การเตรียมตัวอย่างด้วยขวดอัลตราโซนิกทวีตเตอร์

การเตรียมตัวอย่างก่อนการวิเคราะห์อาจต้องใช้กระบวนการวิเคราะห์ก่อนต่างๆเช่นการทําให้เป็นเนื้อเดียวกันเนื้อเยื่อการสลายตัวการสกัดโปรตีนดีเอ็นเออาร์เอ็นเอออร์แกเนลและสารอื่น ๆ ภายในเซลล์ละลายและ degassing VialTweeter เป็นอุปกรณ์อัลตราโซนิกที่ไม่ซ้ํากันที่เตรียมหลอดตัวอย่างหลายพร้อมกันภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน เนื่องจาก sonication ทางอ้อมของหลอดทดลองปิด, การปนเปื้อนข้ามและการสูญเสียตัวอย่างจะหลีกเลี่ยง.

การเตรียมตัวอย่างอัลตราโซนิก

Ultrasonication เป็นเทคนิคทั่วไปของการรักษาตัวอย่างเพื่อให้ได้ตัวอย่างพร้อมสําหรับการวิเคราะห์เช่นปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์ (PCR), เวสเทิร์ Blots, วิเคราะห์, ลําดับโมเลกุล, โครมาโตกราฟี ฯลฯ Ultrasonication เป็นเทคนิคที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในห้องปฏิบัติการในการรักษาตัวอย่างก่อนการวิเคราะห์ ประโยชน์ที่สําคัญของ sonication คือหลักการการทํางานของอัลตราซาวนด์จะขึ้นอยู่กับกองกําลังกลอย่างหมดจด อัลตราโซนิกการสลายตัวและการหยุดชะงักของเซลล์สามารถทําได้โดยแรงเฉือน sonomechanical ซึ่งจะช่วยให้ ultrasonication ประโยชน์ที่ตัวทําละลายที่ใช้สําหรับสกัดโปรตีนสามารถใช้ยังในระหว่างการสลาย อัลตราโซนิกเซลล์ disruptors เช่น VialTweeter ทําลายผนังเซลล์ / เยื่อและส่งเสริมการถ่ายโอนมวลระหว่างภายในเซลล์และตัวทําละลาย ดังนั้นการวิเคราะห์ (เช่น DNA, RNA, โปรตีน, organelles ฯลฯ ) จะถูกโอนอย่างมีประสิทธิภาพจากเมทริกซ์เซลล์ลงในตัวทําละลาย ซึ่งหมายความว่าขั้นตอนของการดับและการสกัดทับซ้อนกับกระบวนการรบกวนเซลล์อัลตราโซนิกซึ่งทําให้ lysis ล้ําที่มีประสิทธิภาพมาก นอกจากนี้การเตรียมตัวอย่างอัลตราโซนิกไม่จําเป็นต้องใช้ผงซักฟอกและน้ํายาสลายตัวอื่น ๆ ซึ่งอาจเปลี่ยนแปลงและทําลายโครงสร้างของไลเสทและเป็นที่รู้จักกันสําหรับปัญหาที่เกิดขึ้นกับการทําให้บริสุทธิ์ อีกวิธี lysis, การหยุดชะงักของเอนไซม์ต้องใช้เวลาฟักตัวนานและมักจะให้ผลการทําซ้ําไม่ได้. การเตรียมตัวอย่างอัลตราโซนิกเอาชนะปัญหาที่พบบ่อยในการเตรียมตัวอย่างเช่นการทําให้เป็นเนื้อเดียวกันเนื้อเยื่อการหยุดชะงักของเซลล์การสลายตัวการสกัดโปรตีนและการทําไลเสท เนื่องจากความเข้มของการรักษาอัลตราโซนิกสามารถควบคุมและปรับให้ตัวอย่างทางชีวภาพการย่อยสลายและการสูญเสียตัวอย่างจะหลีกเลี่ยง ตรวจสอบและควบคุมอุณหภูมิตัวอย่างโดยอัตโนมัติ, โหมดชีพจรและระยะเวลา sonication ให้แน่ใจว่าผลลัพธ์ที่ดีที่สุด

ขวดแก้วเป็นพิเศษสําหรับห้องปฏิบัติการที่ทํางานที่ต้องเตรียมพร้อมกันของหลายตัวอย่างภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน ขวดเป็น sonotrode บล็อกอัลตราโซนิกที่สามารถถือได้ถึง 10 ขวด (เช่น Eppendorf, centriguge, ท่อ NUNC, ขวด cryo) และ sonicates พวกเขาอย่างเข้มข้นภายใต้เงื่อนไขการควบคุมอย่างแม่นยํา เนื่องจากพลังงานอัลตราโซนิกเป็นคู่ผ่านผนังของขวดลงในสื่อตัวอย่างขวดรักษาปิดในระหว่างการรักษา ดังนั้นการสูญเสียตัวอย่างและการปนเปื้อนข้ามจะหลีกเลี่ยงอย่างสมบูรณ์

ขวดและหลอดที่เหมาะสมขวดTweeter

ขวดแก้วมีความเหมาะสมที่จะถือ 10 ทั่วไปท่อรูปกรวยหรือรอบด้านล่างเช่น Eppendorf, centrifuge, cryo ขวดและชนิดขวด NUNC ต่างๆ แต่หลุมสามารถปรับแต่งให้ขวดและหลอดขนาดอื่น ตามคําขอ โปรดแจ้งให้เราทราบชนิดของหลอดทดสอบที่คุณต้องการใช้เพื่อให้เราสามารถปรับเปลี่ยน VialTweeter ของคุณตาม สําหรับหลอดทดสอบขนาดใหญ่เช่นหลอดเหยี่ยวและภาชนะทดสอบอื่น ๆ บีกเกอร์และเรือ VialPress เป็นทางออกที่สะดวก

ขวดแก้วกับขวด

ในขณะที่ VialTweeter ตัวเองกับหลุม 10 หลอดของมันอยู่แล้วอุปกรณ์อัลตราโซนิกที่ไม่ซ้ํากันและการทํางานสูง, เพิ่ม VialPress ทําให้ VialTweeter มากยิ่งขึ้นอเนกประสงค์และมีความยืดหยุ่นสําหรับการดําเนินงาน VialPress เป็นอุปกรณ์เสริมสําหรับ VialTweeter ประกอบด้วยแถบหนีบที่ช่วยในการตรึงท่อตัวอย่างขนาดใหญ่เช่นหลอดเหยี่ยวหรือบีกเกอร์ทดสอบขนาดเล็กถึงขนาดกลางอื่น ๆ ที่ด้านหน้า VialTweeter ภาพด้านซ้ายแสดง VialTweeter ถือ 10 ขวด Eppendorf ในบล็อกในขณะที่ VialPress fixates หนึ่งหลอดทดสอบขนาดใหญ่ที่ด้านหน้าสําหรับ sonication หลอดทดสอบขนาดใหญ่สําหรับ sonication ที่รุนแรง

โพรโทคอการเตรียมตัวอย่าง

ขวดแก้วถูกนํามาใช้กันอย่างแพร่หลายเพื่อ sonicate ตัวอย่างทางชีวภาพ ก่อนการวิเคราะห์ตัวอย่างจะต้องเตรียมการวิเคราะห์ทางชีวเคมีหรือชีวฟิสิกส์และการทดสอบเช่นโดย lysis, เนื้อเดียวกันเนื้อเยื่อการสกัดโปรตีน, DNA / RNA เฉือน degassing ฯลฯ ขวดยา fulfils กระบวนการอัลตราโซนิกเหล่านี้ได้อย่างน่าเชื่อถือ และให้ผลทําซ้ํา การประยุกต์ใช้ทั่วไปของ VialTweeter คือการสลายตัว / เซลล์ของเนื้อเยื่อเลี้ยงลูกด้วยนม (มนุษย์และเนื้อสัตว์) เช่นเดียวกับเซลล์แบคทีเรียและอนุภาคไวรัส ประสบความสําเร็จ VialTweeter-รับการรักษาทางชีวภาพตัวอย่างได้แก่เซลล์เยื่อบุผิวของมนุษย์ปอด, เซลล์ต้นกําเนิด haematopoietic, เซลล์มะเร็งเม็ดเลือดขาวไมลอยด์, เอสเชอริเคียโคลี, เชื้อ Bacillus subtilis, บาซิลลัสแอนทราซีส, ฟรานซิสเซลลา, ยารีซิเนีย, ไพโนเจน, พระจันทร์, ปอดบวม, mycobacteria / Mycobacterium วัณโรคที่ซับซ้อน (MTBC) และอื่น ๆ แบคทีเรีย, พฤกษศาสตร์, และเซลล์จุลินทรีย์.
ด้านล่างนี้คุณสามารถหาโปรโตคอลที่เลือกไม่กี่ที่มี VialTweeter

การสลายตัวของ E.Coli กับขวดยาสําหรับการวัดใน Vivo กลูตาไธโอน

แบคทีเรีย Escherichia coli ของสายพันธุ์ MG1655 ถูกปลูกใน MOPS ขนาดกลางน้อยที่สุดในปริมาณรวมของ 200ml จนกระทั่ง A600 ของ 0.5 ได้ถึง. วัฒนธรรมถูกแบ่งออกเป็น 50 มล. วัฒนธรรมสําหรับการรักษาความเครียด. หลังจาก 15 นาทีของการบ่มด้วยอัลลิซิ mM 1 mM diamide หรือ dimethyl sulfoxide (การควบคุม), เซลล์ถูกล้างสองครั้งด้วยบัฟเฟอร์ KPE ก่อนที่จะกลับมาใช้เม็ดในบัฟเฟอร์ KPE 700μl สําหรับ deproteination, 300μl 10% (w / v) กรดซัลโฟซิลิไซไซซิลิกถูกเพิ่มก่อนที่จะหยุดชะงักของเซลล์โดย ultrasonication (3 x 1 นาที; 1000000000000000000000000000 ซูเปอร์เนทถูกเก็บรวบรวมหลังจากเครื่องปั่นเหวี่ยง (30 นาที, 13,000g, 4 °C) ความเข้มข้นของกรดซัลฟอสอาลิกลดลงเป็น 1% โดยการเพิ่ม 3 ปริมาณของบัฟเฟอร์ KPE. การวัดของกลูตาไธโอนทั้งหมดและ GSSG ได้ดําเนินการตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ความเข้มข้นของกลูตาไธโอนของเซลล์คํานวณจากปริมาณของเซลล์. coli 6.7×10-15 ลิตรและความหนาแน่นของเซลล์ A600 0.5 (เทียบเท่ากับ 1×108 เซลล์มล. -1 วัฒนธรรม). ความเข้มข้นของ GSH คํานวณโดยการลบ 2[GSSG] จากกลูตาไธโอนทั้งหมด (มุลเลอร์และคณะ. 2016)

สลายเซลล์ด้วย VialTweeter ก่อนเตาเผากราไฟท์อะตอมการดูดซึมสเปกโทรเมทรี

Bacillus subtilis 168 (trpC2) ถูกสัมผัสกับ 15 นาทีของความเครียดยาปฏิชีวนะ, จากนั้นเซลล์ถูกเก็บเกี่ยวที่ 3,320 x กรัมล้างห้าครั้งด้วย 100 mM Tris / 1 mM EDTA, pH 7.5, ฟื้นใน 10 mM ทริส, pH 7.5 และหยุดชะงักโดย ultrasonication ใน Hielscher ViaTweeter เครื่องมือ. (เหวินเซลและคณะ. 2014)

การเตรียมตัวอย่างก่อนสเปกโตรเมทรี

เซลล์เซลล์ไลโอฟิลของเซลล์เซลล์เซลล์เซลล์􏰀เซลล์เซลล์เซลล์เซลล์เซลล์เซลล์เซลล์ที่ผ่านกรรมวิธี lyophilized ของเซลล์ต้นกําเนิด/เซลล์เม็ดเลือดที่มนุษย์ฟื้นฟูใน 10μ􏰇l (200μl สําหรับการเตรียม HEK293 จํานวนมากสําหรับชุดเจือเปปไทด์) ของ ยูเรีย M8 ใน 100 mM แอมโมเนียมไฮโดรเจนคาร์บอเนตและไลเสดช่วยโดย sonication กับ Hielscher VialTweeter ที่แอมพลิจูดของ 60%, วงจรของ 60% และระยะเวลา 20s สําหรับสามครั้งกับการระบายความร้อนในระดับกลางบนน้ําแข็ง. (มอม et al. 2019)

โปรโตคอลการเตรียมตัวอย่างโดยใช้ VialPress

ผักกาดหอมสด (Lactuca sativa) ถูก homogenized ในบัฟเฟอร์ 0.5 M HEPES (pH 8, KOH ปรับ) ที่อัตราส่วนของพืช 1 กรัม (น้ําหนักสด) ถึง 200, 100, 50 หรือ 20 สารละลายบัฟเฟอร์มิลลิลิตร อัตราส่วนของปริมาณสารละลายบัฟเฟอร์ต่อพืชจะแตกต่างกันเพื่อให้ปริมาณ homogenate รวมระหว่าง 3.5 และ 12 มล. อัตราส่วนของปริมาณสารละลายบัฟเฟอร์ต่อพืชจะแตกต่างกันเพื่อให้ปริมาณที่เป็นเนื้อเดียวกันทั้งหมดระหว่าง 3.5 และ 12 มล. ทําให้เป็นเนื้อเดียวกันกับหัววัด Homogenates แล้วรับ ultrasonication ทางอ้อมโดยใช้ UP200St กับ VialTweeter พร้อมกับ 200xt VialPress (Hielscher Ultrasonics GmbH, เยอรมนี) สําหรับ 3 นาที (80% ชีพจรและ 100% พลังงาน). การใช้อุปกรณ์นี้หลีกเลี่ยงการปนเปื้อน (ลาฟตัน และคณะ 2019)

การควบคุมอุณหภูมิที่เชื่อถือได้ในระหว่าง sonication กับ VialTweeter

อุณหภูมิเป็นปัจจัยที่มีอิทธิพลต่อกระบวนการที่สําคัญอย่างยิ่งที่มีความสําคัญอย่างยิ่งสําหรับการรักษาตัวอย่างทางชีวภาพ เป็นทุกเทคนิคการเตรียมตัวอย่างเชิงกล sonication สร้างความร้อน อย่างไรก็ตามอุณหภูมิของตัวอย่างสามารถควบคุมได้ดีเมื่อใช้ VialTweeter เรานําเสนอตัวเลือกต่างๆในการตรวจสอบและควบคุมอุณหภูมิของตัวอย่างของคุณในขณะที่การเตรียมพวกเขาด้วย VialTweeter และ VialPress สําหรับการวิเคราะห์

1. การตรวจสอบอุณหภูมิตัวอย่าง: ตัวประมวลผลอัลตราโซนิก UP200St ซึ่งไดรฟ์ VialTweeter เป็นอุปกรณ์ที่มีซอฟต์แวร์อัจฉริยะและเซ็นเซอร์อุณหภูมิแบบเสียบได้ เสียบเซ็นเซอร์อุณหภูมิเข้ากับ UP200St และสอดปลายเซ็นเซอร์อุณหภูมิในหลอดตัวอย่าง ผ่านจอสัมผัสสีดิจิตอลคุณสามารถตั้งค่าในเมนูของ UP200St ช่วงอุณหภูมิที่เฉพาะเจาะจงสําหรับ sonication ตัวอย่างของคุณ เครื่อง ultrasonicator จะหยุดโดยอัตโนมัติเมื่อถึงอุณหภูมิสูงสุดและหยุดชั่วคราวจนกว่าอุณหภูมิตัวอย่างจะลดลงไปต่ํากว่าค่าอุณหภูมิที่ตั้งไว้∆ จากนั้น sonication เริ่มโดยอัตโนมัติอีกครั้ง คุณสมบัติอัจฉริยะนี้ช่วยป้องกันการย่อยสลายที่เกิดจากความร้อน
2. บล็อก VialTweeter สามารถระบายความร้อนก่อน ใส่บล็อก VialTweeter (เฉพาะ sonotrode โดยไม่ต้องแปลงสัญญาณ!) ลงในตู้เย็นหรือช่องแช่แข็งเพื่อก่อนเย็นบล็อกไทเทเนียมช่วยเลื่อนอุณหภูมิเพิ่มขึ้นในตัวอย่าง ถ้าเป็นไปได้ตัวอย่างตัวเองสามารถระบายความร้อนก่อนเกินไป
3. ใช้น้ําแข็งแห้งเย็นในระหว่าง sonication ใช้ถาดตื้นที่เต็มไปด้วยน้ําแข็งแห้งและวาง VialTweeter บนน้ําแข็งแห้งเพื่อให้ความร้อนอย่างรวดเร็วสามารถกระจาย.

ลูกค้าทั่วโลกใช้ VialTweeter และ VialPress สําหรับการเตรียมตัวอย่างประจําวันของพวกเขาในห้องปฏิบัติการทางชีวเคมีทางการแพทย์และคลินิก ซอฟต์แวร์อัจฉริยะและการควบคุมอุณหภูมิของโปรเซสเซอร์ UP200St อุณหภูมิจะถูกควบคุมได้อย่างน่าเชื่อถือและหลีกเลี่ยงการย่อยสลายตัวอย่างความร้อน การเตรียมตัวอย่างอัลตราโซนิกด้วย VialTweeter และ VialPress ให้ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้สูงและทําซ้ําได้!

รายละเอียดทางเทคนิคของขวดTweeter

ขวดเป็น sonotrode บล็อกที่ทําจากไทเทเนียมที่สามารถถือได้ถึง 10 ขวดในหลุมภายในบล็อก. นอกจากนี้, ถึง 5 หลอดทดสอบขนาดใหญ่สามารถยึดไปด้านหน้า VialTweeter โดยใช้ VialPress. VialTweeter ถูกออกแบบมาเพื่อให้พลังงาน ultrasonication กระจายอย่างสม่ําเสมอในแต่ละขวดแทรกเพื่อให้แน่ใจว่าผล sonication ที่เชื่อถือได้และสม่ําเสมอ หมุนขนาดเล็กปรับ vialTweeter sonotrode เพื่อพื้นไม่สม่ําเสมอและจัดหลอดทดสอบในแนวตั้ง

ข้อดีของ VialTweeter ได้อย่างรวดเร็ว

• sonication เข้มข้นถึง 10 ขวดพร้อมกัน
• Sonication ทางอ้อมที่ความเข้มล้ำสูงผ่านผนังเรือเข้าไปในตัวอย่าง
• sonication อ้อมหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนและการสูญเสียตัวอย่าง
• ผลการทำซ้ำเนื่องจากการปรับและควบคุมความกว้าง sonication
• ช่วยให้คุณสามารถที่จะ sonicate หลอดขนาดใหญ่
• สามารถปรับความกว้างได้ตั้งแต่ 20 ถึง 100%
• โหมดการเต้นของชีพจรที่สามารถปรับจาก 0 ถึง 100%
• หม้อนึ่งฆ่าเชื้อ

ขวดแก้วเป็นพลังงานโดย UP200Stหน่วยประมวลผลอัลตราโซนิกที่มีประสิทธิภาพ 200 วัตต์ UP200St เป็นอุปกรณ์ที่มีซอฟต์แวร์อัจฉริยะที่ช่วยให้การควบคุมที่แม่นยํากว่าพารามิเตอร์กระบวนการอัลตราโซนิกที่สําคัญทั้งหมดเช่นความกว้างเวลา sonication, การเต้นของชีพจรและอุณหภูมิ ทําให้ VialTweeter เป็นเครื่องมือที่เชื่อถือได้สําหรับผลกระบวนการทําซ้ําที่ประสบความสําเร็จในห้องปฏิบัติการทางชีวเคมีและชีวภาพ
แอมพลิจูดสามารถปรับได้ระหว่าง 20 และ 100% และช่วยให้สามารถปรับความเข้มของอัลตราโซนิกกับตัวอย่างของคุณ ตัวอย่างเช่น, ตัดและการกระจายตัวของดีเอ็นเอและอาร์เอ็นเอต้องใช้ความกว้าง milder เพื่อป้องกันการผลิตของชิ้นส่วนดีเอ็นเอขนาดเล็กเกินไป, เนื้อเดียวกันของสมองเมาส์ต้องการ sonication ความเข้มสูง. เลือกความกว้างที่เหมาะความเข้ม sonication และระยะเวลาผ่านทางเมนูสมาร์ทและใช้งานง่ายที่โปรเซสเซอร์ UP200St เมนูและการตั้งค่าสามารถเข้าถึงได้ง่ายและดําเนินการผ่านหน้าจอสัมผัสสี ในการตั้งค่าคุณสามารถตั้งค่าพารามิเตอร์ sonication ล่วงหน้าเช่นความกว้าง, โหมดการเต้น / วงจรระยะเวลา sonication, รวมพลังงานเข้าและขีด จํากัด อุณหภูมิ ในการวิจัยและการผลิต, การทําซ้ําของการทดลองและผลการทดสอบเป็นสิ่งสําคัญ. ซึ่งหมายความว่าการบันทึกเงื่อนไขของกระบวนการและโปรโตคอล sonication ได้อย่างแม่นยํามีความสําคัญอย่างยิ่ง ข้อมูลอัตโนมัติ protocolling เขียนข้อมูล sonication ทั้งหมดลงในไฟล์ CSV บนการ์ด SD แบบบูรณาการเพื่อให้คุณสามารถตรวจสอบและเปรียบเทียบการทํางาน sonication ต่างๆ ข้อมูลกระบวนการอัลตราโซนิกทั้งหมดสามารถเข้าถึงได้ง่ายและใช้ร่วมกันเป็นไฟล์ CSV
Hielscher Ultrasonics มุ่งมั่นที่จะให้คุณด้วยเทคโนโลยีขั้นสูงเพื่ออํานวยความสะดวกและปรับปรุงการทํางานวิจัยของคุณ!