เทคโนโลยีอัลตราซาวนด์ Hielscher

การสกัดโปรตีนจากอัลตราโซนิกเนื้อเยื่อและเซลล์วัฒนธรรม

  • การสกัดโปรตีนเป็นขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างที่จำเป็นในโปรตีน
  • โปรตีนที่สามารถสกัดได้จากพืชและสัตว์เนื้อเยื่อยีสต์และจุลินทรีย์
  • sonication เป็นที่เชื่อถือได้วิธีการสกัดโปรตีนที่มีประสิทธิภาพให้อัตราผลตอบแทนที่มีโปรตีนสูงภายในเวลาที่สกัดสั้น

 

การสกัดโปรตีนจากเนื้อเยื่อและเซลล์

การสกัดโปรตีนจากเนื้อเยื่อและเซลล์เพาะเลี้ยงเป็นขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างที่จำเป็นซึ่งจะดำเนินการในช่วงเทคนิคทางชีวเคมีและการวิเคราะห์หลายอย่างเช่นวิธี ELISA, หน้า, ซับตะวันตกมวลสารหรือทำโปรตีนให้บริสุทธิ์ ล้ำเสียง การหยุดชะงักของเซลล์สลายและการสกัด เป็นเทคนิคที่สามารถควบคุมได้อย่างแม่นยำเพื่อให้แน่ใจว่าผลตอบแทนสูงของโปรตีน

การสกัดโปรตีนจากเนื้อเยื่อสัตว์

สำหรับการเตรียมความพร้อมของเนื้อเยื่อขนาดใหญ่ (เช่นไต, หัวใจ, ปอด, กล้ามเนื้อฯลฯ), เนื้อเยื่อควรจะหลุดออกเป็นชิ้นเล็กๆที่มีเครื่องมือที่สะอาด, บนน้ำแข็งโดยเฉพาะอย่างยิ่ง, และเร็วที่สุดเท่าที่เป็นไปได้เพื่อป้องกันการย่อยสลายโดย proteases (เช่นบัฟเฟอร์สลายเช่น การสลายของ RIPA หรือ hypotonic ที่ประกอบด้วยโปรติเอสและสารเรืองแสงค็อกเทล) หลังจาก dissecting, ตัวอย่างจะถูกจุ่มเข้าไปในไนโตรเจนของเหลวสำหรับการแช่แข็ง snap. ตัวอย่างสามารถเก็บไว้ที่-80 ° c สำหรับการใช้งานในภายหลังหรือ keept บนน้ำแข็งสำหรับการเป็นเนื้อเดียวกันทันที ทันทีก่อนที่จะสกัดล้ำ, น้ำแข็งบัฟเฟอร์สลายเย็น (กับสารยับยั้งโปรติเอส dtt, leupeptin และ aprotinin) จะถูกเพิ่มเข้าไปในท่อตัวอย่างรวดเร็ว (ต่อ ~ 10 มิลลิกรัมของเนื้อเยื่อประมาณ ~ ๖๐๐μ l ของบัฟเฟอร์ที่แนะนำ). ประมาณ 20-60 มิลลิกรัมของเนื้อเยื่อที่แนะนำต่อหลอดตัวอย่าง.
ทำให้เป็นเนื้อเดียวกันอัลตราโซนิก, สลายและการสกัดจะดำเนินการกับ homogenizer ล้ำเช่น Uf200 ःที หรือ UP200Stพร้อมกับ sonotrode ไมโครปลาย ระยะเวลา sonication เป็น 60-90 วินาที ในรอบโหมดอัลตราโซนิก 15 วินาที sonication และ 10 วินาที เวลาพักผ่อน กลุ่มตัวอย่างที่ควรเก็บไว้ในน้ำแข็งตลอดเวลา
หลังจากที่ล้ำทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน / สกัด lysate จะหมุนเหวี่ยงที่ 27,000g ประมาณ 20 นาที หลังจากนั้น supernatent จะถูกเก็บรวบรวมเพื่อให้ความเข้มข้นของโปรตีนจะถูกกำหนดโดยการทดสอบโปรตีนเช่นเพียร์ซโปรตีนทดสอบเก็บกวาด

Sonication โปรตีนเป็นวิธีที่สำคัญของการเตรียมตัวอย่าง

สกัดโปรตีนอัลตราโซนิกได้จากเซลล์ที่มี UP200St

ขอข้อมูล





การสกัดโปรตีนจากเลือด

สำหรับส่วนผสมเป็นเนื้อเดียวกันของซีรั่มและบัฟเฟอร์ฟอสเฟตตัวอย่างจะถูกหมุนวนก่อนที่จะสลายเซลล์อัลตราโซนิก สำหรับสลายล้ำตัวอย่างจะถูก sonicated กับ homogenizer ห้องปฏิบัติการล้ำเช่น UP100H 8 รอบที่ 20% กว้างสำหรับรอบละ 5 วินาทีและ 15 วินาทีปิด Sonocation จะดำเนินการโดย sonicationg ในรอบและโดยการวางตัวอย่างบนน้ำแข็งเพื่อให้ความร้อนสูงเกินไปและสลายตัวของกลุ่มตัวอย่างที่จะหลีกเลี่ยง ตั้งแต่ซีรั่มที่มีจำนวนมากสูงโปรตีนน้ำหนักโมเลกุล (เช่นอัลบูมิ, α1-antitrypsin, transferrin, haptoglobulin, อิมมูโน G และอิมมูโน) ซึ่งยุ่งเกี่ยวกับการแยกต่ำน้ำหนักโมเลกุลโปรตีนในช่วง IEF ก็จะแนะนำให้หมดสิ้นลงพวกเขา จากซีรั่มโดยใช้คอลัมน์พร่อง

การสกัดโปรตีนจากเนื้อเยื่อพืช

สดเนื้อเยื่อพืชที่อ่อนนุ่มเช่น ตะไคร่น้ำ ฯลฯ สามารถถูกรบกวนได้ง่ายโดยเพียงแค่วางวัสดุตัวอย่างสับในบัฟเฟอร์สลายสำหรับ sonication ยากเนื้อเยื่อพืช ligenous เช่นเมล็ดเข็มเฟอร์ ฯลฯ ควรเป็นพื้นดินแห้ง บางวัสดุแข็งและพืชยืนต้นต้องถูกแช่แข็งและพื้นดินในไนโตรเจนเหลวสกัดมาก่อนโดย sonication สำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์แขวนลอยพืชการรักษาล้ำระหว่าง 30 และ 150 วินาทีในบัฟเฟอร์สลายเป็นส่วนใหญ่เพียงพอ วัสดุที่รุนแรงเช่นเมล็ดฟักทองต้องมี sonication รุนแรงมากขึ้นตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง

โปรโตคอลสำหรับการสกัดล้ำของโปรตีนชนิดหนึ่งจากเมล็ดฟักทอง

โฮโมจีไนเนื้อเยื่ออัลตราโซนิก UP400St กับ S24d40 - สำหรับการสกัดโปรตีนจากพืชและเนื้อเยื่อสัตว์ (คลิกเพื่อดูภาพขยาย)สำหรับการสกัดโปรตีนอัลบูมิล้ำจากผงเมล็ดฟักทองปรับพื้น 10 กรัมผงเมล็ดฟักทองสกัดและ 100 มิลลิลิตรของน้ำเป็นตัวทำละลาย deionised มีการเพิ่มในบีกเกอร์แก้ว 250mL การสกัดโปรตีนประกอบด้วยในขั้นตอนที่สอง: First ตัวอย่างจะถูก sonicated กับการสอบสวนชนิด ultrasonicator UP400St (400W, 24kHz) ด้วยการติดตั้ง sonotrode S24d7 บีกเกอร์แก้วถูกวางไว้ในอ่างน้ำเย็นในช่วงที่เป็นเนื้อเดียวกันอัลตราโซนิก การตั้งค่าของ ultrasonicator ที่ UP400St เซ็นเซอร์วัดอุณหภูมิเซนให้แน่ใจว่าอุณหภูมิตัวอย่างจะถูกเก็บไว้ต่ำกว่า30องศาเซลเซียส โดยการควบคุมอุณหภูมิที่แม่นยำในระหว่าง sonication denaturation ของ albumin จะหลีกเลี่ยง ประการที่สองการสกัดถูกดำเนินการกับมิกเซอร์ที่ความเร็ว๒๐๐ rpm และที่30° c หลังจากบีกเกอร์ถูกถ่ายโอนเข้าไปในเครื่องปั่นอุณหภูมิขี้ Globulin จะถูกลบออกผ่านการฟอกไตด้วยน้ำกลั่น หลังจากการกำจัด globulin, สารสกัดจากโปรตีนสามารถสุ่มตัวอย่างสำหรับการกำหนดของโปรไฟล์ albumin และต่อมาปรับให้ pI = 3.0 ใช้๐.๑ M HCl สำหรับ albumin แข็งตัว. เฟสที่เป็นของแข็งจะถูกแยกออกด้วยการหมุนเหวี่ยงที่ 5000g, 20 ° c และละลายในน้ำที่มีการสลายตัว การแข็งตัวของ Albumin จะดำเนินการสองครั้งเพื่อเพิ่มอัตราส่วนโปรตีนใน Albumin มีสมาธิ.

อัลตราโซนิกการสกัดโปรตีนอัลคาไลน์สำหรับการเตรียมความพร้อมของโปรตีนจากรำข้าวที่แสดงให้เห็นว่าผลการรักษาล้ำผลผลิตโปรตีนสูงขึ้นในระยะเวลาที่สั้นลงอย่างมีนัยสำคัญในการสกัด – เมื่อเทียบกับวิธีการสกัดการชุมนุม

VialTweeter อุปกรณ์อัลตราโซนิกในการสกัดโปรตีนจากตัวอย่างเนื้อเยื่อ (คลิกเพื่อดูภาพขยาย)

VialTweeter สำหรับ sonication ทางอ้อม

ข้อดี

  • รวดเร็ว
  • ผลตอบแทนสูง
  • ที่มีประสิทธิภาพสูง
  • การควบคุมที่แม่นยำกว่าพารามิเตอร์
  • ผลลัพธ์ที่เที่ยงตรง
  • ขยายขีดความสามารถเชิงเส้น

โปรโตคอลการเตรียมตัวสำหรับการทำงานของเอนไซม์ iNOS

ที่จะได้รับเอนไซม์ iNOS ทำงานได้อย่างสมบูรณ์ (เช่นสำหรับการคัดกรองยาเสพติด) โปรโตคอลต่อไปนี้ขอแนะนำ: ระงับมือถือควรอยู่บนน้ำแข็งและ sonicate กับ UP100H ที่กว้าง10μmโหมดรอบ 5 วินาที sonication และ 25 วินาที ส่วนที่เหลือบนน้ำแข็ง ขั้นตอนที่ควรจะทำซ้ำประมาณ 3 ครั้ง. เวลาพักผ่อนในระหว่างรอบ sonication ช่วยลดอุณหภูมิที่เพิ่มขึ้นและดังนั้นจึงจะช่วยลดความเสี่ยงของการสูญเสียสภาพธรรมชาติ

อัลตราโซนิกโปรตีนละลาย

sonication อาจเร่งกระบวนการละลายโปรตีนซึ่งมักจะต้องใช้เวลาหลายชั่วโมง เพื่อไม่ให้ร้อนมากเกินไปตัวอย่างและป้องกันการย่อยสลายโปรตีนและการปรับเปลี่ยนในการแก้ปัญหาที่มียูเรียระเบิดอัลตราโซนิกไม่ควรนานกว่าไม่กี่วินาที

คำแนะนำทั่วไป

การควบคุมอุณหภูมิ: เพื่อให้แน่ใจว่าเป็นอัตราผลตอบแทนที่มีโปรตีนสูงโดยไม่ต้องสูญเสียสภาพธรรมชาติความร้อนอุณหภูมิในระหว่างการสกัดจะต้องถูกควบคุม Hielscher รัฐของศิลปะ homogenizers ล้ำ – เรียกว่า disintegrator อัลตราโซนิกหรือ sonificator – สามารถควบคุมได้อย่างแม่นยำ พวกเขามาพร้อมกับเซ็นเซอร์อุณหภูมิ plugable ในการตั้งค่าตัวเลือกของ homogenizer ล้ำอุณหภูมิสูงสุดที่สามารถตั้งค่า เมื่ออุณหภูมินี้สูงสุดถึง ultrasonicator จะหยุดโดยอัตโนมัติจนกว่าตัวอย่างเย็นลง
กันชน: choise ที่ของบัฟเฟอร์ที่เหมาะสมและปริมาณที่เหมาะสมของบัฟเฟอร์ที่แตกต่างจากเนื้อเยื่อเนื้อเยื่อและจะต้องคิดออกโดยการทดสอบทดลองและข้อผิดพลาด
แยก / บริสุทธิ์: lysates โปรตีนสามารถมีส่วนเกินของสารชีวโมเลกุลเช่นดีเอ็นเอหรือคาร์โบไฮเดรตซึ่งอาจจะถูกลบออกโดยการตกตะกอนโปรตีน (กรด Deoxycholate-ไตรคลอโร) หรือ buffer แลกเปลี่ยน

Chittapalo และ Noomhorm (2009) รายงานว่าผลผลิตโปรตีนเพิ่มขึ้นโดยใช้ sonication และที่ล้ำทำให้เป็นเนื้อเดียวกันของเนื้อเยื่อและการสลายกระบวนการสามารถเพิ่มประสิทธิภาพกระบวนการสกัดที่มีอยู่อย่างมีนัยสำคัญ – ช่วยให้การหาโอกาสในการสกัดพาณิชย์ใหม่

เสียงการป้องกันด้วยเสียง Hielscher ของสิ่งที่แนบมา SPB-L และอุปกรณ์ล้ำเสียง UP200St (คลิกเพื่อดูภาพขยาย)

โฮโมจีไนเนื้อเยื่ออัลตราโซนิก UP200St สำหรับการสกัดโปรตีนที่มีประสิทธิภาพ

การควบคุมที่แม่นยำของการรักษาอัลตราโซนิก (คลิกเพื่อดูภาพขยาย)

การควบคุมเบราว์เซอร์สำหรับการดำเนินงานที่แม่นยำและการตรวจสอบของกระบวนการ sonication

อุปกรณ์อัลตราโซนิกสำหรับการสกัดโปรตีน

Hielscher Ultrasonics มีความหลากหลายของ homogenizers ล้ำสำหรับการสลายตัวของเซลล์เนื้อเยื่อแบคทีเรียจุลินทรีย์ยีสต์และสปอร์
ultrasonicators ห้องปฏิบัติการ Hielscher มีประสิทธิภาพและใช้งานง่าย สร้างขึ้นสำหรับการดำเนินงาน 24/7 พวกเขาจะได้รับการออกแบบเป็นห้องปฏิบัติการที่แข็งแกร่งและมีประสิทธิภาพและอุปกรณ์บนม้านั่ง สำหรับอุปกรณ์ทั้งหมดที่ออกพลังงานและความกว้างสามารถควบคุมได้อย่างแม่นยำ ช่วงกว้างของ อุปกรณ์ เปิดตัวเลือกการติดตั้งต่อไป อุปกรณ์ดิจิตอลเช่น VialTweeter, Uf200 ःที, UP200Stและ UP400St มีการควบคุมอุณหภูมิแบบบูรณาการและสร้างขึ้นในการ์ด SD สำหรับการบันทึกข้อมูลอัตโนมัติ
สำหรับทางอ้อมการปนเปื้อนฟรีและ sonication พร้อมกันของหลายตัวอย่างที่เรานำเสนอ VialTweeter หรือ อัลตราโซนิก cuphorn.
ทั้งนี้ขึ้นอยู่กับการประยุกต์ใช้วัสดุและปริมาณตัวอย่างของคุณเราจะแนะนำให้คุณตั้งค่าที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการเตรียมตัวอย่างของคุณ ติดต่อเราวันนี้!

ติดต่อเรา! / ถามเรา!

โปรดใช้แบบฟอร์มด้านล่างหากคุณต้องการขอข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับการทำให้เป็นเนื้อเดียวกันของอัลตราโซนิก เรายินดีที่จะเสนอระบบอัลตราโซนิกให้ตรงกับความต้องการของคุณ










วรรณคดี / อ้างอิง

  • Chittapalo T, Noomhorm A (2009): อัลตราโซนิกช่วยสกัดด่างของโปรตีนจากรำสกัดและสมบัติของสารสกัดโปรตีน Int J อาหารวิทย์และเทคโนโลยี 44: 1843-1849
  • Simoes, André E.S:; Pereira, ไดแอนเอ็ม.; Amaral โจแอนนา. Nunes, Ana M. โกเมส, โซเฟีย E. โรเบิร์ต, ปีเตอร์เอ็ม.; Lo, เอเดรีย C. D'Hooge ฤดี; คัดท้าย Clifford เจ. Thibodeau สตีเฟ่นซี.; Borralho ปีเตอร์เอ็ม.; โรดริกู, เซซิเลียเอ็มพี (2013): การกู้คืนที่มีประสิทธิภาพของโปรตีนจากตัวอย่างจากหลายแหล่งหลังจาก Trizol หรือ Trizol LS สกัดอาร์เอ็นเอและระยะยาวการจัดเก็บข้อมูล ฟังก์ชั่น BMC 2013, 14: 181


ข้อเท็จจริงที่รู้

โปรตีน

โปรตีนเป็นเขตการวิจัยที่ศึกษาโปรตีนและโปรตีน โปรตีน fullfil มากมายของการทำงานที่สำคัญภายในสิ่งมีชีวิต โปรตีนเป็นทั้งชุดของโปรตีนที่แสดงโดยจีโนมเซลล์เนื้อเยื่อหรือสิ่งมีชีวิตในเวลาที่แน่นอน โปรตีนขึ้นอยู่กับเวลาและความต้องการที่แตกต่างกันหรือความเครียดที่เซลล์หรือสิ่งมีชีวิตผ่าน โดยเฉพาะอย่างยิ่งมันเป็นชุดของโปรตีนที่แสดงออกในประเภทที่กำหนดของมือถือหรือสิ่งมีชีวิตในเวลาที่กำหนดภายใต้เงื่อนไขที่กำหนดไว้ คำที่เป็นส่วนผสมของโปรตีนและจีโนม เซ็กเมนต์คือการศึกษาของโปรตีนที่

โปรตีน

โปรตีนเป็นสารชีวโมเลกุลที่มีขนาดใหญ่ที่เรียกว่าโมเลกุล – ซึ่งประกอบด้วยจากห่วงโซ่ยาวหนึ่งหรือมากกว่าที่ตกค้างกรดอะมิโน โปรตีนมีอยู่ในทุกสิ่งมีชีวิตทั้งผักและแหล่งกำเนิดของพวกเขาและพวกเขาเป็นสิ่งสำคัญสำหรับส่วนใหญ่ของฟังก์ชั่นทางชีวภาพ. ตั้งแต่โปรตีนที่มีจำนวนมากของข้อมูลทางชีวภาพ, พวกเขาจะถูกสกัดเพื่อวัตถุประสงค์ในการวิเคราะห์, เช่นสำหรับการวิจัย proteomic. ฟังก์ชั่นที่สำคัญที่สุดที่ดำเนินการโดยโปรตีนรวมถึงการกระตุ้นของปฏิกิริยาการเผาผลาญ, จำลองดีเอ็นเอ, การตอบสนองต่อสิ่งเร้า, และการขนส่งของโมเลกุลจากสถานที่หนึ่งไปยังอีก. โปรตีนแตกต่างจากที่อื่นเป็นหลักในลำดับของกรดอะมิโน, ซึ่งจะถูกกำหนดโดยลำดับ nucleotide ของยีนของพวกเขา, และซึ่งมักจะส่งผลในการพับโปรตีนเป็นโครงสร้างสามมิติที่เฉพาะเจาะจงที่กำหนดกิจกรรมของ. โปรตีนเป็น – นอกเหนือจากเปปไทด์ – หนึ่งในองค์ประกอบที่สำคัญของอาหาร ดังนั้นโปรตีนเป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพในด้านวิทยาศาสตร์อาหารที่จะเพิ่มประสิทธิภาพของกระบวนการความปลอดภัยของอาหารและการประเมินคุณค่าทางโภชนาการ

gel electrophoresis

gel electrophoresis เป็นวิธีที่สำคัญสำหรับการแยกและการวิเคราะห์โมเลกุลเช่นดีเอ็นเออาร์เอ็นเอและโปรตีนเช่นเดียวกับชิ้นส่วนของพวกเขาขึ้นอยู่กับขนาดและค่าใช้จ่ายของพวกเขา มันถูกใช้ในทางเคมีคลินิกในการแยกโปรตีนโดยค่าใช้จ่ายและ / หรือขนาด (IEF agarose หลักขนาดอิสระ) และชีวเคมีชีววิทยาโมเลกุลและโปรตีนที่จะแยกประชากรผสมของ DNA และ RNA เศษโดยความยาวเพื่อประเมินขนาดของดีเอ็นเอ และ RNA เศษหรือจะแยกโปรตีนโดยคิดค่าใช้จ่าย

เซลล์เพาะเลี้ยง

การเพาะเลี้ยงเซลล์เป็นกระบวนการเจริญเติบโตควบคุมโดยที่เซลล์ที่ปลูกภายใต้สภาวะควบคุม เงื่อนไขการเพาะเลี้ยงเซลล์แตกต่างกันไปสำหรับประเภทแต่ละเซลล์ โดยทั่วไปสภาพแวดล้อมของการเพาะเลี้ยงเซลล์ที่ประกอบด้วยเรือที่เหมาะสม (เช่น Petri จาน) กับสารตั้งต้นหรือขนาดกลางที่ให้สารอาหารที่จำเป็น (กรดอะมิโน, คาร์โบไฮเดรต, วิตามิน, เกลือแร่) ปัจจัยการเจริญเติบโตฮอร์โมนและก๊าซ (CO2, The2) และควบคุมสภาพแวดล้อมกายภาพเคมี (บัฟเฟอร์, แรงดันอุณหภูมิ) เซลล์ส่วนใหญ่จำเป็นต้องมีพื้นผิวหรือพื้นผิวเทียมขณะที่วัฒนธรรมมือถืออื่น ๆ สามารถปลูกฟรีที่ลอยอยู่ในกลางวัฒนธรรม (วัฒนธรรมระงับระงับมือถือ)
มวลวัฒนธรรมของเซลล์สัตว์ถูกนำมาใช้ในอุตสาหกรรมการผลิตวัคซีนไวรัสและผลิตภัณฑ์ที่ได้เทคโนโลยีชีวภาพอื่น ๆ เซลล์ต้นกำเนิดของมนุษย์ที่มีการเพาะเลี้ยงเพื่อขยายจำนวนของเซลล์และความแตกต่างเซลล์ออกเป็นประเภทเซลล์ร่างกายต่างๆเพื่อวัตถุประสงค์ในการปลูก

ตัวอย่างเนื้อเยื่อ

เนื้อเยื่อคำอธิบายโทรศัพท์มือถือกลางที่วัสดุเซลล์ในระดับองค์กรระหว่างเซลล์และอวัยวะที่สมบูรณ์ ในเนื้อเยื่อของเซลล์ที่คล้ายกันจากแหล่งกำเนิดเดียวกันที่ร่วมกันดำเนินการฟังก์ชั่นที่เฉพาะเจาะจงจะประกอบ โดยการจัดกลุ่มการทำงานของเนื้อเยื่อหลายโครงสร้างที่ซับซ้อนของอวัยวะที่เกิดขึ้น
เนื้อเยื่อเป็นตัวอย่างสำหรับการวิจัยในทางชีววิทยาจุล / จุลพยาธิวิทยาปรสิตวิทยาชีวเคมี immunohistochemistry เช่นเดียวกับการปลูกฝังและสารสกัดดีเอ็นเอ มันสามารถจะแตกต่างระหว่างสัตว์ (แผนก: เนื้อเยื่อเลี้ยงลูกด้วยนม) และเนื้อเยื่อพืช เนื้อเยื่อสัตว์ถูกแบ่งออกเป็นสี่ประเภทพื้นฐานของเกี่ยวพันกล้ามเนื้อประสาทและเนื้อเยื่อเยื่อบุผิว เนื้อเยื่อพืชแบ่งเป็นสามระบบต่อไปเนื้อเยื่อ: หนังกำพร้าเนื้อเยื่อพื้นดินและเนื้อเยื่อหลอดเลือด
ตัวอย่างเนื้อเยื่อสามารถเตรียมได้จากสัตว์หรือพืชส่วนเช่น กระดูกกล้ามเนื้อใบ ฯลฯ

ของเหลวในร่างกาย

เลือด, เซรั่มพลาสม่า, น้ำไขสันหลังน้ำลายและน้ำไขข้อเป็นของเหลวในร่างกายซึ่งมีแหล่งที่ดีของข้อมูลที่เกี่ยวข้อง diagnostically ดังนั้นการเตรียมความซับซ้อนของตัวอย่างของเหลวในร่างกายสำหรับการวิเคราะห์เป็นสิ่งสำคัญ ความยากลำบากในครั้งแรกที่มีความเกี่ยวข้องกับช่วงไดนามิกกว้างของส่วนประกอบนำเสนอในของเหลวในร่างกาย

ความมุ่งมั่นของความเข้มข้นของโปรตีน

แบรดฟอทดสอบโลว์รีย์ทดสอบและกรด bicinchoninic (BCA) การทดสอบมีการวิเคราะห์ร่วมกันในการตรวจสอบความเข้มข้นของโปรตีน วัวซีรั่มอัลบูมิ (BSA) เป็นหนึ่งในมาตรฐานโปรตีนที่ใช้บ่อยที่สุด

สลายบัฟเฟอร์

บัฟเฟอร์สลายจะต้องเลือกได้ตามวัสดุเซลล์หรือเนื้อเยื่อ (การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อพืชแบคทีเรียเชื้อรา ฯลฯ ) และไม่ว่าจะเป็นเซลล์ที่อยู่ในโครงสร้างและชนิดของโครงสร้าง หลากหลายของบัฟเฟอร์สลายการสกัดโปรตีนเยื่อและ organelles เป็นสูตรที่มีหนึ่งหรือมากกว่าผงซักฟอก ผงซักฟอกมักจะถูกเลือกผ่านการทดสอบการทดลองและข้อผิดพลาดหรือ – ถ้ามี – ตามโปรโตคอลการสกัดโปรตีนที่มีอยู่ ผงซักฟอกต้องเข้ากันได้กับแหล่งเนื้อเยื่อและโปรตีน โดยทั่วไปผงซักฟอกภาพได้ชัดเจนว่าทำงานให้กับเนื้อเยื่อเฉพาะ / โปรตีนที่ถูกเลือกเพื่อรักษาฟังก์ชันการทำงานสูงสุดของสารสกัด นอกจากนี้ในกรณีของการสกัดของเยื่อและอวัยวะที่ผงซักฟอกอ่อนช่วยให้เมมเบรนเหมือนเดิม ผงซักฟอกที่ใช้ในการสลายบัฟเฟอร์ส่วนใหญ่เป็นสารลดแรงตึงหรือ zwitterionic เช่น CHAPS, Deoxycholate ไทรทัน™ X-100, NP40 และ Tween 20
ยกตัวอย่างเช่นเนื้อเยื่อเช่นสมองตับลำไส้ไตม้าม ฯลฯ สามารถบัฟเฟอร์เพียงกับ RIPA – แต่น้ำย่อยและ DTT (เช่นสำหรับ gel electrophoresis) ควรจะรวม
บัฟเฟอร์สลายเนื้อเยื่อกล้ามเนื้อโครงร่าง (เย็น): 20 มิลลิเมตร Tris (pH 7.8) 137 มิลลิโซเดียมคลอไรด์ 2.7 มิลลิ KCl 1 มิลลิ MgCl2, 1% Triton X-100, 10% (w / v) กลีเซอรอล 1 มิลลิ EDTA 1 มิลลิ dithiothreitol เสริมด้วยโปรตีเอสและฟอสฟายับยั้งค๊อกเทล
ตารางบัฟเฟอร์ที่พบบ่อยและช่วงค่า pH ของพวกเขา โดยทั่วไปบัฟเฟอร์เหล่านี้ปกติจะใช้ที่ความเข้มข้น 20-50 มิลลิ

กันชน ช่วงพีเอช
กรดมะนาว – NaOH ๒.๒ – ๖.๕
ซิเตรทโซเดียม – กรดมะนาว ๓.๐ – ๖.๒
acetate โซเดียม – กรดน้ำส้ม ๓.๖ – ๕.๖
เกลือโซเดียมกรด cacodylic พบ – Hcl ๕.๐ – ๗.๔
MY – NaOH ๕.๖ – ๖.๘
โซเดียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต – disodium ไฮโดรเจนฟอสเฟต ๕.๘ – ๘.๐
imidazole – Hcl ๖.๒ – ๗.๘
โมพี – เกาะ ๖.๖ – ๗.๘
ไฮโดรคลอไร Triethanolamine – NaOH ๖.๘ – ๘.๘
ทริสเรทติ้ง – Hcl ๗.๐ – ๙.๐
อันดับ – NaOH ๗.๒ – ๘.๒
รีซีน – NaOH ๗.๖ – ๘.๖
tetraborate โซเดียม – กรด ๗.๖ – ๙.๒
บิซีน – NaOH ๗.๗ – ๘.๙
glycine – NaOH ๘.๖ – ๑๐.๖

บัฟเฟอร์ส่วนใหญ่แสดงค่า pH พึ่งพากับอุณหภูมิ นี่คือความจริงโดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับบัฟเฟอร์ Tris การเปลี่ยนแปลงจาก 8.06 pKa ที่ 25 ° C ถึง 8.85 ที่ 0 ° C
(pH และ pKa ของบัฟเฟอร์: พีเอชมีขนาดความเข้มข้นของไฮโดรเจนไอออนในสารละลาย pKa (= การแยกตัวออกกรดคงที่) เป็นที่เกี่ยวข้อง แต่เฉพาะเจาะจงมากขึ้นตัวชี้วัดในการที่จะช่วยให้การคาดการณ์ว่าโมเลกุลจะทำหน้าที่ที่เฉพาะเจาะจง. ค่าพีเอช.)

Trizol

Trizol เป็นวิธีการแก้สารเคมีที่ใช้ในการสกัด RNA / DNA / โปรตีนในช่วง Guanidinium สกัด thiocyanate-ฟีนอลคลอโรฟอร์ม การใช้ช่วย ultrasonically ผลการสกัด Trizol ใน DNA สูงอาร์เอ็นเอและโปรตีนอัตราผลตอบแทนจากตัวอย่างเดียวกันและ excels วิธีการสกัดจึงอื่น ๆ