เทคโนโลยีอัลตราซาวนด์ Hielscher

โปรโตคอลสําหรับ SARS-CoV-2 Coronavirus การกระตุ้นกับ Sonication

Hielscher VialTweeter เป็นหน่วยเตรียมหลายตัวอย่างอัลตราโซนิกที่ไม่ซ้ํากันซึ่งใช้ในการยกเลิกการ coronavirus SARS-COV-2 ขวดแก้วสามารถเตรียมขวดตัวอย่างได้ 10 ขวดพร้อมกัน และจึงเป็นหน่วยที่เหมาะสําหรับการประมวลผลตัวอย่างมวล

การไม่เปิดใช้งานของ SARS-CoV-2 Coronavirus กับ VialTweeter

หลังจากถอดซ่อม, monolayers ถูกล้างสามครั้งด้วยเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (PBS) ก่อนที่จะขูดเซลล์เป็น 1mL MEM / 5% FBS และ sonicated (3 × 10 วินาทีบน, 10 วินาทีปิดที่ 100% พลังงานและ amplitude) โดยใช้หน่วยประมวลผลอัลตราโซนิก Hielscher UP200St กับ VialTweeter เอกสาร แนบ 3000 × กรัมเป็นเวลา 10 นาที 

อ่านโปรโตคอลเต็มรูปแบบที่นี่สําหรับ SARS - CoV - 2 coronavirus ไม่ได้ใช้งานโดย Welch et al. (2020) ด้านล่าง :

เซลล์และไวรัส

เซลล์ Vero E6 (Vero C1008; ATCC CRL-1586) ได้รับการเพาะเลี้ยงในการปรับเปลี่ยนสื่อที่จําเป็นขั้นต่ําของอินทรี (MEM) เสริมด้วย 10% (v/v) เซรั่มทารกในครรภ์น่อง (FCS) ไวรัสที่ใช้เป็น SARS- CoV- 2 สายพันธุ์ hCOV-19/England/2/2020, แยกโดย PHE จากกลุ่มผู้ป่วยครั้งแรกในสหราชอาณาจักรใน 29/01/2020 ไวรัสนี้ได้รับที่ทาง 1 และใช้สําหรับการศึกษาการยกเลิกการเรียกใช้ที่ทาง 2 หรือ 3.
สําหรับน้ํายาและสารเคมีที่ใช้สําหรับ SARS-CoV-2 การไม่ใช้งานเช่นเดียวกับการกําจัดของพิษสารโปรดดูรายงานทางวิทยาศาสตร์ของ Welch et al. (2020).

The ultrasonic sample preparation unit VialTweeter is used for the inactivation of SARS-CoV-2 coronavirus

การยับยั้งไวรัสโดยผงซักฟอก – โปรโตคอลการยกเลิกการเรียกใช้ Coronavirus SARS-Cov-2 โดย Welch et al. 2020

การไม่เปิดใช้งาน SARS-Cov-2

สําหรับผลิตภัณฑ์เชิงพาณิชย์การเตรียมไวรัส (ของเหลววัฒนธรรมเนื้อเยื่อ titers ตั้งแต่ 1 × 106 ถึง 1 × 108 PFU/ml) ได้รับการปฏิบัติในไตร่ตมด้วยน้ํายาที่ความเข้มข้นและสําหรับเวลาติดต่อที่แนะนําในคําแนะนําของผู้ผลิตสําหรับการใช้งาน, ที่มีอยู่, หรือสําหรับความเข้มข้นและครั้งที่ร้องขอโดยเฉพาะโดยห้องปฏิบัติการทดสอบของ ซึ่งช่วงของความเข้มข้นที่ได้รับจากผู้ผลิต, อัตราส่วนต่ําสุดของผลิตภัณฑ์เพื่อตัวอย่างได้รับการทดสอบ (เช่นความเข้มข้นต่ําสุดที่แนะนําของผลิตภัณฑ์ทดสอบ). ตัวอย่างการขนส่งหลอดน้ํายาได้รับการทดสอบโดยใช้อัตราส่วนของปริมาตรของของเหลวเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อถึงสิบปริมาณของน้ํายาเว้นแต่เป็นอัตราส่วนปริมาณของของเหลวตัวอย่างเพื่อน้ํายาถูกกําหนดโดยผู้ผลิต ผงซักฟอก, น้ํายาตรึงและตัวทําละลายได้รับการทดสอบที่ความเข้มข้นที่ระบุไว้สําหรับเวลาที่ระบุ ขั้นตอนยกเลิกการเรียกใช้ทั้งหมดได้ดําเนินการที่อุณหภูมิห้อง (18 - 25 ° C) สําหรับการทดสอบประเภทตัวอย่างทางเลือก, ไวรัสถูกแทงเข้าไปในเมทริกซ์ตัวอย่างที่ระบุที่อัตราส่วน 1:9, แล้วรับการรักษาด้วยการทดสอบสารดังกล่าวข้างต้น. การทดลองทั้งหมดรวมตัวอย่างที่ผ่านการตรวจสอบการควบคุมการจําลองแบบ triplicate ที่มีปริมาณเทียบเท่าของ PBS แทนน้ํายาทดสอบ ทันทีหลังจากเวลาติดต่อที่จําเป็น, 1mL ของการรักษาตัวอย่างได้รับการประมวลผลโดยใช้เมทริกซ์การกรองที่เลือกอย่างเหมาะสม. การกําจัดสารสําหรับการทดสอบการไม่มีการใช้งานได้ดําเนินการในรูปแบบคอลัมน์หมุนขนาดใหญ่โดยใช้ Pierce 4mL กําจัดผงซักฟอกคอลัมน์สปิน (Thermo Fisher) หรือโดยการกรอกว่างเจาะ 10mL คอลัมน์หมุนเหวี่ยงความจุ (Thermo Fisher) กับ SM2 ไบโอ-ลูกปัด, Sephacryl S-400HR หรือ Sephadex LH-20 เพื่อให้ 4mL บรรจุลูกปัด / เรซิน. สําหรับการกรองโดยใช้ตัวกรอง Amicon ตัวอย่าง 2 × 500μl ถูกกรองโดยใช้ตัวกรองแบบแรงเหวี่ยงสองตัวโดยวิธีการก่อนหน้านี้แล้วรวมเข้าด้วยกัน สําหรับฟอร์มาลดีไฮด์และฟอร์มาลดีไฮด์ที่มีการกําจัด glutaraldehyde, หนึ่งตัวกรองถูกนํามาใช้กับปริมาณตัวอย่าง 1× 500μl, resuspended หลังจากการประมวลผลใน 500 ไมโครลิตร PBS, และเพิ่ม 400ul MEM / 5% FBS. สําหรับการยับยั้งการติดเชื้อ VialTweeter at the ultrasonic processor UP200STโมโนเลเยอร์ 12.5 ซม.2 ขวดของเซลล์ Vero E6 (2.5 × 106 เซลล์ / ขวดใน 2.5mL MEM / 5% FBS) ติดเชื้อที่ MOI 0.001 และบ่มที่ 37 ° C / 5% CO2 เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ซูเปอร์เนทถูกถอดออกและเซลล์คงที่โดยใช้ 5mL ของฟอร์มาลดีไฮด์หรือฟอร์มาลดีไฮด์และ glutaraldehyde ที่อุณหภูมิห้องสําหรับ 15 หรือ 60 นาที ฟิสชันได้ถูกลบออกและ monolayers ล้างสามครั้งด้วย PBS ก่อนที่จะขูดเซลล์เป็น 1mL MEM / 5% FBS และ sonicated (3 × 10 วินาทีใน 10 วินาทีออกที่ 100% พลังงานและ amplitude) โดยใช้ UP200St กับสิ่งที่แนบมา Vialtweeter (Hielscher อัลตราซาวด์เทคโนโลยี) 3000 × กรัมเป็นเวลา 10 นาที

VialTweeter สำหรับ Sonication เข้มข้นของขวดปิด

ขวดสําหรับ sonication เข้มข้นของขวดปิด

ขอข้อมูล





Various reagents have been tested for the inactivation of the SARS-CoV-2 coronavirus using the ultrasonic sample prep unit VialTweeter.

รายละเอียดของสารที่ใช้สําหรับ SARS-CoV-2 coronavirus ใช้งานกับ VialTweeter อัลตราโซนิกตามโปรโตคอลโดย Welch et al. 2020

โปรโตคอลเต็มรูปแบบรวมทั้งการใช้ของ Hielscher VialTweeter สามารถพบได้ที่นี่:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

The multi-sample ultrasonicator VialTweeter allows for simultaneous sample preparation of up to 10 vials under same process conditions. The VialTweeter is an established ultrasonic device used for the inactivation of corona virus SARS-CoV-2 (Click to enlarge!)

สําหรับการเปิดใช้งานไวรัสอัลตราโซนิก

ข้อดีของ VialTweeter ได้อย่างรวดเร็ว

  • Sonication ถึง 10 ขวดพร้อมกัน
  • ไม่มีการปนเปื้อนข้าม
  • ไม่มีการสูญเสียตัวอย่าง
  • การบันทึกข้อมูลอัตโนมัติ
  • ใช้งานง่ายและปลอดภัยในการใช้งาน
ขวดแก้วยังใช้สําหรับ

  • สลายเซลล์
  • การหยุดชะงักของอนุภาคไวรัส
  • การสกัดกรดนิวคลีอิก: การแยกดีเอ็นเอ/อาร์เอ็นเอ
  • การกระจายตัวของดีเอ็นเอ/อาร์เอ็นเอ
  • การละลายน้ํา
  • เครื่องกําจัดของอัลตราโซนิกและเซลล์ที่รบกวนที่ซับซ้อน

    หลายตัวอย่างเครื่องอัลตราโซนิก VialTweeter เป็นเพียงหนึ่งในโซลูชั่นอัลตราโซนิกจํานวนมากสําหรับการเตรียมตัวอย่างในห้องปฏิบัติการทางชีวเคมีและทางคลินิก Hielscher Ultrasonics มี dismembrator อัลตราโซนิกเหมาะสําหรับโปรแกรมประยุกต์ของคุณ เช่นสลายเซลล์, การสกัดเซลล์, การทําให้เป็นเนื้อเดียวกันเนื้อเยื่อ, ไลเสท solubilization, ละลาย, degassing
    แจ้งให้เราทราบจํานวนตัวอย่างที่คุณต้องดําเนินการต่อชั่วโมงและวันถ้าคุณต้องการ sonication โดยตรงหรือโดยอ้อมและสิ่งที่เป้าหมายของการรักษาตัวอย่างอัลตราโซนิกเป็น เราจะแนะนําให้คุณหน่วยอัลตราโซนิกที่เหมาะสมที่สุดสําหรับกิจวัตรประจําวันของคุณ!
    โปรเซสเซอร์อัลตราโซนิกดิจิตอล Hielscher Ultrasonics 'มีการติดตั้งซอฟต์แวร์สมาร์ท, บันทึกข้อมูลอัตโนมัติ, ตัวเลือกการตั้งค่าพื้นฐานที่ง่ายสําหรับการควบคุมอุณหภูมิ, ระยะเวลา sonication, วงจร / โหมดชีพจรเช่นเดียวกับการส่องสว่างตัวอย่างและเบราว์เซอร์การควบคุมระยะไกล เรามุ่งมั่นที่จะทําให้อุปกรณ์อัลตราโซนิกของเราเป็นสมาร์ทที่สุดเพื่อให้การวิจัยและกิจวัตรการทํางานของคุณกลายเป็นที่สะดวกและประสบความสําเร็จที่สุด
    คลิกที่นี่เพื่อหาการใช้งานเพิ่มเติมรวมทั้งโปรโตคอลของการเตรียมตัวอย่างอัลตราโซนิกกับ VialTweeter!

    ติดต่อเรา! / ถามเรา!

    สอบถามข้อมูลเพิ่มเติม

    กรุณาใช้แบบฟอร์มด้านล่างเพื่อขอข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับตัวประมวลผลอัลตราโซนิกโปรแกรมประยุกต์และราคา เราจะยินดีที่จะหารือเกี่ยวกับกระบวนการของคุณกับคุณและเพื่อให้คุณระบบอัลตราโซนิกการประชุมความต้องการของคุณ!










    Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

    Hielscher Ultrasonics ผลิต homogenizers อัลตราโซนิกประสิทธิภาพสูงสําหรับการใช้งานผสมกระจาย emulsification และสกัดในห้องปฏิบัติการนักบินและอุตสาหกรรมขนาด

    วรรณกรรม / อ้างอิง



    ข้อเท็จจริงที่รู้

    เซลล์ Vero คืออะไร?

    Vero E6 หรือที่เรียกว่า Vero C1008 (ATCC หมายเลข CRL-1586) เป็นสายเซลล์โคลนจาก Vero 76 และใช้ในการวิจัยของ SARS CoV และ SARS-CoV-2 coronaviruses. เซลล์ Vero เป็นเชื้อสายของเซลล์ที่ใช้ในเซลล์วัฒนธรรม เดอะ เวโร’ เชื้อสายถูกแยกออกจากเซลล์เยื่อบุผิวไตสกัดจากลิงสีเขียวแอฟริกัน (sp Chlorocebus.)
    เซลล์ Vero E6 แสดงการยับยั้งการติดต่อบางอย่าง, จึงเหมาะสําหรับการแพร่กระจายไวรัสที่ทําซ้ําช้า. เซลล์ Vero E6 ใช้กันทั่วไปในการตรวจสอบ cytopathology ของ coronaviruses SARS-CoV และ SARS-CoV-2 เป็น Vero เซลล์ (แอฟริกันเซลล์ไตลิงสีเขียว) แสดงการแสดงออกมากมายของเอนไซม์ angiotensin แปลง 2 (ACE2) ตัวรับ. ตัวรับ ACE2 เป็นบริเวณที่เทียบท่าที่สําคัญสําหรับโรคหลอดเลือดหัวใจ SARS-CoV-2
    ตัวอย่างเช่น Ogando et al. (2020) พบว่า SARS- CoV- 2 – เมื่อเทียบกับ SARS-CoV – สร้างระดับที่สูงขึ้นของไวรัสภายในเซลล์ RNA แต่น่าสงสารเกี่ยวกับ 50 พับน้อยเชื้อไวรัสลูกหลานถูกกู้คืนจากสื่อวัฒนธรรม นอกจากนี้, พวกเขากําหนดความไวของไวรัสทั้งสองถึงสามยับยั้งการจัดตั้งขึ้นของการจําลองแบบ coronavirus (Remdesivir, Alisporivir และคลอโรค) จะคล้ายกันมาก, แต่ที่การติดเชื้อ SARS-CoV-2 เป็นอย่างมากที่สําคัญต่อการรักษาก่อนของเซลล์ที่มีอัลฟาเฟรอน pegylated. ความแตกต่างที่สําคัญระหว่างสองไวรัสคือความจริงที่ว่า – เมื่อผ่านในเซลล์ Vero E6 – SARS-CoV-2 เห็นได้ชัดว่าอยู่ภายใต้แรงกดดันการเลือกที่แข็งแกร่งเพื่อรับการกลายพันธุ์ปรับตัวในยีนโปรตีนที่ขัดขวาง การกลายพันธุ์เหล่านี้เปลี่ยนแปลงหรือลบเว็บไซต์ความแตกแยกเหมือน furin แบบ putative ในภูมิภาคที่เชื่อมต่อ S1 และ S2 โดเมนและผลในการเปลี่ยนแปลงฟีโนไทป์ที่โดดเด่นมากในการทดสอบแผ่นโลหะ