Hielscher Ultrasonics
เรายินดีที่จะพูดคุยเกี่ยวกับกระบวนการของคุณ
โทรหาเรา: +49 3328 437-420
ส่งอีเมลถึงเรา: info@hielscher.com

การสลายเซลล์ของเซลล์ BL21 โดยอัลตราโซนิก

เซลล์ BL21 เป็นสายพันธุ์ของ. coli ที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในห้องปฏิบัติการวิจัย เทคโนโลยีชีวภาพ และการผลิตทางอุตสาหกรรม เนื่องจากความสามารถในการแสดงโปรตีนอย่างมีประสิทธิภาพสูง การหยุดชะงักของเซลล์อัลตราโซนิกการสลายและการสกัดโปรตีนเป็นวิธีทั่วไปในการแยกและรวบรวมโปรตีนเป้าหมายจากภายในเซลล์ของเซลล์ BL21 อัลตราโซนิกรบกวนเซลล์อย่างสมบูรณ์และปล่อยโปรตีนที่ติดอยู่ทั้งหมดทําให้โปรตีนพร้อมใช้งาน 100%

เซลล์ BL21 สําหรับการแสดงออกของโปรตีน

แบคทีเรีย. coli เช่นเซลล์ BL21 มักถูกสลายโดยอัลตราโซนิกเพื่อปล่อยโปรตีนที่แสดงออกเช่นโปรตีนรีคอมบิแนนท์เซลล์ BL21 เป็นสายพันธุ์แบคทีเรีย. coli ที่มีความสามารถทางเคมีซึ่งเหมาะสําหรับการเปลี่ยนแปลงและการแสดงออกของโปรตีนระดับสูงโดยใช้ระบบเหนี่ยวนํา T7 RNA polymerase-IPTG เซลล์ BL21 ช่วยให้สามารถแสดงออกของโปรตีนที่มีประสิทธิภาพสูงของยีนใด ๆ ที่อยู่ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ T7 สายพันธุ์. coli BL21(DE3) เป็นสายพันธุ์การผลิตโปรตีนที่ใช้โพลีเมอเรส T7 RNA รวมกับเวกเตอร์การแสดงออกที่ใช้โปรโมเตอร์ T7 และถูกนําไปใช้กันอย่างแพร่หลายในห้องปฏิบัติการและอุตสาหกรรมเพื่อผลิตโปรตีนรีคอมบิแนนท์ ใน BL21(DE3) การแสดงออกของยีนที่เข้ารหัสโปรตีนรีคอมบิแนนท์จะถูกถอดความโดย T7 RNA polymerase (T7 RNAP) ที่เข้ารหัสโครโมโซม ซึ่งถอดเสียงเร็วกว่า. coli RNAP ทั่วไปถึงแปดเท่า สิ่งนี้ทําให้สายพันธุ์ BL21 (DE3) มีประสิทธิภาพสูงและกลายเป็นหนึ่งในระบบเซลล์การแสดงออกของโปรตีนที่ต้องการมากที่สุด

โปรโตคอลสําหรับการสลายอัลตราโซนิกและการสกัดโปรตีนจากเซลล์ BL21

การสลายเซลล์ของเซลล์ BL21 ส่วนใหญ่จะดําเนินการโดยใช้อัลตราโซนิกร่วมกับโซเดียมลัวรอยล์ซาร์โคซิเนต (หรือที่เรียกว่าซาร์โคซิล) เป็นบัฟเฟอร์การสลาย ข้อดีของการหยุดชะงักของเซลล์อัลตราโซนิกและการสกัดโปรตีนอยู่ที่ความน่าเชื่อถือความสามารถในการทําซ้ําตลอดจนการทํางานที่ง่ายปลอดภัยและรวดเร็วของเครื่องอัลตราโซนิก โปรโตคอลด้านล่างให้ทิศทางทีละขั้นตอนสําหรับการสลายเซลล์อัลตราโซนิก BL21:

  • เม็ดแบคทีเรีย BL21 ถูกแขวนลอยอีกครั้งในบัฟเฟอร์ Sodium Tris-EDTA (STE) เย็น 50 มล. (ประกอบด้วย 10 mM Tris-HCL, pH 8.0, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl เสริมด้วย 100 mM PMSF)
  • ไลโซไซม์ 500 ul (10 มก. / มล.) ถูกเติมและเซลล์จะถูกบ่มบนน้ําแข็งเป็นเวลา 15 นาที
  • หลังจากนั้น จะเติม DTT 500 ul และ sarkosyl 7 มล. (10% (w / v) ที่ประกอบขึ้นในบัฟเฟอร์ STE)
  • จําเป็นอย่างยิ่งที่จะต้องรักษาบัฟเฟอร์การทําให้บริสุทธิ์ทั้งหมดให้เย็นสนิทและรักษาตัวอย่างไว้บนน้ําแข็งตลอดเวลา ขั้นตอนการทําให้บริสุทธิ์ทั้งหมดควรดําเนินการในห้องเย็นถ้าเป็นไปได้
  • VialTweeter ที่โปรเซสเซอร์อัลตราโซนิก UP200ST

  • สําหรับการสลายอัลตราโซนิกและการสกัดโปรตีนตัวอย่างจะถูก sonicated ใน VialTweeter MultiSample เครื่องอัลตราโซนิก เป็นเวลา 4 x 30 วินาทีที่แอมพลิจูด 100% โดยมีช่วงเวลา 2 นาทีระหว่างการ sonication แต่ละครั้ง อีกทางหนึ่ง homogenizer อัลตราโซนิกชนิดโพรบที่มีไมโครทิป เช่น UP200 ฮิต ด้วย S26d2 (3 x 30 วินาที 2 นาที หยุดชั่วคราวระหว่างรอบอัลตราโซนิก แอมพลิจูด 80%) สามารถใช้ได้
  • สําหรับขั้นตอนการทําให้บริสุทธิ์เพิ่มเติม samp จะต้องเก็บไว้บนน้ําแข็งหรือเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -80°C จนกว่าจะผ่านกระบวนการต่อไป
ตัวเชื่อมแบบโพรบ UP200St สําหรับการสลาย

เครื่องรบกวนเซลล์อัลตราโซนิก UP200St พร้อมไมโครทิป S26d2 สําหรับการสลายและการสกัดโปรตีน

การขอข้อมูล







อัลตราโซนิก Lysis ภายใต้การควบคุมอุณหภูมิ Prescise

การควบคุมอุณหภูมิที่แม่นยําและเชื่อถือได้เป็นสิ่งสําคัญเมื่อจัดการกับตัวอย่างทางชีวภาพ อุณหภูมิสูงทําให้เกิดการย่อยสลายโปรตีนที่เกิดจากความร้อนในตัวอย่าง
เนื่องจากเทคนิคการเตรียมตัวอย่างเชิงกลทั้งหมดการ sonication จะสร้างความร้อน อย่างไรก็ตาม อุณหภูมิของตัวอย่างสามารถควบคุมได้ดีเมื่อใช้ VialTweeter เรานําเสนอตัวเลือกต่างๆ ในการตรวจสอบและควบคุมอุณหภูมิของตัวอย่างของคุณในขณะที่เตรียมด้วย VialTweeter และ VialPress สําหรับการวิเคราะห์

  1. การตรวจสอบอุณหภูมิตัวอย่าง: โปรเซสเซอร์อัลตราโซนิก UP200St ซึ่งขับเคลื่อน VialTweeter มีซอฟต์แวร์อัจฉริยะและเซ็นเซอร์อุณหภูมิแบบเสียบได้ เสียบเซ็นเซอร์อุณหภูมิเข้ากับ UP200St และสอดปลายเซ็นเซอร์อุณหภูมิเข้าไปในหลอดตัวอย่างใดตัวหนึ่ง ผ่านหน้าจอสัมผัสสีดิจิตอลคุณสามารถตั้งค่าในเมนูของ UP200St ช่วงอุณหภูมิเฉพาะสําหรับ sampsonication ของคุณ เครื่องอัลตราโซนิกจะหยุดโดยอัตโนมัติเมื่อถึงอุณหภูมิสูงสุดและหยุดชั่วคราวจนกว่า samp อุณหภูมิจะลดลงเหลือค่าที่ต่ํากว่าของ∆อุณหภูมิที่ตั้งไว้ จากนั้นการ sonication จะเริ่มโดยอัตโนมัติอีกครั้ง คุณสมบัติอันชาญฉลาดนี้ป้องกันการเสื่อมสภาพที่เกิดจากความร้อน
  2. บล็อก VialTweeter สามารถระบายความร้อนล่วงหน้าได้ ใส่บล็อก VialTweeter (เฉพาะ sonotrode ที่ไม่มีทรานสดิวเซอร์!) ลงในตู้เย็นหรือช่องแช่แข็งเพื่อทําให้บล็อกไททาเนียมเย็นลงก่อนจะช่วยเลื่อนอุณหภูมิที่เพิ่มขึ้นในตัวอย่าง ถ้าเป็นไปได้ ตัวอย่างเองก็สามารถระบายความร้อนล่วงหน้าได้เช่นกัน
  3. ใช้น้ําแข็งแห้งเพื่อทําให้เย็นในระหว่างการ sonication ใช้ถาดตื้นที่เต็มไปด้วยน้ําแข็งแห้งและวาง VialTweeter บนน้ําแข็งเพื่อให้ความร้อนกระจายอย่างรวดเร็ว

ลูกค้าทั่วโลกใช้ VialTweeter และ VialPress สําหรับงานเตรียมตัวอย่างประจําวันในห้องปฏิบัติการทางชีวภาพ ชีวเคมี การแพทย์ และคลินิก ซอฟต์แวร์อัจฉริยะและการควบคุมอุณหภูมิของโปรเซสเซอร์ UP200St ควบคุมอุณหภูมิได้อย่างน่าเชื่อถือและหลีกเลี่ยงการเสื่อมสภาพของตัวอย่างที่เกิดจากความร้อน การเตรียมตัวอย่างอัลตราโซนิกด้วย VialTweeter และ VialPress ให้ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้สูงและทําซ้ําได้!
 

บทช่วยสอนนี้อธิบายว่าเครื่อง sonicator ประเภทใดดีที่สุดสําหรับงานเตรียมตัวอย่างของคุณเช่นการสลายการหยุดชะงักของเซลล์การแยกโปรตีนการกระจายตัวของ DNA และ RNA ในห้องปฏิบัติการการวิเคราะห์และการวิจัย เลือกประเภทเครื่องโซนิคเตอร์ที่เหมาะกับการใช้งานปริมาตรตัวอย่างจํานวนตัวอย่างและปริมาณงานของคุณ Hielscher Ultrasonics มีโฮโมจีไนเซอร์อัลตราโซนิกที่เหมาะสําหรับคุณ!

วิธีค้นหาเครื่องสะท้อนเสียงที่สมบูรณ์แบบสําหรับการหยุดชะงักของเซลล์และการสกัดโปรตีนในวิทยาศาสตร์และการวิเคราะห์

ภาพขนาดย่อของวิดีโอ

 

ค้นหา Ultrasonic Disruptor ที่เหมาะสมที่สุดสําหรับการใช้งาน Lysis ของคุณ

เครื่องอัลตราโซนิก Hielscher สามารถควบคุมจากระยะไกลผ่านการควบคุมเบราว์เซอร์ พารามิเตอร์ Sonication สามารถตรวจสอบและปรับได้อย่างแม่นยําตามความต้องการของกระบวนการHielscher Ultrasonics เป็นผู้ผลิตเครื่องรบกวนเซลล์อัลตราโซนิกประสิทธิภาพสูงที่มีประสิทธิภาพสูงและโฮโมจีไนเซอร์ที่มีประสบการณ์มาอย่างยาวนานสําหรับห้องปฏิบัติการระบบเครื่องชั่งแบบตั้งโต๊ะและอุตสาหกรรม ขนาดการเพาะเลี้ยงเซลล์แบคทีเรียเป้าหมายการวิจัยหรือการผลิตและปริมาตรของเซลล์ที่จะประมวลผลต่อชั่วโมงหรือวันเป็นปัจจัยสําคัญในการค้นหาตัวรบกวนเซลล์อัลตราโซนิกที่เหมาะสมสําหรับการใช้งานของคุณ
Hielscher Ultrasonics นําเสนอโซลูชั่นต่างๆสําหรับการ sonication พร้อมกันของหลายตัวอย่าง (มากถึง 10 ขวดด้วย VialTweeter) และตัวอย่างมวล (เช่นแผ่นไมโครไทเตอร์ / แผ่น ELISA ที่มี UIP400MTP) เช่นเดียวกับเครื่องอัลตราโซนิกในห้องปฏิบัติการแบบโพรบแบบคลาสสิกที่มีระดับพลังงานที่แตกต่างกันตั้งแต่ 50 ถึง 400 วัตต์เพื่อโปรเซสเซอร์อัลตราโซนิกอุตสาหกรรมเต็มรูปแบบที่มีมากถึง 16,000 วัตต์ต่อหน่วยสําหรับการหยุดชะงักของเซลล์เชิงพาณิชย์และการสกัดโปรตีนในการผลิตขนาดใหญ่ เครื่องอัลตราโซนิก Hielscher ทั้งหมดสร้างขึ้นสําหรับการทํางานตลอด 24/7/365 ภายใต้ภาระเต็มที่ ความทนทานและความน่าเชื่อถือเป็นคุณสมบัติหลักของอุปกรณ์อัลตราโซนิกของเรา
homogenizers อัลตราโซนิกดิจิตอลทั้งหมดมีซอฟต์แวร์อัจฉริยะหน้าจอสัมผัสสีและโปรโตคอลข้อมูลอัตโนมัติซึ่งทําให้อุปกรณ์อัลตราโซนิกเป็นเครื่องมือการทํางานที่สะดวกในห้องปฏิบัติการและโรงงานผลิต
แจ้งให้เราทราบว่าเซลล์ชนิดใดปริมาตรเท่าใดความถี่เท่าใดและเป้าหมายใดที่คุณต้องประมวลผลตัวอย่างทางชีวภาพของคุณ เราจะแนะนําตัวก่อกวนเซลล์อัลตราโซนิกที่เหมาะสมที่สุดสําหรับความต้องการในกระบวนการของคุณ

ตารางด้านล่างให้ข้อบ่งชี้เกี่ยวกับความสามารถในการประมวลผลโดยประมาณของระบบอัลตราโซนิกของเราตั้งแต่โฮโมจีไนเซอร์มือถือขนาดกะทัดรัดและเครื่องอัลตราโซนิก MultiSample ไปจนถึงโปรเซสเซอร์อัลตราโซนิกอุตสาหกรรมสําหรับการใช้งานเชิงพาณิชย์:

ปริมาณแบทช์ อัตราการไหล อุปกรณ์ที่แนะนํา
แผ่นไมโครไทเตอร์ 96 หลุม ไม่ UIP400MTP
10 ขวด à 0.5 ถึง 1.5 มล. ไม่ VialTweeter ที่ UP200St
0.01 ถึง 250 มล. 5 ถึง 100 มล. / นาที UP50H
0.01 ถึง 500 มล. 10 ถึง 200 มล. / นาที UP100H
10 ถึง 2000 มล. 20 ถึง 400 มล. / นาที UP200 ฮิต, UP400ST
0.1 ถึง 20L 0.2 ถึง 4L / นาที UIP2000hdt
10 ถึง 100L 2 ถึง 10L / นาที UIP4000hdT
ไม่ 10 ถึง 100L / นาที UIP16000
ไม่ ขนาด ใหญ่ คลัสเตอร์ของ UIP16000

ติดต่อเรา! / ถามเรา!

สอบถามข้อมูลเพิ่มเติม

โปรดใช้แบบฟอร์มด้านล่างเพื่อขอข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับโปรเซสเซอร์อัลตราโซนิกแอพพลิเคชั่นและราคา เรายินดีที่จะหารือเกี่ยวกับกระบวนการของคุณกับคุณและเสนอระบบอัลตราโซนิกที่ตรงกับความต้องการของคุณ!












การกระจายตัวของดีเอ็นเออัลตราโซนิกเป็นเทคนิคที่เชื่อถือได้และมีประสิทธิภาพที่ใช้กันทั่วไปสําหรับโปรตีนการหยุดชะงักของเซลล์การแยกและการกระจายตัวของดีเอ็นเอในการจัดลําดับรุ่นต่อไป (NGS)

เครื่องสะท้อนเสียงแผ่น UIP400MTP สําหรับการหยุดชะงักของเซลล์ที่มีปริมาณงานสูงในเพลต 96 หลุม

 
 

เครื่องอัลตราโซนิก UP200Ht พร้อมไมโครทิป S26d2 สําหรับการสลายอัลตราโซนิกของตัวอย่างทางชีวภาพ

เครื่องอัลตราโซนิก UP200 ฮิต ด้วย microtip S26d2 ขนาด 2 มม. สําหรับ sonication ของตัวอย่างขนาดเล็ก

 
อ่านเพิ่มเติมเกี่ยวกับวิธีการใช้โฮโมจีไนเซอร์เนื้อเยื่ออัลตราโซนิกสําหรับการเตรียมสารละลายบัฟเฟอร์ที่มีประสิทธิภาพและเชื่อถือได้!
 



ข้อเท็จจริงที่ควรค่าแก่การรู้

แบคทีเรีย Escherichia Coli

Escherichia coli เป็นแบคทีเรียชนิดหนึ่งที่ไม่ก่อให้เกิดสปอร์แกรมลบและมีลักษณะเป็นแท่งตรง แบคทีเรีย E.coli มีอยู่ในสิ่งแวดล้อม อาหาร และลําไส้ของมนุษย์และสัตว์ . coli มักจะเคลื่อนที่ได้โดยใช้แฟลกเจลลา peritrichous แต่ก็มีประเภทที่ไม่เคลื่อนที่เช่นกัน E.coli เป็นสิ่งที่เรียกว่าสิ่งมีชีวิตเคมีออร์กาโนโทรฟแบบไม่ใช้ออกซิเจนซึ่งหมายความว่าพวกมันสามารถเผาผลาญได้ทั้งทางเดินหายใจและการหมัก E.coli ส่วนใหญ่ไม่เป็นพิษเป็นภัยและทําหน้าที่ที่เป็นประโยชน์ในร่างกาย เช่น ยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียที่เป็นอันตราย การสังเคราะห์วิตามิน เป็นต้น
เซลล์แบคทีเรีย Escherichia coli ชนิดที่เรียกว่า B เป็นสายพันธุ์ E.coli ประเภทพิเศษ ซึ่งใช้กันอย่างแพร่หลายในการวิจัยเพื่อตรวจสอบกลไกต่างๆ เช่น ความไวต่อแบคทีเรียหรือระบบปรับเปลี่ยนข้อจํากัด นอกจากนี้ แบคทีเรีย E.coli ยังได้รับการประเมินว่าเป็นม้าทํางานที่เชื่อถือได้สําหรับการแสดงออกของโปรตีนในห้องปฏิบัติการเทคโนโลยีชีวภาพและวิทยาศาสตร์เพื่อชีวิต ตัวอย่างเช่น E.coli ใช้ในการสังเคราะห์สารประกอบ เช่น โปรตีนและโอลิโกแซ็กคาไรด์ในระดับอุตสาหกรรม เนื่องจากคุณสมบัติเฉพาะเช่นการขาดโปรตีเอสการผลิตอะซิเตทต่ําที่ระดับกลูโคสสูงและการซึมผ่านที่เพิ่มขึ้นเซลล์. coli B จึงเป็นเซลล์โฮสต์ที่ใช้บ่อยที่สุดสําหรับการผลิตโปรตีนที่ดัดแปลงพันธุกรรม

โปรตีนรีคอมบิแนนท์

โปรตีนรีคอมบิแนนท์ (rProt) กําลังได้รับความสําคัญอย่างมากในสาขาต่างๆ รวมถึงในการผลิตเคมี ยา เครื่องสําอาง ยาสําหรับมนุษย์และสัตว์ การเกษตร อาหาร ตลอดจนอุตสาหกรรมการบําบัดของเสีย
การผลิตโปรตีนรีคอมบิแนนท์ต้องใช้ระบบการแสดงออก ในฐานะที่เป็นระบบเซลล์ที่แสดงออกสําหรับการผลิต DNA รีคอมบิแนนท์ สามารถใช้ได้ทั้งเซลล์โปรคาริโอตและเซลล์ยูคาริโอต ในขณะที่เซลล์แบคทีเรียถูกนํามาใช้กันอย่างแพร่หลายในการแสดงออกของโปรตีนเนื่องจากปัจจัยต่างๆ เช่น ต้นทุนต่ํา ความสามารถในการปรับขนาดได้ง่าย และสภาวะของสื่อที่เรียบง่าย แต่สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ยีสต์ สาหร่าย แมลง และระบบที่ปราศจากเซลล์เป็นทางเลือกที่จัดตั้งขึ้น ประเภทของโปรตีน กิจกรรมการทํางาน ตลอดจนผลผลิตที่ต้องการของโปรตีนที่แสดงออกมีอิทธิพลต่อการเลือกระบบเซลล์ที่ใช้สําหรับการแสดงออกของโปรตีน
ในการแสดงโปรตีนรีคอมบิแนนท์เซลล์เฉพาะจะต้องถูกถ่ายโอนด้วยเวกเตอร์ดีเอ็นเอที่มีแม่แบบของดีเอ็นเอรีคอมบิแนนท์ เซลล์ที่ถ่ายด้วยแม่แบบจะถูกเพาะเลี้ยง อันเป็นผลมาจากกลไกของเซลล์เซลล์จะถอดเสียงและแปลโปรตีนที่สนใจจึงผลิตโปรตีนเป้าหมาย
เนื่องจากโปรตีนที่แสดงออกถูกดักจับอยู่ในเมทริกซ์ของเซลล์เซลล์จึงต้องถูกไลซิส (หยุดชะงักและแตก) เพื่อปล่อยโปรตีน ในขั้นตอนการทําให้บริสุทธิ์ในภายหลังโปรตีนจะถูกแยกและทําให้บริสุทธิ์
โปรตีนรีคอมบิแนนท์ตัวแรกที่ใช้ในการรักษาคืออินซูลินของมนุษย์รีคอมบิแนนท์ในปี 1982 ปัจจุบันมีการผลิตโปรตีนรีคอมบิแนนท์มากกว่า 170 ชนิดทั่วโลกเพื่อการรักษาทางการแพทย์ โปรตีนรีคอมบิแนนท์ที่ใช้กันทั่วไปในทางการแพทย์ ได้แก่ ฮอร์โมนรีคอมบิแนนท์, อินเตอร์เฟอรอน, อินเตอร์ลูกินส์, ปัจจัยการเจริญเติบโต, ปัจจัยเนื้อร้ายของเนื้องอก, ปัจจัยการแข็งตัวของเลือด, ยาละลายลิ่มเลือด และเอนไซม์สําหรับรักษาโรคสําคัญ เช่น เบาหวาน, คนแคระ, กล้ามเนื้อหัวใจตาย, หัวใจล้มเหลว, สมองบักช ັນ, ปลอกประสาทโลหิตตีบแข็ง, นิวโทรพีเนีย, เกล็ดเลือดต่ํา, โลหิตจาง, ตับอักเสบ, โรคข้ออักเสบรูมาตอยด์, โรคหอบหืด, โรคโครห์น และการรักษามะเร็ง (อ้างอิง Phuc V. Pham ใน Omics Technologies and Bio-Engineering, 2018)


วรรณกรรม / อ้างอิง

VialTweeter ที่โปรเซสเซอร์อัลตราโซนิก UP200ST

เครื่องสะท้อนเสียงไวอัลทวีตเตอร์ สําหรับการ sonication พร้อมกัน 10 ตัวอย่างเช่นเพื่อขัดขวางเซลล์ BL21


Hielscher Ultrasonics จัดหาโฮโมจีไนเซอร์อัลตราโซนิกประสิทธิภาพสูงตั้งแต่ห้องปฏิบัติการไปจนถึงขนาดอุตสาหกรรม

อัลตราโซนิกประสิทธิภาพสูง! กลุ่มผลิตภัณฑ์ของ Hielscher ครอบคลุมสเปกตรัมเต็มรูปแบบตั้งแต่เครื่องอัลตราโซนิกในห้องปฏิบัติการขนาดกะทัดรัดบนหน่วยแบบตั้งโต๊ะไปจนถึงระบบอัลตราโซนิกอุตสาหกรรมเต็มรูปแบบ

เรายินดีที่จะพูดคุยเกี่ยวกับกระบวนการของคุณ

Let's get in contact.