เทคโนโลยีอัลตราซาวนด์ Hielscher

สลายเซลล์ของเซลล์ BL21 โดย ultrasonication

เซลล์ BL21 เป็นสายพันธุ์ของ. coli ที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในห้องปฏิบัติการวิจัย, เทคโนโลยีชีวภาพและการผลิตอุตสาหกรรมเนื่องจากความสามารถในการแสดงโปรตีนมีประสิทธิภาพสูง. การหยุดชะงักของเซลล์อัลตราโซนิก lysis และสกัดโปรตีนเป็นวิธีการทั่วไปในการแยกและรวบรวมโปรตีนเป้าหมายจากภายในเซลล์ของเซลล์ BL21 ทําให้ 100% ของโปรตีนที่มีอยู่

เซลล์ BL21 สําหรับนิพจน์โปรตีน

E. coli bacteria such as BL21 cells are commonly lysed by ultrasonication in order to release expressed proteins, such as recombinant proteinsเซลล์ BL21 เป็นสายพันธุ์แบคทีเรีย. coli ที่มีความสามารถทางเคมีที่เหมาะสมสําหรับการเปลี่ยนแปลงและการแสดงออกของโปรตีนระดับสูงโดยใช้ระบบเหนี่ยวนํา T7 อาร์เอ็นเอพอลิเมอร์-IPTG เซลล์ BL21 ช่วยให้การแสดงออกของโปรตีนประสิทธิภาพสูงของยีนใด ๆ ที่อยู่ภายใต้การควบคุมของ T7 โปรโมเนอร์. สายพันธุ์. coli BL21 (DE3) เป็นสายพันธุ์โปรตีนโปรตีนที่ใช้ T7 RNA polymerase รวมกับเวกเตอร์นิพจน์ T7 ตัวกระตุ้นและถูกนํามาใช้กันอย่างแพร่หลายในห้องปฏิบัติการและอุตสาหกรรมในการผลิตโปรตีน recombinant ใน BL21(DE3), การแสดงออกของยีนเข้ารหัสโปรตีน recombinant จะถูกถ่ายทอดโดย RNAP เข้ารหัสโครโมโซม T7 (T7 RNAP), ซึ่งถอดแปดครั้งเร็วกว่า. coli RNAP ทั่วไป. ทําให้สายพันธุ์ BL21(DE3) มีประสิทธิภาพสูงและกลายเป็นหนึ่งในระบบเซลล์โปรตีนที่ต้องการมากที่สุด

โปรโตคอลสําหรับอัลตราโซนิก Lysis และโปรตีนสกัดจาก BL21 เซลล์

การสลายเซลล์ของเซลล์ BL21 ส่วนใหญ่ดําเนินการโดยใช้ ultrasonication ร่วมกับโซเดียม lauroyl sarcosinate (หรือที่เรียกว่า sarkosyl) เป็นบัฟเฟอร์การสลายตัว ข้อดีของการหยุดชะงักของเซลล์อัลตราโซนิกและการสกัดโปรตีนอยู่ในความน่าเชื่อถือการทําซ้ําเช่นเดียวกับการดําเนินงานที่เรียบง่ายปลอดภัยและรวดเร็วของ ultrasonicators โปรโตคอลด้านล่างให้ทิศทางทีละขั้นตอนสําหรับการสลายเซลล์ BL21 อัลตราโซนิก:

Probe ชนิด insonifier UP200St สำหรับสลาย

รบกวนเซลล์อัลตราโซนิก UP200St ไมโครทิป S26d2 สําหรับการสลายและโปรตีนสกัด

ขอข้อมูล





  • เพื่อลบโปรตีน chaperone, BL21 เม็ดแบคทีเรียถูก resuspended ในน้ําแข็งเย็นโซเดียม Tris-EDTA (STE) บัฟเฟอร์ (ประกอบด้วย 10 mM ไตร-HCL, pH 8.0, EDTA 1 mM, 150 mM NaCled เสริมด้วย 100 mM PMS).
  • เพิ่ม 500 ul ของไลโซ (10 มก. / มิลลิลิตร) และเซลล์จะบ่มบนน้ําแข็งเป็นเวลา 15 นาที
  • หลังจากนั้น 500 ul ของ DTT และ 7 ml ของ sarkosyl (10% (w / v) สร้างขึ้นในบัฟเฟอร์ STE) จะถูกเพิ่ม
  • มันเป็นสิ่งสําคัญเพื่อให้ทุกบัฟเฟอร์บริสุทธิ์น้ําแข็งเย็นและเพื่อรักษาตัวอย่างบนน้ําแข็งตลอดเวลา. ขั้นตอนการทําบริสุทธิ์ทั้งหมดควรดําเนินการในห้องเย็นถ้าเป็นไปได้
  • VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

  • สําหรับการสลายอัลตราโซนิกและการสกัดโปรตีน, ตัวอย่างจะถูก sonicated ใน เครื่องอัลตราโซนิก สําหรับ 4 x 30 วินาทีที่แอมพลิจูด 100% ด้วยช่วงเวลา 2 นาทีระหว่าง sonication แต่ละ หรืออีกวิธีหนึ่งคือ เครื่อง homogenizer อัลตราโซนิกชนิดโพรบที่มีปลายไมโครเช่น Uf200 ःที กับ S26d2 (3 x 30 วินาที, 2 นาที. หยุดระหว่างวงจรอัลตราโซนิก, 80% แอมพลิจูด)
  • สําหรับขั้นตอนการทําให้บริสุทธิ์ต่อไปต้องเก็บตัวอย่างบนน้ําแข็งหรือเก็บไว้ที่ -80 °C จนกว่าจะดําเนินการต่อ

อัลตราโซนิกสลายภายใต้การควบคุมอุณหภูมิ Prescise

การควบคุมอุณหภูมิที่แม่นยําและเชื่อถือได้เป็นสิ่งสําคัญเมื่อจัดการกับตัวอย่างทางชีวภาพ อุณหภูมิสูงเริ่มการย่อยสลายโปรตีนที่เกิดจากความร้อนในตัวอย่าง
เป็นทุกเทคนิคการเตรียมตัวอย่างเชิงกล sonication สร้างความร้อน อย่างไรก็ตามอุณหภูมิของตัวอย่างสามารถควบคุมได้ดีเมื่อใช้ VialTweeter เรานําเสนอตัวเลือกต่างๆในการตรวจสอบและควบคุมอุณหภูมิของตัวอย่างของคุณในขณะที่การเตรียมพวกเขาด้วย VialTweeter และ VialPress สําหรับการวิเคราะห์

  1. การตรวจสอบอุณหภูมิตัวอย่าง: ตัวประมวลผลอัลตราโซนิก UP200St ซึ่งไดรฟ์ VialTweeter เป็นอุปกรณ์ที่มีซอฟต์แวร์อัจฉริยะและเซ็นเซอร์อุณหภูมิแบบเสียบได้ เสียบเซ็นเซอร์อุณหภูมิเข้ากับ UP200St และสอดปลายเซ็นเซอร์อุณหภูมิในหลอดตัวอย่าง ผ่านจอสัมผัสสีดิจิตอลคุณสามารถตั้งค่าในเมนูของ UP200St ช่วงอุณหภูมิที่เฉพาะเจาะจงสําหรับ sonication ตัวอย่างของคุณ เครื่อง ultrasonicator จะหยุดโดยอัตโนมัติเมื่อถึงอุณหภูมิสูงสุดและหยุดชั่วคราวจนกว่าอุณหภูมิตัวอย่างจะลดลงไปต่ํากว่าค่าอุณหภูมิที่ตั้งไว้∆ จากนั้น sonication เริ่มโดยอัตโนมัติอีกครั้ง คุณสมบัติอัจฉริยะนี้ช่วยป้องกันการย่อยสลายที่เกิดจากความร้อน
  2. บล็อก VialTweeter สามารถระบายความร้อนก่อน ใส่บล็อก VialTweeter (เฉพาะ sonotrode โดยไม่ต้องแปลงสัญญาณ!) ลงในตู้เย็นหรือช่องแช่แข็งเพื่อก่อนเย็นบล็อกไทเทเนียมช่วยเลื่อนอุณหภูมิเพิ่มขึ้นในตัวอย่าง ถ้าเป็นไปได้ตัวอย่างตัวเองสามารถระบายความร้อนก่อนเกินไป
  3. ใช้น้ําแข็งแห้งเย็นในระหว่าง sonication ใช้ถาดตื้นที่เต็มไปด้วยน้ําแข็งแห้งและวาง VialTweeter บนน้ําแข็งเพื่อให้ความร้อนอย่างรวดเร็วสามารถกระจาย.

ลูกค้าทั่วโลกใช้ VialTweeter และ VialPress สําหรับการเตรียมตัวอย่างประจําวันของพวกเขาในห้องปฏิบัติการทางชีวเคมีทางการแพทย์และคลินิก ซอฟต์แวร์อัจฉริยะและการควบคุมอุณหภูมิของโปรเซสเซอร์ UP200St อุณหภูมิจะถูกควบคุมได้อย่างน่าเชื่อถือและหลีกเลี่ยงการย่อยสลายตัวอย่างความร้อน การเตรียมตัวอย่างอัลตราโซนิกด้วย VialTweeter และ VialPress ให้ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้สูงและทําซ้ําได้!

ค้นหา Disruptor อัลตราโซนิกที่ดีที่สุดสําหรับโปรแกรมประยุกต์ Lysis ของคุณ

Hielscher's industrial processors of the hdT series can be comfortable and user-friendly operated via browser remote control.Hielscher Ultrasonics เป็นผู้ผลิตที่มีประสบการณ์เป็นเวลานานของ disrupters เซลล์อัลตราโซนิกที่มีประสิทธิภาพสูงและ homogenizers สําหรับห้องปฏิบัติการ, ม้านั่งด้านบนและระบบอุตสาหกรรมมาตราส่วน ขนาดเพาะเชื้อแบคทีเรียของคุณ, เป้าหมายการวิจัยหรือการผลิตของคุณและปริมาณของเซลล์การประมวลผลต่อชั่วโมงหรือวันเป็นปัจจัยสําคัญที่จะหา disruptor เซลล์อัลตราโซนิกขวาสําหรับโปรแกรมประยุกต์ของคุณ.
Hielscher Ultrasonics นําเสนอโซลูชั่นต่างๆสําหรับ sonication พร้อมกันของหลายตัวอย่าง (ถึง 10 ขวดกับ VialTweeter) และตัวอย่างมวล (เช่น, แผ่นไมโครไทเตอร์ / แผ่น ELISA กับ UIP400MTP) เช่นเดียวกับ ultrasonicator ห้องปฏิบัติการ probe-type คลาสสิกที่มีระดับพลังงานที่แตกต่างกันจาก 50-400 วัตต์อย่างเต็มที่โปรเซสเซอร์อัลตราโซนิกอุตสาหกรรมที่มีถึง 16,000 วัตต์ต่อหน่วยสําหรับการหยุดชะงักของเซลล์เชิงพาณิชย์และการสกัดโปรตีนในการผลิตขนาดใหญ่ อัลตราโซนิก Hielscher ทั้งหมดถูกสร้างขึ้นสําหรับการดําเนินงาน 24/7/365 ภายใต้การโหลดเต็มรูปแบบ ความทนทานและความน่าเชื่อถือเป็นคุณสมบัติหลักของอุปกรณ์อัลตราโซนิกของเรา
ทั้งหมด homogenizers อัลตราโซนิกดิจิตอลมีการติดตั้งซอฟต์แวร์สมาร์ท, สัมผัสสีและอัตโนมัติข้อมูล protocolling ซึ่งทําให้อุปกรณ์อัลตราโซนิกเป็นเครื่องมือทํางานสะดวกในห้องปฏิบัติการและการผลิตสิ่งอํานวยความสะดวก
แจ้งให้เราทราบชนิดของเซลล์ปริมาณสิ่งที่มีความถี่และสิ่งที่มีเป้าหมายที่คุณต้องดําเนินการตัวอย่างทางชีวภาพของคุณ เราจะแนะนําให้คุณรบกวนเซลล์อัลตราโซนิกที่เหมาะสมที่สุดสําหรับความต้องการกระบวนการของคุณ

ตารางด้านล่างจะช่วยให้คุณบ่งชี้ของความจุการประมวลผลโดยประมาณของระบบอัลตราโซนิกของเราจาก homogenizers มือถือขนาดกะทัดรัดและ Ultrasonicators MultiSample เพื่อประมวลผลอัลตราโซนิกอุตสาหกรรมสําหรับการใช้งานเชิงพาณิชย์:

ปริมาณชุด อัตราการไหล อุปกรณ์ที่แนะนำ
แผ่นไมโครไทเตอร์ 96 หลุม N.A. UIP400MTP
10 ขวด à 0.5 ถึง 1.5mL N.A. VialTweeter ที่ UP200St
001 ถึง 250mL 5 ถึง 100mL / นาที UP50H
001 ถึง 500mL 10 ถึง 200mL / นาที UP100H
10 ถึง 2000ml 20 ถึง 400ml / นาที Uf200 ःที, UP400St
00.1 เพื่อ 20L 00.2 เพื่อ 4L / นาที UIP2000hdT
10 100L 2 ถึง 10L / นาที UIP4000hdT
N.A. 10 100L / นาที UIP16000
N.A. ที่มีขนาดใหญ่ กลุ่มของ UIP16000

ติดต่อเรา! / ถามเรา!

สอบถามข้อมูลเพิ่มเติม

กรุณาใช้แบบฟอร์มด้านล่างเพื่อขอข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับตัวประมวลผลอัลตราโซนิกโปรแกรมประยุกต์และราคา เราจะยินดีที่จะหารือเกี่ยวกับกระบวนการของคุณกับคุณและเพื่อให้คุณระบบอัลตราโซนิกการประชุมความต้องการของคุณ!










Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of biological samples

ultrasonicator Uf200 ःที กับ2mmไมโครทิปs26d2สําหรับ sonicationของตัวอย่างขนาดเล็ก

วรรณกรรม / อ้างอิง



ข้อเท็จจริงที่รู้

แบคทีเรียเอสเชอร์ริเคียโคลี

Escherichia coli เป็นประเภทแบคทีเรียที่ไม่สปอร์ขึ้นรูปแกรมลบและมีลักษณะเป็นรูปของแกนตรง แบคทีเรีย E.coli อยู่ในสภาพแวดล้อมอาหารและลําไส้ของมนุษย์และสัตว์เลี้ยง . coli เป็นปกติ motile โดยใช้ peritrichous flagella แต่มีประเภท nonmotile, เกินไป. E.coli เป็นสิ่งมีชีวิต chemoorganotroph แบบไม่ใช้ออกซิเจนซึ่งหมายถึงพวกเขามีความสามารถในการเผาผลาญอาหารของระบบทางเดินหายใจและหมัก ส่วนใหญ่ประเภท e.coli เป็นอ่อนโยนและตอบสนองการทํางานที่มีประโยชน์ในร่างกายเช่นการปราบปรามการเจริญเติบโตของสายพันธุ์แบคทีเรียที่เป็นอันตราย, วิตามินสังเคราะห์ฯลฯ.
เซลล์แบคทีเรีย Escherichia coli ของประเภท B ที่เรียกว่าเป็นสายพันธุ์ E.coli ชนิดพิเศษซึ่งใช้กันอย่างแพร่หลายในการวิจัยเพื่อศึกษากลไกเช่นความไวแบคทีเรียหรือระบบการจํากัดการปรับเปลี่ยน นอกจากนี้, แบคทีเรีย E.coli มีมูลค่าเป็น workhorse เชื่อถือได้สําหรับการแสดงออกของโปรตีนในห้องปฏิบัติการเทคโนโลยีชีวภาพและวิทยาศาสตร์ชีวิต. ตัวอย่างเช่น, E.coli จะใช้ในการสังเคราะห์สารเช่นโปรตีนและ oligosaccharides ในระดับอุตสาหกรรม. เนื่องจากคุณสมบัติเฉพาะเช่นการขาดโปรตีเอส, การผลิตอะซิเตทต่ําในระดับสูงของกลูโคส, และการซึมผ่านที่เพิ่มขึ้น, เซลล์. coli B เป็นเขาส่วนใหญ่มักจะใช้เซลล์โฮสต์สําหรับการผลิตโปรตีนดัดแปลงพันธุกรรม.

โปรตีนรีคอมบีแนนท์

โปรตีน Recombinant (rProt) จะดึงดูดความสําคัญในสาขานานา, รวมทั้งในการผลิตสารเคมี, ยา, เครื่องสําอาง, มนุษย์และยา, การเกษตร, อาหารเช่นเดียวกับอุตสาหกรรมบําบัดของเสีย.
การผลิตโปรตีน recombinant ต้องใช้ระบบการแสดงออก เป็นการแสดงระบบเซลล์สําหรับการผลิตของดีเอ็นเอ recombinant, ทั้งเซลล์โปรคาเรียวและ eukaryotic สามารถนํามาใช้. ในขณะที่เซลล์แบคทีเรียใช้กันอย่างแพร่หลายสําหรับการแสดงออกของโปรตีนเนื่องจากปัจจัยต่างๆเช่นต้นทุนต่ํา, scalability ง่ายและเงื่อนไขสื่อ, เลี้ยงลูกด้วยนม, ยีสต์, สาหร่าย, แมลงและระบบเซลล์ฟรีจะจัดตั้งขึ้นทางเลือก. ประเภทโปรตีน, กิจกรรมการทํางาน, เช่นเดียวกับผลผลิตที่จําเป็นของโปรตีนที่แสดงมีผลต่อการเลือกระบบเซลล์ที่ใช้สําหรับการแสดงออกโปรตีน.
เพื่อที่จะแสดงโปรตีน recombinant เซลล์เฉพาะจะต้องได้รับการติดเชื้อดีเอ็นเอเวกเตอร์ที่มีแม่แบบของดีเอ็นเอ recombinant เซลล์ที่ติดเชื้อแม่แบบจะถูกเพาะเลี้ยงแล้ว เป็นผลของกลไกของเซลล์เซลล์, เซลล์ถอดและแปลโปรตีนที่น่าสนใจ, จึงผลิตโปรตีนเป้าหมาย.
ในฐานะที่เป็นโปรตีนที่แสดงจะกักไว้ในเมทริกซ์เซลล์เซลล์เซลล์จะต้อง lysed (หยุดชะงักและแตก) เพื่อปล่อยโปรตีน ในขั้นตอนการทําให้บริสุทธิ์ตามมาโปรตีนจะถูกแยกออกจากกันและบริสุทธิ์
โปรตีน recombinant แรกที่ใช้ในการรักษาเป็นอินซูลินมนุษย์ recombinant ใน 1982. วันนี้โปรตีน recombinant มากกว่า 170 ชนิดผลิตทั่วโลกสําหรับการรักษาพยาบาล โปรตีน recombinant ที่ใช้กันทั่วไปในยาเป็นฮอร์โมน recombinant เช่น interferons interleukins ปัจจัยการเจริญเติบโตปัจจัยเนื้อร้ายเนื้องอก ปัจจัยการแข็งตัวของเลือด, ยาเสพติด thrombolytic, และเอนไซม์สําหรับรักษาโรคที่สําคัญเช่นโรคเบาหวาน, แคระเฟต, กล้ามเนื้อหัวใจตาย, หัวใจล้มเหลว, ภาวะสมองเสื่อม, หลายเส้นโลหิตตีบ, neutropepepnia, (cf. Phuc V. Pham, ใน Omics เทคโนโลยีและวิศวกรรมชีวภาพ, 2018)


Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

อัลตราโซนิกประสิทธิภาพสูง! ช่วงผลิตภัณฑ์ของ Hielscher ครอบคลุมสเปกตรัมเต็มรูปแบบจาก ultrasonicator ห้องปฏิบัติการขนาดกะทัดรัดมากกว่าหน่วยม้านั่งด้านบนเพื่อระบบอัลตราโซนิกอุตสาหกรรมเต็มรูปแบบ