การสกัดโปรตีนจากอัลตราโซนิกเนื้อเยื่อและเซลล์วัฒนธรรม
- การสกัดโปรตีนเป็นขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างที่จำเป็นในโปรตีน
- โปรตีนที่สามารถสกัดได้จากพืชและสัตว์เนื้อเยื่อยีสต์และจุลินทรีย์
- sonication เป็นที่เชื่อถือได้วิธีการสกัดโปรตีนที่มีประสิทธิภาพให้อัตราผลตอบแทนที่มีโปรตีนสูงภายในเวลาที่สกัดสั้น
การสกัดโปรตีนจากเนื้อเยื่อและเซลล์
การสกัดโปรตีนจากเนื้อเยื่อและเซลล์เพาะเลี้ยงเป็นขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างที่จําเป็นซึ่งดําเนินการในระหว่างเทคนิคทางชีวเคมีและการวิเคราะห์หลายอย่างเช่น ELISA, PAGE, Western blotting, mass spectrometry หรือการทําให้บริสุทธิ์ของโปรตีน การหยุดชะงักของเซลล์อัลตราโซนิกการสลายตัวและการสกัดเป็นเทคนิคที่ควบคุมได้อย่างแม่นยําและไม่ใช้ความร้อนเพื่อให้แน่ใจว่าโปรตีนให้ผลผลิตสูง
การสกัดโปรตีนจากเซลล์ด้วย โพรบอัลตราโซนิก UP200St
- รวดเร็ว
- ผลตอบแทนสูง
- ที่มีประสิทธิภาพสูง
- การควบคุมที่แม่นยำกว่าพารามิเตอร์
- ผลลัพธ์ที่เที่ยงตรง
- ขยายขีดความสามารถเชิงเส้น
คําแนะนําทั่วไปสําหรับการสลายตัวด้วยอัลตราโซนิกและการสกัดโปรตีน
- การควบคุมอุณหภูมิ: เพื่อให้แน่ใจว่าเป็นอัตราผลตอบแทนที่มีโปรตีนสูงโดยไม่ต้องสูญเสียสภาพธรรมชาติความร้อนอุณหภูมิในระหว่างการสกัดจะต้องถูกควบคุม Hielscher รัฐของศิลปะ homogenizers ล้ำ – เรียกอีกอย่างว่า disintegrator อัลตราโซนิกหรือ ultrasonifier – สามารถควบคุมได้อย่างแม่นยำ พวกเขามาพร้อมกับเซ็นเซอร์อุณหภูมิ plugable ในการตั้งค่าตัวเลือกของ homogenizer ล้ำอุณหภูมิสูงสุดที่สามารถตั้งค่า เมื่ออุณหภูมินี้สูงสุดถึง ultrasonicator จะหยุดโดยอัตโนมัติจนกว่าตัวอย่างเย็นลง
- กันชน: choise ที่ของบัฟเฟอร์ที่เหมาะสมและปริมาณที่เหมาะสมของบัฟเฟอร์ที่แตกต่างจากเนื้อเยื่อเนื้อเยื่อและจะต้องคิดออกโดยการทดสอบทดลองและข้อผิดพลาด
- แยก / บริสุทธิ์: lysates โปรตีนสามารถมีส่วนเกินของสารชีวโมเลกุลเช่นดีเอ็นเอหรือคาร์โบไฮเดรตซึ่งอาจจะถูกลบออกโดยการตกตะกอนโปรตีน (กรด Deoxycholate-ไตรคลอโร) หรือ buffer แลกเปลี่ยน
Chittapalo และ Noomhorm (2009) รายงานในการศึกษาของพวกเขาว่าผลผลิตโปรตีนเพิ่มขึ้นโดยใช้ sonication และกระบวนการทําให้เป็นเนื้อเดียวกันของเนื้อเยื่ออัลตราโซนิกและกระบวนการ lysis สามารถเพิ่มกระบวนการสกัดที่มีอยู่อย่างมีนัยสําคัญ – ช่วยให้การหาโอกาสในการสกัดพาณิชย์ใหม่
อัลตราโซนิก cuphorn สําหรับการเตรียมตัวอย่างพร้อมกันและมีประสิทธิภาพสูงของตัวอย่างหลายตัวอย่างภายใต้เงื่อนไขเดียวกันสําหรับการแยกโปรตีนและการกระจายตัวของดีเอ็นเอ
การสกัดโปรตีนจากเนื้อเยื่อสัตว์
สำหรับการเตรียมความพร้อมของเนื้อเยื่อขนาดใหญ่ (เช่นไต, หัวใจ, ปอด, กล้ามเนื้อฯลฯ), เนื้อเยื่อควรจะหลุดออกเป็นชิ้นเล็กๆที่มีเครื่องมือที่สะอาด, บนน้ำแข็งโดยเฉพาะอย่างยิ่ง, และเร็วที่สุดเท่าที่เป็นไปได้เพื่อป้องกันการย่อยสลายโดย proteases (เช่นบัฟเฟอร์สลายเช่น การสลายของ RIPA หรือ hypotonic ที่ประกอบด้วยโปรติเอสและสารเรืองแสงค็อกเทล) หลังจาก dissecting, ตัวอย่างจะถูกจุ่มเข้าไปในไนโตรเจนของเหลวสำหรับการแช่แข็ง snap. ตัวอย่างสามารถเก็บไว้ที่-80 ° c สำหรับการใช้งานในภายหลังหรือ keept บนน้ำแข็งสำหรับการเป็นเนื้อเดียวกันทันที ทันทีก่อนที่จะสกัดล้ำ, น้ำแข็งบัฟเฟอร์สลายเย็น (กับสารยับยั้งโปรติเอส dtt, leupeptin และ aprotinin) จะถูกเพิ่มเข้าไปในท่อตัวอย่างรวดเร็ว (ต่อ ~ 10 มิลลิกรัมของเนื้อเยื่อประมาณ ~ ๖๐๐μ l ของบัฟเฟอร์ที่แนะนำ). ประมาณ 20-60 มิลลิกรัมของเนื้อเยื่อที่แนะนำต่อหลอดตัวอย่าง.
การทําให้เป็นเนื้อเดียวกันด้วยอัลตราโซนิกการสลายและการสกัดจะดําเนินการด้วย homogenizer อัลตราโซนิกเช่น UP100H หรือ UP200Ht พร้อมกับ sonotrode ปลายไมโคร ระยะเวลา Sonication คือ 60-90 วินาที ที่โหมดรอบอัลตราโซนิก 15 วินาที sonication และ 10 วินาที เวลาพัก ตัวอย่างควรเก็บไว้ในน้ําแข็งตลอดเวลา
หลังจากที่ล้ำทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน / สกัด lysate จะหมุนเหวี่ยงที่ 27,000g ประมาณ 20 นาที หลังจากนั้น supernatent จะถูกเก็บรวบรวมเพื่อให้ความเข้มข้นของโปรตีนจะถูกกำหนดโดยการทดสอบโปรตีนเช่นเพียร์ซโปรตีนทดสอบเก็บกวาด
การสกัดโปรตีนจากเลือด
สําหรับส่วนผสมที่เป็นเนื้อเดียวกันของซีรั่มและบัฟเฟอร์ฟอสเฟตตัวอย่างจะถูกกระแสน้ําวนก่อนการสลายตัวของเซลล์อัลตราโซนิก สําหรับการสลายอัลตราโซนิกตัวอย่างจะถูก sonicated ด้วย homogenizer ห้องปฏิบัติการอัลตราโซนิกเช่น UP100H สําหรับ 8 รอบที่แอมพลิจูด 20% สําหรับรอบของแต่ละ 5 วินาทีเปิดและ 15 วินาทีปิด การสกัดโปรตีนจะดําเนินการโดย sonicating ในรอบ (โหมดการเต้นเป็นจังหวะ) และโดยการวางตัวอย่างบนน้ําแข็งเพื่อหลีกเลี่ยงความร้อนสูงเกินไปและการย่อยสลายความร้อนของตัวอย่าง เนื่องจากซีรั่มมีโปรตีนที่มีน้ําหนักโมเลกุลสูงจํานวนมาก (เช่นอัลบูมิน, α1-antitrypsin, transferrin, haptoglobulin, immunoglobulin G และอิมมูโนโกลบูลิน A) ซึ่งรบกวนการแยกโปรตีนน้ําหนักโมเลกุลต่ําในระหว่าง IEF จึงแนะนําให้พร่องออกจากซีรั่มโดยใช้คอลัมน์พร่อง
การสกัดโปรตีนจากเนื้อเยื่อพืช
สดเนื้อเยื่อพืชที่อ่อนนุ่มเช่น ตะไคร่น้ำ ฯลฯ สามารถถูกรบกวนได้ง่ายโดยเพียงแค่วางวัสดุตัวอย่างสับในบัฟเฟอร์สลายสำหรับ sonication ยากเนื้อเยื่อพืช ligenous เช่นเมล็ดเข็มเฟอร์ ฯลฯ ควรเป็นพื้นดินแห้ง บางวัสดุแข็งและพืชยืนต้นต้องถูกแช่แข็งและพื้นดินในไนโตรเจนเหลวสกัดมาก่อนโดย sonication สำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์แขวนลอยพืชการรักษาล้ำระหว่าง 30 และ 150 วินาทีในบัฟเฟอร์สลายเป็นส่วนใหญ่เพียงพอ วัสดุที่รุนแรงเช่นเมล็ดฟักทองต้องมี sonication รุนแรงมากขึ้นตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง
โปรโตคอลสำหรับการสกัดล้ำของโปรตีนชนิดหนึ่งจากเมล็ดฟักทอง
สําหรับการสกัดโปรตีนอัลตราโซนิกของอัลบูมินจากผงเมล็ดฟักทองบดละเอียดผงเมล็ดฟักทอง 10 กรัมและน้ําปราศจากไอออน 100 มล. เป็นตัวทําละลายจะถูกเติมลงในบีกเกอร์แก้วขนาด 250 มล. การสกัดโปรตีนประกอบด้วยสองขั้นตอน: ขั้นแรกตัวอย่างจะถูก sonicated ด้วย เครื่องอัลตราโซนิกชนิดโพรบ UP400St (400W, 24kHz) พร้อมกับ sonotrode S24d7 บีกเกอร์แก้วถูกวางไว้ในอ่างน้ําเย็นในระหว่างการทําให้เป็นเนื้อเดียวกันอัลตราโซนิก เซ็นเซอร์อุณหภูมิแบบเสียบได้และการตั้งค่าการควบคุมอุณหภูมิของเครื่องอัลตราโซนิก UP400St ช่วยให้มั่นใจได้ว่าอุณหภูมิตัวอย่างจะถูกเก็บไว้ต่ํากว่า 30 °C เสมอ โดยการควบคุมอุณหภูมิที่แม่นยําในระหว่างการ sonication จะหลีกเลี่ยงการเสื่อมสภาพของอัลบูมิน ประการที่สองการสกัดดําเนินการด้วยเครื่องผสมที่ความเร็ว 200 รอบต่อนาทีและที่ 30 ° C หลังจากนั้นบีกเกอร์จะถูกถ่ายโอนไปยังเครื่องปั่นอุณหภูมิ โกลบูลินจะถูกลบออกโดยการฟอกไตด้วยน้ํากลั่น หลังจากการกําจัดโกลบูลินสารสกัดจากโปรตีนสามารถสุ่มตัวอย่างเพื่อกําหนดโปรไฟล์อัลบูมินและต่อมาจะถูกปรับเป็น pI = 3.0 โดยใช้ 0.1 M HCl สําหรับการแข็งตัวของอัลบูมิน เฟสของแข็งถูกคั่นด้วยการหมุนเหวี่ยงที่ 5000g, 20 ° C และละลายในน้ําปราศจากไอออน การแข็งตัวของอัลบูมินจะดําเนินการสองครั้งเพื่อเพิ่มอัตราส่วนโปรตีนในอัลบูมินเข้มข้น
อัลตราโซนิกการสกัดโปรตีนอัลคาไลน์สำหรับการเตรียมความพร้อมของโปรตีนจากรำข้าวที่แสดงให้เห็นว่าผลการรักษาล้ำผลผลิตโปรตีนสูงขึ้นในระยะเวลาที่สั้นลงอย่างมีนัยสำคัญในการสกัด – เมื่อเทียบกับวิธีการสกัดการชุมนุม
โปรโตคอลการเตรียมตัวสำหรับการทำงานของเอนไซม์ iNOS
เพื่อให้ได้เอนไซม์ iNOS ที่ทํางานได้อย่างสมบูรณ์ (เช่นสําหรับการตรวจคัดกรองยา) แนะนําให้ใช้โปรโตคอลต่อไปนี้: ควรวางสารแขวนลอยของเซลล์บนน้ําแข็งและโซนิคด้วย UP100H ที่แอมพลิจูด 10μm ที่โหมดวงจร 5 วินาที sonication และ 25 วินาที พักบนน้ําแข็ง ขั้นตอนควรทําซ้ําประมาณ 3 ครั้ง เวลาพักระหว่างรอบ sonication ช่วยลดอุณหภูมิที่เพิ่มขึ้นและจะช่วยลดความเสี่ยงของการเสื่อมสภาพ
อัลตราโซนิกโปรตีนละลาย
sonication อาจเร่งกระบวนการละลายโปรตีนซึ่งมักจะต้องใช้เวลาหลายชั่วโมง เพื่อไม่ให้ร้อนมากเกินไปตัวอย่างและป้องกันการย่อยสลายโปรตีนและการปรับเปลี่ยนในการแก้ปัญหาที่มียูเรียระเบิดอัลตราโซนิกไม่ควรนานกว่าไม่กี่วินาที
เครื่องอัลตราโซนิก UP200Ht ด้วย microtip S26d2 ขนาด 2 มม. สําหรับการแยกตัวอย่างขนาดเล็ก
อุปกรณ์อัลตราโซนิกสำหรับการสกัดโปรตีน
Hielscher Ultrasonics มีความหลากหลายของ homogenizers ล้ำสำหรับการสลายตัวของเซลล์เนื้อเยื่อแบคทีเรียจุลินทรีย์ยีสต์และสปอร์
เครื่องอัลตราโซนิกในห้องปฏิบัติการ Hielscher มีประสิทธิภาพและใช้งานง่าย สร้างขึ้นสําหรับการทํางานตลอด 24 ชั่วโมงทุกวันได้รับการออกแบบให้เป็นห้องปฏิบัติการและอุปกรณ์แบบตั้งโต๊ะที่แข็งแกร่งและมีประสิทธิภาพ สําหรับอุปกรณ์ทั้งหมดสามารถควบคุมพลังงานและแอมพลิจูดได้อย่างแม่นยํา อุปกรณ์เสริมที่หลากหลายจะเปิดตัวเลือกการตั้งค่าเพิ่มเติม เครื่องอัลตราโซนิกดิจิตอลเช่น VialTweeter, UP200Ht, UP200St และ UP400St มีการควบคุมอุณหภูมิในตัวและการ์ด SD ในตัวสําหรับการบันทึกข้อมูลอัตโนมัติ
สําหรับ sonication ทางอ้อมปราศจากการปนเปื้อนและพร้อมกันของตัวอย่างหลายตัวอย่างเราขอเสนอ VialTweeter หรือ CupHorn อัลตราโซนิก
ตารางด้านล่างให้ภาพรวมเกี่ยวกับเครื่องอัลตราโซนิกของเราสําหรับการเตรียมตัวอย่างการหยุดชะงักของเซลล์และการสกัด คลิกที่ประเภทอุปกรณ์เพื่อรับข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับโฮโมจีไนเซอร์อัลตราโซนิกแต่ละตัว เจ้าหน้าที่ด้านเทคนิคที่ผ่านการฝึกอบรมมาเป็นอย่างดีและมีประสบการณ์ยาวนานของเรายินดีที่จะช่วยคุณเลือกเครื่องอัลตราโซนิกที่เหมาะสมที่สุดสําหรับการเตรียมตัวอย่างของคุณ!
| ปริมาณชุด | อัตราการไหล | อุปกรณ์ที่แนะนำ |
|---|---|---|
| มากถึง 10 ขวดหรือหลอด | N.A. | VialTweeter |
| แผ่นมัลติเวลล์ / ไมโครไทเตอร์ | N.A. | UIP400MTP |
| หลายหลอด / เรือ | N.A. | เต้าฮอร์น |
| 1 ถึง 500mL | 10 ถึง 200mL / นาที | UP100H |
| 10 ถึง 1000mL | 20 ถึง 200mL / นาที | Uf200 ःที, UP200St |
| 10 ถึง 2000ml | 20 ถึง 400ml / นาที | UP400St |
ทั้งนี้ขึ้นอยู่กับการประยุกต์ใช้วัสดุและปริมาณตัวอย่างของคุณเราจะแนะนำให้คุณตั้งค่าที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการเตรียมตัวอย่างของคุณ ติดต่อเราวันนี้!
ติดต่อเรา! / ถามเรา!
เครื่องอัลตราโซนิกดิจิตอล Hielscher มีรีโมทคอนโทรลของเบราว์เซอร์และโปรโตคอลข้อมูลอัตโนมัติบนการ์ด SD ในตัว
VialTweeter สำหรับ sonication ทางอ้อม
ข้อเท็จจริงที่รู้
โปรตีน
โปรตีนเป็นเขตการวิจัยที่ศึกษาโปรตีนและโปรตีน โปรตีน fullfil มากมายของการทำงานที่สำคัญภายในสิ่งมีชีวิต โปรตีนเป็นทั้งชุดของโปรตีนที่แสดงโดยจีโนมเซลล์เนื้อเยื่อหรือสิ่งมีชีวิตในเวลาที่แน่นอน โปรตีนขึ้นอยู่กับเวลาและความต้องการที่แตกต่างกันหรือความเครียดที่เซลล์หรือสิ่งมีชีวิตผ่าน โดยเฉพาะอย่างยิ่งมันเป็นชุดของโปรตีนที่แสดงออกในประเภทที่กำหนดของมือถือหรือสิ่งมีชีวิตในเวลาที่กำหนดภายใต้เงื่อนไขที่กำหนดไว้ คำที่เป็นส่วนผสมของโปรตีนและจีโนม เซ็กเมนต์คือการศึกษาของโปรตีนที่
โปรตีน
โปรตีนเป็นสารชีวโมเลกุลที่มีขนาดใหญ่ที่เรียกว่าโมเลกุล – ซึ่งประกอบด้วยจากห่วงโซ่ยาวหนึ่งหรือมากกว่าที่ตกค้างกรดอะมิโน โปรตีนมีอยู่ในทุกสิ่งมีชีวิตทั้งผักและแหล่งกำเนิดของพวกเขาและพวกเขาเป็นสิ่งสำคัญสำหรับส่วนใหญ่ของฟังก์ชั่นทางชีวภาพ. ตั้งแต่โปรตีนที่มีจำนวนมากของข้อมูลทางชีวภาพ, พวกเขาจะถูกสกัดเพื่อวัตถุประสงค์ในการวิเคราะห์, เช่นสำหรับการวิจัย proteomic. ฟังก์ชั่นที่สำคัญที่สุดที่ดำเนินการโดยโปรตีนรวมถึงการกระตุ้นของปฏิกิริยาการเผาผลาญ, จำลองดีเอ็นเอ, การตอบสนองต่อสิ่งเร้า, และการขนส่งของโมเลกุลจากสถานที่หนึ่งไปยังอีก. โปรตีนแตกต่างจากที่อื่นเป็นหลักในลำดับของกรดอะมิโน, ซึ่งจะถูกกำหนดโดยลำดับ nucleotide ของยีนของพวกเขา, และซึ่งมักจะส่งผลในการพับโปรตีนเป็นโครงสร้างสามมิติที่เฉพาะเจาะจงที่กำหนดกิจกรรมของ. โปรตีนเป็น – นอกเหนือจากเปปไทด์ – หนึ่งในองค์ประกอบที่สำคัญของอาหาร ดังนั้นโปรตีนเป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพในด้านวิทยาศาสตร์อาหารที่จะเพิ่มประสิทธิภาพของกระบวนการความปลอดภัยของอาหารและการประเมินคุณค่าทางโภชนาการ
Cloud Point Extraction
Cloud Point Extraction เป็นขั้นตอนการวิเคราะห์ล่วงหน้าเพื่อแยกและวิเคราะห์ก่อน concetrate เมื่อใช้ร่วมกับ ultrasonication การสกัดจุดเมฆสามารถทวีความรุนแรงขึ้นทําให้กระบวนการมีประสิทธิภาพเร็วขึ้นและเป็นมิตรกับสิ่งแวดล้อมมากขึ้น ด้วย ultrasonication การสกัดจุดเมฆเป็นวิธีที่มีประสิทธิภาพมากขึ้นอย่างมีนัยสําคัญในการเตรียมการวิเคราะห์ อ่านเพิ่มเติมเกี่ยวกับการสกัดจุดเมฆด้วยความช่วยเหลือด้วยคลื่นเสียงความถี่สูง!gel electrophoresis
gel electrophoresis เป็นวิธีที่สำคัญสำหรับการแยกและการวิเคราะห์โมเลกุลเช่นดีเอ็นเออาร์เอ็นเอและโปรตีนเช่นเดียวกับชิ้นส่วนของพวกเขาขึ้นอยู่กับขนาดและค่าใช้จ่ายของพวกเขา มันถูกใช้ในทางเคมีคลินิกในการแยกโปรตีนโดยค่าใช้จ่ายและ / หรือขนาด (IEF agarose หลักขนาดอิสระ) และชีวเคมีชีววิทยาโมเลกุลและโปรตีนที่จะแยกประชากรผสมของ DNA และ RNA เศษโดยความยาวเพื่อประเมินขนาดของดีเอ็นเอ และ RNA เศษหรือจะแยกโปรตีนโดยคิดค่าใช้จ่าย
เซลล์เพาะเลี้ยง
การเพาะเลี้ยงเซลล์เป็นกระบวนการเจริญเติบโตควบคุมโดยที่เซลล์ที่ปลูกภายใต้สภาวะควบคุม เงื่อนไขการเพาะเลี้ยงเซลล์แตกต่างกันไปสำหรับประเภทแต่ละเซลล์ โดยทั่วไปสภาพแวดล้อมของการเพาะเลี้ยงเซลล์ที่ประกอบด้วยเรือที่เหมาะสม (เช่น Petri จาน) กับสารตั้งต้นหรือขนาดกลางที่ให้สารอาหารที่จำเป็น (กรดอะมิโน, คาร์โบไฮเดรต, วิตามิน, เกลือแร่) ปัจจัยการเจริญเติบโตฮอร์โมนและก๊าซ (CO2, The2) และควบคุมสภาพแวดล้อมกายภาพเคมี (บัฟเฟอร์, แรงดันอุณหภูมิ) เซลล์ส่วนใหญ่จำเป็นต้องมีพื้นผิวหรือพื้นผิวเทียมขณะที่วัฒนธรรมมือถืออื่น ๆ สามารถปลูกฟรีที่ลอยอยู่ในกลางวัฒนธรรม (วัฒนธรรมระงับระงับมือถือ)
มวลวัฒนธรรมของเซลล์สัตว์ถูกนำมาใช้ในอุตสาหกรรมการผลิตวัคซีนไวรัสและผลิตภัณฑ์ที่ได้เทคโนโลยีชีวภาพอื่น ๆ เซลล์ต้นกำเนิดของมนุษย์ที่มีการเพาะเลี้ยงเพื่อขยายจำนวนของเซลล์และความแตกต่างเซลล์ออกเป็นประเภทเซลล์ร่างกายต่างๆเพื่อวัตถุประสงค์ในการปลูก
ตัวอย่างเนื้อเยื่อ
เนื้อเยื่อคำอธิบายโทรศัพท์มือถือกลางที่วัสดุเซลล์ในระดับองค์กรระหว่างเซลล์และอวัยวะที่สมบูรณ์ ในเนื้อเยื่อของเซลล์ที่คล้ายกันจากแหล่งกำเนิดเดียวกันที่ร่วมกันดำเนินการฟังก์ชั่นที่เฉพาะเจาะจงจะประกอบ โดยการจัดกลุ่มการทำงานของเนื้อเยื่อหลายโครงสร้างที่ซับซ้อนของอวัยวะที่เกิดขึ้น
เนื้อเยื่อเป็นตัวอย่างสำหรับการวิจัยในทางชีววิทยาจุล / จุลพยาธิวิทยาปรสิตวิทยาชีวเคมี immunohistochemistry เช่นเดียวกับการปลูกฝังและสารสกัดดีเอ็นเอ มันสามารถจะแตกต่างระหว่างสัตว์ (แผนก: เนื้อเยื่อเลี้ยงลูกด้วยนม) และเนื้อเยื่อพืช เนื้อเยื่อสัตว์ถูกแบ่งออกเป็นสี่ประเภทพื้นฐานของเกี่ยวพันกล้ามเนื้อประสาทและเนื้อเยื่อเยื่อบุผิว เนื้อเยื่อพืชแบ่งเป็นสามระบบต่อไปเนื้อเยื่อ: หนังกำพร้าเนื้อเยื่อพื้นดินและเนื้อเยื่อหลอดเลือด
ตัวอย่างเนื้อเยื่อสามารถเตรียมได้จากสัตว์หรือพืชส่วนเช่น กระดูกกล้ามเนื้อใบ ฯลฯ
ของเหลวในร่างกาย
เลือด, เซรั่มพลาสม่า, น้ำไขสันหลังน้ำลายและน้ำไขข้อเป็นของเหลวในร่างกายซึ่งมีแหล่งที่ดีของข้อมูลที่เกี่ยวข้อง diagnostically ดังนั้นการเตรียมความซับซ้อนของตัวอย่างของเหลวในร่างกายสำหรับการวิเคราะห์เป็นสิ่งสำคัญ ความยากลำบากในครั้งแรกที่มีความเกี่ยวข้องกับช่วงไดนามิกกว้างของส่วนประกอบนำเสนอในของเหลวในร่างกาย
ความมุ่งมั่นของความเข้มข้นของโปรตีน
แบรดฟอทดสอบโลว์รีย์ทดสอบและกรด bicinchoninic (BCA) การทดสอบมีการวิเคราะห์ร่วมกันในการตรวจสอบความเข้มข้นของโปรตีน วัวซีรั่มอัลบูมิ (BSA) เป็นหนึ่งในมาตรฐานโปรตีนที่ใช้บ่อยที่สุด
สลายบัฟเฟอร์
บัฟเฟอร์สลายจะต้องเลือกได้ตามวัสดุเซลล์หรือเนื้อเยื่อ (การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อพืชแบคทีเรียเชื้อรา ฯลฯ ) และไม่ว่าจะเป็นเซลล์ที่อยู่ในโครงสร้างและชนิดของโครงสร้าง หลากหลายของบัฟเฟอร์สลายการสกัดโปรตีนเยื่อและ organelles เป็นสูตรที่มีหนึ่งหรือมากกว่าผงซักฟอก ผงซักฟอกมักจะถูกเลือกผ่านการทดสอบการทดลองและข้อผิดพลาดหรือ – ถ้ามี – ตามโปรโตคอลการสกัดโปรตีนที่มีอยู่ ผงซักฟอกต้องเข้ากันได้กับแหล่งเนื้อเยื่อและโปรตีน โดยทั่วไปผงซักฟอกภาพได้ชัดเจนว่าทำงานให้กับเนื้อเยื่อเฉพาะ / โปรตีนที่ถูกเลือกเพื่อรักษาฟังก์ชันการทำงานสูงสุดของสารสกัด นอกจากนี้ในกรณีของการสกัดของเยื่อและอวัยวะที่ผงซักฟอกอ่อนช่วยให้เมมเบรนเหมือนเดิม ผงซักฟอกที่ใช้ในการสลายบัฟเฟอร์ส่วนใหญ่เป็นสารลดแรงตึงหรือ zwitterionic เช่น CHAPS, Deoxycholate ไทรทัน™ X-100, NP40 และ Tween 20
ยกตัวอย่างเช่นเนื้อเยื่อเช่นสมองตับลำไส้ไตม้าม ฯลฯ สามารถบัฟเฟอร์เพียงกับ RIPA – แต่น้ำย่อยและ DTT (เช่นสำหรับ gel electrophoresis) ควรจะรวม
บัฟเฟอร์สลายเนื้อเยื่อกล้ามเนื้อโครงร่าง (เย็น): 20 มิลลิเมตร Tris (pH 7.8) 137 มิลลิโซเดียมคลอไรด์ 2.7 มิลลิ KCl 1 มิลลิ MgCl2, 1% Triton X-100, 10% (w / v) กลีเซอรอล 1 มิลลิ EDTA 1 มิลลิ dithiothreitol เสริมด้วยโปรตีเอสและฟอสฟายับยั้งค๊อกเทล
ตารางบัฟเฟอร์ที่พบบ่อยและช่วงค่า pH ของพวกเขา โดยทั่วไปบัฟเฟอร์เหล่านี้ปกติจะใช้ที่ความเข้มข้น 20-50 มิลลิ
| กันชน | ช่วงพีเอช |
|---|---|
| กรดมะนาว – NaOH | ๒.๒ – ๖.๕ |
| ซิเตรทโซเดียม – กรดมะนาว | ๓.๐ – ๖.๒ |
| acetate โซเดียม – กรดน้ำส้ม | ๓.๖ – ๕.๖ |
| เกลือโซเดียมกรด cacodylic พบ – Hcl | ๕.๐ – ๗.๔ |
| MY – NaOH | ๕.๖ – ๖.๘ |
| โซเดียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต – disodium ไฮโดรเจนฟอสเฟต | ๕.๘ – ๘.๐ |
| imidazole – Hcl | ๖.๒ – ๗.๘ |
| โมพี – เกาะ | ๖.๖ – ๗.๘ |
| ไฮโดรคลอไร Triethanolamine – NaOH | ๖.๘ – ๘.๘ |
| ทริสเรทติ้ง – Hcl | ๗.๐ – ๙.๐ |
| อันดับ – NaOH | ๗.๒ – ๘.๒ |
| รีซีน – NaOH | ๗.๖ – ๘.๖ |
| tetraborate โซเดียม – กรด | ๗.๖ – ๙.๒ |
| บิซีน – NaOH | ๗.๗ – ๘.๙ |
| glycine – NaOH | ๘.๖ – ๑๐.๖ |
บัฟเฟอร์ส่วนใหญ่แสดงค่า pH พึ่งพากับอุณหภูมิ นี่คือความจริงโดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับบัฟเฟอร์ Tris การเปลี่ยนแปลงจาก 8.06 pKa ที่ 25 ° C ถึง 8.85 ที่ 0 ° C
(pH และ pKa ของบัฟเฟอร์: พีเอชมีขนาดความเข้มข้นของไฮโดรเจนไอออนในสารละลาย pKa (= การแยกตัวออกกรดคงที่) เป็นที่เกี่ยวข้อง แต่เฉพาะเจาะจงมากขึ้นตัวชี้วัดในการที่จะช่วยให้การคาดการณ์ว่าโมเลกุลจะทำหน้าที่ที่เฉพาะเจาะจง. ค่าพีเอช.)
Trizol
Trizol เป็นวิธีการแก้สารเคมีที่ใช้ในการสกัด RNA / DNA / โปรตีนในช่วง Guanidinium สกัด thiocyanate-ฟีนอลคลอโรฟอร์ม การใช้ช่วย ultrasonically ผลการสกัด Trizol ใน DNA สูงอาร์เอ็นเอและโปรตีนอัตราผลตอบแทนจากตัวอย่างเดียวกันและ excels วิธีการสกัดจึงอื่น ๆ
วรรณคดี / อ้างอิง
- Chittapalo T, Noomhorm A (2009): Ultrasonic assisted alkali extraction of protein from defatted rice bran and properties of the protein concentrates. Int J Food Sci Technol 44: 1843–1849.
- Simões, André E.S:; Pereira, Diane M.; Amaral, Joana D.; Nunes, Ana F.; Gomes, Sofia E.; Rodrigues, Pedro M.; Lo, Adrian C.; D’Hooge, Rudi; Steer, Clifford J.; Thibodeau, Stephen N.; Borralho, Pedro M.; Rodrigues, Cecília M.P. (2013): Efficient recovery of proteins from multiple source samples after trizol or trizol LS RNA extraction and long-term storage. BMC Genomics 2013, 14:181.