วิธีปฏิบัติสำหรับการทำให้ไวรัสโคโรนา SARS-CoV-2 หมดฤทธิ์ด้วยคลื่นอัลตราโซนิก

Hielscher VialTweeter เป็นเครื่องเตรียมตัวอย่างหลายตัวอย่างด้วยคลื่นอัลตราโซนิกที่มีเอกลักษณ์เฉพาะ ซึ่งใช้ทำให้ไวรัสโคโรนา SARS-COV-2 หมดฤทธิ์ VialTweeter สามารถเตรียมตัวอย่างในขวดได้สูงสุด 10 ขวดพร้อมกัน จึงเป็นเครื่องที่เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการประมวลผลตัวอย่างจำนวนมาก

การทำให้ไวรัสโคโรนา SARS-CoV-2 หมดฤทธิ์ด้วย VialTweeter

หลังจากนำสารตรึงสภาพออกแล้ว ล้างเซลล์ชั้นเดียวสามครั้งด้วยสารละลายเกลือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต (PBS) ก่อนขูดเซลล์ลงใน MEM/5% FBS ปริมาตร 1mL และให้คลื่นอัลตราโซนิก (3 × 10 วินาทีในช่วงเปิด โดยหยุด 10 วินาทีในช่วงปิด ที่กำลังและแอมพลิจูด 100%) โดยใช้เครื่องประมวลผลด้วยคลื่นอัลตราโซนิกของ Hielscher รุ่น UP200St พร้อม VialTweeter ซึ่งเป็นอุปกรณ์ต่อพ่วง ทำให้ของเหลวส่วนใสปราศจากตะกอนโดยปั่นเหวี่ยงที่ 3000 × g เป็นเวลา 10 นาที อ่านวิธีปฏิบัติฉบับเต็มสำหรับการทำให้ไวรัสโคโรนา SARS-CoV-2 หมดฤทธิ์โดย Welch et al. (2020) ได้ด้านล่าง:

เซลล์และไวรัส

เพาะเลี้ยงเซลล์ Vero E6 (Vero C1008; ATCC CRL-1586) ในอาหารเลี้ยงเซลล์ขั้นต่ำที่จำเป็นของ Eagle สูตรดัดแปลง (MEM) ซึ่งเสริมด้วยซีรัมลูกโคในครรภ์ (FCS) 10% (v/v) ไวรัสที่ใช้คือ SARS-CoV-2 สายพันธุ์ hCOV-19/England/2/2020 ซึ่ง PHE แยกได้จากกลุ่มผู้ป่วยกลุ่มแรกในสหราชอาณาจักรเมื่อวันที่ 29/01/2020 ได้รับไวรัสนี้ที่การถ่ายเชื้อครั้งที่ 1 และใช้ในการศึกษาการทำให้หมดฤทธิ์ที่การถ่ายเชื้อครั้งที่ 2 หรือ 3
สำหรับสารรีเอเจนต์และสารเคมีที่ใช้ทำให้ SARS-CoV-2 หมดฤทธิ์ รวมถึงการขจัดความเป็นพิษต่อเซลล์ของสารรีเอเจนต์ โปรดดูรายงานทางวิทยาศาสตร์ของ Welch et al. (2020)

การทำให้ไวรัสหมดฤทธิ์ด้วยสารซักฟอก – วิธีปฏิบัติสำหรับการทำให้ไวรัสโคโรนา SARS-CoV-2 หมดฤทธิ์โดย Welch et al. 2020

การทำให้ SARS-CoV-2 หมดฤทธิ์


สำหรับผลิตภัณฑ์เชิงพาณิชย์ นำตัวอย่างไวรัสที่เตรียมไว้ (ของเหลวจากการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ ซึ่งมีไตเตอร์อยู่ในช่วง 1 × 10⁶ ถึง 1 × 10⁸ PFU/ml) มาทดสอบซ้ำสามชุดด้วยสารรีเอเจนต์ที่ความเข้มข้นและระยะเวลาสัมผัสตามคำแนะนำการใช้งานของผู้ผลิต หากมีคำแนะนำดังกล่าว หรือตามความเข้มข้นและระยะเวลาที่ห้องปฏิบัติการทดสอบร้องขอเป็นการเฉพาะ ในกรณีที่ผู้ผลิตระบุช่วงความเข้มข้นไว้ ทดสอบที่อัตราส่วนผลิตภัณฑ์ต่อตัวอย่างต่ำที่สุด (กล่าวคือ ความเข้มข้นต่ำที่สุดของผลิตภัณฑ์ทดสอบที่แนะนำ) ทดสอบสารรีเอเจนต์ในหลอดขนส่งสิ่งส่งตรวจโดยใช้อัตราส่วนของเหลวจากการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อหนึ่งส่วนโดยปริมาตรต่อสารรีเอเจนต์สิบส่วนโดยปริมาตร เว้นแต่ผู้ผลิตจะระบุอัตราส่วนปริมาตรของเหลวตัวอย่างต่อสารรีเอเจนต์ไว้ ทดสอบสารซักฟอก สารตรึงสภาพ และตัวทำละลายที่ความเข้มข้นและระยะเวลาที่ระบุ ดำเนินขั้นตอนการทำให้หมดฤทธิ์ทั้งหมดที่อุณหภูมิห้องโดยรอบ (18 – 25°C) สำหรับการทดสอบตัวอย่างชนิดอื่น เติมไวรัสลงในเมทริกซ์ตัวอย่างที่ระบุในอัตราส่วน 1:9 จากนั้นให้ตัวอย่างสัมผัสกับสารรีเอเจนต์ทดสอบตามที่กล่าวข้างต้น การทดลองทั้งหมดมีตัวอย่างควบคุมที่ผ่านขั้นตอนจำลองซ้ำสามชุด โดยใช้ PBS ในปริมาตรเท่ากันแทนสารรีเอเจนต์ทดสอบ ทันทีที่ครบระยะเวลาสัมผัสที่กำหนด นำตัวอย่างที่ผ่านการสัมผัสกับสารรีเอเจนต์ปริมาตร 1mL ไปผ่านวัสดุกรองที่เลือกไว้อย่างเหมาะสม ขจัดสารรีเอเจนต์สำหรับการทดสอบการทำให้หมดฤทธิ์โดยใช้คอลัมน์ปั่นเหวี่ยงขนาดใหญ่ขึ้น ได้แก่ Pierce 4mL Detergent Removal Spin Columns (Thermo Fisher) หรือเติม SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-400HR หรือ Sephadex LH-20 ลงในคอลัมน์ปั่นเหวี่ยง Pierce เปล่าความจุ 10mL (Thermo Fisher) เพื่อให้ได้เม็ดบีด/เรซินที่อัดแน่นปริมาตร 4mL สำหรับการทำให้บริสุทธิ์ด้วยตัวกรอง Amicon นำตัวอย่าง 2 × 500μl มาทำให้บริสุทธิ์โดยใช้ตัวกรองแบบปั่นเหวี่ยงสองตัวตามวิธีที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ แล้วจึงรวมเข้าด้วยกัน สำหรับการขจัด formaldehyde และ formaldehyde ร่วมกับ glutaraldehyde ใช้ตัวกรองหนึ่งตัวกับตัวอย่างปริมาตร 1× 500μl หลังผ่านกระบวนการแล้ว นำตัวอย่างกลับมาแขวนลอยใน PBS ปริมาตร 500μl และเติมลงใน MEM/5% FBS ปริมาตร 400ul สำหรับการทำให้หมดฤทธิ์ใน เซลล์ชั้นเดียวที่ติดเชื้อ ใช้ขวดเพาะเลี้ยงพื้นที่ 12.5 cm² สำหรับเซลล์ Vero E6 (2.5 × 10⁶ เซลล์/ขวด ใน MEM/5% FBS ปริมาตร 2.5mL) โดยทำให้ติดเชื้อที่ MOI 0.001 และบ่มที่ 37°C/5% CO₂ เป็นเวลา 24 ชั่วโมง นำของเหลวส่วนใสออก และตรึงสภาพเซลล์โดยใช้สารปริมาตร 5mL ซึ่งเป็น formaldehyde หรือ formaldehyde ร่วมกับ glutaraldehyde ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 หรือ 60 นาที นำสารตรึงสภาพออก และล้างเซลล์ชั้นเดียวสามครั้งด้วย PBS ก่อนขูดเซลล์ลงใน MEM/5% FBS ปริมาตร 1mL และให้คลื่นอัลตราโซนิก (3 × 10 วินาทีในช่วงเปิด โดยหยุด 10 วินาทีในช่วงปิด ที่กำลังและแอมพลิจูด 100%) โดยใช้ UP200St พร้อมอุปกรณ์ต่อพ่วง VialTweeter (Hielscher Ultrasound Technology) ทำให้ของเหลวส่วนใสปราศจากตะกอนโดยปั่นเหวี่ยงที่ 3000 × g เป็นเวลา 10 นาที


รายละเอียดของสารรีเอเจนต์ที่ใช้ทำให้ไวรัสโคโรนา SARS-CoV-2 หมดฤทธิ์ด้วย VialTweeter แบบอัลตราโซนิกตามวิธีปฏิบัติของ Welch et al. 2020

สามารถดูวิธีปฏิบัติฉบับเต็มซึ่งรวมถึงการใช้ Hielscher VialTweeter ได้ที่นี่:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

เครื่องสลายเนื้อเยื่อและเครื่องทำลายเซลล์ด้วยคลื่นอัลตราโซนิกที่ล้ำสมัย

เครื่องอัลตราโซนิกสำหรับตัวอย่างหลายตัวอย่าง VialTweeter เป็นเพียงหนึ่งในโซลูชันอัลตราโซนิกมากมายสำหรับการเตรียมตัวอย่างในห้องปฏิบัติการชีววิทยา ชีวเคมี และคลินิก Hielscher Ultrasonics มีเครื่องสลายเนื้อเยื่อด้วยคลื่นอัลตราโซนิกที่เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการใช้งานของคุณ เช่น การสลายเซลล์ การสกัดสารจากเซลล์ การทำให้เนื้อเยื่อเป็นเนื้อเดียวกัน การทำให้สารจากการสลายเซลล์ละลาย การละลายสาร การไล่ก๊าซออกจากตัวอย่าง เป็นต้น
โปรดแจ้งให้เราทราบว่าคุณต้องประมวลผลตัวอย่างกี่ตัวอย่างต่อชั่วโมงและต่อวัน ต้องการให้คลื่นอัลตราโซนิกโดยตรงหรือโดยอ้อม และเป้าหมายของการ处理ตัวอย่างด้วยคลื่นอัลตราโซนิกคืออะไร เราจะแนะนำเครื่องอัลตราโซนิกที่เหมาะสมที่สุดสำหรับงานประจำวันของคุณ!
เครื่องประมวลผลด้วยคลื่นอัลตราโซนิกแบบดิจิทัลของ Hielscher Ultrasonics มาพร้อมซอฟต์แวร์อัจฉริยะ การบันทึกข้อมูลอัตโนมัติ ตัวเลือกการตั้งค่าล่วงหน้าที่ใช้งานง่ายสำหรับการควบคุมอุณหภูมิ ระยะเวลาการให้คลื่นอัลตราโซนิก และโหมดรอบ/พัลส์ รวมถึงการส่องสว่างตัวอย่างและการควบคุมระยะไกลผ่านเบราว์เซอร์ เรามุ่งมั่นทำให้อุปกรณ์อัลตราโซนิกของเรามีความอัจฉริยะมากที่สุดเท่าที่เป็นไปได้ เพื่อให้งานวิจัยและงานประจำวันของคุณสะดวกและประสบความสำเร็จมากที่สุดเท่าที่เป็นไปได้
คลิกที่นี่เพื่อดูการใช้งานเพิ่มเติม รวมถึงวิธีปฏิบัติสำหรับการเตรียมตัวอย่างด้วยคลื่นอัลตราโซนิกโดยใช้ VialTweeter!