เทคโนโลยีอัลตราซาวนด์ Hielscher

อัลตราโซนิกสลายของอีโคไล

  • อีแบคทีเรียเป็นเชื้อแบคทีเรียที่ใช้กันมากที่สุดในทางจุลชีววิทยาและเทคโนโลยีชีวภาพ
  • อัลตราโซนิกสารทำลายเซลล์ส่งผลที่เชื่อถือได้และทำซ้ำได้สำหรับสลายของเชื้อ E. coli
  • โพรงอากาศที่รุนแรงยังสามารถควบคุมได้อย่างแม่นยำและแรงเฉือนส่งผลให้เกิดการหยุดชะงักและการสกัดสูงอัตราผลตอบแทนฉบับสมบูรณ์ (เช่นโปรตีน DNA)

การหยุดชะงักของเซลล์โดย Cavitation

แบคทีเรีย Escherichia coli จะ lysed น่าเชื่อถือโดยใช้เนื้อเยื่อ homogenizers ล้ำอัลตราโซนิกการสอบสวนชนิด homogenizers ทำงานที่มีประมาณ 20,000 รอบต่อวินาที (ที่ 20kHz) และก่อให้เกิดโพรงอากาศในของเหลวหรือ supsensions อะคูสติกพื้นที่โพรงอากาศกล้องจุลทรรศน์แรงกดดันสูญญากาศเหมือนและอุณหภูมิสูงที่ฉีกขาดออกจากกันเซลล์ แม้ว่าอุณหภูมิอาจจะสูงถึงหลายพันองศาเซลเซียสปริมาณโพรงอากาศที่มีขนาดเล็กเพื่อให้พวกเขาไม่ร้อนกระบวนการอย่างมีนัยสำคัญ อัลตราซาวนด์ที่สร้างโพรงอากาศเสียงและแรงเฉือนเจาะหรือทำลายเยื่อหุ้มเซลล์ของเชื้อ E.coli – ขึ้นอยู่กับการตั้งค่าอุปกรณ์ของโฮโมจีไนอัลตราโซนิก

ข้อดีของการสลายอัลตราโซนิก

  • การควบคุมที่แม่นยำของการสลาย (ความเข้มความกว้างอุณหภูมิ)
  • การปรับตัวที่ดีที่สุดตัวอย่างที่เฉพาะเจาะจง
  • การควบคุมอุณหภูมิ
  • สำหรับตัวอย่างขนาดเล็กมากที่จะมีขนาดใหญ่มาก (ไมโครลิตรเพื่อลิตร)
  • บำบัดเชิงกลบริสุทธิ์
  • เส้นตรงระดับขึ้นจากห้องปฏิบัติการเพื่อการผลิต
อุปกรณ์อัลตราโซนิก VialTweeter ช่วยให้การเตรียมสารตัวอย่างพร้อมกันถึง 10 ขวดภายใต้เงื่อนไขกระบวนการเดียวกัน (คลิกเพื่อดูภาพขยาย)

VialTweeter สำหรับการสลายอัลตราโซนิก

ขอข้อมูล





ขณะสลายทางเคมีและ enzymtic อาจเป็นปัญหาได้ – ตั้งแต่การสลายสารเคมีที่สามารถปรับเปลี่ยนโครงสร้างโปรตีนและแนะนำปัญหาบริสุทธิ์และการสลายเอนไซม์ต้องใช้เวลาบ่มนานและไม่สามารถทำซ้ำได้ – การหยุดชะงักอัลตราโซนิกคือมีความซับซ้อนเซลล์อย่างรวดเร็ววิธีการหยุดชะงัก
สลายอัลตราโซนิกจะขึ้นอยู่กับกองกำลังเชิงกลเท่านั้น ไม่มีการเพิ่มสารเคมี sonication แบ่งผนังเซลล์โดยกองกำลังเฉือน สลายสารเคมีสามารถเปลี่ยนโครงสร้างของโปรตีนและแนะนำปัญหาการทำให้บริสุทธิ์. การหยุดชะงักของเอนไซม์ต้องใช้เวลาในการฟักตัวนานและไม่ได้เกิดซ้ำ

ข้อเสนอแนะทั่วไป

ultrasonicator UP400St กับเครื่องปฏิกรณ์ไหลsonication เป็นเทคนิคที่นิยมมากที่สุดสำหรับ lysing ปริมาณที่น้อยมากกลางและขนาดใหญ่ของเซลล์แขวนลอย – จากพิโคลิตรขึ้นไป 100L / ชม (โดยใช้เซลล์ไหลอัลตราโซนิก) เซลล์ lysed โดยเฉือนของเหลวและโพรงอากาศ ดีเอ็นเอยังตัดระหว่าง sonication ดังนั้นจึงไม่จำเป็นที่จะเพิ่ม DNase การระงับเซลล์
การควบคุมอุณหภูมิ:
โดยการระบายความร้อนก่อนตัวอย่างและการเก็บรักษาตัวอย่างระหว่าง sonication บนน้ำแข็งลิ้มสลายตัวของกลุ่มตัวอย่างที่สามารถป้องกันได้อย่างง่ายดาย
เป็นการดีที่ตัวอย่างควรจะเก็บน้ำแข็งเย็นในระหว่างการสลายแต่ส่วนใหญ่มันก็เพียงพอถ้าอุณหภูมิไม่ได้เพิ่มขึ้นเหนืออุณหภูมิของวัฒนธรรมหรือแหล่งเนื้อเยื่อ ดังนั้นจึงเป็นที่แนะนำเพื่อให้ระงับบนน้ำแข็งและไปยัง sonicate ที่มีหลาย ultrasonics short พัลส์ของ5-10 วินาทีและหยุดการทำงานของ10-30 วินาที ในระหว่างการหยุดความร้อนสามารถกระจายในการสั่งซื้อเพื่อสร้างอุณหภูมิต่ำอีกครั้ง สำหรับตัวอย่างเซลล์ขนาดใหญ่เครื่องปฏิกรณ์เซลล์ไหลต่างๆที่มีแจ็คเก็ตระบายความร้อนที่มีอยู่

โปรโตคอลสำหรับการเตรียมความพร้อมของอีไลเซ

การวิเคราะห์การแสดงออกและการทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีน

คอไลเม็ดอีถูก sonicated ด้วยระบบอัลตราโซนิก UP100H (Hielscher) เพื่อจุดประสงค์นี้ตะกอนเซลล์ถูก resuspended ในบัฟเฟอร์สลายแช่เย็น (50 mM Tris-HCl ค่า pH = 7.5, 100 มิลลิโซเดียมคลอไรด์, 5 มิลลิ DTT 1 มิลลิ PMSF) และระบายความร้อนบนน้ำแข็งเป็นเวลา 10 นาที จากนั้นเซลล์แขวนลอยถูก sonicated 10 bursts สั้นของ 10 วินาทีตามมาด้วยช่วงเวลา 30 วินาทีสำหรับระบายความร้อน สุดท้ายเศษเซลล์ถูกลบออกโดย ultracentrifugation ที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาทีที่ 14000 รอบต่อนาที เพื่อยืนยันในการแสดงออก RPR ใสได้ทำงานบนเจลอะคริเลต 12% และวิเคราะห์โดยวิธี SDS-PAGE และซับตะวันตก การทำให้บริสุทธิ์ของ RPR ถูกทำโดยการใช้ Ni2 +เรซิน -NTA (Invitrogen, สหรัฐอเมริกา) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ในขั้นตอนนี้วิธีการทำให้บริสุทธิ์พื้นเมืองถูกนำมาใช้ ความบริสุทธิ์ของโปรตีนบริสุทธิ์ได้รับการประเมินโดยใช้อิเลในเจลอะคริเลต 12% และต่อมา Coomassie ย้อมสีฟ้า ความเข้มข้นของโปรตีนบริสุทธิ์โดยวัดจากไมโคร BCA ชุดทดสอบโปรตีน (PIERCE, สหรัฐอเมริกา) (Azarnezhad et al. 2016)

อัลตราโซนิกเซลล์ disruptor UP100H (100W) เพื่อสลายการหยุดชะงักของเซลล์และการตัดดีเอ็นเอ

อัลตราโซนิกโฮโมจีไน UP100H 100W

เจริญเติบโตของเซลล์เชื่อมขวางและเตรียมความพร้อมของ E. coli สารสกัดจากเซลล์

สำหรับ SeqA และ RNA โพลิเมอร์ชิปชิป E. coli หรือ MG1655 MG1655 ΔseqAเติบโตเป็นผู้ใหญ่ที่ 37 ° C ไปยัง OD๖๐๐ ประมาณ๐.๑๕ใน๕๐มล. ปอนด์ (+ ๐.๒% กลูโคส) ก่อน27μ l ของฟอร์ลดีไฮด์ (๓๗%) ต่อมิลลิลิตรเพิ่มขึ้น (ความเข้มข้นสุดท้าย 1%) การเชื่อมโยงมีการดำเนินการที่ช้าเขย่า (๑๐๐รอบต่อนาที) ที่อุณหภูมิห้องสำหรับ20นาทีตามด้วยการดับด้วย10มิลลิลิตรของ๒.๕ M glycine (ความเข้มข้นสุดท้าย๐.๕ M). สำหรับการทดลองการช็อกด้วยความร้อน,. coli MG1655 มีการเติบโตใน๖๕ ml ปอนด์ขนาดกลางที่30° c ถึง OD๖๐๐ ประมาณ 0.3 ต่อมาวันที่ 30 มล. ของวัฒนธรรมที่ถูกย้ายไปก่อนอุ่นขวดที่ 43 องศาเซลเซียสและส่วนที่เหลือจะเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส เชื่อมขวางและดับได้รับการอธิบายไว้ข้างต้นยกเว้นว่าเซลล์ที่ถูกเก็บไว้ที่ 30 หรือ 43 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีก่อนที่จะต่อไปช้าเขย่าที่อุณหภูมิห้อง เซลล์ที่ถูกเก็บรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยงและล้างครั้งที่สองกับ TBS เย็น (pH7.5) หลังจาก resuspension ใน 1 มิลลิลิตรบัฟเฟอร์สลาย (10 mM Tris (pH 8.0) 20% ซูโครส 50 มิลลิโซเดียมคลอไรด์ 10 มิลลิ EDTA, 10 mg / ml lysozyme) และการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีตามด้วยนอกเหนือจาก 4 มล. IP บัฟเฟอร์เซลล์ถูก sonicated บนน้ำแข็งกับ 12 ครั้ง 30 วินาทีและ 30 วินาทีแบ่งที่ UP400St หน่วยประมวลผลอัลตราโซนิก (Hielscher Ultrasonics GmbH) มีอำนาจ 100% หลังจากการหมุนเหวี่ยงเป็นเวลา 10 นาทีที่ 9000 กรัม 800 ไมโครลิตร aliquotes ของสารละลายที่ถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียส (Waldminghaus 2010)

มากเกินไปและการทำให้บริสุทธิ์ของเอนไซม์

สำหรับการผลิตล้นเกินของ decahistidine (His10) โปรตีน -tagged, E. coli BL21 (DE3) ถูกเปลี่ยนด้วยโครงสร้าง pET19b preculture ค้างคืนถูกเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยงและ 1% ถูกใช้ในการฉีดวัคซีนวัฒนธรรมการแสดงออก เซลล์แบก pET19mgtB ปลูกวันที่ 22 ° C จนกว่าจะมีความหนาแน่นของแสงที่ 600 นาโนเมตร (OD๖๐๐) 0.7 วัฒนธรรมถูกย้ายไปอยู่ที่ 17 องศาเซลเซียสและเกิดจาก 100 ไมครอน IPTG หลังจาก 16 ชั่วโมงวัฒนธรรมที่ถูกเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 7,500 ×กรัมที่ 4 ° C เซลล์ที่ถูก resuspended ใน 50 มิลลิน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (PBS) 0.3 M NaCl ที่ pH 7.4 และหยุดชะงักโดย ultrasonication กับ S2 ไมโครปลาย sonotrode ที่ UP200St ultrasonicator (Hielscher, Teltow, เยอรมนี) ในวงจรของ 0.5 และความกว้างของ 75%
ล้นเกินของ decahistidine ติดแท็ก GtfC ถูกชักนำที่ 37 ° C ที่ OD๖๐๐ 0.6 100 ไมครอน IPTG เซลล์ที่ถูกบ่มแล้วสำหรับ 4 ชั่วโมงเก็บเกี่ยวและ lysed ตามที่ระบุไว้ข้างต้นสำหรับ MgtB
สารสกัดจากเซลล์น้ำมันดิบถูกหมุนเหวี่ยงที่ 15,000 ×กรัมและ 4 ° C ถึงตะกอนเศษเซลล์ สารสกัดชี้แจงถูกโหลดในวันที่ 1 มิลลิลิตร HisTrap FF คอลัมน์ดิบโดยใช้ระบบÄKTAprimeพลัส (GE Healthcare) เอนไซม์บริสุทธิ์ตามโปรโตคอลของผู้ผลิตสำหรับชะลาดของโปรตีนที่ติดแท็กของเขา ชะโซลูชั่นโปรตีน dialyzed สองครั้งกับ 1,000 เล่ม 50 มิลลิพีบีเอสพีเอช 7.4, 0.3 M NaCl ที่ 4 ° C บริสุทธิ์ได้รับการวิเคราะห์โดย 12% SDS-PAGE ความเข้มข้นของโปรตีนที่ถูกกำหนดโดยวิธีการใช้แบรดฟอโรตี-ควอนท์ (คาร์ลโรท GmbH, Karlsruhe, เยอรมนี) (Rabausch et al. 2013)

การสกัดโปรตีนจากแบคทีเรีย E.
โปรตีนเหยื่อที่น่าสนใจ (ในกรณีนี้ MTV1 ของ Arabidopsis thaliana) ผสมกับแท็ก GST และแสดงออกใน BL21 Escherichia coli ( E. coli) เซลล์
1. ใช้เวลาหนึ่งเม็ดภาษี GST-MTV1 และจีเอสที (ตรงกับ 50 มลวัฒนธรรมแบคทีเรีย) และ resuspend ในแต่ละ 2.5 มลน้ำแข็งบัฟเฟอร์สกัดเย็น
2. ใช้ ultrasonicator UP100H (พร้อมกับ MS3 microtip-sonotrode สำหรับไดรฟ์ขนาดเล็ก (2-5mL)) ที่จะทำลายเซลล์แบคทีเรียจนกว่าพวกเขาจะ lysed ซึ่งถูกระบุโดยความทึบแสงลดลงและมีความหนืดเพิ่มขึ้น นี้จะต้องมีการดำเนินการเกี่ยวกับน้ำแข็งและก็จะแนะนำให้ sonicate ในช่วงเวลา (เช่น 10 วินาที sonicating ตามด้วย 10 วินาทีบนน้ำแข็งและอื่น ๆ ) การดูแลจะต้องมีการดำเนินการไม่ให้ sonicate ที่มีความรุนแรงสูงเกินไป หากเกิดฟองหรือการก่อตัวของตะกอนสีขาวมีการตรวจพบความรุนแรงจะต้องลดลง
3. โอนทางออกแบคทีเรีย lysed 1.5 มลหลอดไมโครและแปะที่ 4 ° C, 16,000 x กรัมเป็นเวลา 20 นาที

โปรตีนอัลลิซิแก้ไขใน E. coli

VialTweeter เป็น ultrasonicator สะดวกสบายสำหรับตัวอย่างขนาดเล็กทำให้เป็นเนื้อเดียวกันการกำหนดเนื้อหาโดย sulfhydryl 5,5'-Dithiobis (กรด 2 nitrobenzoic) (DTNB) Assay
วัฒนธรรมค้างคืน E. coli MG1655 ถูกใช้ในการฉีดวัคซีน MOPS กลางน้อยที่สุด (1: 100) วัฒนธรรมปลูกออกซิเจนจน A600 0.4 ก็มาถึง วัฒนธรรมถูกแบ่งออกเป็นสามวัฒนธรรม 15 มล. สำหรับการรักษาความเครียด วัฒนธรรมได้รับการรักษาที่ทำหน้าที่เป็นตัวควบคุมเชิงลบ 0.79 มิลลิ allicin (128 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร-1) หรือ 1 มิลลิ diamide ถูกบันทึกให้เป็นหนึ่งในส่วนที่เหลืออีกสองวัฒนธรรมแต่ละ วัฒนธรรมที่ถูกบ่มนาน 15 นาที 5 มล. ของแต่ละวัฒนธรรมถูกเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยง (8525 ×กรัม 4 ° C, 10 นาที) เซลล์ที่ถูกล้างครั้งที่สอง 1 มิลลิลิตรของพีบีเอส (137 มิลลิโซเดียมคลอไรด์ 2.7 มิลลิโพแทสเซียมคลอไรด์ 10 มมนา2HPO42 มิลลิ KH2Po4ค่า pH 7.4 ที่เก็บไว้แบบไม่ใช้อากาศก่อนที่จะใช้) และหมุนเหวี่ยง (13,000 ×กรัม 4 ° C, 10 นาที) เซลล์ที่ถูก resuspended ในบัฟเฟอร์สลาย (พีบีเอสมี 6 มิลลิ Guanidinium HCl ค่า pH 7.4) ก่อนที่จะมีการหยุดชะงักที่ 4 องศาเซลเซียสโดย ultrasonication (VialTweeter ultrasonicator, Hielscher GmbH ประเทศเยอรมนี) (3 × 1 นาที) เศษเซลล์เม็ดโดยการหมุนเหวี่ยง (13,000 ×กรัม 4 ° C, 15 นาที) ใสถูกย้ายไป 3.5 มล. cuvette QS-มาโคร (10 มิลลิเมตร) มีบาร์กวนแม่เหล็กและผสมกับ 1 มิลลิลิตรของบัฟเฟอร์สลาย การสูญเสียของกลุ่มตัวอย่างได้รับการตรวจสอบที่ 412 นาโนเมตรมี spectrophotometer Jasco V-650 พร้อมกับ PSC-718 ควบคุมอุณหภูมิถือมือถือ (Jasco) ที่อุณหภูมิห้อง 100μlของ 3 มิลลิ dithiobis (กรด 2 nitrobenzoic) วิธีการแก้ปัญหาที่ถูกเพิ่ม การสูญพันธุ์ได้รับการตรวจสอบจนกว่าจะถึงความอิ่มตัว การคำนวณความเข้มข้น thiol ถูกดำเนินการโดยใช้ค่าสัมประสิทธิ์εสูญพันธุ์๔๑๒ = ๑๓,๗๐๐ M-1 ซม.-1 สำหรับ thio-2-nitrobenzoic กรด (TNB) ความเข้มข้น thiol Cellular คำนวณขึ้นอยู่กับปริมาณของเชื้อ E. coli เซลล์ 6.7 × 10-15 ลิตรและความหนาแน่นของเซลล์๖๐๐ = 0.5 (เท่ากับ 1 × 108 เซลล์มล.-1 วัฒนธรรม) (Müller et al. 2016)

กลูตาไธโอนในร่างกายการตรวจหา

E.coli MG1655 เติบโตในระดับปานกลางน้อยที่สุด MOPS ในปริมาณรวมของ 200ml จนถึงเกรด A๖๐๐ 0.5 ก็มาถึง วัฒนธรรมถูกแบ่งออกเป็นวัฒนธรรม 50 มล. สำหรับการรักษาความเครียด หลังจาก 15 นาทีของการบ่มด้วย 0.79 มิลลิ allicin 1 มิลลิ diamide หรือ dimethyl sulfoxide (ควบคุม) เซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยว 4,000g ที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที เซลล์ที่ถูกล้างครั้งที่สองกับ KPE บัฟเฟอร์ก่อนที่จะ resuspension เม็ดใน700μlของ KPE บัฟเฟอร์ สำหรับ deproteination, 300L 10% (w / v) กรด sulfosalicylic ถูกเพิ่มก่อนที่จะมีการหยุดชะงักของเซลล์โดย ultrasonication (3 x 1 นาที; VialTweeter ultrasonicator) supernatants ถูกเก็บหลังจากการหมุนเหวี่ยง (30 นาที, 13,000g 4 ° C) Sulfosalicylic ความเข้มข้นของกรดลดลง 1% โดยนอกเหนือจาก 3 เล่มของ KPE บัฟเฟอร์ วัดของกลูตาไธโอนรวมและ GSSG ถูกดำเนินการตามที่กล่าวไว้ข้างต้น ความเข้มข้นของกลูตาไธโอน Cellular คำนวณขึ้นอยู่กับปริมาณของเชื้อ E. coli เซลล์ 6.7×10-15 ลิตรและความหนาแน่นของเซลล์๖๐๐ 00.5 (เท่ากับ 1×108 เซลล์มล.-1 วัฒนธรรม). ความเข้มข้นของ GSH ถูกคำนวณโดยการลบจาก 2 [GSSG] จากกลูตาไธโอนทั้งหมด (Müller et al. 2016)

disruptor อัลตราโซนิกสำหรับการสลายเซลล์และการสกัดของวัสดุชีวภาพ (คลิกเพื่อดูภาพขยาย)

Probe ชนิด ultrasonicator UP400St

การแสดงออกของ mAspAT มนุษยชนใน E. coli

อัลตราโซนิกเซลล์ disruptor UP400St (400W) สำหรับการสกัดของเรื่องเซลล์ (โปรตีนเช่น organelles ดีเอ็นเออาร์เอ็นเอและอื่น ๆ )อาณานิคมเดียวของเชื้อ E. coli BL21 (DE3) เก็บงำเวกเตอร์แสดงออกใน 30 มล Luria-Bertani (LB) ขนาดกลางที่มี100μg / mL ampicillin และจากนั้นได้รับการปลูกฝังที่37ºCจนความหนาแน่นของแสง (OD๖๐๐) ถึง 0.6 เซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 4,000 ×กรัมเป็นเวลา 10 นาทีและ resuspended ใน 3L กลาง LB สดที่มี100μg / mL ampicillin
ต่อจากนั้นการแสดงออกของโปรตีนที่ถูกเหนี่ยวนำให้เกิด 1 มิลลิ isopropyl β-ᴅ-1-thiogalactopyranoside (IPTG) เป็นเวลา 20 ชั่วโมงที่16ºC เซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 8,000 ×กรัมเป็นเวลา 15 นาทีและล้างด้วยบัฟเฟอร์ (20 มิลลิเมตร NaH2PO4, 0.5 M NaCl ค่า pH 7.4) 45g ห้วง (น้ำหนักเปียก) เซลล์ที่ได้รับจาก 3 วัฒนธรรม L หลังจากการหมุนเหวี่ยงเม็ดเซลล์ถูก resuspended ใน 40 มิลลิลิตร (วัฒนธรรม 1 ลิตร) เย็นสกัดบัฟเฟอร์และ lysed โดย ultrasonication ที่อุณหภูมิเย็นใช้ UP400St เครื่องดนตรี (ดร. Hielscher GmbH ประเทศเยอรมนี) สลายเซลล์ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาทีในการแยกที่ละลายน้ำได้ (ใส) และตกตะกอน (เม็ด) เศษส่วน (Jiang et al. 2015)

ตารางด้านล่างนี้จะช่วยให้คุณมีข้อบ่งชี้ของความจุในการประมวลผลโดยประมาณของ ultrasonicators ของเรา:

ปริมาณชุด อัตราการไหล อุปกรณ์ที่แนะนำ
00.5 เพื่อ 1.5ml N.A. VialTweeter
1 ถึง 500mL 10 ถึง 200mL / นาที UP100H
10 ถึง 2000ml 20 ถึง 400ml / นาที Uf200 ःที, UP400St
00.1 เพื่อ 20L 00.2 เพื่อ 4L / นาที UIP2000hdT
10 100L 2 ถึง 10L / นาที UIP4000
N.A. 10 100L / นาที UIP16000
N.A. ที่มีขนาดใหญ่ กลุ่มของ UIP16000

ติดต่อเรา! / ถามเรา!

โปรดใช้แบบฟอร์มด้านล่างหากคุณต้องการขอข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับการทำให้เป็นเนื้อเดียวกันของอัลตราโซนิก เรายินดีที่จะเสนอระบบอัลตราโซนิกให้ตรงกับความต้องการของคุณ










วรรณคดี / อ้างอิง



ข้อเท็จจริงที่รู้

. coli

Escherichia coli (e. coli) เป็นแกรมลบแบบไม่มีการใช้ออกซิเจน, รูปทรงแกน, ของแบคทีเรียในรูปของสกุล Escherichia ที่มักพบในลำไส้ล่างของสิ่งมีชีวิตที่อบอุ่น (endotherms). มีจำนวนมากของสายพันธุ์. coli (หรือประเภทย่อย) ที่มีลักษณะที่มีความหลากหลาย สายพันธุ์. coli มากที่สุดจะไม่เป็นอันตรายต่อมนุษย์เช่น B และ K-12 สายพันธุ์ที่ใช้กันทั่วไปสำหรับการใช้งานวิจัยในห้องปฏิบัติการ อย่างไรก็ตาม, สายพันธุ์บางอย่างเป็นอันตรายและอาจทำให้เกิดโรคร้ายแรง.
E. coli มีบทบาทสำคัญในด้านวิศวกรรมชีวภาพที่ทันสมัยและจุลชีววิทยาอุตสาหกรรมตั้งแต่เชื้อแบคทีเรียที่เป็นเรื่องง่ายที่จะจัดการ การใช้งานในห้องปฏิบัติการทั่วไปที่เกี่ยวข้องกับการมักจะใช้เชื้อ E. coli ไม่เช่น เพื่อสร้างดีเอ็นเอ recombinant (DNA) หรือทำหน้าที่เป็นแบบอินทรีย์
E. coli เป็นเจ้าบ้านที่หลากหลายมากสำหรับการผลิตโปรตีน heterologous และนานาระบบการแสดงออกของโปรตีนที่มีอยู่ในการผลิตของโปรตีนใน E. coli การใช้พลาสมิดที่อนุญาตให้แสดงออกในระดับสูงของโปรตีนยีนสามารถนำเข้าสู่แบคทีเรียซึ่งจะช่วยให้การผลิตโปรตีนดังกล่าวในปริมาณที่สูงในกระบวนการอุตสาหกรรมการหมัก
E.coli ใช้เป็นโรงงานเซลล์ผลิตอินซูลิน การใช้งานเพิ่มเติมรวมถึงการปรับเปลี่ยนการใช้งานของเซลล์ E. coli ในการพัฒนาและผลิตวัคซีนและเอนไซม์ตรึงในการผลิตเชื้อเพลิงชีวภาพเช่นเดียวกับการบำบัดทางชีวภาพ
สายพันธุ์ K-12 เป็นรูปแบบการกลายพันธุ์ของเชื้อ E. coli ที่มากกว่าเป็นการแสดงออกของเอนไซม์อัลคาไลน์ฟอสฟา (ALP) การกลายพันธุ์นี้เกิดขึ้นเนื่องจากข้อบกพร่องในยีนที่รหัสอย่างต่อเนื่องสำหรับเอนไซม์ หากยีนผลิตสินค้าโดยไม่มีการยับยั้งใด ๆ นี้เป็นที่รู้จักกันเป็นกิจกรรมที่เป็นส่วนประกอบ แบบฟอร์มการกลายพันธุ์นี้เฉพาะที่ใช้สำหรับการแยกและการทำให้บริสุทธิ์เอนไซม์ ALP

อัลตราโซนิกตัดดีเอ็นเอ

อัลตราโซนิกแรงเฉือนเป็นวิธีที่ใช้กันทั่วไปจะแยกออกจากเซลล์และทำลายดีเอ็นเอเป็นชิ้น โพรงอากาศอะคูสติกแบ่งผนังเซลล์และเยื่อในการสกัดดีเอ็นเอจากเซลล์และสร้างชิ้นส่วนของประมาณ 600 – 800 bp ยาวซึ่งเหมาะสำหรับการวิเคราะห์
คลิกที่นี่เพื่อเรียนรู้เพิ่มเติมเกี่ยว homogenizers ล้ำสำหรับการกระจายตัวของดีเอ็นเอ!