การเตรียมตัวอย่างด้วยขวดอัลตราโซนิกทวีตเตอร์

การเตรียมตัวอย่างอัลตราโซนิก

Ultrasonication is a common technique of sample treatment in order to get the sample ready for analyses such as polymers chain reaction (PCR), Western Blots, assays, molecular sequencing, chromatography etc. Ultrasonication is a technique widely used in laboratories to treat samples pre-analytically. A major advantage of sonication is that the working principle of ultrasound is based on purely mechanical forces. Ultrasonic lysis and cell disruption is achieved by sonomechanical shear forces, which gives ultrasonication the advantage that the solvents used for protein extraction can be used also during lysis. Ultrasonic cell disruptors such as the VialTweeter break the cell walls / membranes and promote mass transfer between cell interior and solvent. Thereby, the analyte (e.g. DNA, RNA, proteins, organelles etc.) are efficiently transferred from the cell matrix into the solvent. This means the steps of quenching and extraction overlap with the ultrasonic cell disruption process, which makes ultrasonic lysis very effective. Furthermore, ultrasonic sample preparation does not require detergents and other lysis reagents, which might alter and destruct the structure of the lysate and is known for the subsequent troubles with purification. Another lysis method, the enzymatic disruption requires long incubation times and delivers often non-reproducible results. Ultrasonic sample preparation overcomes common problems in sample preparation such as tissue homogenization, cell disruption, lysis, protein extraction and lysate solubilization. Since the intensity of the ultrasonic treatment can be exactly controlled and adjusted to the biological sample, degradation and sample loss are avoided. Automatically monitored and controlled sample temperature, pulse mode and sonication duration ensure optimum outcomes.

ขวดแก้วเป็นพิเศษสําหรับห้องปฏิบัติการที่ทํางานที่ต้องเตรียมพร้อมกันของหลายตัวอย่างภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน ขวดเป็น sonotrode บล็อกอัลตราโซนิกที่สามารถถือได้ถึง 10 ขวด (เช่น Eppendorf, centriguge, ท่อ NUNC, ขวด cryo) และ sonicates พวกเขาอย่างเข้มข้นภายใต้เงื่อนไขการควบคุมอย่างแม่นยํา เนื่องจากพลังงานอัลตราโซนิกเป็นคู่ผ่านผนังของขวดลงในสื่อตัวอย่างขวดรักษาปิดในระหว่างการรักษา ดังนั้นการสูญเสียตัวอย่างและการปนเปื้อนข้ามจะหลีกเลี่ยงอย่างสมบูรณ์

ขวดและหลอดที่เหมาะสมขวดTweeter

ขวดแก้วมีความเหมาะสมที่จะถือ 10 ทั่วไปท่อรูปกรวยหรือรอบด้านล่างเช่น Eppendorf, centrifuge, cryo ขวดและชนิดขวด NUNC ต่างๆ แต่หลุมสามารถปรับแต่งให้ขวดและหลอดขนาดอื่น ตามคําขอ โปรดแจ้งให้เราทราบชนิดของหลอดทดสอบที่คุณต้องการใช้เพื่อให้เราสามารถปรับเปลี่ยน VialTweeter ของคุณตาม สําหรับหลอดทดสอบขนาดใหญ่เช่นหลอดเหยี่ยวและภาชนะทดสอบอื่น ๆ บีกเกอร์และเรือ VialPress เป็นทางออกที่สะดวก

ขวดแก้วกับขวด

ในขณะที่ VialTweeter ตัวเองกับหลุม 10 หลอดของมันอยู่แล้วอุปกรณ์อัลตราโซนิกที่ไม่ซ้ํากันและการทํางานสูง, เพิ่ม VialPress ทําให้ VialTweeter มากยิ่งขึ้นอเนกประสงค์และมีความยืดหยุ่นสําหรับการดําเนินงาน VialPress เป็นอุปกรณ์เสริมสําหรับ VialTweeter ประกอบด้วยแถบหนีบที่ช่วยในการตรึงท่อตัวอย่างขนาดใหญ่เช่นหลอดเหยี่ยวหรือบีกเกอร์ทดสอบขนาดเล็กถึงขนาดกลางอื่น ๆ ที่ด้านหน้า VialTweeter ภาพด้านซ้ายแสดง VialTweeter ถือ 10 ขวด Eppendorf ในบล็อกในขณะที่ VialPress fixates หนึ่งหลอดทดสอบขนาดใหญ่ที่ด้านหน้าสําหรับ sonication หลอดทดสอบขนาดใหญ่สําหรับ sonication ที่รุนแรง

โพรโทคอการเตรียมตัวอย่าง

ขวดแก้วถูกนํามาใช้กันอย่างแพร่หลายเพื่อ sonicate ตัวอย่างทางชีวภาพ ก่อนการวิเคราะห์ตัวอย่างจะต้องเตรียมการวิเคราะห์ทางชีวเคมีหรือชีวฟิสิกส์และการทดสอบเช่นโดย lysis, เนื้อเดียวกันเนื้อเยื่อการสกัดโปรตีน, DNA / RNA เฉือน degassing ฯลฯ ขวดยา fulfils กระบวนการอัลตราโซนิกเหล่านี้ได้อย่างน่าเชื่อถือ และให้ผลทําซ้ํา การประยุกต์ใช้ทั่วไปของ VialTweeter คือการสลายตัว / เซลล์ของเนื้อเยื่อเลี้ยงลูกด้วยนม (มนุษย์และเนื้อสัตว์) เช่นเดียวกับเซลล์แบคทีเรียและอนุภาคไวรัส ประสบความสําเร็จ VialTweeter-รับการรักษาทางชีวภาพตัวอย่างได้แก่เซลล์เยื่อบุผิวของมนุษย์ปอด, เซลล์ต้นกําเนิด haematopoietic, เซลล์มะเร็งเม็ดเลือดขาวไมลอยด์, เอสเชอริเคียโคลี, เชื้อ Bacillus subtilis, บาซิลลัสแอนทราซีส, ฟรานซิสเซลลา, ยารีซิเนีย, ไพโนเจน, พระจันทร์, ปอดบวม, mycobacteria / Mycobacterium วัณโรคที่ซับซ้อน (MTBC) และอื่น ๆ แบคทีเรีย, พฤกษศาสตร์, และเซลล์จุลินทรีย์.
ด้านล่างนี้คุณสามารถหาโปรโตคอลที่เลือกไม่กี่ที่มี VialTweeter

การสลายตัวของ E.Coli กับขวดยาสําหรับการวัดใน Vivo กลูตาไธโอน

แบคทีเรีย Escherichia coli ของสายพันธุ์ MG1655 ถูกปลูกใน MOPS ขนาดกลางน้อยที่สุดในปริมาณรวมของ 200ml จนกระทั่ง A600 ของ 0.5 ได้ถึง. วัฒนธรรมถูกแบ่งออกเป็น 50 มล. วัฒนธรรมสําหรับการรักษาความเครียด. หลังจาก 15 นาทีของการบ่มด้วยอัลลิซิ mM 1 mM diamide หรือ dimethyl sulfoxide (การควบคุม), เซลล์ถูกล้างสองครั้งด้วยบัฟเฟอร์ KPE ก่อนที่จะกลับมาใช้เม็ดในบัฟเฟอร์ KPE 700μl สําหรับ deproteination, 300μl 10% (w / v) กรดซัลโฟซิลิไซไซซิลิกถูกเพิ่มก่อนที่จะหยุดชะงักของเซลล์โดย ultrasonication (3 x 1 นาที; 1000000000000000000000000000 ซูเปอร์เนทถูกเก็บรวบรวมหลังจากเครื่องปั่นเหวี่ยง (30 นาที, 13,000g, 4 °C) ความเข้มข้นของกรดซัลฟอสอาลิกลดลงเป็น 1% โดยการเพิ่ม 3 ปริมาณของบัฟเฟอร์ KPE. การวัดของกลูตาไธโอนทั้งหมดและ GSSG ได้ดําเนินการตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ความเข้มข้นของกลูตาไธโอนของเซลล์คํานวณจากปริมาณของเซลล์. coli 6.7×10-15 ลิตรและความหนาแน่นของเซลล์ A600 0.5 (เทียบเท่ากับ 1×108 เซลล์มล. -1 วัฒนธรรม). ความเข้มข้นของ GSH คํานวณโดยการลบ 2[GSSG] จากกลูตาไธโอนทั้งหมด (มุลเลอร์และคณะ. 2016)

สลายเซลล์ด้วย VialTweeter ก่อนเตาเผากราไฟท์อะตอมการดูดซึมสเปกโทรเมทรี

Bacillus subtilis 168 (trpC2) ถูกสัมผัสกับ 15 นาทีของความเครียดยาปฏิชีวนะ, จากนั้นเซลล์ถูกเก็บเกี่ยวที่ 3,320 x กรัมล้างห้าครั้งด้วย 100 mM Tris / 1 mM EDTA, pH 7.5, ฟื้นใน 10 mM ทริส, pH 7.5 และหยุดชะงักโดย ultrasonication ใน Hielscher ViaTweeter เครื่องมือ. (เหวินเซลและคณะ. 2014)

การเตรียมตัวอย่างก่อนสเปกโตรเมทรี

เซลล์เซลล์ไลโอฟิลของเซลล์เซลล์เซลล์เซลล์􏰀เซลล์เซลล์เซลล์เซลล์เซลล์เซลล์เซลล์ที่ผ่านกรรมวิธี lyophilized ของเซลล์ต้นกําเนิด/เซลล์เม็ดเลือดที่มนุษย์ฟื้นฟูใน 10μ􏰇l (200μl สําหรับการเตรียม HEK293 จํานวนมากสําหรับชุดเจือเปปไทด์) ของ ยูเรีย M8 ใน 100 mM แอมโมเนียมไฮโดรเจนคาร์บอเนตและไลเสดช่วยโดย sonication กับ Hielscher VialTweeter ที่แอมพลิจูดของ 60%, วงจรของ 60% และระยะเวลา 20s สําหรับสามครั้งกับการระบายความร้อนในระดับกลางบนน้ําแข็ง. (มอม et al. 2019)

โปรโตคอลการเตรียมตัวอย่างโดยใช้ VialPress

ผักกาดหอมสด (Lactuca sativa) ถูก homogenized ในบัฟเฟอร์ 0.5 M HEPES (pH 8, KOH ปรับ) ที่อัตราส่วนของพืช 1 กรัม (น้ําหนักสด) ถึง 200, 100, 50 หรือ 20 สารละลายบัฟเฟอร์มิลลิลิตร อัตราส่วนของปริมาณสารละลายบัฟเฟอร์ต่อพืชจะแตกต่างกันเพื่อให้ปริมาณ homogenate รวมระหว่าง 3.5 และ 12 มล. อัตราส่วนของปริมาณสารละลายบัฟเฟอร์ต่อพืชจะแตกต่างกันเพื่อให้ปริมาณที่เป็นเนื้อเดียวกันทั้งหมดระหว่าง 3.5 และ 12 มล. ทําให้เป็นเนื้อเดียวกันกับหัววัด Homogenates แล้วรับ ultrasonication ทางอ้อมโดยใช้ UP200St กับ VialTweeter พร้อมกับ 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, เยอรมนี) สําหรับ 3 นาที (80% ชีพจรและ 100% พลังงาน). การใช้อุปกรณ์นี้หลีกเลี่ยงการปนเปื้อน (ลาฟตัน และคณะ 2019)

การควบคุมอุณหภูมิที่เชื่อถือได้ในระหว่าง sonication กับ VialTweeter

อุณหภูมิเป็นปัจจัยที่มีอิทธิพลต่อกระบวนการที่สําคัญอย่างยิ่งที่มีความสําคัญอย่างยิ่งสําหรับการรักษาตัวอย่างทางชีวภาพ เป็นทุกเทคนิคการเตรียมตัวอย่างเชิงกล sonication สร้างความร้อน อย่างไรก็ตามอุณหภูมิของตัวอย่างสามารถควบคุมได้ดีเมื่อใช้ VialTweeter เรานําเสนอตัวเลือกต่างๆในการตรวจสอบและควบคุมอุณหภูมิของตัวอย่างของคุณในขณะที่การเตรียมพวกเขาด้วย VialTweeter และ VialPress สําหรับการวิเคราะห์

1. การตรวจสอบอุณหภูมิตัวอย่าง: ตัวประมวลผลอัลตราโซนิก UP200St ซึ่งไดรฟ์ VialTweeter เป็นอุปกรณ์ที่มีซอฟต์แวร์อัจฉริยะและเซ็นเซอร์อุณหภูมิแบบเสียบได้ เสียบเซ็นเซอร์อุณหภูมิเข้ากับ UP200St และสอดปลายเซ็นเซอร์อุณหภูมิในหลอดตัวอย่าง ผ่านจอสัมผัสสีดิจิตอลคุณสามารถตั้งค่าในเมนูของ UP200St ช่วงอุณหภูมิที่เฉพาะเจาะจงสําหรับ sonication ตัวอย่างของคุณ เครื่อง ultrasonicator จะหยุดโดยอัตโนมัติเมื่อถึงอุณหภูมิสูงสุดและหยุดชั่วคราวจนกว่าอุณหภูมิตัวอย่างจะลดลงไปต่ํากว่าค่าอุณหภูมิที่ตั้งไว้∆ จากนั้น sonication เริ่มโดยอัตโนมัติอีกครั้ง คุณสมบัติอัจฉริยะนี้ช่วยป้องกันการย่อยสลายที่เกิดจากความร้อน
2. บล็อก VialTweeter สามารถระบายความร้อนก่อน ใส่บล็อก VialTweeter (เฉพาะ sonotrode โดยไม่ต้องแปลงสัญญาณ!) ลงในตู้เย็นหรือช่องแช่แข็งเพื่อก่อนเย็นบล็อกไทเทเนียมช่วยเลื่อนอุณหภูมิเพิ่มขึ้นในตัวอย่าง ถ้าเป็นไปได้ตัวอย่างตัวเองสามารถระบายความร้อนก่อนเกินไป
3. ใช้น้ําแข็งแห้งเย็นในระหว่าง sonication ใช้ถาดตื้นที่เต็มไปด้วยน้ําแข็งแห้งและวาง VialTweeter บนน้ําแข็งแห้งเพื่อให้ความร้อนอย่างรวดเร็วสามารถกระจาย.

ลูกค้าทั่วโลกใช้ VialTweeter และ VialPress สําหรับการเตรียมตัวอย่างประจําวันของพวกเขาในห้องปฏิบัติการทางชีวเคมีทางการแพทย์และคลินิก ซอฟต์แวร์อัจฉริยะและการควบคุมอุณหภูมิของโปรเซสเซอร์ UP200St อุณหภูมิจะถูกควบคุมได้อย่างน่าเชื่อถือและหลีกเลี่ยงการย่อยสลายตัวอย่างความร้อน การเตรียมตัวอย่างอัลตราโซนิกด้วย VialTweeter และ VialPress ให้ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้สูงและทําซ้ําได้!

รายละเอียดทางเทคนิคของขวดTweeter

ขวดเป็น sonotrode บล็อกที่ทําจากไทเทเนียมที่สามารถถือได้ถึง 10 ขวดในหลุมภายในบล็อก. นอกจากนี้, ถึง 5 หลอดทดสอบขนาดใหญ่สามารถยึดไปด้านหน้า VialTweeter โดยใช้ VialPress. VialTweeter ถูกออกแบบมาเพื่อให้พลังงาน ultrasonication กระจายอย่างสม่ําเสมอในแต่ละขวดแทรกเพื่อให้แน่ใจว่าผล sonication ที่เชื่อถือได้และสม่ําเสมอ หมุนขนาดเล็กปรับ vialTweeter sonotrode เพื่อพื้นไม่สม่ําเสมอและจัดหลอดทดสอบในแนวตั้ง

ข้อดีของ VialTweeter ได้อย่างรวดเร็ว

• sonication เข้มข้นถึง 10 ขวดพร้อมกัน
• Sonication ทางอ้อมที่ความเข้มล้ำสูงผ่านผนังเรือเข้าไปในตัวอย่าง
• sonication อ้อมหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนและการสูญเสียตัวอย่าง
• ผลการทำซ้ำเนื่องจากการปรับและควบคุมความกว้าง sonication
• ช่วยให้คุณสามารถที่จะ sonicate หลอดขนาดใหญ่
• สามารถปรับความกว้างได้ตั้งแต่ 20 ถึง 100%
• โหมดการเต้นของชีพจรที่สามารถปรับจาก 0 ถึง 100%
• หม้อนึ่งฆ่าเชื้อ

ขวดแก้วเป็นพลังงานโดย UP200Stหน่วยประมวลผลอัลตราโซนิกที่มีประสิทธิภาพ 200 วัตต์ UP200St เป็นอุปกรณ์ที่มีซอฟต์แวร์อัจฉริยะที่ช่วยให้การควบคุมที่แม่นยํากว่าพารามิเตอร์กระบวนการอัลตราโซนิกที่สําคัญทั้งหมดเช่นความกว้างเวลา sonication, การเต้นของชีพจรและอุณหภูมิ ทําให้ VialTweeter เป็นเครื่องมือที่เชื่อถือได้สําหรับผลกระบวนการทําซ้ําที่ประสบความสําเร็จในห้องปฏิบัติการทางชีวเคมีและชีวภาพ
แอมพลิจูดสามารถปรับได้ระหว่าง 20 และ 100% และช่วยให้สามารถปรับความเข้มของอัลตราโซนิกกับตัวอย่างของคุณ ตัวอย่างเช่น, ตัดและการกระจายตัวของดีเอ็นเอและอาร์เอ็นเอต้องใช้ความกว้าง milder เพื่อป้องกันการผลิตของชิ้นส่วนดีเอ็นเอขนาดเล็กเกินไป, เนื้อเดียวกันของสมองเมาส์ต้องการ sonication ความเข้มสูง. เลือกความกว้างที่เหมาะความเข้ม sonication และระยะเวลาผ่านทางเมนูสมาร์ทและใช้งานง่ายที่โปรเซสเซอร์ UP200St เมนูและการตั้งค่าสามารถเข้าถึงได้ง่ายและดําเนินการผ่านหน้าจอสัมผัสสี ในการตั้งค่าคุณสามารถตั้งค่าพารามิเตอร์ sonication ล่วงหน้าเช่นความกว้าง, โหมดการเต้น / วงจรระยะเวลา sonication, รวมพลังงานเข้าและขีด จํากัด อุณหภูมิ ในการวิจัยและการผลิต, การทําซ้ําของการทดลองและผลการทดสอบเป็นสิ่งสําคัญ. ซึ่งหมายความว่าการบันทึกเงื่อนไขของกระบวนการและโปรโตคอล sonication ได้อย่างแม่นยํามีความสําคัญอย่างยิ่ง ข้อมูลอัตโนมัติ protocolling เขียนข้อมูล sonication ทั้งหมดลงในไฟล์ CSV บนการ์ด SD แบบบูรณาการเพื่อให้คุณสามารถตรวจสอบและเปรียบเทียบการทํางาน sonication ต่างๆ ข้อมูลกระบวนการอัลตราโซนิกทั้งหมดสามารถเข้าถึงได้ง่ายและใช้ร่วมกันเป็นไฟล์ CSV
Hielscher Ultrasonics มุ่งมั่นที่จะให้คุณด้วยเทคโนโลยีขั้นสูงเพื่ออํานวยความสะดวกและปรับปรุงการทํางานวิจัยของคุณ!