก sonication, เอา sonotrode จากตัวอย่าง ตัวอย่างควรจะบ่มบนน้ําแข็งเป็นเวลา 5 นาที จากนั้นหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 x กรัมเป็นเวลา 20 นาทีเพื่ออัดเศษ ถ่ายโอนสารเหนือไปให้หลอดไมโครเซนทริฟ ติดฉลากวิเคราะห์และเก็บที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียส
• อัลตราโซนิก sonotrode สามารถทําความสะอาดได้โดยเช็ดอย่างถูกต้องด้วยแอลกอฮอล์หรือ sonicate ในบีกเกอร์ที่เต็มไปด้วยแอลกอฮอล์เช่น 70% เอทานอล ทั้งหมดอัลตราโซนิก probes ทําจากไทเทเนียมเป็นนึ่ง

สําหรับเนื้อเดียวกันเนื้อเยื่อ:

• ล้างเนื้อเยื่อด้วยน้ําแข็งเย็น PBS (0.01M, pH = 7.4) เพื่อเอาเลือด hemolysis ส่วนเกินให้สะอาด.
• ชั่งน้ําหนักเนื้อเยื่อ (ไต, หัวใจ, ปอด, ม้าม ฯลฯ ) และ macerate เป็นชิ้นเล็ก ๆ ซึ่งเป็นเนื้อเดียวกันใน PBS ปริมาณของ PBS ที่จําเป็นเกี่ยวข้องกับน้ําหนักของเนื้อเยื่อ ตามกฎของหัวแม่มือ, 1g ของเนื้อเยื่อต้องใช้ประมาณ. 9mL PBS. ขอแนะนําให้เพิ่มสารยับยั้งโปรตีเอสบางอย่างลงใน PBS (RIPA หรือบัฟเฟอร์สลาย hypotonic ที่มีโปรติเอและสารยับยั้ง phosphatase ค็อกเทลสามารถนํามาใช้อีกทางเลือกหนึ่ง.)
• ทั้งนี้ขึ้นอยู่กับขนาดเนื้อเยื่อ, การรักษาน้ําวนสั้น (ประมาณ 1-2 นาที. ใน 15 วินาทีชีพจร) จะมีประโยชน์ในการรักษาเนื้อเยื่อก่อน
• ติดไมโครปลายเช่น S26d2 กับเครื่องอัลตราโซนิกของคุณ วางหลอดตัวอย่างด้วยเนื้อเยื่อในอ่างน้ําแข็ง
• sonicate ตัวอย่างกับ ultrasonicator ของคุณเช่น UP200St (80% แอมพลิจูด) เป็นเวลา 1 นาทีในโหมดชีพจร (15 วินาทีบนหยุดชั่วคราว 15 วินาที) เก็บตัวอย่างในอ่างน้ําแข็ง
• เนื้อเดียวกันจะถูกหมุนวนแล้วเพื่อให้ได้สระว่ายน้ําที่เฉพาะเจาะจง (cytosolic, นิวเคลียร์, ยลนไดหรือไลโซม) เพื่อเพิ่มโปรตีนสําหรับการวิเคราะห์ โดยการเหวี่ยงตัวอย่างสําหรับ5นาทีที่5000×g,

การควบคุมอุณหภูมิที่เชื่อถือได้ในระหว่าง sonication

อุณหภูมิเป็นปัจจัยที่มีอิทธิพลต่อกระบวนการที่สําคัญอย่างยิ่งที่มีความสําคัญอย่างยิ่งสําหรับการรักษาตัวอย่างทางชีวภาพเช่นเพื่อป้องกันการย่อยสลายความร้อนของโปรตีน เป็นทุกเทคนิคการเตรียมตัวอย่างเชิงกล sonication สร้างความร้อน อย่างไรก็ตาม อุณหภูมิของตัวอย่างสามารถควบคุมได้ดีเมื่อใช้อุปกรณ์ Hielscher Ultrasonics เรานําเสนอตัวเลือกต่างๆเพื่อตรวจสอบและควบคุมอุณหภูมิของตัวอย่างของคุณในขณะที่การเตรียมพวกเขาด้วย ultrasonicator โพรบชนิดหรือ VialTweeter ก่อนการวิเคราะห์

1. การตรวจสอบอุณหภูมิตัวอย่าง: โปรเซสเซอร์อัลตราโซนิกดิจิตอล Hielscher ทั้งหมดมีการติดตั้งซอฟต์แวร์อัจฉริยะและเซ็นเซอร์อุณหภูมิแบบเสียบได้ เสียบเซ็นเซอร์วัดอุณหภูมิเข้ากับอุปกรณ์อัลตราโซนิก (เช่น Uf200 ःที, UP200St, VialTweeter, UIP400MTP) และใส่ปลายเซ็นเซอร์อุณหภูมิในหลอดตัวอย่าง ผ่านดิจิตอลสีสัมผัสจอแสดงผล, คุณสามารถตั้งค่าในเมนูของหน่วยประมวลผลอัลตราโซนิกช่วงอุณหภูมิที่เฉพาะเจาะจงสําหรับ sonication ตัวอย่างของคุณ เครื่อง ultrasonicator จะหยุดโดยอัตโนมัติเมื่อถึงอุณหภูมิสูงสุดและหยุดชั่วคราวจนกว่าอุณหภูมิตัวอย่างจะลดลงไปต่ํากว่าค่าอุณหภูมิที่ตั้งไว้∆ จากนั้น sonication เริ่มโดยอัตโนมัติอีกครั้ง คุณสมบัติอัจฉริยะนี้ช่วยป้องกันการย่อยสลายที่เกิดจากความร้อน
2. เกี่ยวกับชุดตัวอย่างหลายตัวอย่างอัลตราโซนิก VialTweeter บล็อกไทเทเนียมซึ่งถือหลอดตัวอย่างสามารถระบายความร้อนก่อน ใส่บล็อก VialTweeter (เฉพาะ sonotrode โดยไม่ต้องแปลงสัญญาณ!) ลงในตู้เย็นหรือช่องแช่แข็งเพื่อก่อนเย็นบล็อกไทเทเนียมช่วยเลื่อนอุณหภูมิเพิ่มขึ้นในตัวอย่าง ถ้าเป็นไปได้ตัวอย่างตัวเองสามารถระบายความร้อนก่อนเกินไป
3. ใช้น้ําแข็งอาบน้ําหรือน้ําแข็งแห้งเย็นในระหว่าง sonication วางหลอดตัวอย่างของคุณในระหว่าง sonication ลงในอ่างอาบน้ําน้ําแข็ง สําหรับ VialTweeter ใช้ถาดตื้นที่เต็มไปด้วยน้ําแข็งแห้งและวาง VialTweeter บนน้ําแข็งแห้งเพื่อให้ความร้อนอย่างรวดเร็วสามารถกระจาย

ลูกค้าทั่วโลกใช้ Hielscher โพรบ ultrasonicators เป็นหน่วย sonication หลายตัวอย่าง VialTweeter และ UIP400MTP สําหรับงานเตรียมตัวอย่างประจําวันของพวกเขาในห้องปฏิบัติการทางชีวภาพทางชีวเคมีทางการแพทย์และทางคลินิก ซอฟต์แวร์อัจฉริยะและการควบคุมอุณหภูมิของโปรเซสเซอร์ Hielscher อุณหภูมิจะถูกควบคุมได้อย่างน่าเชื่อถือและหลีกเลี่ยงการย่อยสลายตัวอย่างความร้อน การเตรียมตัวอย่างอัลตราโซนิกด้วย Hielscher อัลตราโซนิกโซลูชั่นให้ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้สูงและทําซ้ําได้!